Name: Cell Block Bereiden uit Cytologie Model met overwegend Individueel verspreide cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Leer Shidham's methode voor het bereiden van celblokken uit cytologiepreparaten met individueel verspreide cellen met behulp van een AV-marker. Deze techniek verbetert de nauwkeurigheid van immuunprofielen en speciale kleuringen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Chris Chartrand, HT (ASCP) voor het aantonen van de sectie te snijden van de cel blok met AV marker.

Inleiding: Dit is een video beschrijft Shidham de methode voor het celblok voorbereiding op basis van vloeibare cytologie (LBC) specimen met HistoGelTM (Thermo Scientific) (HG). In vergelijking met andere willekeurige benaderingen, de volgende zijn de twee belangrijkste kenmerken van dit protocol voor het bereiden van celblokken van relatief hypocellular exemplaren met afzonderlijk verspreide losse cellen (1-5). <ol><li> Dit protocol gaat stappen ondernemen om de cellen te concentreren langs het vlak evenwijdig aan het snijvlak van de cel te blokkeren. </li><li> Het bevat ook een baken-achtige donkere opnemen van AV-marker (Figuur 1b), die twee van de volgende doeleinden dient: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Te visualiseren het niveau waarop de cellen worden geconcentreerd. De oppervlakte van de cel blok met de cellen van belang nu kan worden gevisualiseerd door de histotechnologist wanneer het donker gekleurde baken wordt blootgesteld tijdens het snijden. Dit vermogen om toezicht te houden zou voorkomen dat een uit te snijden door het niveau met de meeste van de cellen, of niet snijden te oppervlakkig naar het niveau met de hoogste concentratie van het monster cellen. </li><li> Om te dienen als een locator referentiepunt in serie celblok gedeelte over verschillende dia&#39;s. Dit referentiepunt fungeert als een baken te helpen lokaliseren bepaalde cellen of groepen van cellen voor de evaluatie van een coördinaat immunoreactiviteit patroon met het SCIP aanpak (6,7). </li></ol></li></ol> PROTOCOL (figuur 2) Voorbereiding van het monster. <ol><li> Breng de resterende LBC cervicale cytologie monster aan een vlakke bodem glazen buis (15mm diameter x 45mm) (Figuur 2.1 tot en met 2.4). Plaats de glazen buis in een grotere plastic buis (28 x 85mm) en gecentrifugeerd. Verwijder de glazen bodem los van de drager buis en giet het supernatant. </li><li> De glazen buis wordt vervolgens afgedekt (het morsen van het verwarmen van water te voorkomen in de volgende stap) en weer terug geplaatst in een groter vlakke bodem drager plastic tube </li><li> De vervoerder plastic buisje met de glazen buis wordt vervolgens afgedekt, geplaatst in een centrifuge (met draaibare koppen en geen vaste hoek cups zodat de cellen loodrecht vallen op de vlakke bodem van de glazen buis), en gesponnen bij 1805 G (3000 RPM, rotor radius-17cm) gedurende vijf minuten (Figuur 2.5). </li><li> De buisjes worden vervolgens verticaal uit de centrifuge en de kleinere glazen buis wordt verwijderd met een pincet uit de grotere carrier plastic tube zonder verstoring van de gesedimenteerde pellet met cellen. </li><li> De glazen buis met het monster is de niet-afgetopte en het supernatant wordt afgegoten zorg ervoor dat u de platte laag van sediment-cellen op de bodem (Figuur 2.6) verstoren. </li></ol> Opname van de referentie te coördineren AV-marker en toevoeging van gel <ol><li> Een donkere baken AV-marker (ongeveer 2 mm X 2 mm groot, plat opgedoken, fragment van donker gekleurde, sectionable materiaal) (figuur 3) wordt toegevoegd als een wegwijzer naar de glazen buis (figuur 2.7). </li><li> Vloeibaar een aliquot van HG door smelten in magnetron 10 seconden bij gemiddeld vermogen. </li><li> Voeg 0,5 ml gesmolten HG op de buis, mengen met het sediment snel, en samen te vatten is (Figuur 2.8) (Ga verder naar de volgende stap snel zonder dat de HG om te beginnen met stollen). </li><li> Voeg ongeveer 2,5 ml warm (45 ° C) water aan de vervoerder plastic buis (figuur 2.9). </li><li> De kleinere bedekte glazen buis is geplaatst in de plastic buis met warm water. (Deze stap is nodig om de HG te houden van stollen tijdens de volgende stappen) (Figuur 2.9). </li><li> De vervoerder plastic buisje wordt geplaatst in de centrifuge (met draaibare koppen en niet vaste hoek cups zodat de cellen loodrecht vallen op de vlakke bodem van de glazen buis), en gesponnen bij 1805 G (3000 rpms, rotor radius-17cm) voor vijf minuten. Het doel van deze centrifugatie stap is om de AV-marker duwen en om de cellen te concentreren in een laag dichter bij het snijvlak van de uiteindelijke paraffine ingebedde celblok (Figuur 1d). </li><li> De buizen worden vervolgens voorzichtig en verticaal uit de centrifuge zorg ervoor dat u de gesedimenteerd dunne laag met het monster cellen op de bodem te verstoren. </li><li> De grotere plastic buis is de niet-afgetopte en de kleinere glazen buis verticaal is verwijderd door een pincet zonder de sedimentlaag van het monster cellen. </li><li> De kleine glazen buis wordt gekoeld in een verticale positie gedurende 15 minuten afkoelen en stollen van de HG (Figuur 2.11). </li></ol> Verwijdering van de cel te blokkeren als een knop van de gel met het monster voor eindverwerking <ol><li> De gestolde HG schijf, met de laag van geconcentreerde / sediment monster op de bodem wordt verdreven uit het vlakke bodem glazen buis door spuiten 10% formaline door middel van een 23 gauge naald met de spuit (figuur 2.12). </li><li> De naald wordt ingebracht langs de zijkant van de buis aan de rand van gestolde HG schijf met het monster (zie figuur 2.12). </li><li> De needle wordt gedraaid langs de zijkant van de buis, terwijl formaline langzaam geduwd door de spuit. Dit resulteert in de scheiding van de HG-toets samen met donker gekleurde baken AV-marker en de geconcentreerde model in het van de platte bodem van de glazen buis (figuur 2.12). </li><li> De cel blok (gel-knop met het monster cellen) wordt dan geplaatst in een label cassette en ter weefsel verwerking paraffine ingebedde celblokken (Figuur 2.13) voor te bereiden. </li></ol> Inbedding en snijden van het monster <ol><li> De schijf is ingebed in paraffine met de donkere baken marker naar beneden als snij-oppervlak (figuur 1). </li><li> Het blok is doorsnede tot aan het donker gekleurde AV-marker als een baken wordt blootgesteld en duidelijk zichtbaar. </li><li> Drie tot vier micron delen worden gesneden van dit niveau die moet bevatten de meeste van de afzonderlijk verspreide cellen van het monster. </li><li> De secties worden verzameld op het glaasje voor verdere kleuring, immunohistochemische kleuring, of andere tests zoals aangegeven. De protocollen voor deze tests waaronder het type van dia&#39;s te gebruiken voor montage van de onderdelen kan variëren. In het algemeen voor immunokleuring, zijn gecoat slides gebruikt om zwevende en het verlies van secties van de dia&#39;s te voorkomen tijdens de immunokleuring stappen. </li></ol> Afkortingen (in alfabetische volgorde): CISH, chromogene in-situ hybridisatie tests; FISH, TL-in-situ hybridisatie tests; FFPE, formaline gefixeerde in paraffine ingebedde, FNA, fijne naald aspiratie, HG, HistoGel ™ (Thermo Scientific); LBC, op basis van vloeibare cytologie; PCR polymerase chain reaction; <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig1.jpg" alt="figuur 1" /> Figuur 1. De structuur van de cel te blokkeren voorbereid door het protocol Shidham&#39;s. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig2.jpg" alt="figuur 2" /> Figuur 2. De samenvatting van de verschillende stappen voor het bereiden van celblok van LBC monster door het protocol Shidham&#39;s. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig3.jpg" alt="figuur 3" /> Figuur 3. Voorbereiding van de AV-marker van bananenschillen. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig4.jpg" alt="figuur 4" /> Figuur 4. Vergelijking van de cel-blokken en secties met en zonder AV-marker. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig5.jpg" alt="figuur 5" /> Figuur 5. Vergelijking van de celeigenschappen van delen van de cel te blokkeren met en zonder AV-marker.

<ol><li>Shidham, V. B., Epple, J. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. Forthcoming.</li>
<li>Varsegi, G., D'Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology - Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. 2009 Mar 7-13, Boston, Ma, , Abstract 424 97a-97a (2009).</li>
<li>Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cell+block+preparation+methods+for+nongynecologic+ThinPrep+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens.</a> Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).</li>
<li>Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Thin-Prep+and+cell+block+preparation+for+the+evaluation+of+Thyroid+epithelial+lesions+on+fine+needle+aspiration+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22CytoJournal%22%5BJournal%5D)">Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy.</a> CytoJournal. 5, 3-3 (2008).</li>
<li>Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+diagnostic+accuracy+with+a+cell+block+preparation+from+thin-layer+endometrial+cytology%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study.</a> Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).</li>
<li>Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAtkinson%2C+BF+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
<li>Shidham, V. B. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
</ol>

Cel blokken zijn een waardevol instrument voor de evaluatie van de verschillende cytologie specimens (1). Het belangrijkste is, in aanvulling op de architecturale details van het model, cel-blokken zorgen voor de evaluatie van bijkomende studies als immunocytochemie, fluorescerende / chromogene in-situ hybridisatie test (FISH / CISH) en de in-situ PCR. Een verscheidenheid van methoden voor de voorbereiding van cellenblok worden beschreven. Echter, de meeste van deze zijn geschikt voor niet-gynaecologische cytologie monsters, die relatief veel cellen bevatten, en met weefsel microfragments zoals in FNA zuigt en een aantal sereuze vloeistoffen zoals ontboezemingen (1,3,4,5). Omdat de cel blokkeert in de eerste plaats de mogelijkheid van een immunocytochemische evaluatie, moet de verwerking bij voorkeur vergelijkbaar met die van de formaline-gefixeerd paraffine-ingebed (FFPE) weefsels. Uiteindelijk de resultaten die zijn verkregen na immunocytochemische evaluatie van de cel te blokkeren secties worden vergeleken met die van de gepubliceerde literatuur voornamelijk uitgevoerd op FFPE weefselcoupes. Eventuele wijzigingen in het protocol mogelijk compromis en teniet te doen de geldigheid van de resultaten verkregen op celblokken worden verwerkt door middel van verschillende fixatieven en reagens sequenties andere dan die wordt gebruikt voor routine FFPE. Enkele commerciële technieken kunnen hebben het nadeel van de verwerking door middel van een protocol van de blootstelling aan andere fixatief-reagens blootstelling. Verschillende methoden van de cel te blokkeren voorbereiding zijn beschikbaar voor exemplaren met een aanzienlijke hoeveelheid sediment en weefsel fragmenten. In principe worden de sedimenten geconcentreerd wordt ondersteund door een gel of coagulatie principe. De wendbaar knop is dan ingebed in paraffine na verwerking, zoals de chirurgische pathologie exemplaren / biopten. Gebruikte de gels zijn gelatine, agar, fibrinogeen / plasma-trombine, en andere commerciële gels, zoals HG. De methoden van concentratie varieert van eenvoudige pelleteren van het sediment door centrifugeren om de concentratie van de cellen langs verschillende soorten membranen. Voorbeelden hiervan zijn: Milipore, collodin (Celloidin) zakken of schrapen van de cellen van de cytologie vlekken op glazen objectglaasjes (1). We hebben ook onderzocht een groot aantal gels door te proberen verschillende combinaties van agar en gelatine. Geen van de combinaties bereikte een stevig genoeg consistentie een makkelijk wendbaar schijf van gestolde gel te verkrijgen met embedded cellen van het model in een stuk. HG toonde juiste consistentie en in onze ervaring de immunokleuring resultaten op HG celblok secties zijn uitstekend. Vloeistof op basis van cytologie (LBC) monsters voor cervicovaginal cytologie zijn over het algemeen minder mobiel dan niet-gynaecologische exemplaren zoals hierboven vermeld. Daarnaast heeft de gynaecologische LBC exemplaren voornamelijk bevatten individuele verspreide geëxfolieerde oppervlakkige cellen van cervicovaginal slijmvlies. Door deze, kunnen passende cellulariteit binnen de cel blok secties niet worden bereikt zonder een speciale aanpak. Aangezien deze afzonderlijk verspreid cellulaire componenten in de het blok kan niet worden gezien door de histotechnologist tijdens de sectie snijden, kan het niveau waarop de cellen start verschijnen in de secties niet op prijs gesteld en kunnen gemist worden, hetzij door te snijden langs het niveau met de meeste cellen of niet snijden diep genoeg in het niveau met de hoogste concentratie van het monster cellen (figuur 4). Shidham&#39;s protocol richt deze beide aspecten met behulp van HG voor de inbedding en conventionele laboratorium apparatuur (2) (figuur 2). Dit protocol gaat volgende twee belangrijke functies (figuur 1): <ol><li> Concentratie en uitlijning van afzonderlijk verspreid cellen in een smalle vlak naast en parallel aan het snijvlak van de cel blok (figuur 5). </li><li> Opname van een baken-like dark AV-marker als een wegwijzer. Dit is essentieel voor het bereiken van volgende functies: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Identificeren en bewaken van het niveau waarop de cellen zijn geconcentreerd in de cel te blokkeren. De belichting van de donkere gekleurde wegwijzer highlights het niveau waarop het merendeel van de singly verspreide cellen in de cel blok zullen naar verwachting worden gevestigd (figuur 4). Dit voorkomt de oversnijding (snijden langs het niveau met de meeste cellen) of prijsonderbieding (niet snijden diep genoeg in het niveau met de hoogste concentratie van het monster cellen) in de cel te blokkeren en de selectie van de secties van het niveau in de cel blok correspondeert met de hoogste concentratie staat van cellen. </li><li> De donker gekleurde wegwijzer in de secties dient ook als een referentiepunt te overzien en precies dezelfde cellen te identificeren in verschillende seriële secties van de cel te blokkeren op verschillende dia&#39;s (figuur 4). Dit is van cruciaal belang tijdens het interpreteren en evalueren van de te coördineren eigenschappen zoals immunoprofile van bepaalde cellen van het SCIP benadering van dezelfde cellen te volgen in verschillende secties (6,7). </li></ol></li></ol> Hoewel de our protocol is gestandaardiseerd en gerapporteerd voor vloeibare cervixslijm exemplaren, het kan ook gebruikt worden om diagnostische opbrengst van de vele andere niet-gynaecologische exemplaren, zoals effusie vloeistoffen, FNA, poetsen, cyste inhoud etc. Daarnaast versterken de AV marker zou vergemakkelijken verbeterd toepassing van SCIP aanpak tijdens de immunohistochemische evaluatie van de cel te blokkeren delen van deze specimens. De inbedding medium kan worden vervangen door andere reagentia met de nodige wijzigingen op relevante stappen. HG kan worden vervangen door plasma (fibrinogeen) te gegeleerd door trombine bij kamertemperatuur (1).

cell block bereiden uit cytologie model met overwegend individueel verspreide cellen

Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells

Deze video toont Shidham de methode voor de bereiding van de cel blokken van vloeistof op basis cervicovaginal cytologie exemplaren, die elk verspreid cellen en kleine celgroepen. Deze techniek maakt gebruik van HistoGel (Thermo Scientific) met conventionele laboratorium apparatuur. Het gebruik van cell block secties is een waardevolle aanvullende instrument voor evaluatie van de niet-gynaecologische cytologie. Ze stellen de cytopathologist om extra morfologische exemplaar details waaronder de architectuur van de laesie studie. Het belangrijkste is dat ze zorgen voor de evaluatie van de bijkomende studies als immunocytochemie, in-situ hybridisatie test (FISH / CISH) en in-situ polymerase chain reaction (PCR). Traditionele cellenblok bereidingstechnieken zijn meestal toegepast op de niet-gynaecologische cytologie preparaten, typisch voor lichaamsvocht effusies en fijne naald aspiratie biopsie. Vloeistof op basis cervicovaginal exemplaren zijn relatief minder mobiel dan hun niet-gynaecologische tegenhangers met vele individuele verspreide cellen. Vanwege dit, adequate cellulariteit binnen de cel blok onderdelen is moeilijk te bereiken. Daarnaast kan de histotechnologist snijden het blok niet te visualiseren het niveau waarop de cellen worden bij de hoogste concentratie. Daarom is het moeilijk te controleren het juiste niveau waarop secties kunnen worden geselecteerd om te worden overgebracht naar de glazen dia&#39;s voor het testen. Als gevolg daarvan kan de oppervlakte van de cel blok met de cellen van belang worden gemist, hetzij door te snijden verleden of niet snijden diep genoeg. Huidige protocol voor de methode Shidham adressen van deze problemen. Hoewel dit protocol is gestandaardiseerd en gerapporteerd voor gynaecologische vloeistof op basis cytologie exemplaren, kan het ook worden toegepast op niet-gynaecologisch exemplaren, zoals effusie vloeistoffen, FNA, poetsen, cyste inhoud etc voor betere kwaliteit van diagnostisch materiaal in de cel te blokkeren secties.

Shidham de methode voor de bereiding van cel blokken met AV-marker van cytologie exemplaren, die elk verspreid cellen en kleine celgroepen.

Cell Block Bereiden uit Cytologie Model met overwegend Individueel verspreide cellen

Deze video demonstreert de methode van Shidham voor de bereiding van celblokken uit vloeistofgebaseerde cervicovaginale cytologiepreparaten die individuele ... bevatten.

De bereiding van het celblok begint met de overdracht van de geconcentreerde specimencellen naar een glazen buis met een platte bodem die in een grotere buis is geplaatst. De cellen worden vervolgens door centrifugatie op de bodem gelaagd voordat de AV-marker en gesmolten HistoGel worden toegevoegd. De toevoeging van warm water aan de dragende glazen buis zorgt ervoor dat de HistoGel vloeibaar blijft.Een daaropvolgende centrifugatie drijft de AV-marker door de gel en concentreert de cellen in een laag vlakbij het snijoppervlak van het celblok. Zodra de gelknop is gestold, kan deze worden verwijderd en verwerkt voor paraffine-inbedding. Hallo, ik ben Dr. George Varszegi van de sectie cytologie van de afdeling pathologie aan het Medical College of Wisconsin in Milwaukee, Wisconsin.En ik ben Dr. Vsam, eveneens van de sectie Cytopathologie van de Afdeling Pathologie aan het Medical College of Wisconsin in Milwaukee. Vandaag willen we u een procedure laten zien voor het bereiden van cellenblokjes uit cytologische preparaten met een overmaat aan individueel verspreide cellen. We gebruiken deze procedure om het immunoprofiel van de cellen in deze individueel verspreide cellen in de coupes van het cellenblokje te bestuderen en ook voor de evaluatie van speciale kleuringen op deze coupes.Laten we beginnen. Om deze procedure te starten, brengt u ongeveer 0.5 milliliters van het bij voorkeur geconcentreerde specimen over naar een 45 millimeters lange glazen buis met een platte bodem en een diameter van 15 millimeter. Plaats de glazen buis vervolgens in een grote plastic draaghouder met een platte bodem en centrifugeer 5 minuten bij 1800 Gs bij kamertemperatuur.Verwijder na centrifugatie de glazen buis met vlakke bodem uit de plastic dragerbuis en giet het supernatant af. Let er hierbij op dat de vlakke laag celneerslag op de bodem niet wordt verstoord. Er wordt een donkere marker, zoals een Johnny Vena- of AV-marker, aan de cellen toegevoegd als referentiepunt.Nadat de cellen zijn ingebed, dient een AV-markering om het niveau te identificeren waarop de cellen in het paraffineblok zijn geconcentreerd. Voeg met een speciale pipette een eerder bereide, vlakke kubus van de AV-markering toe aan de cellen in de buis. Begin nu met het proces van het toevoegen van de gel; vloeibaar maak een aliquoot histogel of HG door het 10 seconden op gemiddeld vermogen in een magnetron te smelten of volg de instructies van de fabrikant.Voeg 0,5 milliliters van de gesmolten HG toe aan de buis met de gesedimenteerde cellen. Meng snel en sluit de buis weer. Voeg onmiddervijk ongeveer twee en een halve milliliters warm water bij 45 degrees Celsius toe aan de plastic transportbuis.Plaats vervolgens de CAPAs-buis met de cellen, de AV-marker en de HistoGel. Door snel te werken en warm water te gebruiken, wordt voorkomen dat de gel stolt tijdens de volgende stappen. Centrifugeer daarna om de AV-marker door de gel te drukken en de cellen te concentreren in een laag die dichter bij het snijvlak van het uiteindelijke in paraffine ingebedde cellenblok zal liggen.Gebruik draaibare cupjes en geen cupjes met een vaste hoek, zodat de cellen zich loodrecht op de platte bodem van de glazen buis concentreren, en centrifugeer 1800 Gs gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Wanneer de centrifugatie is voltooid, worden de buizen voorzichtig en verticaal uit de centrifuge verwijderd, waarbij erop wordt gelet dat de dunne sedimentlaag van cellen op de bodem niet wordt verstoord. Verwijder met een pincet de kleinere glazen buis verticaal zonder de sedimentlaag van monster-cellen te verstoren.Zet tenslotte de kleine glazen buis 15 minuten verticaal in de koelkast om de gel te laten afkoelen en stollen. Verwijder na 15 minuten de gel die de cellen bevat uit de glazen buis om de gestolde HG-schijf los te maken, die aan de onderzijde een laag geconcentreerd monster bevat samen met de donkergekleurde AV-marker. Gebruik hiervoor een naald van 23 gauge, bevestigd aan een spuit gevuld met 10% formin.Begin met het inbrengen van de naald langs de zijkant van de buis, aan de periferie van de gestolde HG-schijf. Draai vervolgens de naald langs de zijkant van de buis terwijl u tegelijkertijd langzaam de Formine-oplossing via de spuit naar binnen duwt. Observeer hoe de HG-knop loskomt van de vlakke bodem van de glazen buis.De gescheiden gelknop die de donkergekleurde beacon AV-marker en het geconcentreerde specimen bevat, wordt een celblok genoemd; voltooi dit door het celblok in een gelabelde cassette te plaatsen en in te dienen voor weefselverwerking om in paraffine ingebedde celblokken te verkrijgen. Zodra het celblok is ingebed, kan men overgaan tot het snijden van het specimen om de schijf van het in paraffine ingebedde celblok vrij te leggen; monteer het in paraffine ingebedde celblok op de microtoom en voer grove sneden uit om het oppervlak van het paraffineblok te nivelleren en de schijf van het celblok bloot te leggen totdat de donkergekleurde AV-marker zichtbaar en duidelijk waarneembaar is. Zodra de donkergekleurde AV-marker is blootgelegd, worden coupes van drie tot vier micron dik gesneden.Deze coupes bevatten geconcentreerde cellen uit het oorspronkelijke specimen. Verzamel elke coupe op een glasplaatje voor verdere kleuring, gevolgd door microscopie. Hier zien we bij lage vergroting de impact van het toevoegen van een met AV-inkt gemarkeerde bananenschil aan het specimen op de cellulariteit in deze H&amp;E-gekleurde coupes.In de afbeelding links is te zien dat deze marker het mogelijk maakt om de snijdiepte van de sectie te bewaken om het niveau met een goede cellulariteit te verkrijgen. De AV-marker maakt tevens de oriëntatie van verschillende cellen mogelijk, in het bijzonder secties die in verschillende seriële secties op andere glazen objectglaasjes met de marker gevolgd moeten worden. Zonder deze marker zou de snijdiepte niet bewaakt kunnen worden.Weefselmonsters werden verzameld op een doorsnedevlak met geringe cellulariteit. De mate van aanwezige cellulariteit in de monsters is nog duidelijker zichtbaar bij hoge vergroting; met de AV-marker is de snijdiepte eenvoudig te monitoren, waardoor monsters met een slechte cellulariteit gemakkelijk kunnen worden vermeden. We hebben u een methode getoond voor het bereiden van het celblok uit het specimen met losse verspreide fragmenten en cellen.De donkere AV-marker, die we hebben toegevoegd tijdens de verwerking van het cellenblok, helpt ons om de secties met de hoogste concentratie cellen te selecteren. Het stelt ons daarnaast in staat om deze secties correct te oriënteren op glazen objectglaasjes. Het is belangrijk dat de HistoGel in een gesmolten fase verkeert terwijl de cellen zich uitlijnen langs de glazen bodembuis van de flood pla, wat het snijvlak is.Deze procedure kan echter worden aangepast voor andere methoden, waaronder koude methoden zoals trombine en fibrinogeen, door middel van relevante modificaties. Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw procedures.Dank u wel.

cell-block-preparation-from-cytology-specimen-with-predominance

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This protocol describes the preparation of formalin-fixed paraffin-embedded tumor samples which are used to preserve tissue and cytology samples from non-small cell lung cancer...

Preparation of Formalin-Fixed Paraffin-Embedded Tumor Samples: A Protocol to Preserve Tissue and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC)

This video describes the preparation of subcellular fractions from leukemic cells which is a method to generate cellular and nuclear fractions from leukemic cells. The nuclear and cytoplasmic fractions can be used for further downstream analysis.

Preparation of Subcellular Fractions from Leukemic Cells: A Method to Generate Cellular and Nuclear Fractions from Leukemic Cells

Chromosomen kunnen worden geïsoleerd uit levende cellen zoals lymfocyten of huidfibroblasten en organismen, met inbegrip van mensen of muizen. Deze chromosoom preparaten kunnen verder worden gebruikt voor routinematige G-banding en moleculaire cytogenetische procedures zoals fluorescentie in situ hybridisatie (FISH), vergelijkende genomische hybridisatie (CGH) en spectrale karyotypering (SKY).

Chromosoom Voorbereiding Van gekweekte cellen

Het gebruik van cytobrush-sampling om lymfocyten en monocyten uit de endocervix te verzamelen is een minimaal invasieve techniek die monsters levert voor analyse van de immuniteit van het vrouwelijke genitale kanaal. In dit protocol beschrijven we het verzamelen van cytobrush-monsters en het isoleren van immuuncellen voor flowcytometrie-analyses.

Collectie, Isolatie, en Flowcytometrische analyse van de menselijke Endocervicale Monsters

Het begrijpen van de rol van kanker-stamcel-achtige cellen bij tumorrecidieven en resistentie tegen therapieën is in het afgelopen decennium een onderwerp van groot belang geworden. Dit artikel beschrijft de isolatie en karakterisering van de subpopulatie van kanker-stamcel-achtige cellen uit hoofd-hals-plaveiselcelcarcinoom cellijnen (HNSCC).

Isolatie en karakterisering van een hoofd en de nek plaveiselcelcarcinoom subpopulatie hebben van Stem Cell Kenmerken

Hier presenteren we een protocol om monsters met een laag aantal cellen voor te bereiden op transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) analyse.

Een alternatieve benadering voor Monstervoorbereidingstesten met een lage aantal cellen voor TEM Analyse

Dit protocol beschrijft het gebruik van centrifugaal elutriation te scheiden van primaire acute lymfatische leukemie cellen in verschillende celcyclus fasen.

Voorbereiding van primaire Acute lymfatische leukemie cellen in verschillende celcyclus fasen door centrifugaal Elutriation

Momenteel is de methode van keuze voor gehaltebepaling eiwit expressie immunefluorescentie kleuring op vaste cellen wanneer morfologische ook noodzakelijk is. Dit protocol gepresenteerd hierin voorziet in een alternatieve methode van immunocytochemie op cel paraffine-ingebedde blokken.

Bepaling van eiwit expressie niveau in gekweekte cellen door immunocytochemie op cel paraffine-ingebedde blokken

Hier presenteren we een geïntegreerde workflow om fenotypische en moleculaire kenmerken te identificeren die circulerende tumorcellen (CTCs) karakteriseren. Wij combineren levende immunokleuring en robotachtige micromanipulatie van enige en geclusterde CTCs met enige cel-gebaseerde technieken voor stroomafwaartse analyse en beoordeling van metastasen-zaait capaciteit.

Micromanipulatie van circulerende tumor cellen voor downstream moleculaire analyse en gemetastaseerde potentiële beoordeling

Dit fractioneringsprotocol stelt onderzoekers in staat om cytoplasmatische, nucleaire, mitochondriale en membraaneiwitten uit zoogdiercellen te isoleren. De laatste twee subcellulaire fracties worden verder gezuiverd via isopycnic dichtheidsgradiënt.

Celfractionering van U937-cellen door isopycnic density gradient purification

Het protocol biedt een betrouwbare en geoptimaliseerde benadering voor de isolatie van kernen uit solide tumormonsters voor multioomsequencing met behulp van het 10x Genomics-platform, inclusief aanbevelingen voor weefseldissociatieomstandigheden, cryopreservatie van eencellige suspensies en beoordeling van geïsoleerde kernen.

Geoptimaliseerde kernisolatie van verse en diepgevroren solide tumormonsters voor multioomsequencing

Leer Shidham's methode voor het bereiden van celblokken uit cytologiepreparaten met individueel verspreide cellen met behulp van een AV-marker. Deze techniek verbetert de nauwkeurigheid van immuunprofielen en speciale kleuringen.

Cell Block Bereiden uit Cytologie Model met overwegend Individueel verspreide cellen

Meer video's verkennen