Name: Micro-injectie van de zebravis embryos Gene functie analyseren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Leer micro-injectie van mRNA of morpholino in zebravisembryo's om genexpressie te manipuleren. Deze methode helpt onderzoekers genfunctie te bestuderen tijdens de ontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij erkennen de leden van de Mably lab en Narie Storer voor hun technische bijstand, en de American Heart Association (NCRP Scientist Development Grant 0635363N) en het National Heart, Lung, and Blood Institute (Grant SCCOR RFA HL02-027) voor de financiering.

Deel 1: productie van eieren en het verzamelen <ol><li> De nacht voorafgaand aan de injectie, het opzetten van de vissen in het fokken van tanks met verdeelschotten op zijn plaats. Ter verhoging van de totale productie van eieren, kunnen vissen worden ingesteld in een verhouding van twee vrouwtjes om een ​​mannetje indien gewenst. </li><li> De volgende ochtend, zet na de kamer lampjes op, trek de verdelers van verschillende tanks en laat ongeveer 20 minuten ongestoord paartijd. </li><li> Met behulp van een zeef, het verzamelen van de eieren van de kweek kooien en spoel ze met ei water. Giet de eieren in een petrischaal met ei water en verwijder onbevruchte eieren en vuil met een transfer pipet. Vis kunnen worden gegroepeerd in grotere tanks om extra rondes van eieren voor injectie te produceren. De timing van ei collectie toe te staan ​​voor een maximale hoeveelheden eieren worden geproduceerd, zonder hen te laten passeren de enkele cel stadium. </li><li> Plaats een microscoop dia in de omgekeerde deksel van een 100mm petrischaal. Gebruik een transferpipet aan line-up van de eieren tegen de zijkant van de glijbaan het vormen van een enkele kolom. Verwijder overtollig water uit het ei dia door het indrukken van een Kimwipe tegen de zijde tegenover de eieren. (Figuur 1A) </li></ol> Deel 2: Naald trekken, laden, en voorbereiding <ol><li> Met een micropipet trekker, trek een 1,0 mm OD glazen capillaire in twee naalden en op te slaan in een 150mm petrischaal door het leggen van meer dan Silly Putty hellingen. Naalden kunnen worden getrokken op voorhand. </li><li> Frictie van de naald met 3 pi van injectie materiaal met behulp van een microloader pipet. Schud de bolus in de richting van de naald totdat er weinig of geen luchtbellen blijven. </li><li> Zet de lucht bron en microinjector. Steek de naald in de microinjector en verzekeren een goede afdichting in het huis. Controleer of de micromanipulator is in een goede positie om voor een breed scala van beweging en aanpassing. Breng de naald in het vlak van uitzicht op de microscoop, hoog boven het podium, en de focus op het dunste deel van de tip. Gebruik een paar scherpe tang knijpen af ​​van de naald op een punt die vertrekt van de naald smal genoeg te doorboren het chorion en het eigeel, maar nog steeds in staat van het leveren van een consistente kraal grootte. Een druppel van minerale olie op een micrometer kan worden gebruikt om het volume van elke injectie te berekenen. Bij injectie in de olie, een kraal met een diameter van 0,1 mm bevat 500 pL van injectie materiaal (figuur 1B); injectie volume van 500 PL of 1nL worden doorgaans gebruikt. Druk het voetpedaal en toezicht op de grootte van de kraal, terwijl het trimmen van de naald en het aanpassen van de injectie druk als dat nodig is. Ideaal injectie volumes zal vullen circa 10% van het ei volume. De kwaliteit van de naald is cruciaal voor zowel het gemak van de injectie en de kwaliteit en consistentie van de resultaten. </li></ol> Deel 3: Injectie <ol><li> Zorg ervoor dat de embryo&#39;s niet ontwikkeld langs de vier-cellig stadium. Idealiter zou embryo&#39;s zijn op de een-cellig stadium. </li><li> Laat de naald naar de kolom van eieren, die de schotel op zijn plaats met uw andere hand. </li><li> Pierce het oppervlak van het chorion en voer de dooier in een vloeiende slag tijdens het kijken voor eventuele breken of scheuren van de dooierzak. Injecteer de injectie materiaal in de dooier (figuur 1C). Vermijd het injecteren van luchtbellen of strekken van de dooier als ofwel kan dodelijk zijn voor het embryo. Werken langs de lijn, pas de druk die nodig is om een ​​consistente kraal grootte en, met behulp van een pipet tip te behouden, verwijder dan de eieren die er onbevruchte of worden vernietigd tijdens de injectie proces. </li><li> Na het voltooien van een kolom van eieren, gebruik dan een zachte stroom van ei water om de geïnjecteerde eitjes te verplaatsen naar een schone petrischaal. Herhalen als nodig is. Houden verschillende uninjected embryo&#39;s als een controle. Aan het eind van dag een, verwijderen dode embryo&#39;s en het registreren van het aantal geïnjecteerde embryo&#39;s. Vervang het ei water in de schaal periodiek om de kans op infectie te verkleinen. </li></ol> Deel 4: Representatieve resultaten Afhankelijk van wat er wordt ingespoten, kunnen embryo&#39;s overleven tegen een lager tarief dan hun uninjected broers en zussen. Gelukkig is het gemakkelijk is om te injecteren grote aantallen van hen, dus dit is zelden een probleem. Het is normaal dat morphants te exposeren licht vertraagde ontwikkeling. Ter illustratie van de resultaten van micro-injectie, gebruikten we dit protocol tot het niveau van het eiwit Hart van Glas (Heg) te manipuleren. HEG is een transmembraan eiwitten die nodig zijn voor een normale ontwikkeling van het hart. Bij gebreke daarvan, embryo&#39;s te ontwikkelen harten met gigantische instroom traktaten en Kamers 1. We hebben twee niet eerder beschreven morpholinos geïnjecteerd tegen HEG, heg_e3i3_egfr1 en heg_e4i4_egfr2, bij een concentratie van 500 uM. Op twee dagen na de bevruchting, de uninjected broer of zus controleert normaal lijken, zoals verwacht (figuur 2A en B). Embryo&#39;s geïnjecteerd met heg_e3i3_egfr1 hebben hersenoedeem (figuur 2C). Hoewel de harten van de meeste van deze morphants hebben morfologie veranderd, hun kamers zijn normaal formaat (figuur 2D). Embryo&#39;s geïnjecteerdmet heg_e4i4_egfr2 vertonen variabele hartafwijkingen. Sommige normaal lijken, terwijl anderen hebben grote instroom landstreken en matig vergroot atria (figuur 2E en F). Het HEG mutant, zoals eerder gemeld een, heeft een enorm vergrote instroom-darmkanaal en het atrium (zie figuur 2G en H). We hebben ook geïnjecteerd wildtype embryo&#39;s met 400 ng / ul mRNA getranscribeerd van de volledige lengte cDNA HEG. Terwijl uninjected controles normaal ontwikkelen (figuur 3A en B), embryo geïnjecteerd met HEG mRNA vertonen een spectrum van fenotypen, variërend van wildtype verschijning aan ernstige cyclopie, verkorting van de belangrijkste lichaam as, necrose van het hoofd en lichaam, en middellijn afwijkingen (figuur 3C en D). <img src="/files/ftp_upload/1115/Figure%201%20FINAL.png" alt="" /> Figuur 1. Embryo&#39;s worden geïnjecteerd worden opgesteld tegen een microscoop dia in een petrischaal (A). Injectie volume wordt bepaald door het injecteren in de minerale olie op een micrometer. Een injectie volume van 500 pL, die gewoonlijk wordt gebruikt, heeft een diameter van 0,1 mm (B). Onmiddellijk na de injectie, de morfolino-of mRNA is zichtbaar als een onderstrepen plek in de dooier (C). <img src="/files/ftp_upload/1115/Figure%202%20FINAL.png" alt="" /> Figuur 2. Op twee dagen na de bevruchting, embryo&#39;s uninjected hebben geen grove gebreken (A) of hart-fenotype (B). Embryo&#39;s geïnjecteerd met het morfolino heg_e3i3_egfr1 hebben hersenoedeem (C, pijl) maar normaal formaat hartkamers (D). Sommige embryo geïnjecteerd met het morfolino heg_e4i4_egfr2 een vergrote instroom traktaten en atria (E, F). HEG mutanten hebben ernstig vergrote instroom traktaten en atria (G, H). (A), (C), (E), en (G) zijn 4x DIC beelden; (B), (D), (F) en (H) zijn 20x DIC beelden. a = atrium, het = instroom-darmkanaal. <img src="/files/ftp_upload/1115/Figure%203%20FINAL.png" alt="" /> Figuur 3. Na 24 uur na de bevruchting, embryo&#39;s uninjected hebben een lange, rechte lichaam zonder necrose of middellijn defecten (A) en twee duidelijk omschreven ogen met een neurale buis tussen hen (B). Sommige embryo geïnjecteerd met HEG mRNA, daarentegen, vertonen een verkorte lichaamsas, necrose, misvormde somieten (C), en cyclopie (D). (A) en (C) zijn 4x DIC beelden; (B) en (D) zijn 20x DIC beelden.

<ol><li>Mably, J. D., Mohideen, M. P. K., Burns, C. G., Chen, J., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((heart+of+glass+regulates+the+concentric+growth+of+the+heart+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">heart of glass regulates the concentric growth of the heart in zebrafish.</a> Curr. Biol. 13, 2138-2147 (2003).</li>
</ol>

Een van de sterke punten van de zebravis model systeem is het gemak waarmee specifiek gen producten kunnen worden toegevoegd of verwijderd uit het embryo door micro-injectie. Om rode draad overexpressie een bepaald eiwit, het mRNA dat codeert het wordt geïnjecteerd in de dooier op de een-cellig stadium. Tijdens de daaropvolgende van de embryo&#39;s ontwikkeling, wordt het RNA verdeeld over het organisme en vertaald. Omgekeerd, een bepaald eiwit te elimineren, worden morpholinos gebruikt. Morpholinos zijn synthetische oligonucleotiden ontworpen met antisense complementariteit met specifieke RNA&#39;s. Net als mRNA&#39;s worden morpholinos geïnjecteerd in de dooier op de een-cellig stadium. Binnen de embryo ze binden hun doel RNA&#39;s, het voorkomen van vertaling. De belangrijkste wijziging die moet worden gemaakt voor elke morfolino of mRNA is de concentratie van de geïnjecteerde materiaal. Een te hoge concentratie van een van beide morfolino-of mRNA kan leiden tot niet-specifieke toxiciteit, terwijl iedere morfolino moet empirisch worden getest om de optimale concentratie, meestal morfolino concentraties tussen 200 en 500 uM uM bepalen knock down gen-activiteit effectief zonder dat niet-specifieke afwijkingen. De precieze grootte van de naald opening is niet cruciaal. Binnen een bereik van naald maten, inspuitdruk en injectie tijd kan worden aangepast om een ​​bolus van het juiste volume te produceren. Morpholinos hebben vele toepassingen, waaronder de functionele ontleding van domeinen binnen een eiwit. Indien ontworpen voor specifieke exon-intron knooppunten te pakken zal morpholinos voorkomen dat splicing zich voordoet daar. We hebben gekeken naar de effecten van twee morpholinos die zich binden exon-intron knooppunten in het pre-mRNA van HBG. De morfolino heg_e3i3_egfr1 bindt de kruising tussen exon 3 en intron 3, het voorkomen van de splicing machines van integratie van exon 3 tot rijpe transcripten. De morfolino heg_e4i4_egfr2 verwijdert dezelfde exon 4. Zowel de exonen 3 en 4 coderen domeinen die EGF-achtige herhalingen. Sommige embryo geïnjecteerd met heg_e4i4_egfr2 matig phenocopy de mutant, verdere experimenten vereist zal zijn om de rol van de Heg exon 4 in ontwikkeling van het hart te begrijpen. Verrassend, embryo geïnjecteerd met heg_e3i3_egfr1 hebben hersenoedeem, een feature niet gezien in HEG mutanten. Dit kan te wijten zijn aan het vermogen van morpholinos van moeders transcripties dat zou beïnvloed zijn in zygotische mutanten te binden.

<table><tbody><tr><td>Micro-injector</td><td>Instrument</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PLI 100</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Instrument</td><td>Narishige International</td><td>MN 153</td><td></td></tr><tr><td>Naaldtrekker</td><td>Instrument</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P 97</td><td></td></tr><tr><td>Glazen capillairen</td><td>Instrument</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>TW100 F6</td><td></td></tr><tr><td>Microloader-pipetten</td><td>Instrument</td><td>Eppendorf</td><td>5242956.003</td><td></td></tr><tr><td>Naaldhouder</td><td>Instrument</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MPH310</td><td></td></tr></tbody></table>

micro-injectie van de zebravis embryo&#39;s gene functie analyseren

Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function

Een van de voordelen van het bestuderen van zebravis is het gemak en de snelheid van het manipuleren van eiwit niveaus in het embryo. Morpholinos, die synthetische oligonucleotiden met antisense complementariteit te richten RNA&#39;s, kunnen worden toegevoegd aan het embryo om de expressie van een bepaald gen product te verminderen. Omgekeerd kan verwerkt mRNA worden toegevoegd aan het embryo tot het niveau van een gen product te verhogen. Het voertuig voor het toevoegen van een mRNA of morfolino-tot een embryo is micro-injectie. Micro-injectie is een efficiënte en snelle, waardoor voor de injectie van honderden embryo&#39;s per uur. Deze video laat alle stappen die betrokken zijn bij micro-injectie. Kortom, worden de eieren immediately verzameld na het leggen en gevoerd tegen een microscoop dia in een petrischaal. Vervolgens is een fijne punt naald geladen met injectiemateriaal verbonden aan een microinjector en een lucht-bron, en de microinjector controles worden aangepast om een ​​wenselijke injectie volume te produceren. Ten slotte wordt de naald ondergedompeld in dooier van de embryo&#39;s en de morfolino-of mRNA wordt uitgezet.

Deze video laat zien hoe morfolino of mRNA kan worden geïnjecteerd in zebravis embryo&#39;s in het een-cellig stadium te verlagen of te verhogen van het niveau van specifieke gen-producten tijdens de verdere ontwikkeling.

Micro-injectie van de zebravis embryo&#39;s Gene functie analyseren

Een van de voordelen van het bestuderen van zebravisjes is de eenvoud en snelheid waarmee eiwitniveaus in het embryo kunnen worden gemanipuleerd. Morpholino's, wat synthetische ...

Mannelijke en vrouwelijke zebravisjes worden gepaard in een kweekkooi waarin bevruchte eitjes naar de bodem zakken, waar ze gemakkelijk kunnen worden opgevangen. De eitjes worden vervolgens in een Petrischaal tegen een microscopische glaasje in een rij geplaatst. Daarna wordt de gevulde injectienaald afgeknipt en worden de injectie-instellingen aangepast, zodat de injectiebolus de gewenste grootte heeft wanneer deze met een micrometer wordt gemeten.Ten slotte worden de eieren één voor één in de rij geïnjecteerd. Hallo, ik ben Jonathan Rosen van het laboratorium van John MA in de afdeling Cardiologie van het Children's Hospital Boston. En ik ben Michael Sweeney, ook werkzaam in het VY-lab.Vandaag gaan we demonstreren hoe mRNA of morpholino kan worden geïnjecteerd in zebravissenembryo's. In ons laboratorium gebruiken we deze procedure om de effecten van knockdown of overexpressie van specifieke genproducten te bestuderen. Laten we beginnen.Om te beginnen moeten de vissen- en kweekbakken de avond vóór de injectie worden ingericht met scheidingswanden om de totale eiproductie te verhogen. Indien gewenst kunnen de vissen worden geplaatst in een verhouding van twee vrouwtjes op één mannetje. De volgende ochtend, nadat de kamerverlichting is ingeschakeld, worden de scheidingswanden uit meerdere bakken verwijderd om ongeveer 20 minuten ongestoorde paringstijd toe te staan. Verzamel de eieren uit de kweekkooien met een zeef en spoel ze met eierwater voordat ze in een Petrischaal worden gegoten.Met gebruik van eierwater kunnen vissen worden hergegroepeerd in grotere tanks om extra rondes eieren voor injectie te produceren. Pas de timing van de eierverzameling aan zodat het maximale aantal eieren wordt geproduceerd zonder dat ze het eencellige stadium passeren. Plaats ten slotte een microscoopglaasje in het omgekeerde deksel van een 100 millimeter Petri-schaal.Gebruik een transferpipet om de eitjes tegen de zijkant van het preparaatglas te lijnen zodat er een enkele kolom wordt gevormd, en verwijder vervolgens het overtollige eiwater van het preparaatglas door een Kimwipe tegen de zijde tegenover de eitjes te drukken. Daarna bereiden we de micro-injectienaalden voor met behulp van een micropipet-puller. We trekken een glazen capillair met een buitendiameter van 1 millimeter uit tot twee naalden en bewaren deze naalden in een Petrischaal van 150 millimeter. Door ze over hellingen van siliconenkit te leggen, kunnen de naalden vooraf worden getrokken.We gebruiken de volgende instellingen. Heat 6 45 pole 60 velocity 80. Vul het brede uiteinde van de naald met drie µL injectiemateriaal met behulp van een microloader-pipet.Schud de bolus richting de naaldpunt totdat er nog maar weinig of geen luchtbellen overblijven. Vervolgens schakelen we de luchtbron en de micro-injector in. Plaats de naald in de micro-injector en zorg voor een luchtdichte afsluiting in de behuizing.Controleer of de micromanipulator in een juiste positie staat om een breed bereik aan beweging en aanpassing mogelijk te maken. Breng de naaldpunt in het gezichtsveld van de microscoop. Houd deze hoog boven het objecttafeltje en focus op het dunste gedeelte van de punt.Gebruik een scherp pincet om de naald af te knippen op een punt waardoor de naalden smal genoeg blijven om door het chorion en de dooier te dringen, maar nog steeds in staat zijn om een consistente kraalformaat te leveren. Om het volume van elke injectie te berekenen, gebruiken we een druppel minerale olie op een micrometer; voer de naald in de olie in en druk op het voetpedaal om een kraal van de oplossing in de olie te injecteren. Controleer de grootte van de kraal terwijl de naald wordt bijgesneden en pas de injectiedruk aan indien nodig tijdens het injecteren in de olie.Een kraal met een diameter van 0,1 millimeter bevat 500 picoliter injectiemateriaal. Er worden doorgaans injectievolumes van 500 picoliter of één nanoliter gebruikt. Ideale injectievolumes vullen ongeveer 10% van het ei-volume.De kwaliteit van de naaldpunt is cruciaal voor zowel het gemak van de injectie als de kwaliteit en consistentie van de resultaten. Het is nu tijd om te injecteren en de injectieprocedure te starten. Zorg ervoor dat de embryo's niet verder zijn ontwikkeld dan het viercellige stadium.Idealiter moet het embryo zich in het eencellige stadium bevinden. Laat vervolgens de naald richting de kolom eieren zakken, doorboor het oppervlak van het chorion en dring in één vloeiende beweging het eigeel binnen terwijl u dit observeert. Bij eventueel verbrijzelen of scheuren van de dooierzak dient het injectiemateriaal in het eigeel te worden geïnjecteerd.Voorkom het injecteren van luchtbellen en let tijdens het proces op embryo's die zichtbaar beschadigd zijn door de injectie. Pas indien nodig de druk aan om een consistente drupelgrootte te behouden en verwijder met een pipetpunt eieren die onbevrucht lijken of die tijdens het injectieproces zijn beschadigd. Verplaats na het voltooien van een kolom eieren de geïnjecteerde eieren met een zachte stroom eierwater naar een schone Petrischaal en herhaal dit indien nodig.Houd enkele niet-geïnjecteerde embryo's aan als controle. Verwijder later op de eerste dag de dode embryo's en noteer het aantal geïnjecteerde embryo's. Vervang periodiek het eiwater in de schaal om de kans op infectie te verkleinen.Houd er rekening mee dat embryo's, afhankelijk van wat er wordt geïnjecteerd, met een lager percentage kunnen overleven dan hun niet-geïnjecteerde broedjes en zusjes. Gelukkig is het eenvoudig om grote aantallen embryo's te injecteren, waardoor dit zelden een probleem is. We tonen nu enkele representatieve resultaten van zowel morpho-injectie als mRNA.De niet-geïnjecteerde controle op 48 uur na bevruchting ziet er naar verwachting normaal uit. Embryo's die zijn geïnjecteerd met de morpho HG E drie i drie eeg FFR één, die HG-isovormen uitschakelt die de eerste van twee EEG-achtige herhalingen bevatten, vertonen echter oedeem in de hersenen en injectieschade aan het hart. Injectie van hart-glas Mr.NA produceerde ook een duidelijk fenotype op 24 uur na bevruchting.De koppen van de niet-geïnjecteerde controles zagen er normaal uit. Omgekeerd vertoonden sommige van de embryo's die waren geïnjecteerd met M NNA opia. We hebben zojuist aangetoond hoe de injectie van morpholino's of mRNA tijdens het eencellig stadium de expressie van specifieke genen tijdens de latere ontwikkeling kan verhogen of verlagen. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om dit ook te onthouden.Een hoge concentratie van zowel mRNA als morpholino kan leiden tot aspecifieke letaliteit in de embryo's met het morpholino. Elk type moet empirisch worden getest, maar doorgaans zorgen concentraties tussen 200 en 500 micromolair voor een specifieke knockdown van de genactiviteit zonder dat dit leidt tot algehele letaliteit. Dat is alles.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

microinjection-of-zebrafish-embryos-to-analyze-gene-function

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Micro-injectie is een gevestigde en effectieve methode voor het introduceren van vreemde stoffen in bevruchte zebravis embryo's. Hier tonen we een robuuste micro-injectie techniek voor het uitvoeren van mRNA overexpressie en morfolino oligonucleotide-gen knock-down studies in de zebravis.

Micro-injectie van mRNA en morfolino antisense oligonucleotiden in zebravis embryo&#39;s.

In deze video, demonstreren we een methode om de ontwikkeling van gewervelde hersenen te analyseren in levende zebravis embryo's bij enkele cel resolutie door confocale microscopie. Dit omvat de methode waarmee we injecteren van de single-cell zebravis embryo en vervolgens monteren en het imago van de zich ontwikkelende hersenen.

Live-Imaging van de zebravis embryonale Brain door confocale microscopie

Stervende cellen zijn geëxtrudeerd uit epitheelweefsels door gezamenlijke contractie van naburige cellen zonder verstoring van de barrièrefunctie. De optische helderheid van ontwikkelen zebravis biedt een uitstekende systeem om extrusie visualiseren in levende epithelia. Hier beschrijven we methoden om te induceren en imago extrusie in het larvale zebravis epidermis op cellulair resolutie.

Live-Imaging van de Cel Extrusie van de opperhuid van de ontwikkelingslanden zebravis

Deze video beschrijft een techniek van Embryo microinjection om verbindingen in Zebrafish dooierzak te leveren.

Embryo Microinjection: Een techniek om een verbinding in de Zebrafish Yolk te leveren

In dit artikel tonen we een werkwijze voor het manipuleren van genexpressie in het ventriculaire cellen van het volwassen zebravissen telencephalon met morfolino antisense oligonucleotiden. Wij stellen deze werkwijze efficiënt en snel protocol dat kan worden gebruikt voor functionele studies in de volwassen gewervelde hersenen.

Micromanipulatie van genexpressie in de Adult zebravis hersenen met behulp Cerebroventricular Micro-injectie van Morfolino Oligonucleotides

De zebravis, een kleine tropische vissen, is uitgegroeid tot een populair model voor het bestuderen van gen-functie tijdens gewervelde ontwikkeling en ziekte. De ruimtelijke en temporele expressie van de doelwitgenen worden...

Hoge resolutie Hele Mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in zebravis embryo&#39;s om genexpressie en functie te bestuderen

De zebravis is een uitstekend modelsysteem voor genetische en ontwikkelingsstudies. Het implanteren van kralen is een waardevolle techniek voor weefselmanipulatie die kan worden gebruikt om ontwikkelingsmechanismen te onderzoeken door veranderingen in lokale cellulaire omgevingen te introduceren. Dit protocol beschrijft hoe microkralenimplantatie in de zebravis-embryo moet worden uitgevoerd.

Microkraal Implantatie in de zebravis embryo

Optogenetische manipulatie van signaalroutes kan een krachtige strategie zijn om te onderzoeken hoe signalering wordt gedecodeerd bij ontwikkeling, regeneratie, homeostase en ziekte. Dit protocol biedt praktische richtlijnen voor het gebruik van licht-zuurstof-spanningsgevoelige domeingebaseerde Nodale en botmorfogene proteïne (BMP) signaleringsactivatoren in het vroege zebravisembryo.

Optogenetische signaleringsactivering in zebravisembryo's

RASopathieën zijn multisysteem-genetische syndromen die worden veroorzaakt door hyperactivering van de RAS-MAPK-route. Potentieel pathogene varianten die wachten op validatie duiken continu op, terwijl slecht preklinisch bewijs de therapie beperkt. Hier beschrijven we ons in vivo protocol voor het testen en kruisvalideren van RASopathie-geassocieerde ERK-activeringsniveaus en de farmacologische modulatie ervan tijdens de embryogenese door middel van live FRET-beeldvorming in Teen-reporter...

Een efficiënt protocol om ERK-activiteitsmodulatie te beoordelen in vroege zebravismodellen van het Noonan-syndroom via live FRET-microscopie en immunofluorescentie

In deze video, Nijole Jasinskiene toont de methoden die gebruikt worden om transgene Aedes aegypti muggen, die vectoren voor knokkelkoorts te genereren. De technieken voor het correct opstellen van micro-injectie naalden, droogmiddelen embryo's en het uitvoeren van micro-injectie worden aangetoond.

Micro-injectie van A. aegypti embryo&#39;s om transgene muggen verkrijgen

Leer micro-injectie van mRNA of morpholino in zebravisembryo's om genexpressie te manipuleren. Deze methode helpt onderzoekers genfunctie te bestuderen tijdens de ontwikkeling.

Micro-injectie van de zebravis embryo's Gene functie analyseren

Meer video's verkennen