Name: Verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: Leer hoe je menselijke embryonale stamcellen onderhoudt en uitbreidt met behulp van collageenase-splitsingstechnieken. Deze methode behoudt celaggregaten en voorkomt differentiatie bij het werken met H1- en H9-cellijnen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (es) cellen

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen

Ja, ik ben Lauren Deon. Ik ben verantwoordelijk voor de Human Amgen stamcel-co-faciliteit bij MGH. Ja, ik ben Lauren, ik ben verantwoordelijk voor de Human AM stamcel-co-faciliteit bij MGH.Ik werk nu al jaren met menselijke Amgen-stamcellen, sinds mijn tijd als postdoc in het laboratorium van George De, vier jaar geleden. Op dit moment hebben we twee cellijnen, H1 en H9, die beide afkomstig zijn van Y cell. De manier waarop we deze cellen in cultuur expanderen of onderhouden, of althans de manier waarop we deze cellen splitsen, is door gebruik te maken van collagenase.Wat ik gewoonlijk doe tijdens de eerste paar passages na het uitplaten van de cellen, is de techniek van het plukken van kolonies gebruiken. Op deze manier kan ik onder de microscoop controleren welke kolonies goed zijn, gedifferentieerd zijn en een mooie vorm hebben; ik verzamel dan alleen deze kolonies, snijd ze in een paar stukjes en plaats ze terug in een nieuw flacon. De kolonies die er minder gedifferentieerd uitzien, laat ik ongemoeid.Een andere manier om de cellen te passeren is door gebruik te maken van trypsine. Ik gebruik deze techniek hier niet. Ik denk dat collagenase iets veiliger is, omdat humane stamcellen er niet van houden om geïndividualiseerd te worden of om alleen te zijn.Wanneer u trypsin gebruikt, en dit iets te lang doet — bijvoorbeeld drie tot vier minuten, wat gebruikelijk is voor andere celtypen — zullen menselijke stamcellen individueel worden, waardoor de meeste cellen afsterven, differentiëren of niet aan de matrix hechten. Het is daarom essentieel om de cellen in clusters te houden; u wilt voorkomen dat ze individueel in de kolf terechtkomen.Het gebruik van collagenase heeft als voordeel dat de cellen als planten behouden blijven. Bij het gebruik van chipsy selecteert u specifiek de cellen die dit zeer zware proces van g-opsonisatie overleven. Deze cellen zijn doorgaans zeer sterk proliferatief.Zo kunt u uw cellen aanpassen aan dit trypsineproces. Het probleem is dat u cellen heeft die zich anders gedragen en veel sneller groeien. Een risico is dat er chromosomale abnormaliteiten kunnen ontstaan als gevolg van dit zeer snelle delingsproces.U stelt dus dat ization kan leiden tot selectie van cellen in culture voor de meeste prolifererende cellen. Dat klopt. Actiever en waarschijnlijk ook hogere overlevingspercentages dan andere cellen. Dus na proliferatie, in feite culture na proliferatie in tripsine, worden deze na verschillende passages een andere culture met deze verschillende eigenschappen.Het is dus lastig om vast te stellen of ze exact identiek zijn. Als u de gebruikelijke test uitvoert, bijvoorbeeld door markers te controleren, reguliere markers van volledig gedifferentieerde cellen zoals OC four, nano one 60 SC four C, C3, dan kunnen al deze moleculen mogelijk nog steeds tot expressie komen. Als u TER-vorming uitvoert, kunnen deze cellen mogelijk nog steeds differentiëren en worden gevormd zoals normale cellen.Als u naar het karyotype kijkt, kan er sprake zijn van een abnormaliteit, maar het is ook mogelijk dat u een normaal karyotype heeft. Het selectieve voordeel kan dan simpelweg te wijten zijn aan een mutatie die u niet kunt waarnemen via een karyotype. Daarom denk ik dat het feit dat ze veel sneller groeien op zichzelf al een beetje zorgwekkender is.En als we deze cellen op een bepaald moment voor transplantatie willen gebruiken, zou ik dit type cellen zeker niet gebruiken. Oké. Wilt u mij vertellen wat de belangrijkste technische problemen zijn bij het gebruik van deze techniek voor het passeren van cellen? Dus het gebruik van S, ja.Het duurt gewoon iets langer en aangezien de cellen minder snel groeien, duurt het veel langer voordat er voldoende cellen zijn om een experiment uit te voeren. Ik zou dus zeggen dat het minder praktisch is. Wilt u in een paar woorden vertellen wat de doelen van uw experiment zijn?Hoe gebruikt u CS-cellen? Mijn belangrijkste project hier is om endotheelcellen te verkrijgen uit menselijke AB-stamcellen. Het idee is om in staat te zijn bloed te produceren.We werken veel samen met laboratoria voor weefselbiotechnologie en een van hun doelen is om weefsel in vitro te creëren. Een van de beperkingen hiervan is echter het gebrek aan bloedvaten die door deze weefsels lopen. Als we endotheliale cellen in dit weefsel kunnen brengen of plaatsen, zouden we een betere groei van dit weefsel verkrijgen.Er zijn slechts enkele bekende bronnen voor endotheelcellen, zoals koud bloed of drukbloed, maar het zou interessant zijn om een andere celbron te hebben, zoals menselijke oren. Het voordeel hiervan is dat menselijke oren vrijwel oneindig kunnen worden uitgebreid, waardoor u deze cellen kunt modificeren, een induceerbaar systeem kunt maken en dit kunt gebruiken. Vervolgens past u dit toe in uw eindproduct, in dit geval uw materiaalcellen.

propagation-of-human-embryonic-stem-es-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Het vermogen van menselijke embryonale stamcellen om zichzelf te vernieuwen en te differentiëren in alle celtypen van het lichaam, suggereert dat zij een grote belofte voor zowel de medische toepassingen en als een research tool voor het aanpakken van fundamentele vragen bij ontwikkeling en ziekte vast te houden. Hier bieden wij een beknopte, stap-voor-stap protocol voor de winning van menselijke embryonale stamcellen uit embryo's door immunosurgical isolatie van de binnenste celmassa.

Afleiding van menselijke embryonale stamcellen door Immunosurgery

De differentiatie van ESC samenvalt met cel-type specifieke veranderingen in de structuur en samenstelling van het chromatine. De detectie van deze veranderingen geeft waardevolle inzichten in de mechanismen die stemcellness en celdifferentiatie te definiëren. Chromatine immunoprecipitatie (ChIP) vormt een waardevolle methode om de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen stamcellen differentiatie ontleden.

Chromatine immunoprecipitatie van menselijke embryonale stamcellen

Deze video laat zien hoe het handhaven van de groei van menselijke embryonale stamcellen (hESC 's) in de feeder cel-vrije omstandigheden en hoe je continu passage hESC' s in de feeder cel-vrije omstandigheden. Bevestiging van hESC pluripotentie gegroeid in feeder celvrije voorwaarden door immunofluorescentie microscopie is ook aangetoond. Deel 3 van 3.

Van MEF tot Matrigel 3: passage uit hESC &#39;s Matrigel op Matrigel

Geregisseerd differentiatie van hESC 's in de specifieke cellen heeft gegenereerd veel belangstelling voor regeneratieve geneeskunde. Wij bieden een beknopte, stap-voor-stap protocol voor het bepalen van...

Lot in kaart brengen van menselijke embryonale stamcellen door teratoom Formation

Ondanks de recente ontwikkelingen in genetische modificatie, transfectie van humane embryonale stamcellen (hESC 's) blijft een grillig proces. Voor zover wij weten, zijn systematische en efficiënte methoden om menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) transfecteren niet gemeld. Hier beschrijven we robuuste protocollen om efficiënt te transfecteren en nucleofect menselijke iPSCs.

Transfecteren en Nucleofecting Human geïnduceerde pluripotente stamcellen

We hebben een protocol voor de inductie van neuroblasts rechtstreeks van pluripotente menselijke embryonale stamcellen gehouden onder bepaalde voorwaarden met kleine moleculen, die afleiding van een groot aanbod van menselijke neurale voorouders en neuronale celtypes in het ontwikkelen van CNS voor neurale reparatie mogelijk maakt.

Efficiënte Afleiding van de Mens Neuronale voorouders en neuronen van pluripotente menselijke embryonale stamcellen met op kleine moleculen Inductie

Enkele cel genexpressie test is noodzakelijk om inzicht stamcel heterogeniteiten.

Profilering Individuele menselijke embryonale stamcellen door kwantitatieve RT-PCR

Reporter cellijnen bieden een middel om te visualiseren, te volgen en te isoleren cellen van belang zijn van de heterogene populatie. Echter, gen targeting met gebruikelijke homologe recombinatie in humane embryonale stamcellen is inefficiënt. Hierin beschrijven we richten CNS middenhersenen specifieke transcriptiefactor PITX3 locus met EGFP met zink-vinger nuclease verbeterde homologe recombinatie.

Zink-vinger Nuclease Enhanced gentargeting in menselijke embryonale stamcellen

Hier gepresenteerd is een protocol voor het genereren van een eencellige cultuur van menselijke embryonale stamcellen en hun daaropvolgende differentiatie in neurale voorlopercellen. Het protocol is eenvoudig, robuust, schaalbaar en geschikt voor geneesmiddelen screening en toepassingen voor regeneratieve geneeskunde.

Efficiënte Neurale differentiatie met behulp van eencellige cultuur van menselijke embryonale stamcellen

Hier laten we zien hoe onze lab TINTEN menselijke embryonale stamcellijnen bevriest.

Invriezen menselijke embryonale stamcellen

Leer hoe je menselijke embryonale stamcellen onderhoudt en uitbreidt met behulp van collageenase-splitsingstechnieken. Deze methode behoudt celaggregaten en voorkomt differentiatie bij het werken met H1- en H9-cellijnen.

Verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen

Meer video's verkennen