Name: Het ontleden van de niet-humane primaten Brain in stereotaxische Space (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-16T20:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Leer hoe u het niet-humane primatenbrein in stereotaxische ruimte kunt blokkeren voor neurowetenschappelijk onderzoek. Deze methode maakt coronaal snijden en cryobescherming mogelijk voor verdere studie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag Ikiel Ptito bedanken voor zijn voortdurende technische ondersteuning. NSERC te verlenen aan MP.

Deel 1: Pre-verwerking van weefsel <ol><li> Weefsel moet goed worden geperfuseerd met paraformaldehyde, glutaaraldehyde, of formaline. Dit kan worden bereikt door middel van standaard transcardial perfusie meestal gebruikt om andere organen te oogsten. In de huidige studie het onderwerp was diep gesedeerd met ketamine hydrochloride (10 mg / kg, im), gedood met een overdosis natrium pentobarbital (25 mg / kg, iv) en perfusie transcardially met 0,1 M PBS tot het volledig exsanguinated.This wordt gevolgd met een 4% paraformaldehyde oplossing in PBS gedurende 5 minuten (~ 1 liter). </li></ol> Deel 2: stereotaxische blokkeren <ol><li> Voorafgaand aan het plaatsen van de kop in het kader stereotaxisch de coördinaten van het vliegtuig Horsley-Clarke/interaural nul moet worden genomen. Dit is het theoretische midden tussen de oren. Voor het meten van dit vlak, het oor bars moeten op gelijke voet worden geplaatst in het apparaat, plaats dan een scalpel in de stereotaxische manipulator arm en meet het midden tussen het oor bars. Dit is van belang voor het bepalen van waar het weefsel op basis van behoeften aan onderzoek te blokkeren. Zodra dit is afgerond de schedel moet worden voorbereid voor bevestiging in de stereotaxische apparaat. </li><li> Om het hoofd te plaatsen in de stereotaxisch kader van de onderkaak zal moeten worden verwijderd met bot rongeurs en een scalpel. Bovendien de huid, spieren en bindweefsel dient te worden verwijderd om de schedel bloot te leggen. Zodra het bindweefsel wordt verwijderd uit de schedel, de hersenen bloot te leggen door chippen weg Calvaria (de in tabelvorm gedeelte van de achterhoofdsknobbel bot als de pariëtale, ad voorhoofdsbeenderen). In het huidige experiment deel van de Calvaria is al klaar is verwijderd. Wees niet te volledig verwijderen van de tijdelijke botten, omdat de gehoorgang zal moeten worden intact aan het hoofd plaatsen in de stereotaxisch frame. De resterende dura kwestie moet worden verwijderd uit de blootgestelde hersenen. De schedel is nu klaar om te worden geplaatst in de stereotaxisch frame. </li><li> Op dezelfde wijze waarop men een operatie uit te voeren stereotaxische, pas de ogen, gehemelte, en oor bars zodanig dat de kop stevig vast in de stereotaxische apparaat. Plaats de stereotaxische manipulator in de vooraf bepaalde anterior / posterior (A / P) coördineert en beweeg de manipulator aan de laterale aspect van de hersenen. Langzaam zakken het mes in de hersenen, volledig verhoging van het mes uit de hersenen, dan mediaal verplaatsen en opnieuw lager het blad. Herhaal deze twee stappen totdat het mes heeft bereikt het laterale aspect van de tegenovergestelde hemisfeer. Hiermee is de eerste coronale blok. Voor de daaropvolgende coronale blokken te verplaatsen van de manipulator 1 cm in de A / P-as en herhalen totdat het gehele brein is geblokkeerd. </li></ol> Deel 3: Het verwijderen van de hersenen uit de schedel <ol><li> Verwijder de kop van de stereotaxische frame en houd de blootgestelde hersenen in de palm van je hand. Probeer naar de hersenen te beveiligen door het plaatsen van licht vertroeteling van de hersenen in de palm van je hand en leg je pink vinger over de frontale kwabben, dit minimaliseert beweging van de hersenen in de schedel. Met het oog op het drogen van de pial oppervlak van de hersenen te voorkomen, een stukje van PBS bevochtigd gaas in de hersenen. Houd het hoofd goed vast aan de schedel en chip weg de resterende achterhoofd en temporale beenderen samen met de wervelkolom. Dit onthult de basis en laterale aspecten van de hersenen. Ten slotte verwijder alle resterende frontale bot en het neusbeen, die de toegang tot de olfactorische bollen zal toestaan. Het is belangrijk om de frontale bot te verwijderen laatste, want als het verwijderen van de basis van de schedel de hersenen beweegt een beetje en de frontale kwabben kunnen beschadigd raken op de scherpe randen van de fontal bot. Weggesneden en verwijder de resterende duur materie. Til de voorkant van de hersenen, schuif de scalpel in de hersenen en vrij de hersenen uit de schedel. </li></ol> Deel 4: Metingen <ol><li> Er zijn een aantal nuttige metingen die kunnen voor het invriezen worden gemaakt. Bijvoorbeeld, de A / P-as van de hersenen met een remklauw. Verder is de specifieke dichtheid kan worden gemeten door weging van de hersenen, het meten van het volume door de verplaatsing van water in een maatcilinder vervolgens te delen gewicht per volume verplaatsing (tabel 1). </li></ol> Deel 5: Voltooi het blokkeren van de hersenen. <ol><li> Meestal wanneer de scalpel wordt ingebracht in de hersenen is het niet lang genoeg om volledig doordringen in de volledige rug-buik omvang van de hersenen. Zodra de hersenen is verwijderd en grove metingen worden verkregen, neem een ​​tissue-snijmes en finish het blokkeren van de hersenen via de ventrale zijde van de hersenen (figuur 2). </li><li> Voorafgaand aan het bevriezen van de blokken, is het noodzakelijk om het weefsel cryoprotect in gegradeerde PBS-gebufferde sucrose oplossingen (10, 20, en 30%) gehandhaafd op 4 ˚ C tot aan de hersenen zinkt. Het duurt meestal een overnacht incubatie bij 10%, 2-3 dagen in 20% en extra 3-5 dagen in 30% van de blokken te zinken naar de bodem van de container. Een dagelijkse verandering van ee 30% sucrose-oplossing is aan te bevelen. </li></ol> Deel 6: representatieve resultaten Er zijn een aantal van de bruto-morfologische metingen die kunnen worden gemaakt zodra de hersenen is verwijderd uit de schedel. Deze omvatten A / P lengte, gewicht, en de specifieke dichtheid (tabel 1). We over het algemeen blokkeren de hersenen in 6-7 blokken van 1 cm (figuur 1). Elk stuk is dan gefotografeerd (figuur 2) en kan verder worden ontleed afhankelijk van de behoeften aan onderzoek of voorbereid voor het invriezen in gegradeerde sucrose oplossingen. <table border="1"><tbody><tr><td> Onderwerp </td><td> A / P Lengte (Mm) </td><td> Gewicht (Gram) </td><td> Waterverplaatsing (Ml) </td><td> Specifieke Dichtheid (G / ml) </td></tr><tr><td> O2303-2-1-1 </td><td> 64,3 </td><td> 28,1 </td><td> 24 </td><td> 1.171 </td></tr><tr><td> O5180-1 </td><td> 71,3 </td><td> 38,7 </td><td> 34 </td><td> 1.138 </td></tr><tr><td> O2708-3-1 </td><td> 62,8 </td><td> 28,7 </td><td> 26 </td><td> 1.104 </td></tr><tr><td> O9184-4-2 </td><td> 65,3 </td><td> 29,5 </td><td> 24 </td><td> 1.229 </td></tr><tr><td> N459-1-14-2 </td><td> 68,2 </td><td> 31,6 </td><td> 26 </td><td> 1.215 </td></tr><tr><td> GEMIDDELDE </td><td> 66,38 </td><td> 31,32 </td><td> 26,8 </td><td> 1.171 </td></tr><tr><td> STD DEV </td><td> 3.38 </td><td> 4.33 </td><td> 4.17 </td><td> 0.052 </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Bruto Morfologische metingen van de rechter hersenhelft van 5 maanden oud Groene meerkatten <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig1.jpg" alt="figuur 1" /> <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig2.jpg" alt="figuur 1.5" /> Figuur 1. Schema&#39;s voor de coronale vliegtuigen wordt gebruikt voor het blokkeren van de hersenen. Dit is een voorbeeld van een geëxternaliseerd volwassen vervet hersenen. Voorbeeld van de blokkering procedure. De verticale lijnen zijn hier een onderlinge afstand van 1 cm, meestal het produceren van 7 coronale blokken van elk halfrond. <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig3.jpg" alt="figuur 2" /> Figuur 2. Blokken van hersenweefsel in stereotaxische de ruimte. Ieder blok levert ongeveer 200 afdelingen die op 50μm. Met deze bemonsteringsschema meer dan 1200 onderdelen door de cortex zullen worden genomen en een extra 400 tot 500 van het cerebellum bij gesneden in het frontale vlak.

<ol><li>Gallagher, M., Rapp, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+animal+models+to+study+the+effects+of+aging+on+cognition.+Annu+Rev+Psychol+48%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The use of animal models to study the effects of aging on cognition. Annu Rev Psychol 48.</a> , 339-370 (1997).</li>
<li>Clancy, B., Darlington, R., Finlay, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+developmental+time+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Translating developmental time across mammalian species.</a> Neuroscience. 105, 7-17 (2001).</li>
<li>Nowakowski, R. S., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+site+of+origin+and+route+and+rate+of+migration+of+neurons+to+the+hippocampal+region+of+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The site of origin and route and rate of migration of neurons to the hippocampal region of the rhesus monkey.</a> J Comp Neurol. 196, 129-154 (1981).</li>
<li>Rakic, P., Bourgeois, J. P., Eckenhoff, M. F., Zecevic, N., Goldman-Rakic, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+overproduction+of+synapses+in+diverse+regions+of+the+primate+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Concurrent overproduction of synapses in diverse regions of the primate cerebral cortex.</a> Science. 232, 232-235 (1986).</li>
<li>Granger, B., Tekaia, F., Le Sourd, A. M., Rakic, P., Bourgeois, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tempo+of+neurogenesis+and+synaptogenesis+in+the+primate+cingulate+mesocortex%3A+comparison+with+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Tempo of neurogenesis and synaptogenesis in the primate cingulate mesocortex: comparison with the neocortex.</a> J Comp Neurol. 360, 363-376 (1995).</li>
<li>Zecevic, N., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+layer+I+neurons+in+the+primate+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of layer I neurons in the primate cerebral cortex.</a> J Neurosci. 21, 5607-5619 (2001).</li>
<li>Ervin, F. R., Palmour, R. M., Young, S. N., Guzman-Flores, C., Juarez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+consumption+of+beverage+alcohol+by+vervet+monkeys%3A+population+screening%2C+descriptive+behavior+and+biochemical+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Voluntary consumption of beverage alcohol by vervet monkeys: population screening, descriptive behavior and biochemical measures.</a> Pharmacol Biochem Behav. 36, 367-373 (1990).</li>
<li>Palmour, R. M., Mulligan, J., Howbert, J. J., Ervin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+monkeys+and+men%3A+vervets+and+the+genetics+of+human-like+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Of monkeys and men: vervets and the genetics of human-like behaviors.</a> Am J Hum Genet. 61, 481-488 (1997).</li>
<li>Boire, D., Théoret, H., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereological+evaluation+of+neurons+and+glia+in+the+monkey+dorsal+lateral+geniculate+nucleus+following+an+early+cerebral+hemispherectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Stereological evaluation of neurons and glia in the monkey dorsal lateral geniculate nucleus following an early cerebral hemispherectomy.</a> Exp Brain Res. 142, 208-220 (2002).</li>
<li>Bjugstad, K. B., Teng, Y. D., Redmond, D. E. J. r, Elsworth, J. D., Roth, R. H., Cornelius, S. K., Snyder, E. Y., Sladek, J. R. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+migrate+along+the+nigrostriatal+pathway+in+a+primate+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells migrate along the nigrostriatal pathway in a primate model of Parkinson's disease.</a> Exp Neurol. 211, 362-369 (2008).</li>
<li>Lemere, C. A., Beierschmitt, A., Iglesias, M., Spooner, E. T., Bloom, J. K., Leverone, J. F., Zheng, J. B., Seabrook, T. J., Louard, D., Li, D., Selkoe, D. J., Palmour, R. M., Ervin, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+abeta+vaccine+reduces+central+nervous+system+abeta+levels+in+a+non-human+primate%2C+the+Caribbean+vervet%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease abeta vaccine reduces central nervous system abeta levels in a non-human primate, the Caribbean vervet.</a> Am J Pathol. 165, 283-297 (2004).</li>
<li>Mash, D. C., Staley, J. K., Doepel, F. M., Young, S. N., Ervin, F. R., Palmour, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+dopamine+transporter+densities+in+alcohol-preferring+vervet+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Altered dopamine transporter densities in alcohol-preferring vervet monkeys.</a> Neuroreport. 7, 457-462 (1996).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

De St. Kitts vervet (Chlorocebus aethiops sabeus) is een Oude Wereld primaten met vergelijkbare patronen en de tarieven van de corticale en subcorticale ontwikkeling van de hersenen met die van mensen. Deze soort is gebruikt om complexe menselijke gedragsstoornissen model zoals angstig gedrag, hypertensie 8, 9 hemispherectomy, de ziekte van Parkinson 10, Alzhemier de ziekte van 11, en ​​alcoholmisbruik 12. Meer recent is deze soort is gebruikt om de effecten van de ne...

<table><tbody><tr><td>Scalpel</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Scalpelmesjes</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Scharen</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td>Alle chirurgische scharen zijn voldoende</td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Fine Science Tools</td><td>16121-14</td><td></td></tr><tr><td>Pincetten</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Filterpapier</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-924-150</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxisch frame</td><td>Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mes voor weefselsnijden</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

het ontleden van de niet-humane primaten brain in stereotaxische space

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

Het gebruik van niet-menselijke primaten biedt een uitstekende translationeel model voor ons begrip van ontwikkelings-en verouderingsprocessen in de mens<sup&gt; 1-6</sup&gt;. Daarnaast is het gebruik van niet-menselijke primaten onlangs de gelegenheid om op natuurlijke wijze model complexe psychiatrische stoornissen, zoals alcoholmisbruik<sup&gt; 7</sup&gt;. Hier beschrijven we een techniek voor het blokkeren van de hersenen in het frontale vlak van de vervet aap (<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;) In het intacte schedel in stereotaxische ruimte. De hier beschreven methode levert een standaard vlak van sectie tussen de blokken en de onderwerpen en minimaliseert de gedeeltelijke gedeelten tussen de blokken. Snijden een blok van weefsel in het frontale vlak ook vergemakkelijkt de afbakening van een gebied van belang. Deze methode biedt beheersbaar formaat blokken, omdat een enkele halfrond van de vervet aap levert meer dan 1200 delen als het snijden in 50μm. Verder door het blokkeren van de hersenen in 1 cm blokjes, vergemakkelijkt de penetratie van sucrose voor cyroprotection en laat het blok te worden gesneden op een standaard cryostaat.

De niet-menselijke primaat is een belangrijk translationeel soort voor ons begrip van de normale verwerking van de hersenen. De anatomische organisatie van het primaat hersenen kan belangrijke inzichten in normale en pathologische omstandigheden bij de mens.

Het ontleden van de niet-humane primaten Brain in stereotaxische Space

Het gebruik van niet-menselijke primaten biedt een uitstekend translationeel model voor ons begrip van ontwikkelings- en verouderingsprocessen bij mensen1-6. In ...

Deze procedure begint met een goed geperfuseerde apenkop. Nadat de calvaria is verwijderd, wordt de kop in het stereotaxische frame geplaatst en worden er met de manipulatorarm een reeks stereotaxische coronale coupes gemaakt; vervolgens wordt het brein verwijderd, opgemeten en cryoprotectie toegepast. Hallo, ik ben Dr. Mark Burke van het Visual Neurosciences Laboratory van de School of Optometry aan de Universiteit van Montreal.Ik ben dr. Shaheen Zur, eveneens van het Visual Neurosciences Laboratory van de School of Optometry aan de Universiteit van Montreal. Ik ben dr. Mo Petto, directeur van het Visual Neuroscience Laboratory van de School of Optometry, Universiteit van Montreal. Vandaag laten we u een procedure zien voor het blokkeren van de hersenen van een niet-menselijke primaat in de stereotactische ruimte.Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om verschillende aspecten van de hersenorganisatie te bestuderen tijdens de normale ontwikkeling en als reactie op ontwikkelingsstoornissen. Laten we beginnen. Dit protocol start na de euthanasie, fixatie en decapitatie van een groene meerdaagseaap.Voordat de hersenen worden verwijderd, moet het stereotaxische frame worden voorbereid. Eerst moeten de coördinaten van het nulpunt van het Horsley Clark interaurale vlak, oftewel het theoretische middelpunt tussen de oren, worden bepaald. Om dit vlak te meten, worden de oorstaven gelijkmatig in het apparaat geplaatst.Plaats vervolgens een scalpelblad in de arm van de stereotaxische manipulator en meet het middelpunt tussen de oorstaven. Bereid daarna de kop voor om in het stereotaxische frame te worden geplaatst. Gebruik een botknipper en een scalpel om de onderkaak te verwijderen.Verwijder op dit punt gedurende deze stappen alle resterende delen van de calvaria. Pas op dat u de temporale beenderen niet verwijdert, aangezien de gehoorgangen intact moeten blijven om de kop in het stereotaxisch frame te verankeren. Gebruik een pincet en een schaar om de zichtbare dura mater voorzichtig weg te snijden van de blootgestelde hersenen.De schedel is nu klaar om in de stereotaxische manipulator te worden geplaatst. Om te beginnen met het stereotaxisch blokkeren van de hersenen, plaatst u de kop in het frame en stelt u het oogpalet en de oorstaven in zoals u dat zou doen voor een stereotaxische operatie. Plaats de stereotaxische manipulator op de vooraf bepaalde anterieure, posterieure of AP-as.Om te beginnen met het blokkeren van de hersenen, plaatst u de manipulator aan de uiterste linker- of rechterkant van de hersenen en laat u het mes zakken om de eerste snede te maken. Het mes staat loodrecht op de middellijn van de hersenen en snijdt in het coronale vlak.Til het mesje op zodat het het breinoppervlak volledig vrijmaakt. Beweeg vervolgens mediaal tot u de eerste snede net overlapt en laat het mesje zakken. Herhaal dit. Ga door met het maken van overlappende sneden totdat u de tegenovergestelde rand van de hersenen bereikt.Hiermee is het eerste coronale blok voltooid. Verplaats de manipulator één centimeter naar voren of naar achteren langs de AP-as en maak een volgende reeks sneden in het coronale vlak, parallel aan de vorige sneden. Ga op deze manier door totdat het gehele brein in blokken is verdeeld.Nu het snijden is voltooid, is het tijd om de hersenen uit de schedel te verwijderen. Haal eerst de kop uit het frame. Probeer de hersenen te stabiliseren door ze voorzichtig in de palm van uw hand te wiegen, om te voorkomen dat de hersenen in de schedel schudden en beschadigd raken.Plaats uw pink over de frontale kwabben om te voorkomen dat het blootgestelde oppervlak van de hersenen uitdroogt. Bevochtig een stukje gaas met PBS en leg dit over de hersenen. Houd de kop stevig vast bij de schedel en verwijder de resterende occipitale en temporale botten samen met de wervelkolom.Dit legt de basis en de laterale aspecten van de hersenen bloot. Verwijder nu de resterende dura. Verwijder tot slot het neusbeen en het resterende frontale been, waardoor toegang tot de bulbi olfactorii mogelijk wordt.Het is belangrijk om het frontale bot als laatste te verwijderen, omdat de hersenen licht verschuiven wanneer u de schedelbasis verwijdert en de grillige randen van het frontale bot de frontale kwabben kunnen beschadigen.Verwijder eventueel resterend dura mater, til het voorste gedeelte van de hersenen voorzichtig op, schuif het scalpel onder de hersenen en maak de hersenen vrij van de schedel. Deze zullen bij elkaar blijven, zoals een ui die langs de steel is ingesneden, omdat het snijblad de ventrale zijde niet volledig bereikt. Er zijn een aantal nuttige metingen die u kunt verrichten voordat u de hersenen invriest.Gebruik eerst een schuifmaat om de AP-as van de hersenen te meten. Bepaal vervolgens de specifieke dichtheid door de hersenen te wegen. Meet daarna het volume door de waterverplaatsing in een maatcilinder te bepalen.Nu heeft u de dichtheid, massa gedeeld door volume. Nu u metingen aan de gehele hersenen heeft verricht, is het tijd om de individuele weefselblokken los te maken van de ventrale zijde van de hersenen en ze voor te bereiden op invriezen. Neem een weefselsnijmes en trek elke snede door de ventrale zijde van de hersenen om de blokken los te maken.Een schuifmaat kan worden gebruikt om de mediale, laterale en anterieure posterior AE's te meten. De hersenblokken zijn nu klaar om cryoprotectie te ondergaan en bevroren te worden. We hebben u zojuist laten zien hoe u een niet-menselijke primatenhersenen in de stereotaxische ruimte blokkeert.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om het mesje volledig terug te trekken voordat er met een stereotaxische manipulator een mediaal-laterale beweging wordt gemaakt. Let er daarnaast op, bij het weghakken van de botten van de hersenen, dat de cortex niet met de ERs wordt beschadigd. Dat is alles.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

dissecting-the-non-human-primate-brain-in-stereotaxic-space

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Brain bank-en systematische bemonstering van biologisch materiaal vormt de basis voor onpartijdige stereology en maximaliseert de mogelijkheden gegevens van elk exemplaar.

Brain Banking: Het maken van de meeste van uw onderzoek Specimens

De anatomische organisatie van het primaat hersenen kan belangrijke inzichten in normale en pathologische omstandigheden bij de mens. Onpartijdige stereology is een methode voor het nauwkeurig en efficiënt schatting van het totaal aantal neuron (of een ander celtype) in een bepaalde...

Weten wat telt: Unbiased Stereology in de niet-menselijke primaat hersenen

De laterale ventrikel muren bevatten de grootste germinal regio in de volwassen hersenen van zoogdieren. Traditioneel, hebben studies over neurogenese in deze regio zich op de klassieke opdeling technieken voor histologische analyse. Hier presenteren wij een alternatieve aanpak, de wholemount techniek, die een uitgebreide, en-face het oog op deze germinal regio biedt.

De subventriculaire zone En-face: Wholemount Beitsen en ependymale Flow

Deze paper toont het effectieve gebruik van een fiber dissectie methode te onthullen van de oppervlakkige witte stof traktaten en periventricular structuren van de menselijke hersenen, in de driedimensionale ruimte, om te helpen student begrip van ventriculaire morfologie.

Verkennen van Deep Space - blootleggen van de anatomie van de Periventricular structuren te onthullen van de laterale ventrikels van het menselijk brein

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methodologie voor het verkrijgen van afgevlakte tangentiële secties van zoogdieren afkomstig cortices en visualiseren van corticale modules met behulp van histochemische en immunohistochemische methoden.

Visualisatie van corticale Modules in afgeplatte zoogdieren Cortices

De onderstaande methode is bedoeld om een uitgebreid protocol te bieden voor de voorbereiding van niet-menselijke primaten (NHP) neurochirurgie met behulp van een nieuwe combinatie van driedimensionale (3D) printmethoden en MRI-gegevensextractie.

Een MRI-gebaseerde toolbox voor neurochirurgische planning bij niet-menselijke primaten

We presenteren een hands-on, stap-voor-stap, snel protocol voor het verwijderen en ontleden van discrete gebieden van vers hersenweefsel bij muizen. Het verkrijgen van hersengebieden voor moleculaire analyse is routine geworden in veel neurowetenschappelijke laboratoria. Deze hersengebieden worden onmiddellijk bevroren om transcriptomische gegevens van hoge kwaliteit te verkrijgen voor analyse op systeemniveau.

Microdissectie van muizenhersenen in functioneel en anatomisch verschillende regio's

Dit artikel schetst geautomatiseerde processen voor neurochirurgische planning van niet-menselijke primaten op basis van MRI-scans (magnetic resonance imaging). Deze technieken maken gebruik van procedurele stappen in programmeer- en ontwerpplatforms om op maat gemaakt implantaatontwerp voor NHP's te ondersteunen. De validiteit van elk onderdeel kan vervolgens worden bevestigd met behulp van driedimensionale (3D) geprinte levensgrote anatomische modellen.

Een gereedschapskist voor het ontwerpen van neurale implantaten voor niet-menselijke primaten

Seriële tweefotontomografie (STPT) beeldvorming is een techniek om een weefselmassa in zijn driedimensionale vorm in beeld te brengen door tweefotonbeeldvorming te combineren met automatische faseregeling en microtoom slicing. Hier beschrijven we een protocol voor de implementatie ervan voor zijdeaapjes om hun structurele kenmerken beter te begrijpen.

Seriële twee-fotontomografie van het hele zijdeaapje brein voor neuroanatomische analyses

Single-cell elektroporatie (SCE) is een gespecialiseerde techniek waardoor de levering van DNA of andere macromoleculen in individuele cellen in intact weefsel, ook in vivo preparaten. Hier hebben we detail de procedure voor SCE van een fluorescente kleurstof of plasmide DNA in neuronen in de intacte hersenen van de Xenopus laevis kikkervisje.

Single Cell Elektroporatie in vivo binnen de Intact ontwikkeling van de hersenen

Leer hoe u het niet-humane primatenbrein in stereotaxische ruimte kunt blokkeren voor neurowetenschappelijk onderzoek. Deze methode maakt coronaal snijden en cryobescherming mogelijk voor verdere studie.

Het ontleden van de niet-humane primaten Brain in stereotaxische Space

Meer video's verkennen