Name: Gene-gun Transfectie van de hippocampus Neuronen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Leer een protocol voor het isoleren van hippocampi uit hele hersenen met behulp van een schone snijder. Deze methode verbetert de reproduceerbaarheid in neurowetenschappelijk onderzoek naar geheugen en leren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs hebben niets te melden.

gene-gun transfectie van de hippocampus neuronen

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gene-gun Transfectie van de hippocampus Neuronen

Hoi, ik ben Kma. Ik werk in het Case Lab aan de Brown University. Reinig de Slicer-stap met 70% ethanol. Plaats de plaatinsert in zes.Vul de wellplaat met medium en incubeer op 37 °C; gebruik een pincet om de gehele hersenen tussen het middenbrein en de vier hersenkwabben te scheiden. Isoleer de hippocampus aan één zijde en isoleer vervolgens de hippocampus aan de andere zijde. Plaats de hippocampi op een druppel PBS.Zuig de PBS af en maak sagittale coupes met de weefselsnijder. Herhaal dit proces door de snijders op een petri-schaal over te brengen door voorzichtig te spoelen met PBS; was de coupes door voorzichtig PBS en medium toe te voegen en weer af te zuigen. Scheid de coupes met een pincet.Was de coupes met PBS en medium. Plaats de coupes vervolgens opnieuw op de plaat en voeg deze in. Zuig het medium uit de coupes weg met behulp van een pincet.Sluit de slang van het genenpistool aan op de heliumcilinder. Bevestig de loop aan het genenpistool. Vul het magazijn met projectielen.Plaats het magazijn in het Jing-apparaat. Stel de druk op de heliumtank in. Breng EGFP-gecoate kralen aan op de coupes.En nu.

gene-gun-transfection-of-hippocampal-neurons

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We beschrijven een methode voor het bereiden van DNA-gecoate goud kogels en demonstreren het gebruik van dergelijke kogels om biolistically transfecteren neuronen in de hippocampus gekweekte plakjes.

De voorbereiding van Gene Gun Bullets and biolistische Transfectie van Neuronen in Slice Cultuur

Live-cell imaging is met name van nut bij het bestuderen van de dynamiek van organel mensenhandel. Hier beschrijven we een protocol voor live beeldvorming van dense-core blaasjes in gekweekte neuronen met behulp van wide-field fluorescentie microscopie. Dit protocol is flexibel en kan worden aangepast aan image andere organellen, zoals mitochondriën, endosomen, en peroxisomen.

Live-Imaging van dicht-core Blaasjes in het jeugdwerk Gekweekte hippocampale neuronen

Dit protocol beschrijft de stappen die nodig zijn om te ontleden, transfecteren via elektroporatie en cultuur muis hippocampus en corticale neuronen. Op korte termijn culturen kan worden gebruikt voor studies van axon uitgroei en begeleiding, terwijl de lange-termijn culturen kunnen worden gebruikt voor onderzoek naar synaptogenese en dendritische rug analyse.

Nucleofection en Primaire Cultuur van de embryonale Mouse hippocampus en de corticale neuronen

Source: Keener, D. G., et al. Single-Cell Electroporation across Different Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Excitatory and Class-Specific Inhibitory Neurons. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates the process of single-cell electroporation to introduce plasmid DNA into neurons within mouse hippocampal slice cultures. The procedure involves precise pipette positioning, pressure adjustments, and electroporation pulses to transiently permeabilize the neuronal membrane,...

Gene Expression via Single-Cell Electroporation in Mouse Hippocampal Slice Cultures

Source: Denaxa, M., el al., Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the procedure for injecting a plasmid vector carrying the gene of interest into interneuron progenitors in an embryonic brain slice, followed by electroporation for plasmid entry and gene expression. These modified progenitors can later be used for treating brain disorders.

Agarose-Embedded Electroporation-Assisted Gene Transfer in Mouse Cortical Interneuron Progenitors

Calciumfosfaatprecipitatie een gemakkelijke en economische methode voor transfectie van gekweekte cellen. Met optimalisatie is het mogelijk om deze methode te gebruiken op moeilijk te transfecteren cellen zoals primaire neuronen. Hier beschrijven we gedetailleerd protocol voor calciumfosfaattransfectie van hippocampale neuronen gekweekt samen met astrogliale cellen.

Calciumfosfaattransfectie van Primary hippocampus neuronen

Recente verbeteringen in organotypische herfsnijspreparaten hebben hun exploitatie voor biotechnologische toepassingen mogelijk gemaakt. Organotypische plakjes behouden lokale structurele kenmerken van in vivo biologie, inclusief functionele synaptische verbindingen. Hier presenteren we een regioselectieve biolistische afleveringsmethode om deze plakjes te labelen en genetisch te manipuleren.

Regioselectieve Biolistische Targeting in Organotypische Brain Plakjes met een aangepaste Gene Gun

Hier is een gemodificeerde roller buis methode voor het kweken en intermitterende high-resolution beeldvorming van knaagdier hersenen plakjes vele weken met precieze herpositionering op photoetched coverslips. Neuronale levensvatbaarheid en morfologie van het segment zijn goed onderhouden. Toepassingen van deze volledig gesloten systeem met virussen voor celtype specifieke expressie worden geleverd.

Gemodificeerde Roller buis methode voor juist gelokaliseerd en repetitieve intermitterende Imaging tijdens langetermijnkweek van hersenen segmenten in een gesloten systeem

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor eencellige elektroporatie dat genen kan leveren in zowel excitatory als remmende neuronen in een reeks in vitro hippocampale slice-cultuurleeftijden. Onze aanpak zorgt voor een nauwkeurige en efficiënte expressie van genen in individuele cellen, die kunnen worden gebruikt om cel-autonome en intercellulaire functies te onderzoeken.

Eencellige elektroporatie over verschillende organotypische slicecultuur van hippocampale excitatory en klassespecifieke remmende neuronen

Deze techniek laat een efficiënte manier om replicatie-defecte retrovirale aandelen dat codeert voor een menselijk oncogen voor te bereiden, en vervolgens gebruikt voor de inductie van myeloproliferatieve ziekte in de muis model.

De productie van replicatie-defecte Retrovirus door transiënte transfectie van 293T-cellen

Leer een protocol voor het isoleren van hippocampi uit hele hersenen met behulp van een schone snijder. Deze methode verbetert de reproduceerbaarheid in neurowetenschappelijk onderzoek naar geheugen en leren.

Gene-gun Transfectie van de hippocampus Neuronen

Meer video's verkennen