Name: Kanker Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 37 s
Description: Leer het stomatogastrische zenuwstelsel (STNS) prepareren uit Cancer borealis voor elektrofysiologische opnames. Deze methode maakt intracellulaire metingen van het STG mogelijk voor neurobiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij dankbaar erkennen de leden van de Marder Lab. Wij danken onze adviseur, dr. Eva Marder, voor haar steun en aanmoediging. Dit onderzoek werd ondersteund door het Nationaal Instituut voor Neurologische Aandoeningen en Stroke subsidies NS-17813 en de NS-058110.

1. Bruto Dissection <ol><li> Plaats een krab op ijs gedurende 30 minuten te saai de zintuiglijke en motorische systemen van het dier. Surround het aan alle kanten met ijs. Handschoenen worden gedragen bij het hanteren van de krab. </li><li> Bereid je voor op de bruto-dissectie door het leggen van de dissectie pan en de tools die u gaat gebruiken. Rongeurs, zijn bot snijden schaar, kleine schaar, pincet getande, een spatel met een conische rand, een zwart Sylgard-gecoate schaal, en insecten pennen nodig. </li><li> Haal de krab uit de ijsemmer door haar achterpoot om te voorkomen dat te knijpen en plaats deze in de dissectie pan. </li><li> Verwijder de klauwen eerst door te draaien ieder een naar binnen. Verwijder vervolgens iedere poot met dezelfde draaiende beweging. </li><li> Met behulp van de rongeurs, verwijder de bovenkaak voor de mond. Verwijder ook de zachte maxillule. </li><li> Met behulp van de rongeurs opnieuw beginnen vanaf de laterale achterste einde van de schaal en krijgen een goede grip op de rand van het. Klem naar beneden met de rongeurs en breken dat stukje schild uit te schakelen. Zorg ervoor dat u genoeg van de schaal te verwijderen, zodat de spatel om de opening te gaan. Ga door het verwijderen van de rand van de schaal tot aan de ogen en herhaal aan de andere kant. </li><li> Met de conische kant van de spatel voorzichtig weg te schrapen de zachte binnenkant weefsel van het dak van de dorsale schild. Houd de spatel in contact met het schild om te voorkomen dat schade aan de STNS. Gebruik de rongeurs te breken weg de delen van het schild die zijn gescheiden van het weefsel. Ook aparte deel van het zachte weefsel van de ventrale schild en zorg ervoor dat alle adductoren het bevestigen van de weefsel om het schild te scheiden. </li><li> Vakantie, weg van de dorsale schild zo ver posterior als het hart, waar er twee kleine gehoorbeentjes uitsteekt uit het schild. Snijd zo ver anterior mogelijk te maken. Stabiliseren van de Cephalon (het &quot;gezicht&quot;) met een vinger, terwijl het doorbreken van de meest voorste delen van de dorsale schild. </li><li> Aan de ventrale zijde van de schaal, trek het kaken een voor een door het verankeren van de rongeurs op een onderkaak, draaien ze naar buiten met de onderkaak los van de bijgevoegde epistome, en trekken weg. Twee lange gehoorbeentjes met spieren moet worden gehecht aan de geëxtraheerde onderkaak indien goed gedaan. </li><li> Aparte weg het weefsel van de zijkanten van de cephalon de buurt van de ogen met behulp van de spatel. Met kleine dissectie schaar, dwars door het weefsel zo dicht mogelijk bij de nok van het beentje als mogelijk laag voor laag. </li><li> Rest de krab tegen een muur van de dissectie pan en prop het op vastzetten op zijn plaats (de klauwen kan worden gebruikt voor deze). Snijd de labrum (&quot;upper lip&quot;) uit de buurt van de epistome om zeker niet te verlaten elk weefsel bevestigd. Met behulp van bot-cutting schaar maken twee diagonale sneden in de ventrale schild om de cephalon te verwijderen. </li><li> Neem het labrum met getande tang en snijd het labium (&quot;onderlip&quot;) van de beentje op de buikzijde. Dan voorzichtig til de lip van de resterende ventrale schild. Gebruik de kleine schaar om het ventrale deel van de maag te scheiden van het weefsel voering het schild. Wanneer de pyloric ampullen zichtbaar zijn, snijd de maag weg van het weefsel aan weerszijden van het tot de maag wordt gewonnen uit de krab. </li><li> Nog steeds de maag door de lip met een tang, rust de maag tegen de palm van de hand en zout in de mond giet. Dit vergroot de maag en maakt het gemakkelijker open te snijden. Gesneden uit de opening bij de mond naar beneden tussen de pylorus dwars door het beentje tussen de ampullen. Vervolgens schuin naar beneden dwars door de twee cardiale takken. Snijd de uiteinden van de drie tanden binnenkant van de maag. </li><li> Plaats de maag op een groot, zwart, Sylgard-gecoate schaal met de binnenkant van de maag naar beneden. Vastpinnen de vijf hoeken van de voorbereiding met insect pinnen en vul de schotel met koude zoutoplossing, dompelen de hele voorbereiding (zie figuur 1). </li></ol> 2. Fijn Dissection <ol><li> , Micro-dissectie-instrumenten zijn nodig voor de fijne dissectie. In het bijzonder, tangen en de lente schaar gesteld en moet er een pin houder met een wolfraam naald. Een heldere, Sylgard-coating, petrischaaltje en wat fijne draden pinnen moet ook zijn voorbereid. </li><li> Begin op de laagste vergroting, beginnen met spelden de klep helemaal dicht bij de rand die wordt gebruikt om de mondopening zijn. De volgorde van de rest van de pinnen om de voorbereiding van strak en alle andere gebieden nodig pin. </li><li> Til de gevlekte hypodermis die het onderste deel van de voorbereiding en trim het over het verlaten van een patch van de hypodermis met twee witte stippen. </li><li> Schil van de gele, piekerig, membraneuze weefsel buurt van de onderkant van het preparaat. De mvns zijn zwak aan de onderkant van dit weefsel. Haal voorzichtig het mvns van het gele weefsel als het is opgetrokken. Volg de gele weefsel op en snijd langs de hersenen. </li><li> Volg de dikke processen het verlaten van de hersenen die zich uitstrekken laterally. Dit zijn de commisural zenuwen. Zodra het einde van de commissural zenuw is bereikt, verwijder dan de massa van de sponsachtige, gebroken witte weefsel dat is weg van de kant van de hersenen snijden. </li><li> Waar de ionen en zonen de tandwielen te voldoen, weggesneden van de spieren en weefsel op de lengte van de ionen en zonen te onthullen. </li><li> Keer terug naar de gevlekte hypodermis patch en knip het uit. Dit moet vertrekken een opening in de slagader rond de STG. Knip de opening naar de twee spieren die flank van de STG te scheiden. Til de uiteinden van deze spieren en dwars onder hen te scheiden van de slagader en naar de alns en AGNs bloot te leggen. Scheid de flankerende spieren zo ver als het kraakbeen ligt boven de stn. </li><li> Knip de arteriële weefsel rondom de STG naar beneden tot waar de mvns, DGN, en dvn ontmoeten. Het werk neer de dvn aan de lvns en snijd door de witachtige, delicate weefsel voor de lvns. </li><li> Zoek de PSN beentje over de aan de onderkant van de voorbereiding. De PSN kan worden gebruikt om de lvn en dlvn knooppunt te vinden. </li><li> Vervolgens de dlvn naar de pyn en PDN vinden. De pyn wraps vaak over de pyloris ampulla naar de opening. Het PDN vorken off van het dlvn en is tussen de pyloris ampulla en de cardio pyloric klep spieren. Laat wat spieren aan een van deze zenuwen, omdat ze gemakkelijk kunnen worden verward wanneer het preparaat wordt overgebracht naar de duidelijke Sylgard schotel. </li><li> Wanneer alle van de zenuwen zijn blootgelegd, verbreken de resterende verbindingen tussen de STNS en het weefsel en ongewenste zenuwen van de maag. Ga voorzichtig de STNS weg van de rest van de maag, het snijden elke gemiste aansluitingen. </li><li> De toestand van de duidelijke Sylgard schotel met de overgebleven massa van de maag weefsel door te wrijven over het oppervlak van de Sylgard totdat de Sylgard niet meer voelt zich te plakkerig of droog. Sylgard is hydrofoob en de STNS zal sterk hechten aan het als de Sylgard-gecoate schaal is niet geconditioneerd op deze manier. </li><li> Voeg wat koude zoutoplossing aan het gerecht. Pak de bovenste uiteinden van de zenuwen commissural met een tang en breng de STNS de duidelijke Sylgard schotel. </li><li> Speld de STNS neer op de Sylgard. Scheiden de hersenen van de commissural zenuwen en gebruik de minuten pinnen aan de vier uiteinden van de tandwielen veilig naar beneden de eerste plaats. Zorg ervoor dat de voorbereiding goed is kant naar boven door te controleren of het IVN omhoog wijst weg van de Sylgard. De dgn moet een beetje af te sluiten onder de STG wanneer de STG is juiste kant naar boven. Speld de rest van de zenuwuiteinden naar beneden met de fijne draad pinnen. </li><li> Schone weg alle resterende spier of weefsel van de STNS. </li><li> Desheath de STG met behulp van een pen houder en een beetje verslaafd, fijne, wolfraam naald. Maak een klein gaatje in een hoek van de STG schede uit de buurt van de cellichamen en gebruik dat gat te krijgen tussen de lagen van de schede. Snijd voorzichtig een flap van gescheiden schede om de STG neuropil en cellichamen bloot te leggen. </li><li> Beneden een pin flappen van schede om de toegankelijkheid te verhogen om de cellichamen en de STG voor intracellulaire opnames te stabiliseren. Re-pin de rest van de STNS ervoor te zorgen dat elke zenuw strak is en goed verdeeld voor de extracellulaire opname (zie figuur 3). </li></ol> 3. Resultaten <ol><li> Idealiter zouden alle van de zenuwen vrij zijn van inkepingen en schade, met name degenen die zullen worden opgenomen van. Geen van de zenuwen moet worden verward of gedraaid. De STG moet intact met alle van de cellen die in een baard formatie rond de neuropil. De intacte STNS is bilateraal symmetrisch en ziet eruit als een homunculus met de lvns als de benen, de mvns als de armen en het voorste einde als het hoofd. </li></ol> Afkortingen: <table border="1"><tbody><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric zenuwstelsel </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric ganglion </td></tr><tr><td> Cog </td><td> Commissural ganglion </td></tr><tr><td> OG </td><td> Oesofageale ganglion </td></tr><tr><td> mvn </td><td> Mediane zenuw ventriculaire </td></tr><tr><td> ion </td><td> Inferior oesofageale zenuw </td></tr><tr><td> zoon </td><td> Superior oesofageale zenuw </td></tr><tr><td> AGN </td><td> Anterior maag zenuw </td></tr><tr><td> ALN </td><td> Anterior laterale zenuw </td></tr><tr><td> dgn </td><td> Dorsale maag zenuw </td></tr><tr><td> dvn </td><td> Dorsale zenuw ventriculaire </td></tr><tr><td> lvn </td><td> Laterale ventrikel zenuw </td></tr><tr><td> PSN </td><td> Posterior maag zenuw </td></tr><tr><td> pyn </td><td> Pylorus zenuw </td></tr><tr><td> PDN </td><td> Pylorus dilatator zenuw </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> Dorsale tak van de laterale ventrikel zenuw </td></tr><tr><td> IVN </td><td> Inferior ventriculaire zenuw </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;Afbeelding 1&quot; /&gt; Figuur 1: Diagram van de benaderende plaatsing van de STNS in de maag voorafgaand aan de dissectie. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="Figuur 2" /> Figuur 2: Schematische weergave van de verschillende spieren in het onderste deel van de maag en een overlay van de STNS in het licht groen. Elke cel type in de STG is opgenomen met de spieren ze bekend zijn innerveren. Deze kaart is handig bij het plannen van een zenuw die een signaal van een bepaalde cel (met dank aan de Nadim lab) draagt ​​ontleden. <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="Figuur 3" /> Figuur 3: Schematische weergave van de STNS met intracellulaire elektroden en extracellulaire putten (van Marder en Bucher, 2007).

<ol><li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris-Warrick%2C+RM+%22Dynamic+Biological+Networks%3A+The+stomatogastric+nervous+system%22">Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system</a>. , MIT Press. Boston. (1992).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li>
<li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stomatogastric+Nervous+System%3A+Structure+and+function+of+a+small+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li>
</ol>

De STNS dissectie is de eerste stap in het uitvoeren van een elektrofysiologie of immunohistochemie experiment, of voor het verkrijgen van cellen voor celcultuur. Ongeacht de beoogde experiment, zal de bruto dissectie blijven ongewijzigd. Echter, de fijne dissectie variëren. Het is belangrijk om van tevoren te plannen welke cellen en welke zenuwen je zult opnemen. De meeste neuronen in de STG hebben processen die ten minste een spier innerveren in de maag (zie figuur 2) en zijn ingedeeld volgens hun geïnnerveerd doel. D...

<table><tbody><tr><td>Zwart Sylgard 170</td><td>Overig</td><td>Dow Corning</td><td>170</td><td>Grove dissectie</td></tr><tr><td>Fijne schaar</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Insectenspelden maat 6</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-65</td><td></td></tr><tr><td>Mayo-schaar</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14110-17</td><td></td></tr><tr><td>Microspatel</td><td>Chirurgie</td><td>WARD&amp;rsquo;s Natural Science</td><td>15 V 4313</td><td></td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>Weefselpincet</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Fijn wolfraamdraad (0.001 in. diameter)</td><td>Chirurgie</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>Fijne dissectie</td></tr><tr><td>Pincet #5</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Minuten-spelden</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Moria-veerschaar (7 mm bladen)</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal (100x15 mm)</td><td>Overig</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Speldhouder</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>Superfijne pincet #5SF</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>Overig</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>Wolfraamnaalden</td><td>Chirurgie</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Microscoop</td><td>Wild</td><td>MC3</td><td>Diversen</td></tr><tr><td>Jonahkrab (&lt;em&gt;C. borealis&lt;/em&gt;)</td><td>Dier</td><td>Commercial Lobster</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kanker borealis stomatogastric nervous system dissection

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

De stomatogastric ganglion (STG) is een uitstekend model voor het bestuderen van cellulaire en interactie met het netwerk, want het bevat een relatief klein aantal cellen (ongeveer 25 in C. borealis) die goed worden gekarakteriseerd. De cellen in de STG vertonen een breed scala aan uitgangen en zijn verantwoordelijk voor de motorische acties van de maag. De maag bevat de maag molen die voedsel afbreekt met drie interne tanden, en de pylorus, die het voedsel filtert voordat het de middendarm. De STG produceert twee ritmische uitgangen naar de maag molen en pylorus bekend staat als centrale patroon generatoren (CPGs) controle. Elke cel in het STG kunnen deelnemen aan een of beide van deze ritmes. Deze CPGs maken voor de studie van neuromodulatie, homeostase, cellulair en netwerk variabiliteit, netwerk ontwikkeling en net te herstellen. De dissectie van de stomatogastric zenuwstelsel (STNS) van de Jona Noordzeekrab (Cancer borealis) gebeurt in twee delen, de grove en fijne dissectie. In de bruto-dissectie de gehele maag wordt ontleed uit de krab. Tijdens de fijne dissectie van de STNS wordt gewonnen uit de maag met behulp van een dissectie microscoop en micro-dissectie-instrumenten (zie figuur 1). De STNS omvat de STG, de slokdarm ganglion (OG), en de commissural ganglia (COG) en de zenuwen die de maag spieren innerveren. Hier laten we zien hoe een volledige ontleding van de STNS ter voorbereiding van een elektrofysiologie experiment waarbij de cellen in de STG zou worden opgenomen van intracellulair en de perifere zenuwen uit te voeren zou worden gebruikt voor extracellulaire opnamen. De juiste techniek voor het vinden van de gewenste zenuwen is zowel getoond als onze techniek van desheathing het ganglion aan de somata en neuropil onthullen.

Het stomatogastric zenuwstelsel (STNS) van de Jona krab (<em&gt; C. borealis</em&gt;) Kan worden gebruikt voor de elektrofysiologie, immunohistochemie, en onderzoeken in celculturen. De STNS extractie gebeurt in twee delen: de grove en fijne dissectie.

Kanker Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

Het stomatogastrische ganglion (STG) is een uitstekend model voor het bestuderen van cellulaire en netwerkinteracties omdat het een relatief klein aantal ... bevat

Deze procedure begint met een grove dissectie van de krabbensuik, waarbij de aanhangsels en de dorsale carpus van de krab worden verwijderd. De gehele maag wordt uit het dier gedisseceerd. De maag wordt opengesneden en platgepind op een zwart sardisch schaaltje.Ter voorbereiding op de fijne dissectie wordt het gastrische zenuwstelsel van de Steamatic uit de maag gedisseceerd en overgebracht naar een doorzichtige, met Sard gecoate Petrischaal, waar de omhulsels worden verwijderd ter voorbereiding op een elektrofysiologisch experiment. Hallo, mijn naam is Rachel Au van het Martyr Lab aan de Brandeis University. En ik ben Gabrielle Gutierrez, ook van het Martyr Lab.Vandaag tonen we u een procedure voor het dissekeren van het somatische gastrische zenuwstelsel van de Crab Cancer Borealis. Wij gebruiken het St NS van de krab in ons laboratorium voor onze elektrofysiologische, immunohistochemische en celcultuurexperimenten. Met behulp van dit neurale netwerk kunnen we verschillende fundamentele principes van de neurobiologie onderzoeken, zoals neuromodulatiehomeostase, netwerkvariabiliteit, netwerkontwikkeling en netwerkherstel.Laten we beginnen. Voordat de dissectie start, moet de krab worden verdoofd door deze gedurende 30 minuten in ijs te begraven. Zorg ervoor dat de krab aan alle kanten door ijs is omringd.Het ijs verdooft de sensorische en motorische systemen van de krab, maar de krab kan nog steeds reageren wanneer deze wordt verwijderd terwijl de krab afkoelt. Bereid de grove dissectie voor door de apparatuur te verzamelen die nodig is voor dit deel van het protocol. De dissectieschaal, Ron-klemmen, botknipscharen, kleine scharen, tandpincetten, een spatel met een taps toelopende rand, een zwarte schaal met siliconen coating en insectenspelden voordat u begint.Bereid u voor door handschoenen aan te trekken. Zodra er 30 minuten zijn verstreken, haalt u de krab bij zijn achterpoot uit de ijsemmer. Om te voorkomen dat u wordt geknepen, verwijdert u eerst de scharen door deze naar binnen te draaien, waarna u de krab in de dissectieschaal plaatst.Verwijder vervolgens elke poot met dezelfde draaiende beweging. Nu het dier geen aanhangsels meer heeft, gebruikt u de Rongeurs om de maxilla die de mond bedekt en de zachte maxilla te verwijderen. Gebruik de Rongeurs opnieuw, begin bij het lateroposterieure uiteinde van de carpus en grip de rand hiervan goed vast. Klem met de Rongeurs aan en breek dat deel van de carpus af.Zorg ervoor dat u voldoende van de carpus verwijdert zodat de spatel in de opening kan worden gebracht. Ga door met het verwijderen van de rand van de carpus tot aan de ogen en herhaal dit aan de andere zijde. Schraap met de taps toelopende zijde van de spatel voorzichtig het zachte binnenweefsel los van het dak van de dorsale carpus.Houd tijdens deze handeling de spatel in contact met de carus. Gebruik om beschadiging van de STNS te voorkomen de Ron Jos om delen van de carus die van het weefsel zijn gescheiden, weg te breken. Breek de dorsale carus weg tot het punt waar twee kleine S uit de carus steken.Snijd zo anterieur mogelijk. Stabiliseer het cephalon met één vinger terwijl de meest anterieure delen van de dorsale carpus worden afgebroken. Scheid een deel van het zachte weefsel van de ventrale carpus.Zorg ervoor dat alle adductormuiskelen die het weefsel aan de carus bevestigen aan de ventrale zijde van de carus worden losgemaakt. Trek de mandibels één voor één naar buiten door de kaken te verankeren aan een mandibel, naar buiten te draaien en weg te trekken; twee lange structuren met aangehechte spieren zouden aan de geëxtraheerde mandibel bevestigd moeten zijn. Indien correct uitgevoerd, dient het weefsel aan de zijkanten van het cephalon nabij de ogen te worden losgemaakt.Snijd met de spatel en kleine dissectieschaar laag voor laag door het weefsel direct naast de rand van het gehoorbeentje. Zet het overgebleven deel van de krab vast tegen de dissectieschaal. Verwijder met de losgekoppelde scharen het gehele labrum van het epistoma.Maak met de kleine botknipschaar twee diagonale sneden in de ventrale carpus. Om het cephalon te verwijderen, pakt u nu het labrum vast met een pincet en snijdt u het labium aan de ventrale zijde weg van de osci. Til de lip voorzichtig weg van de resterende ventrale carus.Gebruik een klein schaartje om het ventrale deel van de maag te scheiden van het weefsel dat de carapax bekleedt. Zodra de pori canula zichtbaar zijn, snijdt u de maag aan weerszijden los van het weefsel totdat de maag uit de krab is verwijderd, waarbij u de maag bij de rand met een pincet vasthoudt. Plaats de maag tegen uw handpalm en giet zoutoplossing in de mond.Dit zal de maag uitzetten en het gemakkelijker maken om deze met de kleine schaar open te knippen. Knip vanaf de mondopening tussen de ula door, recht door het obstakel. Knip vervolgens diagonaal naar beneden door de twee cardio-takken.Snijd tot slot de uiteinden van de drie tanden in de maag af. Plaats de maag met de binnenzijde naar beneden op een met zwarte was beklede schaal ter voorbereiding op de fijne dissectie. Zet de vijf hoeken van de maag vast met insectenspelden en onderdompel het preparaat in koude zoutoplossing.De fijne dissectie wordt uitgevoerd onder het stereomicroscoop en vereist een pincet en veerschaar, evenals een naaldhouder met een wolfraamnaald. Een Petri-schaal met een transparante randbescherming en enkele fijne draadspelden moeten al klaarliggen. Begin bij de laagste vergroting en zet de flappen nabij de lip die voorheen de mondopening was vast met spelden. Maak het preparaat nu strak door de spelden naar behoefte te herschikken en toe te voegen.Til de gevlekte hypodermis die het onderste deel van het preparaat bedekt voorzichtig op met een pincet en trim deze dwars af. Er moet een stuk hypodermis overblijven met twee witte stippen. Pel nu het gele, sliertige vliezige weefsel nabij de onderkant van het preparaat los. De M vns zijn zwak bevestigd aan de onderzijde van dit weefsel.Scheid met het blad van de schaar voorzichtig de M VNS van het gele weefsel terwijl dit omhoog wordt getrokken. Snijd het gele weefsel weg langs de weinige zichtbare dikke witte uitlopers van de hersenen. Het grootste deel van de hersenen is momenteel ingebed in weefsel.Volg de processen die lateraal en richting de lip lopen. Dit zijn de twee commissurale zenuwen. Zodra het uiteinde van de commissurale zenuw is gevonden, verwijdert u het massieve, sponsachtige, gebroken witte weefsel dat van de zijkant van de hersenen is weggesneden.Lokaliseer de iOS en sos op het kruispunt waar ze de commis-ganglia raken. Snijd het spier- en weefsel weg om de lengte van de IO ns en so ns bloot te leggen; deze twee zenuwen lopen mediaal vanaf de commis-ganglia en komen samen met de slokdarmzenuw. Keer terug naar het gevlekte stukje hypodermis en snijd dit weg.Dit moet een opening in de slagader rondom de STG achterlaten. Snijd door de opening om de twee spieren die de STG flankeren van elkaar te scheiden. Til de uiteinden van deze spieren op en snijd eronder om ze van de slagader te scheiden. Deze stap legt de ALN's bloot.Verwijder de flankerende spieren tot aan de kraaklijn boven de STN. De TN is een zenuw die omhoog loopt vanuit de STG en vertoont een lichte uitstulping. Snijd vervolgens het arteriële weefsel rondom de STG weg tot het punt waar de M vns DGN en DVN samenkomen.Volg de DVN terwijl deze zich splitst in de twee LVN's. Snijd door het witachtige, delicate weefsel totdat elke LVN volledig is blootgesteld en aansluit op de DLVN. Lokaliseer de PSN boven de Osco.Nabij de onderzijde van het preparaat kan de PSN worden gebruikt om de verbinding tussen de LVN en DLVN te lokaliseren. De DV DLV loopt dus deze kant op. Hij komt hier naar beneden. Ja.Daarna splitst het zich en gaat het deze kant op. Klopt. Wat ik normaal gesproken doe, is dat ik ze hier beneden zoek en vanuit daar mijn weg terug naar boven zoek. De PDN splitst af van de DLVN en bevindt zich tussen de ULA en de spieren van de cardio-pylorische klep. Ja. Hier zijn de ampule ula, ula ampule, de P, de PYN vlak hier.Zorg ervoor dat er aan een van deze zenuwen wat spierweefsel is vastgelaten als markering om ze van elkaar te kunnen onderscheiden. Zodra alle zenuwen zijn vrijgelegd, worden alle resterende verbindingen tussen de STNS en de maag doorgesneden. Verplaats tot slot de STNS voorzichtig weg van de rest van de maag.Verwijder alle gemiste verbindingen. Bereid de heldere S-guard schaal voor door er wat maagweefsel overheen te wrijven totdat deze vochtig aanvoelt en minder plakkerig is. De STNS zal sterk aan de sogar hechten.Indien de schaal niet op deze wijze is geconditioneerd, voeg dan wat verse koude zoutoplossing toe aan de schaal. Pak de bovenste uiteinden van de commissurale zenuwen vast met een pincet en verplaats het st NS naar de heldere sogar-schaal. De hersenen blijven verbonden met de commissurale zenuwen om ontwarring te voorkomen.Bereid nu de STNS voor op het vastzetten door de hersenen los te snijden van de Commis-zenuwen. Gebruik minuchin-pinnen om de vier uiteinden van de Commis-zenuwen aan de sill guard te bevestigen. Controleer of het preparaat rechtop ligt door te verifiëren dat de IVN naar boven wijst en dat de DGN net onder de STG-pin uitkomt.De rest van de zenuw wordt afgeknipt met behulp van fijne pincetten en scharen. Verwijder zorgvuldig alle overgebleven spieren of weefsels van de STNS. De STG moet nu worden ontbloot met een naaldhouder en een licht gebogen fijne wolfraamnaald.Maak een klein gaatje in de hoek van de STG-schede, uit de buurt van de cellichamen. Steek de wolfraamnaald voorzichtig in het gaatje en breng deze tussen de schede en de Samara. Snijd of scheur voorzichtig een flapje van de gescheiden schede af om de STG-neuropill en de cellichamen bloot te leggen.Klem eventuele flappen van de schede vast om de toegankelijkheid van de cellichamen te vergroten en de STG te stabiliseren voor intracellulaire opnames. Span de rest van de STNS aan, waarbij u ervoor zorgt dat elke zenuw strak staat en voldoende gescheiden is voor extracellulaire opnames. Idealiter moeten alle zenuwen vrij zijn van knikken en beschadigingen, in het bijzonder de zenuwen waarvan u opnames zult maken.Geen van de zenuwen mag in de knoop zitten of gedraaid zijn. Het STG moet intact zijn, waarbij alle cellen in een baardformatie rond de snavel van de NI zijn gerangschikt. Het TNS was bilateraal symmetrisch en ziet eruit als een homunculus, met de LVN's als de benen.De M vns zijn de armen en het anterieure uiteinde is de kop. We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u het somatische gastrische zenuwstelsel van de krab dissecteert ter voorbereiding op een elektrofysiologisch experiment. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat u de zenuwen waarvan u wilt registreren dissecteert door de gewenste zenuwen te volgen naar de spieren die zij innerveren.Zorg ervoor dat de STNS strak is vastgezet op de transparante cigarschaal, waarbij de ongestripte zijde van de STG naar boven is gericht. Dat was het. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

cancer-borealis-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We beschrijven de fijne ontleding van het stomatogastric zenuwstelsel uit de maag van de Amerikaanse kreeft...

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

We beschrijven de bruto-dissectie van de maag van de Amerikaanse kreeft...

Bruto Dissectie van de maag van de Kreeft, Homarus Americanus</em

Samenwerking tussen een geactiveerd oncogen zoals RAS V12 en mutaties in cel polariteit genen zoals gekrabbeld, leiden tot tumorgroei in Drosophila waar tumorcellen ook weergeven invasief gedrag. Hier een eenvoudig protocol voor de inductie en observatie van de goedaardige en invasieve tumoren wordt gepresenteerd.

Een protocol voor Genetische Inductie en Visualisatie van goedaardige en Invasieve Tumoren in Cephalic Complexen van<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Prikken herstellen motoriek na een complete dwarslaesie. Sommige spinale-projecterende neuronen goed regeneratoren en andere niet. Dit document illustreert de technieken voor huisvesting zeeprik larven (en onlangs omgebouwd volwassenen), het produceren van volledige ruggenmerg doorsnijdingen en het voorbereiden wholemount hersenen en ruggenmerg voor in situ hybridisatie.

Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in Larvale Overzeese Lamprei

Hier beschrijven we de dissectie van de abdominale zenuwstreng van rivierkreeft. We demonstreren ook een elektrofysiologische techniek om fictieve voortbeweging op te nemen vanuit zwembeenmotorneuronen.

De Swimmeret Systeem van rivierkreeftjes: Een praktische gids voor de dissectie van de Nerve Koord en extracellulaire Opnamen van de Motor van het Patroon

Deze video-artikel toont het gebruik van de dorsale wortel ganglia (DRG)/kankercelmodel in adenocarcinoom van de ductus pancreaticus.

In Vitro Modellering van kanker zoals Neurale Invasion: De dorsale wortel ganglion Model

Perineurale invasie (PNI) is een veel voorkomend kenmerk van plaveiselcellencarcinoom in het hoofd-halsgebied (HNSCC), wat lagere overlevingspercentages tot gevolg heeft. De mechanismen ervan zijn slecht begrepen. Door gebruik te maken van neurites die gegenereerd zijn uit muisdorsale wortelganglia beperkt tot een semi-solide matrix, kunnen de paden die betrokken zijn bij de PNI van HNSCC-cellijnen worden onderzocht.

Een Model voor perineurale invasie in hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom

Hier presenteren we een protocol voor minimaal invasieve chirurgische lesioning van spieren intrinsiek aan het Voer apparaat van de mariene weekdieren Aplysia californica om de rollen van deze spieren te begrijpen tijdens het voeden gedrag.

Een minimaal invasieve laesie techniek voor de intrinsieke spieren van de Odontophore van Aplysia californica

Dit protocol presenteert een methode voor het weergeven van neuronale populatieactiviteit met eencellige resolutie bij niet-transgene ongewervelde soorten met behulp van absorptiespanningsgevoelige kleurstoffen en een fotodiode array. Deze aanpak maakt een snelle workflow mogelijk, waarbij beeldvorming en analyse in één dag kunnen worden nagestreefd.

Op fotodiode gebaseerde optische beeldvorming voor het opnemen van netwerkdynamica met single-neuronresolutie in niet-transgene ongewervelde dieren

Het huidige protocol beschrijft een muismodel van de ablatie van adrenerge innervatie door het superieure cervicale ganglion te identificeren en te reseceren.

Chirurgische techniek voor superieure cervicale ganglionectomie in een muizenmodel

Leer het stomatogastrische zenuwstelsel (STNS) prepareren uit Cancer borealis voor elektrofysiologische opnames. Deze methode maakt intracellulaire metingen van het STG mogelijk voor neurobiologisch onderzoek.

Kanker Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

Meer video's verkennen