Name: Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Leer een protocol voor het genereren van single-celsuspensies uit muizenhersenweefsel met de gentleMACS Dissociator. Deze methode behoudt celviabiliteit en oppervlakte-eiwitten voor nauwkeurige celidentificatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Om te werken onder steriele omstandigheden, is het raadzaam om alle stappen in een laminaire stroming kap uit te voeren. 1. Materialen <ul><li> Zenuwweefsel Dissociatie Kit (P) (Componenten: Oplossing 1,2, 3 en 4, Storage Buffer) </li><li> Pre-Scheiding Filters </li><li> (Optioneel) Myeline Removal Beads </li><li> Beta-mercaptoethanol </li><li> gentleMACS Dissociator </li><li> C Buizen </li><li> MACSmix Tube Rotator </li><li> HBSS (w / o) </li><li> HBSS (w) </li></ul><ol><li> Bereid de volgende oplossingen voor het begin van het protocol: <ol><li> Gebufferde Salt Hanks &#39;oplossing zonder tweewaardige kationen Ca 2 + of Mg 2 + (HBSS (w / o) </li><li> HBSS, standaard, dat wil zeggen met Ca 2 + en Mg 2 + (HBSS (w) </li></ol></li><li> Afhankelijk van het antigeen epitoop van belang in de volgende toepassingen, gebruikt u de Papaïne op basis van zenuwweefsel Dissociatie Kit (P) of het trypsine-based zenuwweefsel Dissociatie Kit (T). </li><li> Bereid de volgende oplossingen uit de Neural Tissue Dissociatie Kit: <ol><li> Oplossing 2: voeg beta-mercapto-ethanol op 0,067 mM </li><li> Oplossing 4: los poeder in 0,7 ml Storage Buffer (meegeleverd in de kit), meng (niet vortex) </li><li> Enzym Mix 1: Pipetteer 1,9 ml Oplossing 2 en 50 ul Oplossing 1 (beide uit kit) in een C Tube en incubeer 10-15 minuten bij 37 ° C. Dit is voldoende om 400 mg van hersenweefsel dissociëren. </li></ol></li></ol> 2. Dissociatie van de neurale weefsel <ol><li> Weeg hersenweefsel in een buisje met 1 ml HBSS (w / o) </li><li> Overdracht hersenen van muizen in de C Tube met 1950 pi van voorverwarmde Enzyme Mix 1. (NB: dit protocol is geschreven voor ≤ 400 mg, maar volume van de oplossingen kan geschaald naar maximaal 1600 mg van hersenweefsel per C Tube zijn) </li><li> Plaats de C-Tube op de gentleMACS Dissociator en start het programma &quot;m_brain_01&quot;. </li><li> Incubeer met rotatie (4 min met behulp van een MACSmix Tube Rotator) gedurende 15 minuten bij 37 ° C. </li><li> Plaats de C-Tube op de gentleMACS Dissociator en start het programma &quot;m_brain_02&quot;. </li><li> Tijdens de dissociatie stap voor te bereiden 30 ul van Enzyme Mix 2 per 400 mg van het weefsel door zachtjes mengen 20 ul van Solution 3 en 10 ul van Solution 4. </li><li> Voeg Enzyme Mix 2 naar de C Tube via het septum afgesloten cap en meng voorzichtig zonder vortex. </li><li> Incubeer de C Tube met rotatie gedurende 10 min bij 37 ° C in een incubator. </li><li> Plaats de C-Tube op de gentleMACS Dissociator en start het programma &quot;m_brain_03&quot;. </li><li> Incubeer de C Tube met rotatie gedurende 10 min bij 37 ° C in een incubator. </li><li> Centrifugeer kort aan het monster te verzamelen op de bodem van de buis. </li></ol> 3. Filtratie <ol><li> Selecteer een filter groot genoeg is om doorgang te laten de cellen van belang. Bijvoorbeeld, Purkinje cellen zijn te groot zijn om door een 30 urn filter, maar Prominin-1 + cellen. </li><li> Gebruik een suitable1000 ul pipet om de cellen te verwijderen vormen de C buis door de septum-verzegelde dop en toepassen op de Pre-Separation filter op een 15 ml collectie buis. (NB: voor grotere steekproefomvang gebruik maken van een 50 ml collectie buis). </li><li> Was het filter met 10 ml van HBSS (w). </li><li> Centrifugeer de gefilterde cellen op 300 xg gedurende 10 min bij RT. </li><li> Resuspendeer de supernatent in uw medium of buffer van de keuze voor latere aanvragen. </li><li> Voor het verwijderen van myeline vuil, gebruik Myeline verwijderen Beads. </li></ol> 4. Vertegenwoordiger Resultaat: Zie Figuren 1-3 <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="fig 1" /> Figuur. 1 De hersenen dissociatie met de gentleMACS Dissociator resulteerde in 97% levensvatbare cellen, zoals flowcytometrische analyse laat zien. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="fig 2" /> Figuur. 2 licht microscoop beeld van neurosphere vorming na magnetische celsortering met behulp van anti-Prominin-1 microbolletjes na 7 dagen van de teelt in MACS ® NeuroMedium aangevuld met MACS Supplement B27 PLUS. Cellen werden bereid uit CD1 hersenen van muizen (P3) met de Neural Tissue Dissociation Kit (P). <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="fig 3.5" /> Figuur. 3 Myeline puin in single-cell suspensies vermindert aanzienlijk celisolatie, en het verwijderen van myeline puin door Myeline verwijderen Kralen verhoogt de efficiëntie cel scheidingen. Voor MACS Scheidingen met behulp van anti-Prominin-1 microbolletjes, P22 hersenen van muizen werd gedissocieerd met behulp van de Neural Tissue Dissociation Kit (P). Cellen van de single-celsuspensie werden ofwel direct gebruikt voor de scheiding, of werden voorgelegd aan uitputting myeline met behulp van Myeline verwijderen Beads. Vergelijking van de scheiding van monsters zonder en met myeline verwijdering, toont aan dat de zuiverheid hoger is voor monsters met de vorige myeline verwijderen.

<ol><li>Hardt, O., Scholz, C., Küsters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li>
<li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Környei, Z., Gócza, E., Rühl, R., Orsolits, B., Vörös, E., Szabó, B., Vágovits, B., Madarász, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li>
<li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li>
<li>Skog, J., Würdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T. Jr, Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li>
</ol>

De auteurs zijn medewerkers van Miltenyi Biotec GmbH, Duitsland.

De gentleMACS Dissociator vergemakkelijkt de gestandaardiseerde voorbereiding van de single-cell schorsingen van zenuwweefsel in een gesloten systeem. Zenuwweefsel Dissociatie Kits zijn geoptimaliseerd om antigeen epitopen die nodig is voor verdere toepassingen zoals immunostainings en ​​immunomagnetische celscheiding 1-5 te behouden. In dit protocol laten we de zachte enzymatische dissociatie van de muis hersenen met behulp van de gentleMACS Dissociator en de Neural Tissue Dissociation Kit (P), wat in 97% levensvatbare cellen. 100 mg van zenuwweefsel rendementen tussen de 5x10 en 1x10 6 7 cellen, afhankelijk van de leeftijd van de gastheer weefsel. De beoogde Prominin-1 + cellen werden geïsoleerd met behulp van anti-Prominin-1 microbolletjes en vervolgens rekening mee cultuur. Het protocol is aangetoond dat het nog effectiever te zijn met het extra gebruik van myeline verwijderen kralen bij het werken met neurale weefsel afkomstig van muizen&gt; P7.

generatie van de single-celsuspensies van mouse neural tissue

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Binnen het zenuwstelsel, hebben honderden neuronale en gliale celtypes beschreven. Elke specifieke celtype in de hersenen of het ruggenmerg heeft een repertoire van het celoppervlak moleculen of moleculaire determinanten, waardoor het kan worden geïdentificeerd en gekarakteriseerd. Op dit moment, robuuste cel identificeren en de scheiding technologieën vereisen single-cell voorbereidingen worden gegenereerd, terwijl tegelijkertijd het beperken van celdood en vernietiging van karakteristieke oppervlakte-eiwit. De gentleMACS Dissociator, indien gebruikt in combinatie met trypsine of papaïne op basis van dissociatie kits, kan effectief en zachtjes distantiëren hersenweefsel met behoud van antigen epitopen en het beperken van cel-verlies. Gestandaardiseerde voorbereiding van de single-cell suspensies wordt gerealiseerd met behulp van C Buizen en geoptimaliseerd, vooraf ingestelde gentleMACS Programma&#39;s. Eenmaal gegenereerd, single-celsuspensies kunnen worden behandeld met monoklonale antilichaam zoals Anti-Prominin-1 microbolletjes, die neurale voorlopercellen te identificeren, of gezuiverd verder met Myeline verwijderen Beads.

Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel aggitation het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS Dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op nerual weefsel wordt uitgelegd.

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

Binnen het zenuwstelsel zijn honderden typen neuronale cellen en gliacellen beschreven. Elk specifiek celtype in de hersenen of het ruggenmerg heeft een ...

Binnen het zenuwstelsel zijn honderden typen neuronale glia-cellen beschreven. Elk specifiek celtype in de hersenen of het ruggenmerg beschikt over een repertoire van celoppervlaktemoleculen of moleculaire determinanten waaraan het kan worden geïdentificeerd en gekarakteriseerd.Momenteel vereisen robuuste technologieën voor celidentificatie en -scheiding dat er enkeltcelpreparaten worden gegenereerd, terwijl tegelijkertijd celdood en de vernietiging van karakteristieke oppervlakte-eiwitten worden beperkt. De GentleMax Associator kan, in combinatie met dissociatiekits op basis van trypsine of pepaine, hersenweefsel effectief en zacht dissociëren, waarbij antigeen-epitopen behouden blijven en celverlies wordt beperkt. Zodra enkeltcelsuspensies zijn gegenereerd, kunnen deze worden behandeld met monoklonale conjugaten zoals anti-prominent one microbeads, die neuroprogenitoren identificeren, of verder worden gezuiverd met myelin removal beads.Hoi, mijn naam is Sandra PeNAT. Ik ben projectmanager voor neurowetenschappelijke producten bij Mil Biotech hier in baggage Gabert, Duitsland. Vandaag laat ik u zien hoe u een enkelcel-suspensie bereidt uit muizenhersenweefsel met behulp van de genix dis associator.De Genix Dis Associator is een apparaat dat diverse weefseltypen kan dissociëren in een gesloten steriele omgeving, waardoor de noodzaak voor tijdrovende handmatige mechanische dissociatie wordt weggenomen. Laten we beginnen. Afhankelijk van het antigeenepitoop dat relevant is voor latere toepassingen, gebruikt u ofwel de op papaïne gebaseerde neurale weefseldissociatiekit of de op trypsine gebaseerde neurale weefseldissociatiekit.Voor het experiment van vandaag geven we de neuro tissue dissociation kit P de voorkeur, omdat we prominente positieve cellen willen isoleren met behulp van anti prominent one microbeads. Prominent one is noch gevoelig voor pepane, noch voor trypsine, waardoor de neuro tissue dissociation kit P in dit geval de betere keuze is. Voordat het protocol wordt gestart, moeten de reagentia en oplossingen voor deze kit worden voorbereid.Zorg dat u uw eigen voorraad Hank's gebalanceerde zoutoplossing HBSS zonder calcium- en magnesiumionen, HBSS met calcium- en magnesiumionen en beetme capto ethanol bij de hand heeft. Begin met het bereiden van oplossing twee, oplossing vier en vervolgens enzymmengsel één. Voeg eerst beetme capto ethanol toe aan oplossing twee tot een eindconcentratie van 0,067 millimolair.De oplossing is nu tot een maand stabiel bij bewaring op vier graden Celsius. Los vervolgens het geliofiliseerde poeder op in een flacon met het label solution.Four. Voeg 0,7 milliliter bewaarbuffer toe, meng voorzichtig en vortex niet.Bereid nu enzymmix één voor door 1900 µL van oplossing twee en 50 µL van oplossing één in een C-buis te pipetteren. Dit is voldoende oplossing om 400 mg weefsel te dissociëren; indien er meer weefsel wordt gedissocieerd, dient er extra enzymmix één te worden bereid. In een C-buis kan maximaal 1600 mg hersenweefsel worden verwerkt.Het enzymmengsel één in de C-buis wordt vervolgens 10 tot 15 minuten geïncubeerd bij 37 °C. Om de dissociatie te starten, pipetteert u 1 mL HBSS zonder calcium- en magnesiumionen in de buis. Plaats de buis op een balans, voeg het hersenweefsel toe en noteer de massa.Deze muizenhersenen van P4 wegen ongeveer 0,2 gram. Een volwassen brein zou ongeveer 0,4 gram wegen voor alle weefselmonsters minder dan 400 milligram. De oplossingsvolumes die we vandaag zullen gebruiken zijn adequaat.Als uw weefsel meer dan 400 milligram weegt, schaal dan alle reagensvolumes dienovereenkomstig op; tot 1600 milligram weefsel kan in één C-buis worden verwerkt. Breng de muizenbrein over in de voorbereide C-buis die 1.950 microliters van het voorverwarmde enzym bevat. Meng en sluit de dop stevig.Plaats nu de C-buis met de dop naar beneden op de GenMax dissociator en zorg ervoor dat het weefsel zich in het gebied van de stator bevindt. Selecteer het programma MCO brain O one en start het programma. Dit is het eerste van de drie programma's die u voor de dissociatie zult uitvoeren wanneer het programma is voltooid.Verwijder buis C en incubeer het monster gedurende 15 minuten bij 37 °C onder langzame continue rotatie. Gebruik hiervoor de max mix buisrotator, waarbij de bedrijfsmodus van het apparaat overeenkomt met vier RPM. Plaats de buis na de eerste incubatie ondersteboven terug op de dissociatiemachine en start programma M brain O2. Bereid tijdens de volgende associatie 30 µL enzymmix twee per 400 mg weefsel voor door 20 µL oplossing drie en 10 µL oplossing vier toe te voegen.Wanneer de tweede associatorcyclus is beëindigd, voeg dan 30 µL enzymmix twee toe aan de C-buis, direct via de met een septum afgedichte opening in het midden van de dop. Om steriliteit te waarborgen, wordt de C-buis voorzichtig omgekeerd om te mengen; gebruik geen vortex. Plaats de C-buis vervolgens terug op de max mix buisrotator en incubeer het monster gedurende 10 minuten bij 37 °C met een mengsnelheid van 4 RPM.Vervolgens wordt de CTU voor de derde en laatste keer teruggeplaatst in de gentle max dis associator en wordt het programma M brain oh drie uitgevoerd. Wanneer het derde programma is voltooid, worden de C-buisjes op de rotator geplaatst en nog 10 minuten geïncubeerd bij 37 °C. Centrifugeer het monster nu kort om de cellen op de bodem van de buis te verzamelen.We zijn nu klaar om de cellen te filteren. Kies een celzeef op basis van de grootte van het celtype waarin u geïnteresseerd bent. Als de cellen die u wilt verzamelen groter zijn dan 30 µm in diameter, zoals kinji-cellen, moet de poriegrootte groot genoeg zijn om cellichamen van deze diameter door te laten.Voor prominente enkelvoudige positieve cellen is een filter van 30 micrometer geschikt. Verwijder het gedissocieerde weefsel uit de C-buis met behulp van 1000 microliter pipettepunten die door de met een septum verzegelde opening in de dop van de C-buis passen. Breng de celsuspensie aan op het vooraf gescheiden filter dat op een verzamelbuis van 15 milliliter is geplaatst.Voor grotere monsterhoeveelheden kan een buis van 50 milliliter nodig zijn. Laat de celsuspensie door het filter lopen. Was vervolgens het filter door 10 milliliters HBSS-oplossing met calcium- en magnesiumionen toe te voegen.Gebruik bij hoeveelheden weefsel groter dan 400 milligram tot 30 milliliter HBSS met calcium- en magnesiumionen voor het wassen van het filter. Pellet vervolgens de cellen in de opvangbuis door centrifugatie bij 300 Gs gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur, aspireer het supernatant volledig en resuspendeer de celpellet in de door u gekozen buffer of medium. Op dit punt kunt u ervoor kiezen om eventuele myeline-resten te verwijderen, aangezien deze de celisolatie en antilichaamkleuring kunnen belemmeren.Om myelinedebris te verwijderen, raden wij het gebruik van myelin removal beads aan. Anders zijn de cellen klaar voor verdere toepassing. Deze dot plot op basis van propidiumjodide-kleuring geeft aan dat 97% van de cellen in een single cell suspension van een muizenbrein, zoals de suspensie die in deze video is gegenereerd, levensvatbaar is.Deze cellen kunnen verder worden gezuiverd met behulp van anti-prominent microbeads om neuronale progenitorcellen te verkrijgen, die bij kweek in max neuro-medium, aangevuld met B 27 plus, neurosferen kunnen vormen in deze dot plots. Het voordeel van het behandelen van suspensies met myelin-verwijderingsbeads is zichtbaar. Een significant hoger percentage prominent 1-expresserende neuronale progenitorcellen wordt verkregen via max separation na myeline-depletie uit een single-cell-suspensie.Ik heb zojuist gedemonstreerd hoe u een suspensie van enkelvoudige cellen uit muizenhersenweefsel bereidt met behulp van de genix dissociatie en de neural tissue dissociation kit. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk dat alle oplossingen correct zijn voorbereid voor de juiste keuze van de neural tissue dissociation kit, T of P. Raadpleeg hiervoor de NDK-applicatienota of het datasheet. Met deze methode kunnen zowel embryonale als de D weefselsecties of de volledige hersenen onder steriele omstandigheden op een tijdsefficiënte en gestandaardiseerde wijze worden verwerkt.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

generation-of-single-cell-suspensions-from-mouse-neural-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video beschrijft de methode die wordt gebruikt voor het isoleren van neuroprecursors uit de ontwikkelingslanden cortex van embryonale muizen. De procedure voor het verwijderen van embryo's uit de baarmoeder, het ontleden van de corticale weefsel, en verteren de geïsoleerde cerebrale cortex wordt weergegeven.

Cultuur van Mouse Neurale Stem Cell Voorlopers

Een eenvoudige en betrouwbare methode op isolatie en de cultuur van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale corticale weefsel wordt beschreven. Culturen zijn afgeleid van bekende menselijke neurologische aandoeningen kunnen worden gebruikt voor de karakterisering van pathologische cellulaire en moleculaire processen, maar ook als een platform om de farmacologische werkzaamheid beoordelen.

Generatie van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale Cortical weefsel

This video demonstrates a method for isolating stem cells from the postnatal mouse cerebellum and differentiating them into neural cells. Stem cells from the isolated cell suspension are purified using antibody-coated magnetic beads and are cultured to form neurospheres. The neurospheres are then maintained in a differentiation medium to generate neural cells.

Isolation of Stem Cells from Postnatal Mouse Cerebellum and Differentiation into Neural Cells

This video demonstrates a protocol to obtain a highly viable single-cell suspension from the mouse brain hippocampus using a combination of automated mechanical dissociation and a mixture of enzymes to aid in enzymatic digestion.

Obtaining a Single-Cell Suspension from Mouse Hippocampal Tissue

The video demonstrates the preparation of a single-cell suspension of immune cells from a murine brain tissue. It involves enzymatic digestion to release cells from the brain tissue, followed by density gradient centrifugation to isolate the immune cells based on their densities to obtain the single-cell suspension.

Preparing a Single-Cell Suspension of Immune Cells from Murine Brain Tissue

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor het gelijktijdig opwekken van neurale precursoren celculturen, hetzij als hechtende monolagen of neurosferen, uit de subventriculaire zone en dentate gyrus van individuele volwassen muizen.

Een muis, twee culturen: Isolatie en Cultuur van adulte neurale stamcellen uit de Twee Neurogeen Zones van individuele muizen

Het opzetten van cultuursystemen voor de expansie van volwassen neurale stamcellen (aNSCs) maakt het mogelijk om aNSCs te onderzoeken en toe te passen voor therapie. De subcallosale zone (SCZ) is onlangs herkend als een nieuwe neuroblastvormende regio in volwassen muizen. Hier worden methoden beschreven voor de isolatie, expansie en differentiatie van SCZ-aNSCs.

Isolatie en cultuur van de volwassen neurale stamcellen van de muis Subcallosal Zone

Hier introduceren wij een nieuwe microchirurgische techniek voor de isolatie van neurale stamcellen uit de E13 muis embryo ganglionaire eminentie.

Isolatie en cultuur van muis embryonale neurale stamcellen

Hier beschrijven we een nucleofectiesysteem dat is ontworpen om de efficiëntie van genafgifte te verbeteren in uitgebreide neurale stamcellen (NSC's) geïsoleerd uit de subventriculaire zone van volwassen muizen. De bevindingen tonen aan dat deze methode de genverstoring in NSC's aanzienlijk verbetert, de effectiviteit van traditionele transfectieprotocollen overtreft en de celoverleving verbetert.

Isolatie, expansie en nucleofectie van neurale stamcellen uit de subventriculaire zone van volwassen muizen

Om de immuunrespons op hersenaandoeningen te onderzoeken, is een veelgebruikte benadering het analyseren van veranderingen in immuuncellen. Hier worden twee eenvoudige en effectieve protocollen gegeven voor het isoleren van immuuncellen uit muizen hersenweefsel en schedelbeenmerg.

Het isoleren van immuuncellen uit de hersenen en de schedel van muizen

Leer een protocol voor het genereren van single-celsuspensies uit muizenhersenweefsel met de gentleMACS Dissociator. Deze methode behoudt celviabiliteit en oppervlakte-eiwitten voor nauwkeurige celidentificatie.

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

Meer video's verkennen