Meten van de bloeddruk in Muizen met behulp van Volume Pressure Recording, een staart-cuff-methode

Het woord coda is Italiaans voor staart. Het Coda-systeem voor niet-invasieve bloeddrukmeting maakt bloeddrukmetingen bij knaagdieren mogelijk, dankzij een gespecialiseerde volumedruksensor die veranderingen in het bloedvolume van de staart meet wanneer deze over de staart van een dier wordt geplaatst. Deze video demonstreert hoe u het systeem instelt, de dieren voorbereidt en gelijktijdig bloeddrukmetingen verzamelt voor acht dieren.

Hallo, ik ben Anju Bala Krishnan, werkzaam in het laboratorium van Alan Dougherty bij het Cardiovascular Research Center van de University of Kentucky in Lexington. Vandaag tonen we u een procedure om de bloeddruk bij muizen te meten met behulp van volume-drukregistratie via de staartmanchetmethode. Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om het cardiovasculaire systeem te bestuderen.

Laten we beginnen. Om het CODA-systeem op te stellen, kiest u een plek in het laboratorium waar de kamertemperatuur stabiel is op 20 °C of hoger. Vermijd locaties nabij ventilatieroosters van de airconditioning; blootstelling van dieren aan harde geluiden of geuren kan irritatie of stress veroorzaken.

De dierengeuren kunnen ook elk sterk parfum omvatten dat u mogelijk draagt. Zet de Coda-controller aan en vervolgens de verwarmingsplatforms, die zijn ingesteld op niveau drie. Als de kamertemperatuur boven de 25 °C ligt, start dan op niveau één of twee.

Voer eerst de Controllerdiagnostiektest uit en open de Coda-software. Selecteer het Coda-apparaat door erop te klikken. Klik op test geselecteerde apparaat.

Selecteer de mancheten en kanalen die getest moeten worden en klik op testen. Sluit het venster voor apparaattests nadat de diagnostische test van de controller is voltooid. Selecteer de code van de te gebruiken controller en klik vervolgens.

Gebruik deze apparaten om de software in te stellen. Selecteer tools personeelsbeheer. Klik vervolgens op onderzoeker één.

Klik op de volgende rijen om extra onderzoekers toe te voegen om de naam te wijzigen. Klik vervolgens op gegevens opslaan. Klik op het tabblad technici om technici te wijzigen of toe te voegen.

Klik daarna op het tabblad 'specimens' om de dieren te benoemen voor een eenvoudige identificatie en om het diertype te selecteren. Klik vervolgens op 'save data'. Klik tot slot op het tabblad 'animals'.

Om het diertype en de gevoeligheid te wijzigen, klikt u op gegevens opslaan en sluit u vervolgens het venster. Om een nieuw experiment te starten, selecteert u bestand Nieuw experiment. Voer de naam van het experiment in, selecteer de hoofdonderzoeker en selecteer een begindatum.

Klik op volgende. De volgende stap is het invoeren van de basisinformatie van de sessie. Begin met het invoeren van de sessienaam en stel het aantal acclimatisatiecycli in op vijf; als u geen acclimatisatiecycli wilt opnemen, stelt u dit in op nul.

Stel het aantal sets in op één, de tijd tussen sets op 30 seconden voor meerdere sets. Stel het aantal cycli per set in op 20 cycli en de tijd tussen cycli op vijf seconden. Klik vervolgens op next.

Om te beginnen met de monsterselectie, selecteert u het monster uit de monsterpool en wijst u dit toe aan het eerste beschikbare kanaal. Klik vervolgens op 'volgende' om de sessieparameters in te stellen. Stel de maximale occlusiedruk in op 250 millimeters.

Stel de kwikdeflatietijd in op 20 seconden. Stel voor muizen het minimumvolume in op 15 microliters en de weergavestijl op één kanaal per grafiek. U kunt eventueel ook extra onderzoekers en technici toevoegen.

Klik vervolgens op volgende. Controleer het sessiescript en klik op volgende. Selecteer niet voltooien totdat u het gedeelte over de voorbereiding van het dier heeft voltooid, dat hierna wordt beschreven.

U kunt nu de dieren ophalen en naast het CODA-bloeddrukmeetstelsel plaatsen. Let voordat u de dieren in de houders plaatst op de grootte van elk dier in verhouding tot de grootte van de geselecteerde houder. Het dier moet ongehinderd in de houder kunnen gaan.

Plaats elk dier in een houder door het dier bij de staart op te pakken en voorzichtig in de achterzijde van de houder te plaatsen, die naar het open uiteinde van de neuskegel is gericht. Bevestig de achterklep zorgvuldig aan de houder door de schroef op de achterklep aan te draaien. Let erop dat de staart of andere lichaamsdelen niet bekneld raken bij het sluiten van de achterklep.

Volgende dia. De neuskegel richting de achterklep. Hiermee wordt de beweging van het dier beperkt.

De neuskegel moet in een positie staan die voorkomt dat het dier zich kan omdraaien. Plaats de houder, terwijl het dier erin bevindt, op het verwarmingsplatform. Laat het dier in de aangewezen positie ten minste vijf minuten wennen aan de houder.

Raak het dier niet aan en hanteer het niet. Terwijl het dier zich in de houder bevindt, kan verhoogd contact het dier irriteren; laat het dier nooit onbeheerd in de houder achter. Om de occlusiemanchet voor de staart correct te plaatsen, rijgt u de staart door de occlusiemanchet en plaatst u de manchet zo dicht mogelijk bij de basis van de staart zonder kracht uit te oefenen.

Rijg daarna de staart door de VPR-sensormanchet, waarbij deze binnen twee millimeter van de occlusiemanchet wordt geplaatst. Zet de slang vast in de inkeping aan de bovenachterzijde van de houder. De occlusiemanchet rond de staart wordt opgeblazen om de bloedtoevoer naar de staart te belemmeren.

De occlusiemanchet wordt langzaam leeggelaten en de VPR-staartmanchet, voorzien van een speciaal ontworpen sensor, meet de fysiologische kenmerken van de terugkerende bloedstroom terwijl het bloed terugstroomt naar de staart. De VPR-sensormanchet meet de zwelling van de staart als gevolg van de arteriële pulsaties van de bloedstroom. De systolische bloeddruk wordt automatisch gemeten bij het eerste verschijnen van de staartzwelling.

De diastolische bloeddruk wordt automatisch berekend zodra de stijgende zwelsnelheid in de staart stopt. Nadat alle dieren in de houders zijn geplaatst en de manchetten om hun staart zijn aangebracht, moeten ze ten minste vijf minuten krijgen om thermisch te reguleren. Noteer de temperatuur van de dieren.

Met een infraroodthermometer moet de temperatuur van het dier gewoonlijk tussen de 32 en 35 °C liggen. Nu de dieren klaar zijn, kunnen we aan het experiment beginnen. Klik op voltooien om het experiment te starten.

De rode lijn stelt de deflatie van de occlusieband en de VPR-sensormans voor. De blauwe lijn stelt de veranderingen in het bloedvolume van de staart voor. De eerste buiging van de blauwe lijn, het minimale veranderingspercentage, identificeert de systolische bloeddruk.

Het tweede buigpunt van de blauwe lijn, de maximale veranderingssnelheid, identificeert de diastolische bloeddruk op het moment dat het experiment is beëindigd. Verwijder de dieren onmiddellijk uit de manchetten en de houder. Een eenvoudig verslag met de samenvatting van de sessie wordt weergegeven.

De in het experiment verzamelde gegevens worden opgeslagen als een Excel-bestand. Er zijn verschillende manieren om de gegevens binnen het Excel-bestand te verwerken. Een gebruikelijke praktijk is het berekenen van het gemiddelde en de standaardafwijking en het verwijderen van metingen.

Indien de standaarddeviatie groter is dan 30. Bovendien kunnen afgekeurde cycli worden bekeken en kan de gehele database eenvoudig naar Excel worden geëxporteerd. Raadpleeg het schriftelijke protocol en de gebruikershandleiding.

Voor meer informatie: ik heb u zojuist laten zien hoe u de bloeddruk bij muizen niet-invasief kunt meten met behulp van volumedrukregistratie. Het is van groot belang om stress bij het dier te verminderen door deze procedure te volgen, om zo nauwkeurige en consistente metingen te verkrijgen. Dat is alles.

Bedankt voor het kijken en veel succes met de experimenten.