Creatie van Muizen Experimentele abdominale aorta-aneurysma met Elastase

Deze chirurgische procedure om een abdominaal aorta-aneurysma te creëren begint met een midline abdominale incisie. De inhoud van de buikholte wordt terzijde geschoven en alle vertakkingen van de aorta worden geligeerd. De proximale en distale delen van de aorta worden afgebonden.

Het hart wordt doorgeprikt met een naald en een overvloed aan elastase wordt toegediend via een hitte-getaperde polyethyleenbuis. Wanneer de toediening voltooid is, wordt de AOR-autotomie gesloten. De ligaturen worden verwijderd, de aorta vult zich met bloed en de buikholte wordt gesloten.

De muis krijgt vervolgens de tijd om te herstellen en het aneurysma zal na 14 dagen volledig gedilateerd zijn. Hallo, ik ben Julian Asma van het laboratorium voor Foetale Cellen van de afdeling Cardiovasculaire Geneeskunde aan de Stanford University. Vandaag laat ik u de procedure zien voor het injecteren van een nieuw experimenteel abdominaal aortaneurysma met elastase.

We gebruiken deze procedure in uw laboratorium om de PE's van de abdominale art S te bestuderen. Laten we beginnen. Om uw experimenten te starten, selecteert u een gewenste muis, bijvoorbeeld een C 57 black six muis, en anestheseert u deze met geïnhaleerd isofluorine tot de muis bewusteloos is. Houd er rekening mee dat verschillende muizenstammen variëren in de groeisnelheid van het aneurysma.

Verwijder de geanestheseerde muis uit de kamer naar een adequaat verlicht preparatiestation. Scheer het haar van de buik vanaf het einde van het borstbeen tot aan de aanzet van de poten. Gebruik ontharingscrème om het resterende haar te verwijderen.

Reinig de blote huid met 70% alcohol totdat alle haren uit het geschoren gebied zijn verwijderd. Reinig de huid vervolgens minimaal drie keer met Betadine, waarbij tussen de beurten door met alcohol wordt gedeppen. Plaats de muis nu in rugligging op het operatieveld om de muis bewusteloos te houden.

Plaats tijdens de operatie een tube op de neus die isofluraan toedient met dezelfde stroomsnelheid als gebruikt voor het opwekken van de narcose. De elastase wordt op ijs bewaard en in een spuit getrokken. De spuit wordt vervolgens vastgeklemd en naast het operatieveld geplaatst, waarna de katheter wordt bevestigd.

Het is belangrijk dat de punt van de katheter steriel blijft, wat wordt bereikt door de punt in een steriel vial te plaatsen. Zorg ervoor dat er steriele technieken worden toegepast voordat de muis wordt opengesneden. Begin met het aantrekken van steriele handschoenen.

De chirurgische instrumenten, scharen, naaldvoerders en pincetten moeten vóór de operatie worden gedesinfecteerd. Neem even de tijd om uw voorbereidingen te controleren en probeer andere potentiële bronnen van contaminatie tijdens de operatie te elimineren. Indien de steriele techniek tijdens de procedure wordt doorbroken, moet het instrument opnieuw worden gesteriliseerd in een hot bead-sterilisator.

Zodra alles is voorbereid, wordt de operatie gestart met een lange mediane abdominale incisie in de buikholte. Verschuif de abdominale inhoud naar de vrije ruimte in de buik of trek deze met steriel gaas buiten de buikholte om de aorta abdominalis bloot te leggen. Gebruik nu een pincet om de aorta abdominalis zorgvuldig te isoleren vanaf het niveau van de linker niervene tot aan de bifurcatie.

In het getoonde geval is er één enkele aftakking die zich boven de plek bevindt waar we de aorta ligeren en deze hoeft daarom niet te worden afgebonden. Als er aortatakken aanwezig zijn tussen de locaties van de distale en proximale aortaligaturen, ligeer dan de takken binnen één centimeter van de bifurcatie met 10 aut hechtingen; plaats tijdelijke 6.0 zijden ligaturen bij de proximale en distale delen van de aorta om de bloedstroom te stoppen.

Voer nu een autotomie uit bij de bifurcatie. Begin met het doorprikken van de bifurcatie met een naald van 30 gauge. Verhitte, taps toelopende polyethyleenbuisjes kunnen via de AOR-autotomie worden ingebracht en met een knoop worden vastgezet.

Gebruik de pincet om de buis voorzichtig en zachtjes in de aorta in te brengen. Let erop dat de endotheellaag niet wordt beschadigd met een druk van 100 milliliters. De aorta werd geperfuseerd met elastase uit een zoutoplossingszak die op een hoogte van 136 centimeters was opgehangen.

Zorg ervoor dat er geen lucht in de buis zit, anders zal de druk niet exact zijn. De zoutoplossing bevat 4,5 units per milliliter type one porcine pancreatic elastase en zou de aorta in vijf tot 15 minuten moeten vullen.

Tijdens de perfusie dilateert de aorta doorgaans tot ongeveer 140% van de oorspronkelijke diameter. Na voltooiing wordt de perfusie verwijderd en wordt de aortotomie gesloten met een 10 aught hechtdraad om constrictie te voorkomen. Nadat de tomie is gesloten, moet ook de distale ligatuur worden verwijderd.

Indien er weinig tot geen bloedingen optreden vanuit de herstelde autotomie, wordt de proximale ligatuur verwijderd. Indien er wel sprake is van bloedingen, worden aanvullende tijdelijke 6.0 soak-ligaturen geplaatst bij de proximale en distale delen van de aorta en wordt er nog een hechting toegevoegd om de AOR-autotomie volledig te sluiten. De uitgezette aorta zal onmiddellijk na verwijdering van de proximale ligatuur met bloed vollopen.

Zodra de procedure aan de aorta is voltooid, worden de darmen teruggeplaatst in de buikholte. Als deze waren teruggetrokken, zullen de darmen als één geheel terugglijden, waardoor de exacte positionering geen zorgen baart. Wanneer alle organen op hun plaats zitten, kan de externe wond in twee lagen worden gesloten met zes aut nylon- en polypropyleen hechtingen.

Dien nu een plaatselijke verdovingsmiddel toe aan de muis, zoals één druppel 0,25%boop van ICAN per centimeter incisie. Dien daarnaast één dosis van het ontstekingsremmende middel Carin toe in een hoeveelheid van vijf milligram per kilogram via een subcutane injectie. De chirurgische ingreep is nu voltooid en de muis moet op een warme plek worden geplaatst waar hij weer bij bewustzijn kan komen.

Het herstel vindt gewoonlijk binnen 15 minuten plaats. Wanneer de muis het bewustzijn terugkrijgt, wordt deze teruggeplaatst in een individuele kooi en periodiek gemonitord tijdens het herstel. Na de procedure dilateert de aorta doorgaans tot ongeveer 140 tot 160% van de oorspronkelijke diameter.

Deze initiële dilatatie wordt waargenomen met stabilisatie tot dag zeven. Er vindt een snelle secundaire dilatatie plaats tussen dag zeven en dag 14. Op dag 14 kan het aneurysma in de infrarenale aorta worden waargenomen.

Ik heb u zojuist laten zien hoe u een abdominaal aneurysma induceert met elastase bij muizen. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om de vorming van bloedstolsels in de aorta te voorkomen. Dat is alles.

Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experiment.