Name: Gibberella zeae Ascospore Productie en collectie voor microarray experimenten. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 24 s
Description: Leer een steriele collectieprocedure voor ascosporen van Gibberella zeae om ontwikkelingsprocessen te bestuderen. Dit protocol verbetert de reproduceerbaarheid voor genoomexpressieprofieltests.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Karen Hilburn voor een uitstekende technische ondersteuning. Dit project werd ondersteund door de National Research Initiative van de USDA Cooperative State Research, Onderwijs en Extension Service (Award # 2004-35604-14327). Matias Pasquali wordt ondersteund door Branco Weiss Fellowship. De Amerikaanse tarwe en gerst Scab Initiative is ook erkend voor de niet aflatende steun van het onderzoek.

<ol><li> Wortel-agar (Klittich en Leslie, 1988) werd voorbereid in 9-cm diameter petrischalen. </li><li> Een 2 mm kubus van agar met vers mycelium gekweekt op aardappel-dextrose-agar werd toegepast op het midden van elke petrischaal. </li><li> Culturen werden gekweekt bij 25 ° C en een 12-uur lichtperiode voor 96 uur. </li><li> Een ml van de waterige 2,5% Tween 60 werd aangebracht op het oppervlak van de cultuur (Trail en Common, 2000) en verspreid over de cultuur met een plastic staafje, door voorzichtig op te drukken. </li><li> Perithecia schieten ascosporen ontwikkeld 7-10 dagen na deze inductie behandeling bij bewaring in een vochtige omgeving bij 25 ° C met dezelfde fotoperiode. </li><li> Spore collectie wordt uitgevoerd door het veranderen van de Petri plaat deksel, waardoor perithecia te schieten voor een beperkte tijd (bijvoorbeeld 12 uur) in het donker. </li><li> Steriel water wordt toegevoegd aan het deksel, schorsing ascosporen door zacht stromend water op het oppervlak. </li><li> Ascosporen worden verzameld in steriele Falcon buizen, gewassen en gebruikt voor verdere analyse. </li></ol>

<ol><li>Beyer, M., Verreet, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germination+of+Gibberella+zeae+ascospores+as+affected+by+age+of+spores+after+discharge+and+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors.</a> , (2005).</li>
<li>Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+inoculum+levels+of+Gibberella+zeae+on+wheat+spikes.+Plant+Disease+83%2C662-666%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666.</a> , (1999).</li>
<li>Goswami, R. S., Kistler, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heading+for+disaster%2C+Fusarium+graminearum+on+cereal+crops.+Molecular+Plant+Pathology+5%2C515%26%23x2013%3B525%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515&#x2013;525.</a> , (2004).</li>
<li>Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+reduction+mutants+in+Fusarium+moniliforme+%28Gibberella+fujikuroi%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi.</a> Genetics. 118, 417-2013 (1998).</li>
<li>Trail, F., Common, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perithecium+development+in+Gibberella+zeae%2C+a+light+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study.</a> , (2000).</li>
<li>Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+substrate+for+uniform+production+of+perithecia+in+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae.</a> Mycologia. , 67-1101 (1975).</li>
<li>Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+environment+on+sexual+reproduction+of+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae.</a> , (1976).</li>
</ol>

Het protocol hier wordt gepresenteerd is gebaseerd op eerdere procedures voor perithecial productie van Fusarium spp. (Klittich en Leslie, 1988, Trail en Common, 2000). Standaardisatie van de procedure waarmee grote hoeveelheden ascosporen (voldoende voor microarray analyse) zijn gegenereerd was essentieel voor de reproduceerbaarheid van het experiment. Het is gemeld dat de milieu-factoren, leeftijd en substraat verschillen kunnen de biologische karakter van ascosporen (Beyer en Verreet, 2005) te wijzigen. Daarom is het gebruik van video ka...

<table><tbody><tr><td>Petrischaal 9 cm diameter</td><td>Instrument</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 60 (20%)</td><td>Reagens</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wortelagar (20% w/v biologische wortelen en 1,5% w/v agar)</td><td>Reagens</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gibberella zeae ascospore productie en collectie voor microarray experimenten.

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is een plant pathogeen veroorzaakt schurft ziekte op tarwe en gerst dat gewas opbrengst en graankwaliteit vermindert. F. graminearum veroorzaakt ook steel en oor rot van maïs en is een producent van mycotoxinen, zoals de trichothecenen dat graan vervuilen en zijn schadelijk voor mens en vee (Goswami en Kistler, 2004). De schimmel produceert twee soorten sporen. Ascosporen, de propagulen als gevolg van geslachtelijke voortplanting, zijn de belangrijkste bron van primaire infectie. Deze sporen zijn gedwongen ontslagen uit volwassen perithecia en verspreid door de wind (Francl et al. 1999). Secundaire infecties worden vooral veroorzaakt door macroconidia die worden geproduceerd door ongeslachtelijke middel op de plant oppervlak. De studie van de ontwikkelingsprocessen van de ascosporen in deze schimmel, was een procedure voor de collectie in grote hoeveelheden onder steriele omstandigheden vereist. Ons protocol werd gefilmd in om het hoogste niveau van informatie voor inzicht in en reproduceerbaarheid genereren; cruciale aspecten bij het volledige genoom gen-expressie profielen worden gegenereerd en geïnterpreteerd. In het bijzonder, de variabiliteit van ascospore kieming en de biologische activiteit zijn afhankelijk van de voorafgaande manipulatie van het materiaal. Het gebruik van video voor het documenteren van elke stap in ascospore productie is voorgesteld om normalisatie te vergroten, voldoen aan de steeds strengere eisen voor microarray analyse. De procedure maakt gebruik van standaard laboratoriumapparatuur. Stappen worden aangetoond dat besmetting en voor de tijd synchronisatie van ascosporen te voorkomen.

De studie van de ontwikkelingsprocessen van de ascosporen in Gibberella zeae, een procedure voor de collectie onder steriele omstandigheden wordt gefilmd om het hoogste niveau van informatie voor protocol beschrijving te genereren. Dit moet de reproduceerbaarheid van het experiment, een cruciaal aspect bij het volledige genoom expressie profiel testen worden uitgevoerd.

Gibberella zeae Ascospore Productie en collectie voor microarray experimenten.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorf Gibberella zeae) is een plantpathogeen dat korrelvrotschade veroorzaakt bij tarwe en gerst, wat leidt tot een vermindering van de gewasopbrengst en graan...

gibberella-zeae-ascospore-production-collection-for-microarray

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Microarray analyse voor Saccharomyces cerevisiae</em

De verwoesting van de graangewassen door zaad-infecterende schimmels heeft ertoe geleid dat tal van onderzoeksinspanningen om beter te begrijpen plant-pathogeen interacties. Om zaad-schimmel interacties in een laboratorium te bestuderen, ontwikkelden we een robuuste methode voor de kwantificering van de schimmel reproductie, biomassa en verontreiniging met mycotoxinen met behulp van kernel bioassays.

Kwantificering van schimmelkolonisatie, Sporogenesis, en de productie van mycotoxinen Met behulp van Kernel Bioassays

Seksuele kruisen en isolatie van recombinante nakomelingen zijn belangrijke onderzoeksinstrumenten voor de filamenteuze...

Seksuele ontwikkeling en Ascospore Lozing in Fusarium graminearum</em

This video demonstrates a method to quantify fungal infection in zebrafish larvae. Fungal spores are microinjected into the larval hindbrain ventricle, and the larvae are incubated to allow infection development. Infected larvae are harvested at defined intervals, and infection progress is assessed by enumerating colony-forming units.

A Technique to Quantify Fungal Infection in Zebrafish Larvae

The video demonstrates a zebrafish wounding and entrapment device technique for observing fluorescently labeled fungal pathogen infection in zebrafish larvae. Initial infection attracts macrophages, and as infection persists, neutrophil recruitment progresses at the injection site.

A zWEDGI Technique to Visualize Fungal Pathogen-Infected Zebrafish Larvae

Hier presenteren we een protocol om Aspergillus flavus groei en productie van aflatoxine in maïs kernels uiting van een antischimmel eiwit te analyseren.  Met behulp van een stam GFP-uiten A. flavus bewaakt we de infectie en de verspreiding van de schimmel in volwassen kernels in real-time. De bepaling is snel, betrouwbaar en reproduceerbaar.

Remming van de groei van de Aspergillus flavus en aflatoxine productie in transgene maïs uiten van de α-amylase Inhibitor van Lablab purpureus L.

Een knelpunt in de 'design-build-test' cyclus van microbiële engineering is de snelheid waarmee we functionele schermen van stammen kunnen uitvoeren. We beschrijven een high-throughput methode voor stam screening toegepast op honderden tot duizenden gistcellen per experiment dat droplet-gebaseerde RNA sequencing gebruikt.

Hoge doorvoer Gist Stam Federtyping met Droplet-Based RNA Sequencing

Dit protocol beschrijft een Aspergillus infectiemodel in zebravislarven. Aspergillus sporen worden micro-geïnjecteerd in de hindbrain van larven, en chemische behandeling wordt gebruikt om immunosuppressie induceren. Infectieprogressie wordt gecontroleerd via een dagelijkse beeldvormingsopstelling om schimmelgroei en immuunresponsen te monitoren, evenals inventarisatie van levende sporen per kolonievormende eenheidsplating.

Infectie van zebravislarven met Aspergillus-sporen voor analyse van gastheer-pathogene interacties

We presenteren een labelvrij live beeldvormingsprotocol met behulp van microscopietechnieken voor doorgegeven licht om beelden vast te leggen, groeikinetiek van de filamenteuze schimmel A. nidulans in zowel ondergedompelde culturen als vaste media te analyseren en te kwantificeren. Dit protocol kan worden gebruikt in combinatie met fluorescentiemicroscopie.

Kwantitatieve analyse van de groeisnelheid van Aspergillus nidulans met behulp van live microscopie en open-source software

Dit protocol is een effectieve, snelle methode om gisten en de schimmel Aspergillus fumigatus uit grote sets bodemmonsters te kweken in slechts 7 dagen. De methoden kunnen eenvoudig worden aangepast om een reeks incubatiemedia en temperaturen te accommoderen als dat nodig is voor experimenten.

Isolatie van kweekbare gisten en schimmels uit bodems om de structuur van schimmelpopulaties te onderzoeken

Dit manuscript beschrijft een geoptimaliseerd inoculatieprotocol dat gebruik maakt van losse maïsbladomhulsels voor reproduceerbare cytologische, fysiologische en moleculaire studies van maïsinteracties met schimmelpathogenen van planten. De bladomhulsels vergemakkelijken real-time observatie van cellulaire interacties tussen de levende plant en de schimmel in niet-gefixeerde weefsels.

Losse maïsomhulsels voor levende beeldvorming van infectie door schimmelpathogenen van bladmaïs

Leer een steriele collectieprocedure voor ascosporen van Gibberella zeae om ontwikkelingsprocessen te bestuderen. Dit protocol verbetert de reproduceerbaarheid voor genoomexpressieprofieltests.

Gibberella zeae Ascospore Productie en collectie voor microarray experimenten.

Meer video's verkennen