Name: Grove en fijne Dissectie van binnenoor Sensory epitheel in Adult zebravis ( Danio rerio) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Leer grove en fijne dissectie van het binnenoor van volwassen zebravis (Danio rerio). Deze methode isoleert sensorisch epitheelweefsel om haarcelregeneratie in gewervelden te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd ondersteund door de Intramurale Research Program van de National Human Genome Research Institute, National Institutes of Health.

Deel 1: Voorbereiding van het weefsel <ol><li> Euthanaseren de volwassen zebravissen met gebufferde MS-222 (Ethyl 3-aminobenzoaat methaansulfonaat zout, 0,03%). </li><li> Onthoofden van de vis. Snijd de onderkaak, plaats het hoofd op de dissectie pad met de ventrale kant naar boven, en immobiliseren het weefsel met een insect pinnen. Verwijder het zachte weefsel ventrale aan de schedel en crack opent het ventrale deel van de schedel capsule met een paar fijne pincet onder een dissectie microscoop. </li><li> Zet de vis kop in paraformaldehyd (4%) bij 4 ° C gedurende de nacht. </li><li> Spoel de vaste vis kop in PBS (fosfaat gebufferde zoutoplossing, 1X) voor de 3 keer, 5 minuten per keer. </li></ol> Deel 2: Bruto dissectie van het binnenoor <ol><li> Leg de vis hoofd op de dissectie pad met de ventrale zijde naar boven. Immobiliseren het met insect pinnen. Alle volgende stappen worden uitgevoerd in het kader van de dissectie microscoop. </li><li> Met een paar fijne pincet, verwijder het schedelbot over het binnenoor en daarna voorzichtig trek het binnenoor weefsels: saccules, lagenae, en utricles. De saccule en lagena zijn nauw aan elkaar vast en zo trek bij elkaar, terwijl de utricle (anterior aan de saccule en lagena), zal zeer waarschijnlijk worden losgemaakt van de andere kant organen tijdens dissectie. </li><li> Leg het binnenoor weefsels in PBS (1X). Indien geen nadere fijne dissectie nodig is, spoelt het weefsel 2-3 keer met PBS (1X) en het kan gebruikt worden voor andere experimenten, bijvoorbeeld vriescoupes. </li></ol> Deel 3: Fijn dissectie van het binnenoor zintuiglijke epithelia <ol><li> De boete dissectie kan worden uitgevoerd in een daling van PBS (1X) op een schoon glasplaatje. </li><li> Haal de utricular otoliet van de utricle met twee paar fijne pincet, en, indien gewenst, trim off van de niet-zintuiglijke epitheelweefsel en de innervatie van het epitheel met een paar fijne pincet en een naald mes. </li><li> Verwijder de lagenar otoliet voordat scheiden zakvormig en lagenar epitheel, terwijl proberen om het hele saccule zo intact mogelijk te houden. Plaats het weefsel in de PBS druppel met ventrale zijde naar boven. Gebruik de naald mes zorgvuldig te snijden tussen de saccule en lagena. Snij de excessieve niet-zintuiglijke epitheelweefsel en de innvervation met fijne pincet en de naald blad, indien gewenst. </li></ol> Deel 4: Fluorescerende kleuring van de haarcellen in de sensorische epithelia <ol><li> Spoel de sensorische epitheel met PBT (1XPBS en 1% Triton X-100) voor de 3 keer, 5 min per keer. </li><li> Incubeer het epitheel met fluophore-gelabeld phalloidin (bv. Alexa Meel 488 Phalloidin, 1:1000 verdunning) gedurende 30 min bij kamertemperatuur. </li><li> Spoel de sensorische epitheel met PBT voor drie keer, tien minuten per keer. </li><li> Monteer het epitheel op een dia met montage medium en controleer de gekleurde weefsel onder de fluorescentie microscoop met filters van de juiste golflengte. </li><li> Na de succesvolle dissectie en kleuring, kunnen intacte epitheel met een sterke haarcel bundel verkleuring te zien onder de microscoop (afb. 1). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1211/fig1.png" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Haarcellen van het zakvormig sensorische epitheel werden gekleurd met Alexa Flour 488 Phalloidin (groen). Het weefselmonster was ontleed en gekleurd zoals vermeld in de krant. Verschillende foto&#39;s werden genomen op verschillende posities van het monster en betegelde samen met Adobe Photoshop 7.0. Schaalbalk = 150μm.

In dit protocol beschrijven we de grove en fijne ontleding van het binnenoor sensorische epitheel van volwassen zebravissen, die ons in staat stelt weefselmonster voor te bereiden op het bestuderen van de cellulaire en subcellulaire kenmerken van de sensorische epitheel. Met het oog op het uitvoeren van een succesvolle dissectie, de allereerste stap, fixatie, is erg belangrijk. Zorg ervoor dat u altijd vers bereide paraformaldehyde oplossing te gebruiken omdat oude oplossing zal resulteren i...

<table><tbody><tr><td>MS222 (Ethyl 3-aminobenzoaat methaansulfonaatzout)</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>PBS (fosfaatgebufferde zoutoplossing, 10X)</td><td>Reagens</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-6148</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 phalloïdine</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium met DAPI</td><td>Reagens</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1500</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Microscoop</td><td>Nikon Instruments</td><td>SMZ1000</td><td></td></tr><tr><td>Insectenspeldjes</td><td>Instrument</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-40</td><td></td></tr><tr><td>Schaar</td><td>Instrument</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Instrument</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>Naaldmes</td><td>Instrument</td><td>Sharpoint</td><td>78-6810</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>Microscoop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Axiovert 200M</td><td></td></tr><tr><td>Dissectieblok</td><td>Instrument</td><td>eNasco</td><td>SB07840M</td><td></td></tr><tr><td>Zebravis</td><td>Dier</td><td>Diverse</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

grove en fijne dissectie van binnenoor sensory epitheel in adult zebravis ( danio rerio)

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensorische epitheel in het binnenoor zijn de cruciale structuren voor gehoor en evenwicht functies. Daarom is het belangrijk om te begrijpen van de cellulaire en moleculaire kenmerken van het epitheel, die hoofdzakelijk zijn samengesteld uit twee soorten cellen: haarcellen (HCS) en het ondersteunen van cellen (SC). Hier kiezen we ervoor om het binnenoor sensorische epitheel bij volwassen zebravissen niet alleen studeren, omdat de epitheliale structuren zijn sterk geconserveerd in de bestudeerde alle gewervelde dieren, maar ook omdat de volwassen zebravis is in staat om HC, een vermogen dat zoogdieren te verliezen kort na de geboorte te regenereren. We maken gebruik van het binnenoor van volwassen zebravis als model systeem om de mechanismen van binnenoor HC regeneratie studie bij volwassen gewervelde dieren die nuttig zouden kunnen zijn voor de klinische behandeling van het gehoor / balans tekorten in de menselijke als gevolg van de HC verlies. Hier laten we zien hoe de grove en fijne dissecties van binnenoor sensorische epitheel bij volwassen zebravissen doen. De bruto dissectie verwijdert de weefsels rondom het binnenoor en is nuttig voor het bereiden van weefselcoupes, die ons in staat stelt te onderzoeken of het gedetailleerde structuur van de sensorische epitheel. De fijne dissectie ruimt de niet-zintuiglijke-epitheliale weefsels van elke individuele epitheel en stelt ons in staat om de heterogeniteit van de gehele epitheel gemakkelijk te onderzoeken in zijn geheel-mount epitheliale monsters.

Het binnenoor sensorische epitheel van volwassen zebravis is een goed model voor het begrijpen van de mechanismen van haar cel regeneratie in volwassen gewervelde dieren. Dit protocol laat de fijne ontleding van het epitheel, waardoor we kunnen weefselmonsters krijgen voor het bestuderen van de regeneratieve gebeurtenissen in cellulaire en subcellulaire niveau.

Grove en fijne Dissectie van binnenoor Sensory epitheel in Adult zebravis ( Danio rerio)

Neurosensoriële epithelia in het binnenoor zijn de cruciale structuren voor de functies van het gehoor en het evenwicht. Daarom is het belangrijk om de ...

In het binnenoor van zebravissen bevinden zich drie paren zakvormige eindorganen: het utriculus, het sacculus en de lagena. Het utriculus bevindt zich het meest anterieur, terwijl het sacculus en de lagena nauw aan elkaar verbonden zijn en posterior ten opzichte van het utriculus liggen. Na de grove dissectie blijven het sacculus en de lagena aan elkaar verbonden, en de steenachtige structuur van de otoliet is in elk eindorgaan gemakkelijk zichtbaar tijdens de daaropvolgende fijne dissectie. Het sacculus en de lagena worden van elkaar gescheiden door een incisie aan de ventrale zijde.De otolieten worden verwijderd en het niet-sensorische epitheelweefsel wordt weggesneden om het sensorische epitheelweefsel van alle drie de eindorganen te verkrijgen. Hallo, ik ben Jean Leon van het lab van Sean Burgess in de sectie voor ontwikkelingsgenomica van het National Human Genome Research Institute. Vandaag laten we u een procedure zien voor de nauwkeurige dissectie van de sensorische epithelia van het binnenoor bij de volwassen zebravis.Wij gebruiken dit proces in ons laboratorium om de genexpressie in de sensorische epithelia van het binnenoor te bestuderen. Laten we beginnen. Om de dissect

gross-fine-dissection-inner-ear-sensory-epithelia-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol beschrijft een procedure voor het identificeren en ontleden van organen van de volwassen zebravissen.

Dissectie van organen van de Adult zebravis

Dit artikel beschrijft een aanpak voor zebravis netvliezen microdissect met en zonder retinale pigmentepitheel bevestigd, van een tot drie dagen postfertilization embryo's.

Microdissectie van de zebravis embryonale oogweefsels

Een duidelijke, gestandaardiseerde methode voor dissectie en isolatie van de zebravis hart op meerdere ontwikkelingsstadia worden beschreven. Annotatie en kwantificatie technieken worden ook besproken.

Hart Dissection in larvale, jeugdige en volwassen zebravis, Danio rerio</em

Het doel van deze video aan te tonen procedures voor het verkrijgen van gezonde, intacte haarcellen van het binnenoor organen van volwassen zebravissen en gebruik voor patch clamp studies gericht op het karakteriseren van de biofysische eigenschappen van de voltage-gated kanalen.

Patch Clamp Opnamen in Binnen-oorhaar cellen geïsoleerd uit zebravis

Deze video beschrijft het protocol dat is ontwikkeld om volwassen en larvale zebravislenzen te ontleden om corticale lensmorfologie en structurele integriteit van de lens hechtingen te analyseren.

Ooglensdissectie: een techniek om zebravislensmorfologie te observeren

Omdat veel zebravismodellen van neurologische en niet-neurologische ziekten worden bestudeerd in de volwassen vissen dan het embryo / larven ontwikkelden we een kwantitatieve dwarslijn regeneratieve test die kan worden toegepast bij de zebravis ziektemodellen volwassene. De test betrokken resolutie bij de 1) neuromast en 2) individuele haar cel niveaus.

Een test voor laterale lijn Regeneration in Adult zebravis

Grootschalige 2D elektronenmicroscopie (EM), of nanotomy, is de toepassing van EM met nanoschaalresolutie op weefselbreed niveau. Hier beschrijven we een universele methode voor nanotomy toegepast om de larvale hersenen van de zebravis te onderzoeken in gezondheid en bij niet-invasieve hersenletsels.

Grootschalige Scanning Transmission Electron Microscopy (Nanotomy) van gezonde en beschadigde hersenen zebravis

Hier presenteren we een protocol dat de meting van lichte evoked electroretinogram reacties van larvale zebrafish vereenvoudigt. Een roman kegelvormige spons-tip-elektrode kan helpen om de studie van visuele ontwikkeling in larvale zebrafish met behulp van de electroretinogram ERG gemakkelijker te bereiken met betrouwbare resultaten en lagere kosten.

Electroretinogram opname in larvale Zebrafish met behulp van A roman kegel-vormig spons-tip elektrode

Laserablatie is een breed toepasbare technologie voor het bestuderen van regeneratie in biologische systemen. Het gepresenteerde protocol beschrijft het gebruik van een standaard laserscanning confocale microscoop voor laserablatie en de daaropvolgende time-lapse beeldvorming van het regenereren van interneuromastcellen in de zebravis laterale lijn.

Confocale Microscoop-gebaseerde Laser Ablatie en Regeneratie Test in Zebrafish Interneuromast Cellen

Een mechanisch hersenletselmodel bij de volwassen zebravis wordt beschreven om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die hun hoge regeneratieve capaciteit reguleren. De methode legt uit om een steekwondletsel te creëren in het optische tectum van meerdere soorten kleine vissen om de regeneratieve reacties te evalueren met behulp van fluorescerende immunostaining.

Steekwondletselmodel van het volwassen optische tectum met behulp van zebravissen en medaka voor de vergelijkende analyse van regeneratieve capaciteit

Het artikel legt uit hoe de ogen chirurgisch kunnen worden verwijderd van levende zebravislarven als de eerste stap om te onderzoeken hoe retinale input de groei en ontwikkeling van het optische tectum beïnvloedt. Daarnaast biedt het artikel informatie over larvale anesthesie, fixatie en hersendissectie, gevolgd door immunohistochemie en confocale beeldvorming.

Oogverwijdering bij levende zebravislarven om innervatie-afhankelijke groei en ontwikkeling van het visuele systeem te onderzoeken

Leer grove en fijne dissectie van het binnenoor van volwassen zebravis (Danio rerio). Deze methode isoleert sensorisch epitheelweefsel om haarcelregeneratie in gewervelden te bestuderen.

Grove en fijne Dissectie van binnenoor Sensory epitheel in Adult zebravis ( Danio rerio)

Meer video's verkennen