Name: Gestandaardiseerde Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-02T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Leer een gestandaardiseerde methode voor het prepareren van single-celsuspensies uit muizenlongweefsel met behulp van de gentleMACS dissociator. Dit protocol levert levensvatbare cellen op voor downstream toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs zijn medewerkers van Miltenyi Biotec GmbH, Duitsland.

Om te werken onder steriele omstandigheden, is het raadzaam om alle stappen in een laminaire stroming kap uit te voeren. 1. Materialen <ol><li> HEPES buffer: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl 2) </li><li> Collagenase D oplossing: Collagenase D: 100 mg / ml (Collagenase D&gt; 0,15 U / mg), in HEPES buffer </li><li> DNase I oplossing: 20.000 U / ml DNase I </li><li> PBS buffer bij pH 7,2 </li><li> PEB buffer: een deel BSA Stock Solution in 20 delen autoMACS spoeloplossing </li><li> Tissue: long afgeleid van 6 / 7 weken oude volwassen vrouwelijke BALB / C muizen, vrij van aangrenzende organen. </li><li> Optioneel: CD11c microbolletjes, MACS MS Columns, MACS Separator voor de isolatie van dendritische cellen van muizen long single-celsuspensie </li></ol> 2. Dissociatie het longweefsel <ol><li> Spoel weefsel in een petrischaal met PBS aan erythrocyten te verwijderen. </li><li> Overdracht een maximum van 450 mg longweefsel naar een gentleMACS C Tube met 4,9 ml HEPES buffer. </li><li> Voeg 100 ul Collagenase D-oplossing tot een uiteindelijke concentratie van 2 mg / ml Collagenase D. </li><li> Voeg 10 uL DNase I-oplossing voor maximaal 150 mg weefsel (uiteindelijke concentratie van 40 U / ml DNase I) of 20 il DNase I voor 150 tot 450 mg longweefsel (uiteindelijke concentratie van 80 U / ml DNase I). </li><li> Goed afsluiten van de C metro en bevestig deze op de gentleMACS Dissociator. Dan start je het programma &quot;m_lung_01&quot;. </li><li> Incubeer gedurende 30 minuten bij 37 ° C met automatische rotatie of handmatig draaien om de 5 minuten. </li><li> Keer terug naar de sample gentleMACS Dissociator en start het programma &quot;m_lung_02&quot;. </li></ol> 3. Filtratie <ol><li> Bereid een 50 mL buis voor het verzamelen van cellen gefilterd door het vervangen van de kap met een 70 um mesh cel zeef. </li><li> Zodra de tweede gentleMACS programma eindigt, afhankelijk van de verdeling van het monster materiaal in de buis, kunt u kort centrifugeer de buis om het monster materiaal op de bodem van de buis te verzamelen. </li><li> Verwijder de cellen door het septum gesloten kap van de C-Tube met behulp van een geschikte 1000 il pipetpunt en toepassen op de cel zeef. </li><li> Was de cel zeef met 5 ml HEPES buffer bij RT. </li><li> Centrifugeer de cellen een pellet in een 50 ml buis 300xg gedurende 10 minuten. </li><li> Zuig het supernatant en resuspendeer de cel pellet in uw gewenste volume van de PEB buffer. </li></ol> Deel 4: representatieve resultaten: <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Lung dissociatie met de gentleMACS ™ Dissociator resulteerde in 92% levensvatbare cellen. Dode cellen werden fluorescent gekleurd met propidiumjodide (PI) (rechts dot plot, links dot plot: geen PI kleuring). <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig2.jpg" alt="Figuur 2" /> Figuur 2. Dissociatie van de muis longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator resulteert in een hoog percentage van de levensvatbare leukocyten en endotheelcellen. De afgeleide single-cell suspensies werden gekleurd met CD45-PE en de CD146-FITC of CD31-FITC en geanalyseerd door flowcytometrie. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266figure2c.png" alt="Figuur 2C" /> Figuur 3. Single-celsuspensie afgeleid van muizen longweefsel werd gekleurd met CD11c-FITC en Anti-mPDCA-1-APC voor muis CD11c laag m-PDCA-1 + plasmacytoïde DCs evenals CD11c hoge cellen te detecteren. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig4.jpg" alt="Figuur 4" /> Figuur 4. Verrijking van dendritische cellen met behulp van CD11c microbolletjes, een MiniMACS Separator en twee MS kolommen.

<ol><li>Swanson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flt3-Ligand%2C+IL-4%2C+GM-CSF%2C+and+Adherence-Mediated+Isolation+of+Murine+Lung+Dendritic+Cells%3A+Assessment+of+Isolation+Technique+on+Phenotype+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function.</a> J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).</li>
<li>Vermaelen, K., Pauwels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+and+simple+discrimination+of+mouse+pulmonary+dendritic+cell+and+macrophage+populations+by+flow+cytometry%3A+Methodology+and+new+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights.</a> Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).</li>
</ol>

De auteurs zijn werknemers van Miltenyi Biotec GmbH, de fabrikant van het instrument dat in dit artikel wordt gebruikt.

In deze video, introduceren we een nieuwe methode voor de dissociatie van de muis longweefsel. We laten zien dat een combinatie van mechanische en enzymatische behandeling van het longweefsel een hoog percentage van levensvatbare leukocyten en endotheelcellen opgeleverd. In het bijzonder, was de mechanische desintegratie van het weefsel bereikt door de gentleMACS Dissociator. De gentleMACS C Tubes zijn een rotor - stator systeem, dat scheidt weefsel in een zachte manier. De procedure wordt gecontroleerd door de programm...

<table><tbody><tr><td>C-buizen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Startset</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Buisrotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnr. 130-090-753</td><td>&lt;Om onder steriele omstandigheden te werken, wordt aanbevolen alle stappen in een laminaire flowkast uit te voeren.

1. Materialen
HEPES-buffer: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl2)
Collagenase D-oplossing: Collagenase D: 100 mg/mL (Collagenase D > 0,15 U/mg), in HEPES-buffer
DNase I-oplossing: 20.000 U/mL DNase I
PBS-buffer bij pH 7,2
PEB-buffer: 1 deel BSA-stockoplossing in 20 delen autoMACS Rinsing Solution
Weefsel: long afkomstig van een volwassen vrouwelijke BALB/C-muis van 6 tot 7 weken oud, vrij van aangrenzende organen.
Optioneel: CD11c MicroBeads, MACS MS-kolommen, MACS Separator voor de isolatie van dendritische cellen uit een enkelcellupsuspensie van muizenlong.

2. Dissociëren van het longweefsel
Spoel het weefsel in een petrischaal met PBS om erytrocyten te verwijderen.
Overbreng maximaal 450 mg longweefsel naar een gentleMACS C-buis met 4,9 mL HEPES-buffer.
Voeg 100 μL Collagenase D-oplossing toe tot een eindconcentratie van 2 mg/ml Collagenase D.
Voeg 10 μL DNase I-oplossing toe voor maximaal 150 mg weefsel (eindconcentratie van 40 U/ml DNase I) of 20 μL DNase I voor 150-450 mg longweefsel (eindconcentratie van 80 U/mL DNase I).
Sluit de C-buis stevig en bevestig deze op de gentleMACS Dissociator. Voer vervolgens het programma "m_lung_01" uit.
Incubeer gedurende 30 min bij 37°C met automatische rotatie of door elke 5 min handmatig te draaien.
Plaats de monsterbuis terug in de gentleMACS Dissociator en voer het programma "m_lung_02" uit.

3. Filtratie
Bereid een 50 mL buis voor het opvangen van gefilterde cellen door de dop te vervangen door een cellstrainer met een maaswijdte van 70 μm.
Zodra het tweede gentleMACS-programma is beëindigd, kunt u de buis kort centrifugeren om het monstermateriaal onderin de buis te verzamelen, afhankelijk van de verdeling van het monstermateriaal in de buis.
Verwijder de cellen via de met een septum afgedichte dop van de C-buis met een geschikte 1000 μl pipetpunt en breng ze aan op de cellstrainer.
Was de cellstrainer met 5 ml HEPES-buffer bij kamertemperatuur.
Centrifugeer de cellen tot een pellet in een 50 mL buis bij 300xg gedurende 10 min.
Sifon het supernatant af en resuspendeer de celpellet in het gewenste volume PEB-buffer.

Deel 4: Representatieve resultaten:
Figuur 1. Longdissociatie met de gentleMACS™ Dissociator resulteerde in 92% levensvatbare cellen. Dode cellen werden fluorescent gekleurd met propidiumjodide (PI) (rechter dotplot; linker dotplot: geen PI-kleuring).
Figuur 2. Dissociatie van muizenlongweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator resulteert in een hoog percentage levensvatbare leukocyten en endotheelcellen. De verkregen enkelcellussuspensies werden gekleurd met CD45-PE en CD146-FITC of CD31-FITC en geanalyseerd via flowcytometrie.
Figuur 3. De enkelcellussuspensie afgeleid van muizenlongweefsel werd gekleurd met CD11c-FITC en Anti-mPDCA-1-APC om muizen CD11clow m-PDCA-1+ plasmacytoïde DC's alsook CD11chigh cellen te detecteren.
Figuur 4. Verrijking van dendritische cellen met behulp van CD11c MicroBeads, een MiniMACS Separator en twee MS-kolommen.&quot;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; Spoeloplossing</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-091-222</td><td>&lt;Om onder steriele omstandigheden te werken, wordt aanbevolen om alle stappen uit te voeren in een laminaire flowkast.

1. Materialen
HEPES-buffer: (10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl2)
Collagenase D-oplossing: Collagenase D: 100 mg/mL (Collagenase D > 0,15 U/mg), in HEPES-buffer
DNase I-oplossing: 20.000 U/mL DNase I
PBS-buffer bij pH 7,2
PEB-buffer: 1 deel BSA-stockoplossing in 20 delen autoMACS Rinsing Solution
Weefsel: long afkomstig van een volwassen vrouwelijke BALB/C-muis van 6/7 weken oud, vrij van aangrenzende organen.
Optioneel: CD11c MicroBeads, MACS MS-kolommen, MACS-separator voor de isolatie van dendritische cellen uit een enkelcel-suspensie van muizenlong.

2. Dissociëren van het longweefsel
Spoel het weefsel in een Petrischaal met PBS om erytrocyten te verwijderen. Overbreng maximaal 450 mg longweefsel naar een gentleMACS C Tube met 4,9 mL HEPES-buffer. Voeg 100 μL Collagenase D-oplossing toe tot een eindconcentratie van 2 mg/ml Collagenase D. Voeg 10 μL DNase I-oplossing toe voor maximaal 150 mg weefsel (eindconcentratie van 40 U/ml DNase I) of 20 μL DNase I voor 150-450 mg longweefsel (eindconcentratie van 80 U/mL DNase I). Sluit de C Tube stevig en bevestig deze aan de gentleMACS Dissociator. Start vervolgens het programma "m_lung_01". Incubeer 30 min lang bij 37°C met automatische rotatie of door elke 5 min handmatig te draaien. Plaats de monster opnieuw in de gentleMACS Dissociator en start het programma "m_lung_02".

3. Filtratie
Bereid een 50 mL buis voor het opvangen van gefilterde cellen door de dop te vervangen door een cellstrainer met een maaswijdte van 70 μm. Zodra het tweede gentleMACS-programma is beëindigd, kunt u de buis kort centrifugeren om het monstermateriaal onderin de buis te verzamelen, afhankelijk van de verdeling van het monstermateriaal in de buis. Verwijder de cellen via de septumafdichting van de dop van de C Tube met een geschikte 1000 μl pipetpunt en breng ze aan op de cellstrainer. Was de cellstrainer met 5 ml HEPES-buffer bij kamertemperatuur. Centrifugeer de cellen tot een pellet in een 50 mL buis bij 300xg gedurende 10 min. Aspireer het supernatant en resuspendeer de celpellet in het gewenste volume PEB-buffer.

Deel 4: Representatieve resultaten:
Figuur 1. Longdissociatie met de gentleMACS™ Dissociator resulteerde in 92% levensvatbare cellen. Dode cellen werden fluorescent gekleurd met propidiumjodide (PI) (rechter dot plot; linker dot plot: geen PI-kleuring).
Figuur 2. Dissociatie van muizenlongweefsel met de gentleMACS Dissociator resulteert in een hoog percentage levensvatbare leukocyten en endotheelcellen. De verkregen enkelcel-suspensies werden gekleurd met CD45-PE en CD146-FITC of CD31-FITC en geanalyseerd via flowcytometrie.
Figuur 3. Enkelcel-suspensie afgeleid van muizenlongweefsel werd gekleurd met CD11c-FITC en Anti-mPDCA-1-APC om muizen CD11clow m-PDCA-1+ plasmacytoïde DC's alsmede CD11chigh cellen te detecteren.
Figuur 4. Verrijking van dendritische cellen met behulp van CD11c MicroBeads, een MiniMACS-separator en twee MS-kolommen.&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; BSA-stockoplossing</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnr. 130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnr. 130-052-001</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c-FITC, CD11c-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-092-026130-091-830</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-mPDCA-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-091-963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD146-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-092-026</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD45-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-091-610</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Propidiumjodide-oplossing</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Bestelnummer 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/nl/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Art 1000 Reach Pipetpunten</td><td>Molecular BioProducts</td><td>Bestelnummer 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;Om onder steriele omstandigheden te werken, wordt aanbevolen om alle stappen uit te voeren in een laminaire flowkast.

1. Materialen
HEPES-buffer: (10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl2)
Collagenase D-oplossing: Collagenase D: 100 mg/ml (Collagenase D > 0,15 U/mg), in HEPES-buffer
DNase I-oplossing: 20.000 U/ml DNase I
PBS-buffer bij pH 7,2
PEB-buffer: 1 deel BSA-stockoplossing in 20 delen autoMACS Rinsing Solution
Weefsel: long afkomstig van een volwassen vrouwelijke BALB/C-muis van 6/7 weken oud, vrij van aangrenzende organen.
Optioneel: CD11c MicroBeads, MACS MS Columns, MACS Separator voor de isolatie van dendritische cellen uit een single-cell suspensie van muizenlong.

2. Dissociëren van het longweefsel
Spoel het weefsel in een petrischaal met PBS om erytrocyten te verwijderen. Overbreng maximaal 450 mg longweefsel naar een gentleMACS C Tube met 4,9 ml HEPES-buffer. Voeg 100 μl Collagenase D-oplossing toe tot een eindconcentratie van 2 mg/ml Collagenase D. Voeg 10 μl DNase I-oplossing toe voor maximaal 150 mg weefsel (eindconcentratie 40 U/ml DNase I) of 20 μl DNase I voor 150-450 mg longweefsel (eindconcentratie 80 U/ml DNase I). Sluit de C Tube stevig en bevestig deze op de gentleMACS Dissociator. Voer vervolgens het programma "m_lung_01" uit. Incubeer 30 min bij 37°C met automatische rotatie of door elke 5 min handmatig te draaien. Plaats de sample terug in de gentleMACS Dissociator en voer het programma "m_lung_02" uit.

3. Filtratie
Bereid een 50 ml buis voor het opvangen van gefilterde cellen door de dop te vervangen door een cellstrainer met een 70 μm mesh. Zodra het tweede gentleMACS-programma is beëindigd, kunt u de buis, afhankelijk van de verdeling van het sampelmateriaal in de buis, kort centrifugeren om het sampelmateriaal onderin de buis te verzamelen. Verwijder de cellen via de septumafdichting van de dop van de C Tube met een geschikte 1000 μl pipetpunt en breng deze aan op de cellstrainer. Was de cellstrainer met 5 ml HEPES-buffer bij RT. Centrifugeer de cellen tot een pellet in een 50 ml buis bij 300xg gedurende 10 min. Aspireer het supernatant en resuspendeer de celpellet in het gewenste volume PEB-buffer.

Deel 4: Representatieve resultaten:
Figuur 1. Longdissociatie met de gentleMACS™ Dissociator resulteerde in 92% levensvatbare cellen. Dode cellen werden fluorescent gekleurd met propidiumjodide (PI) (rechter dot plot; linker dot plot: geen PI-kleuring).
Figuur 2. Dissociatie van muizenlongweefsel met de gentleMACS Dissociator resulteert in een hoog percentage levensvatbare leukocyten en endotheelcellen. De verkregen single-cell suspensies werden gekleurd met CD45-PE en CD146-FITC of CD31-FITC en geanalyseerd via flowcytometrie.
Figuur 3. De single-cell suspensie afgeleid van muizenlongweefsel werd gekleurd met CD11c-FITC en Anti-mPDCA-1-APC om muis CD11clow m-PDCA-1+ plasmacytoïde DC's cũng als CD11chigh-cellen te detecteren.
Figuur 4. Verrijking van dendritische cellen met behulp van CD11c MicroBeads, een MiniMACS Separator en twee MS Columns.&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

gestandaardiseerde voorbereiding van de single-celsuspensies van mouse longweefsel met behulp van de gentlemacs dissociator

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

De voorbereiding van single-cell schorsingen van weefsel is een belangrijke voorwaarde voor veel experimenten in cellulair onderzoek. Het proces van dissociëren hele organen vereist specifieke parameters om een ​​groot aantal levensvatbare cellen te verkrijgen op een reproduceerbare manier. De gentleMACS Dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. Het instrument bevat voorgeprogrammeerde instellingen die zijn geoptimaliseerd voor het efficiënt, maar zachte dissociatie van een verscheidenheid van weefsels types, inclusief muis longen. In deze publicatie het gebruik van de gentleMACS Dissociator op longweefsel zijn afgeleid van muizen is aangetoond.

Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel opwinding tot het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op longweefsel wordt uitgelegd.

Gestandaardiseerde Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator

De bereiding van enkelcel-suspensies uit weefsels is een belangrijke voorwaarde voor veel experimenten in het cellulair onderzoek. Het proces van ...

In dit videoprotocol leert u hoe u adult muislongweefsel kunt dissociëren met gentle max na de dissociatie van het longweefsel. In aanwezigheid van collagenase d en DNase I worden cel-suspensies gefiltreerd met een 70 micron cell strainer, gecentrifugeerd en gesuspendeerd voor verdere toepassingen. Hallo, ik ben Melanie Mlu van Mil Biotech in Duitsland.Vandaag laat ik u een reproduceerbare en geautomatiseerde procedure zien voor het bereiden van een single-cell suspensie uit longweefsel van muizen met behulp van de GenX-dissociatie. Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om single-cell suspensies voor te bereiden voor de isolatie van leukocyten of endotheelcellen. Laten we beginnen.Voordat we met het protocol beginnen, moeten enkele standaardoplossingen worden bereid en klaargezet. Ten eerste hebben we Hebes-buffer nodig. Ten tweede een collagenase D-oplossing die 100 mg/mL enzym en Hebes-buffer bevat.Ten derde, een dase one-oplossing met 20.000 units per milliliter dase one. Ten slotte, twee gangbare bufferoplossingen: een typische PBS-buffer bij pH 7,2 en een PEB-buffer afgeleid van AutoMax-spoelmiddel en een BSA-stockoplossing.We beginnen ons protocol met een gedissect

standardized-preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video beschrijft een eenvoudige, tijdsbesparende techniek voor automatische weefsel dissociatie met behulp van de gentleMACS Dissociator naar single-cell suspensies van de muis splenocyten voor te bereiden.

Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator

Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel aggitation het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS Dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op nerual weefsel wordt uitgelegd.

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

In dit artikel tonen we de isolatie van murine inwoner long mesenchymale stamcellen (MSC long), hun expansie, karakterisering en analyse van immunomodulerende eigenschappen.

Isolatie &amp; Karakterisering van Hoechst Lage CD45 Negatief Muis Lung Mesenchymale stamcellen

Een sterk gezuiverde bereiding van de muis long dendritische cellen wordt beschreven. Specifieke aandacht wordt gegeven aan de isolatie van de conventionele dendritische cel subset.

Isolatie van Mouse Lung dendritische cellen

This video describes the preparation of mouse lung cell suspension for flow cytometric analysis to study PD-L1 expression of lung adenocarcinoma cells.

Mouse Lung Preparation for Flow Cytometry: Generating Cell Suspension from Lung Tissue for Flow Cytometric Analysis

Dit werk beschrijft de standaardisatie van een methode om zuivere kiemcelpopulaties te verkrijgen uit testicularweefsel van verschillende zoogdieren. Het is een eenvoudig protocol dat mechanische testis dissociatie combineert, vlekken met Hoechst-33342 en propidiumjodide, en FACS-sortering, met brede toepassingen in vergelijkende studies van mannelijke voortplantingsbiologie.

Een gestandaardiseerde benadering voor multispecies Zuivering van zoogdierkiemcellen door middel van mechanische weefseldissociatie en flowcytometrie

Deze studie presenteert twee cruciale experimentele technieken: de constructie van een muiswondmodel voor het beoordelen van wondsluiting en de voorbereiding van suspensies van enkele cellen uit muishuid om de celviabiliteit te behouden.

Muizenwondmodellen en het bereiden van single-cell suspensies

We bieden een gedetailleerd protocol voor het isoleren en identificeren van zeldzame antigeenspecifieke T-celpopulaties in muizenlongen door middel van T-celverrijking op basis van magnetische kralen en peptide:major histocompatibility complex (MHC)-tetrameren.

Identificatie van zeldzame antigeenspecifieke T-cellen uit muizenlongen met peptide: belangrijke histocompatibiliteitscomplextetrameren

Dit protocol beschrijft de isolatie van levende immuun- en niet-immuunpopulaties uit de muizenlong in een stabiele toestand en na griepinfectie. Het biedt ook poortstrategieën voor het identificeren van subsets van epitheelcellen en myeloïde cellen.

Isolatie van levende myeloïde en epitheelcelpopulaties uit de muizenlong

Het hieronder beschreven protocol is een eenvoudige en effectieve manier om retinoïde-bevattende cellen te isoleren uit zeer heterogene longcelpopulaties door gebruik te maken van specifieke retinoïde autofluorescentie en door gebruik te maken van fluorescerend-geactiveerde celsortering.

Isolatie van longretinoïde-bevattende cellen door celsortering

Dit protocol presenteert een gedetailleerde methode om hoogwaardige eencelsuspensies te isoleren uit zowel gezond als tumordragend muislongweefsel. Dit protocol kan worden toegepast op scRNA-seq, flowcytometrie-analyse en primaire celisolatie.

Geoptimaliseerde voorbereiding van heel muis tumordragend longweefsel voor flowcytometrie en single-cell RNA-sequencing

Leer een gestandaardiseerde methode voor het prepareren van single-celsuspensies uit muizenlongweefsel met behulp van de gentleMACS dissociator. Dit protocol levert levensvatbare cellen op voor downstream toepassingen.

Gestandaardiseerde Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator

Meer video's verkennen