Name: De poort naar de hersenen: Ontrafeling van de Primate Eye (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Ontdek hoe je een niet-menselijke primaatretina dissecteert voor onderzoek naar neurobiologie en ontwikkeling. Deze methode behoudt de anatomische structuur en ondersteunt studies naar veroudering en retinale ziekten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag Ikiel Ptito bedanken voor zijn technische ondersteuning. We zijn dankbaar voor Frank Ervin, Roberta Palmour en het personeel van Gedragswetenschappen Stichting Laboratoria gevestigd in St. Kitts, West-Indië, voor hun blijvende steun van onze primaat werk.

Deel 1: Pre-verwerking van weefsel <ol><li> Weefsel moet goed worden geperfuseerd met paraformaldehyde, glutaaraldehyde, of formaline. Dit kan worden bereikt door middel van standaard transcardial perfusie meestal gebruikt om andere organen te oogsten. Het wordt aanbevolen dat kort na het offer van de ogen worden geïnjecteerd met een fixatief net onder de lens en opgeslagen in fixeermiddel. </li><li> In de huidige studie het onderwerp was diep gesedeerd met ketamine hydrochloride (10 mg / kg, im), gedood met een overdosis natrium pentobarbital (25 mg / kg, iv) en perfusie transcardially met 0,1 M PBS tot het volledig exsanguinated. Dit wordt gevolgd door een 4% paraformaldehyde oplossing in PBS gedurende 5 minuten (~ 1 liter). </li></ol> Deel 2: Het verwijderen van de oogbol uit de orbitale holte <ol><li> Voor gemakkelijker toegang tot de oogbol is het aanbevolen om eerst te verwijderen van de hersenen. Zodra de hersenen is verwijderd van de dunwandige baan bot is duidelijk zichtbaar. Gebruik het bot rongeurs langzaam chip weg de wand van de baan. Knip de oogspieren met een scalpel en verwijder het bindweefsel van de oogbol. Knip voorzichtig de oogzenuw, kan dit worden gebruikt in elektronische microscopie studies. De oogbol moet nu worden vrijgesteld van de orbitale holte. </li></ol> Deel 3: Prepareer het netvlies van de oogschelp <ol><li> Plaats het oog in een petrischaal met PBS om het netvlies te houden van drogen. Een dissectiemicroscoop of tafel bevestigd vergrootglas licht stand bruikbaar is in de ontleding, maar niet een noodzaak. Verwijder het hoornvlies door het snijden van de sclera nauw samen om de omtrek van het hoornvlies op het niveau van de ora serrata met een paar van de lente schaar en verwijder de lens met de tang. </li><li> Gebruik een penseel, tang, schaar en de lente aan het netvlies te verwijderen uit de sclera. Dit wordt gedaan door het scheiden van het netvlies van de sclera en dan snijden van de sclera weg met de schaar. Men moet het uitvoeren van dit proces in kleine stappen, zodat er geen schade of scheuren de retinale weefsel. De sclera is niet gemakkelijk gescheiden van de rest oogzenuw zo zorgvuldig de sclera rondom de oogzenuw te snijden. </li><li> Op dit punt het netvlies heeft zijn gebogen vorm en moet worden afgevlakt voor de bemonstering. Voor afvlakking het netvlies, kan het glasachtig lichaam, waardoor de consistentie van gelei heeft, verwijderd worden in een keer. Te vlakken het netvlies op een dia, maken een aantal radiale snijdt met een scalpel. De resterende glasvocht kan nu worden verwijderd met gewone filter papier en een penseel. De retinale ganglion cel laag wordt blootgesteld op dit punt dus het is noodzakelijk om zacht bij het verwijderen van het glasvocht. Als de oogzenuw is nog steeds verbonden aan de optische schijf, verwijder de optische zenuw, zonder het rippen van het netvlies met behulp van een scalpel en een paar van de lente schaar. Dit is nu een platte berg netvlies (figuur 1) en de fovea moet duidelijk zijn als een donkere vlek in de temporale / ventrale richting van de optische schijf. </li></ol> Deel 4: Monsterneming <ol><li> Er zijn een aantal opties voor de bemonstering van de retina. Hier beschrijven we de flatmount voorbereiding en isodentric bemonstering. Voor beide procedures flatmount het netvlies met de optische vezel laag uit de buurt van de dia. Als het de bedoeling is te onderzoeken of het retinale ganglion cel laag in de flatmount voorbereiding, is het noodzakelijk om ofwel te verwijderen of bleek de gepigmenteerde epitheel. Voor het verwijderen van de gepigmenteerde epitheel licht gebruik maken van een penseel om een ​​aantal van deze laag te verwijderen, deze heeft de neiging om schade aan de afdrukband laag. Bleken gaat het weken het netvlies in kaliumpermanganaat-oplossing (0,25%) voor een uur, wassen in gedestilleerd water, en de open plek in oxaalzuur (5%) gedurende 5 minuten 2. </li><li> Als het de bedoeling is te onderzoeken cel distributie en de morfologie van elke laag in heel het netvlies, dan raden we isometrische bemonstering van het netvlies. Het netvlies moet flatmounted op een dia en vochtig gehouden met PBS. Voor de isometrische monsters gesneden kleine stukjes weefsel op gelijke afstand van de optische schijf in de neus, temporele, bovenste en onderste richtingen (Figuur 1). Het is niet nodig voor het bleken van de gepigmenteerde epitheel in dit preparaat. Deze stukken kunnen nu doorsnede worden in het frontale vlak met een cryostaat, vibratome of ultramicrotoom afhankelijk van de onderzoeksvraag. Voor de cryostaat snijden, moeten de stukken worden cryoprotected in 30% sucrose &#39;s nachts en bevroren in het kader van een montage medium op droog ijs. Als alternatief kunnen de monsters worden ingebed in agar en gesneden op een vibratome. De cryostaat en vibratome voorbereidingen betrouwbaar zal opleveren secties zo dun als 4 m. Als dunnere secties nodig zijn (bijvoorbeeld voor elektronenmicroscoop voorbereiding), is het noodzakelijk om de monsters voor te bereiden op de ultramicrotoom. Om dit te doen, moeten de onderdelen post-gefixeerd in osmium tetroxide gedurende 1 uur onder de fumehood. Dit wordt gevolgd door uitdroging in een ethanolreeks (50, 70, 95, 95, 100, 100%) en 100% propyleenoxide. Het weefselwordt dan ingebed in EPON (EMBED-812 inbedding kit). </li></ol> Deel 5: representatieve resultaten: In ons laboratorium hebben we routinematig immunohistochemie op cryosectioned retinae (figuur 2). In dit geval zijn we geïnteresseerd in de isodensity van de cannabinoïde-receptoren (CB1) in de retina. We onderzoeken ook het effect van prenatale blootstelling aan ethanol op het primaat visuele systeem. Daartoe zijn we geïnteresseerd in cel dichtheid en laagdikte in de fovea en in de perifere retina. Om dit te bereiken, hebben we stukjes netvlies verankeren in Epon, slice op 700nm op een ultramicrotoom, en vlek met 1% toluïdineblauw (figuur 3). <img src="/files/ftp_upload/1261/fig1.jpg" alt="figuur 1" /> Figuur 1 Flatmount Retina. Radial bezuinigingen worden gebruikt om het netvlies af te vlakken. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig2.jpg" alt="figuur 2" /> Figuur 2 Immunokleuring. Cryosection van de perifere retina immunostained voor CB1, waar de retinale ganglioncellen zwaar zijn gelabeld met een aantal etikettering in de binnenste en buitenste nucleaire lagen. De dikte van dit onderdeel is 14 m en gekleurd op de dia. RG - retinale ganglion laag; IP - binnenste plexiform laag; IN - binnenste nucleaire laag; OP - buitenste plexiform laag; ON - buitenste nucleaire laag. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig3.jpg" alt="figuur 3" /> Figuur 3 Fovea. Doorsnede van de fovea, dat was ingebed in EPON en gesneden op een ultramicrotrome bij 700nm. De afdrukband laag (PR) werd gebruikt om de secties uit te lijnen. Merk op dat de volledige omvang van de fotoreceptoren kunnen worden geïdentificeerd met de bijbehorende hoek in het frontale vlak. Dichtheid van metingen werden genomen op 300 m, 500 m en 800 m van het centrum van de foveale put met behulp van de Bioquant Imaging systeem. RG - retinale ganglion laag; IP - binnenste plexiform laag; IN - binnenste nucleaire laag; OP - buitenste plexiform laag; ON - buitenste nucleaire laag; schaal bar = 50 m

<ol><li>Hendrickson, A., Kupfer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histogenesis+of+the+fovea+in+the+macaque+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The histogenesis of the fovea in the macaque monkey.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 15, 746-756 (1976).</li>
<li>Herbin, M., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+and+distribution+of+retinal+ganglion+cells+in+the+St.+Kitts+green+monkey+%28Cercopithecus+aethiops+sabeus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Size and distribution of retinal ganglion cells in the St. Kitts green monkey (Cercopithecus aethiops sabeus).</a> J Comp Neurol. 383, 459-472 (1997).</li>
<li>Stone, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStone%2C+J+%22The+Wholemount+Handbook%22">The Wholemount Handbook</a>. , Maitland Publishing Pty. Ltd. Sydney. (1981).</li>
<li>Herbin, M., Boire, D., Theoret, H., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transneuronal+degeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+early+hemispherectomized+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Transneuronal degeneration of retinal ganglion cells in early hemispherectomized monkeys.</a> Neuroreport. 10, 1447-1452 (1999).</li>
<li>Krebs, W., Krebs, I. Primate Retina and Choroid Atlas of Fine Structure in Man and Monkey. , Springer-Verlag. New York. (1991).</li>
<li>Pow, D., Sullivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+kinesis%2C+neurite+sprouting+and+abnormal+axonal+projections+of+cone+photoreceptors+in+the+aged+and+AMD-afflicted+human+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nuclear kinesis, neurite sprouting and abnormal axonal projections of cone photoreceptors in the aged and AMD-afflicted human retina.</a> Exp Eye Res. 84, 850-857 (2007).</li>
</ol>

De voorbereiding van het netvlies als een wholemount maakt voor de analyse van de topografie en de ruimtelijke verdeling van ofwel het ganglion cel laag of de endotheliale cellen van het netvlies bloedvaten 3. Kwantificering van de celdichtheid in de periferie van de retina wordt eenvoudig volbracht. Echter, in perifoveal en foveale regio&#39;s, de stapeling van meerdere lagen in het ganglion cellaag belemmert kwantificering. Om dit te omzeilen mogelijke vertekening, kan de fovea en perifoveal regio ontleed u...

<table><tbody><tr><td>Scalpel</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Scalpelmesjes</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Veerschaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>15020-15</td><td></td></tr><tr><td>Schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td>Elke chirurgische schaar is voldoende</td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Fine Science Tools</td><td>16121-14</td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Filterpapier</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-924-150</td><td></td></tr><tr><td>Penseel van kameel- of sabelhaar</td><td>Willekeurige leverancier</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

de poort naar de hersenen: ontrafeling van de primate eye

The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

Het visuele systeem bij de mens wordt beschouwd als de poort naar de wereld en speelt een belangrijke rol in de overvloed van zintuiglijke, perceptuele en cognitieve processen. Het is dan ook niet verwonderlijk dat de kwaliteit van het zicht is gebonden aan de kwaliteit van leven. Ondanks de wijdverspreide klinisch en fundamenteel onderzoek rond de oorzaken van visuele stoornissen, vele vormen van visuele beperkingen, zoals retinitis pigmentosa en maculaire degeneratie, gebrek aan effectieve behandelingen. Niet-menselijke primaten hebben het dichtst algemene kenmerken van het oog de ontwikkeling aan die van de mens. Niet alleen hebben ze een vergelijkbare vasculaire anatomie, maar onder andere zoogdieren, primaten hebben de unieke eigenschap van het hebben van een gebied in de temporale retina gespecialiseerd is voor een hoge gezichtsscherpte, de fovea<sup&gt; 1</sup&gt;. Hier beschrijven we een algemene techniek voor het ontleden van de retina om weefsel te bieden voor het netvlies histologie, immunohistochemie, laser capture microdissectie, evenals licht-en elektronenmicroscopie. Met het uitgebreide gebruik van de niet-menselijke primaten als een translationeel model, onze hoop is dat een beter begrip van het netvlies zal inzicht bieden in effectieve aanpak van verzachtende of het omkeren van de negatieve impact van visuele stoornissen op de kwaliteit van leven van de getroffen personen.

De niet-menselijke primaat is een belangrijk translationeel soort voor ons begrip van de ontwikkeling en veroudering. De anatomische organisatie van het primaat netvlies kan leveren belangrijke inzichten in normale en pathologische omstandigheden bij de mens.

De poort naar de hersenen: Ontrafeling van de Primate Eye

Het visuele systeem bij mensen wordt beschouwd als de toegangspoort tot de wereld en speelt een hoofdrol in de overvloed aan sensorische, perceptuele en cognitieve ...

Deze procedure begint met een goed geperfuseerde apenkop. Nadat de hersenen zijn verwijderd, worden de oogbollen geëxtraheerd en verbonden. Vervolgens wordt het omliggende weefsel weggehaald, waarna het hoornvlies, de lens, het harde vlies en het glasvocht zorgvuldig worden verwijderd om het netvlies vrij te maken.De retina wordt plat op een glazen objectglas geplaatst en het resterende glasvocht wordt verwijderd. Vervolgens worden Iso Dentrix-monsters genomen en cryoprotectie toegepast. Hallo, ik ben Dr. Mark Burke van het Visual Neurosciences Laboratory van de School of Optometry aan de Universiteit van Montreal.Hoi, ik ben dr. Shaheen Zur, eveneens van het Visual Neurosciences Laboratory aan de School of Optometry van de Universiteit van Montreal. Hallo, ik ben dr. Tito, directeur van het Visual Neuroscience Laboratory aan de School of Optometry, Universiteit van Montreal. Vandaag laten we u een procedure zien voor het dissekeren van een retina van een niet-menselijke primaat.Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om verschillende aspecten van de retinale organisatie te bestuderen tijdens de normale ontwikkeling en als reactie op ontwikkelingsstoornissen. Laten we begi

the-gateway-to-the-brain-dissecting-the-primate-eye

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De niet-menselijke primaat is een belangrijk translationeel soort voor ons begrip van de normale verwerking van de hersenen. De anatomische organisatie van het primaat hersenen kan belangrijke inzichten in normale en pathologische omstandigheden bij de mens.

Het ontleden van de niet-humane primaten Brain in stereotaxische Space

Een formele demonstratie van het ontleden van een muis oog, wat resulteert in een hele berg van het retinale pigment epitheel.

Ontleding van een muis Oog voor een hele berg van de retinaal pigment epitheel

Deze video presentatie toont een werkwijze voor het oogsten van de twee belangrijkste zeer vasculaire structuren die voorhersenen functie ondersteunen. Zij zijn de cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vaatstelsel, samen met de bijbehorende hersenvliezen (MAV) en het vaatvlies plexus die nodig zijn voor cerebrale doorbloeding en de cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase.

Een visuele beschrijving van de dissectie van de Cerebral Surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het Choroid Plexus van Rat Brain

Deze video beschrijft hoe de volwassen Drosophila-hersenen kunnen worden ontleed en geïsoleerd - een procedure die nodig is voor het visualiseren van het orgaan, dat anders wordt verduisterd door de cuticula, het oog en het tracheaweefsel. Het voorbeeldprotocol toont een gedetailleerde demonstratie die hoogwaardige preparaten oplevert die kunnen worden gebruikt voor immunostaining- en beeldvormingsmethoden in de drosophila-neurobiologie.

Drosophila Volwassen hersendissectie: een methode in vliegneurobiologie

Deze video beschrijft hoe je het oog-hersencomplex kunt ontleden en isoleren van Drosophila poppen. Het aanbevolen protocol demonstreert de procedure die hoogwaardig weefsel oplevert, compatibel met bijvoorbeeld immunostaining en andere genexpressie-experimenten.

Dissectie van het oog-hersencomplex van Fly Pupae: een methode om netvliesweefsel te isoleren

Het verwijderen van de ogen, ook wel enucleatie, een bruikbare strategie om aspecten van de visuele, cross-modale en ontwikkelingsplasticiteit bestuderen langs de zoogdieren visuele systeem is omdat het leidt tot onomkeerbare gedeeltelijke (monoculair) of volledige (binoculair) verlies van gezichtsvermogen. Hier beschrijven we een zeer reproduceerbare en duidelijke aanpak om te presteren in vivo enucleatie.

Een zeer reproduceerbare en eenvoudige methode om te presteren In Vivo Oculaire Enucleatie in de muis na opening van de ogen

Het doel van dit document en instructie video te beschrijven hoe bloot en verwijder de pig postmortem hersenen en hypofyse in intacte toestand, geschikt voor daaropvolgende macroscopische en histologische analyse.

Blootstelling van het varken voor CNS Histologische analyse: A Manual voor onthoofding, Schedel openen en Brain verwijdering

Gezichtsuitdrukkingen zijn een wijze van visuele communicatie, geproduceerd door mimetische spieren. We presenteren hier protocollen voor de nieuwe technieken van omgekeerde dissectie en DiceCT volledig visualiseren en evalueren van de mimetische spieren. Deze gecombineerde technieken kunnen zowel morfologische en fysiologische aspecten van mimetische spierstelsel te bepalen functionele aspecten onderzoeken.

Omgekeerde dissectie en DiceCT onthullen anders verborgen gegevens in de evolutie van het Primate gezicht

Dit protocol beschrijft het uitvoeren van een craniectomie met behulp van een pneumatische boor met hoge snelheid op een 3 maanden oud Deens Landras-varken. De toegang wordt gemaakt door het voorhoofdsbeen en onthult de ventrale dura mater en de onderliggende hersenhelften. Deze procedure geeft toegang tot een groot deel van de varkenshersenen.

Toegang tot het varkensbrein via high-speed pneumatische boorcraniectomie

Grondige grossing en gestandaardiseerde doorsnede van niet-neoplastische bollen zijn belangrijk voor het verkrijgen van reproduceerbare histopathologische doorsneden van hoge kwaliteit. Richtlijnen voor een gestandaardiseerde grossisatie van volwassen en foetale niet-neoplastische bollen worden hierin gegeven. Verschillende opties voor het doorsnijden van wereldbollen worden gedemonstreerd en besproken, inclusief criteria voor case-based besluitvorming.

Grossing van niet-neoplastische bollen, inclusief foetale ogen

Het netvlies vertoont een complexe ruimtelijke organisatie over zijn laminaire structuur. Moderne ruimtelijke transcriptomics en sequencingtechnieken vereisen weefselcoupes &lt; 20 μm dik, waardoor hun toepasbaarheid voor retinaal onderzoek wordt beperkt. Deze vers ingevroren cryosectiemethode produceert dunne delen van het netvlies van de muis met behoud van vlakke ruimtelijke relaties, waardoor uitgebreide moleculaire kartering over laminae mogelijk is.

En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

Ontdek hoe je een niet-menselijke primaatretina dissecteert voor onderzoek naar neurobiologie en ontwikkeling. Deze methode behoudt de anatomische structuur en ondersteunt studies naar veroudering en retinale ziekten.

De poort naar de hersenen: Ontrafeling van de Primate Eye

Meer video's verkennen