Name: Het visualiseren van de Beating Heart in Drosophila /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-28T21:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Leer technieken voor het visualiseren van het kloppende hart in larven en volwassen Drosophila. Deze methoden omvatten dissectie en immobilisatie met histo acral lijm voor cardiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

KO wordt ondersteund door een subsidie ​​van de American Heart Association.

Voordat u begint Volwassen harten <ol><li> Vers voor te bereiden kunstmatige hemolymfe (AH) oplossing met 108mm Na +, 5mM K +, 2 mM Ca 2 +, 8mm MgCl2, 1 mM NaH 2 PO 4, 4mm NaHCO 3, 10mm sucrose, 5mM trehalose, 5mM HEPES (pH 7,1, alle reagentia van de Sigma Chemicals). De sucrose en trehalose moeten worden toegevoegd aan de AH uit de gekoelde voorraad oplossingen alleen maar voorafgaand aan het gebruik om bacteriële besmetting te voorkomen. </li><li> Breng AH tot kamertemperatuur en zuurstof de oplossing door de lucht-borrelen gedurende minstens 15 minuten. </li><li> Trek een aantal fijne haarvaten (bijv. glazen capillairen, 100ul, VWR) die nodig zijn voor het verwijderen van vet. </li></ol> Larvale harten <ol><li> Sylgard-gecoate dekglaasjes: met behulp van een tandenstoker, transfer ongeveer 50-70μl van Sylgard oplossing op een 22x22mm dekglaasje aan. Laat de Sylgard uitharden bij 65 ° C gedurende de nacht. </li><li> Bereid de Broadie en Bate&#39;s buffer (135mm NaCl, KCl 5mM, 4mm MgCl 2, 2 mM CaCl2, 5mM TES, 36mm Sucrose;. PH 7,15 Zie Broadie en Bate, 1993). </li><li> Bereid de instrumenten die nodig zijn om de histoacryl lijm toe te passen. Trek eerst een aantal fijne haarvaten (bijv. Science Products GB100T8P). Sluit een 1,5 ml pipet tip met een kleine plastic buis (Tygon, 1 / 32 &quot;) door het inbrengen van de kleinere uiteinde in de buis. Plaats een capillair met een brede opening naar de andere kant. Laad de capillair met Histoacryl lijm door dompelen van de capillaire in een druppel lijm en zachte zuigkracht in de plastic tip. Bij het werken met de lijm moet men een tweede glazen capillaire bij de hand om overtollige lijm te verwijderen van de punt van de lijm capillair. De lijm is vloeibaar totdat het in contact komt met de gebufferde zoutoplossing waar het zal verharden binnen een paar seconden. Het blijft echter meestal plastic lang genoeg om te worden verwijderd uit de lijm capillaire tip of om, terwijl de toepassing ervan op het monster. </li></ol> Semi-intacte Drosophila Hart van de volwassen vlieg <ol><li> Volwassen Drosophila vliegen zijn verdoofd met Fly Nap (Carolina Biological Supply Co) voor 2-5 minuten. Zorg moet worden genomen niet om de vliegen te verlaten in de Fly Nap voor langere belichtingen. Korte termijn blootstelling aan koude kan ook worden gebruikt om vliegen verdoven, maar CO 2 wordt niet aanbevolen omdat het een langer aanhoudend effect op de hartfrequentie en ritmiek. </li><li> Verdoofd vliegen zijn geplaatst, rug naar beneden, in een petrischaal gecoat met een dun laagje vaseline. De hydrofobe cuticula in de vleugels en het lichaam omkeerbaar &quot;kleven&quot; aan de gelei, maar de vlieg kan verplaatst worden indien nodig. Dit wordt vooral belangrijk tijdens de volgende manipulaties. </li><li> Een eerste snede wordt gemaakt met behulp van een gebogen paar van de lente schaar (Roboz # 5611). De schaar bladen zijn geplaatst onder de benen en schuin naar beneden richting de dorsale oppervlak van de thorax de buurt van de nek. Het hoofd, ventrale zenuw koord, en de benen worden verwijderd met een enkele cut. Het preparaat wordt vervolgens ondergedompeld in een zuurstofrijk, kunstmatige hemolymfe (AH) oplossing. </li><li> Met behulp van de lente een schaar de achterste punt van het achterlijf (bestaande uit de buik segmenten 7 en 8) wordt verwijderd met een enkele cut. Dit biedt toegang voor het maken van zijdelingse snijdt langs beide kanten van de buik en dient om verbreken de verbinding tussen de achterste darmen en de buik cuticula. De bevrijde klep van ventrale buik cuticula wordt vervolgens verwijderd. </li><li> In stap 3 en 4 van de voorste en achterste aansluitingen van de darm worden doorgesneden, zodat de buikorganen worden nu op hun plaats gehouden alleen door tracheols. De darmen en andere buikorganen kunnen meestal worden verwijderd als een massa met behulp van juwelier pincet (Roboz, # 55) en zachte trekken. Het verwijderen van de inwendige organen onthult het kloppend hart buis nog aan de dorsale cuticula omgeven door vet lichamen. </li><li> Het vet lichamen zijn vrij ondoorzichtig in het licht microscoop daarom is het vaak nodig om een ​​deel van dit vet te verwijderen om het hart buis duidelijk te zien. Dit wordt bereikt door een liposuctie techniek met behulp van fijn getrokken glas haarvaten. Haarvaten zijn gemaakt met behulp van een standaard pipet trekker (bijv. Sutter P-97 pipet Puller) en worden vervolgens ingebracht in plastic buis (Tygon, 1 / 16 &quot;) bevestigd aan een vacuüm bron. Dit systeem wordt gebruikt voor het zuigen overtollige vet van rond het hart buis. Zuigkracht is evenredig met tip diameter zo pipetten met tips die groter zijn dan 40 micron in diameter mogen niet worden gebruikt. Men moet uiterst voorzichtig worden genomen om te voorkomen dat het aanraken van het hart zelf en omdat het achterste gedeelte van het hart is zeer breekbaar dat gebied moet helemaal worden vermeden. </li><li> De volwassen Drosophila hart buis is nu bloot en moet worden geslagen. Indien nodig de cuticula en de bijgevoegde hart kan worden verplaatst door voorzichtig het opheffen van de cuticula uit de vaseline en voorzichtig aanstampen het weer naar beneden, weer het vermijden van elk contact met het hartweefsel. Op tzijn punt de oplossing baden de voorbereiding moet worden vervangen door verse AHL. Deze voorbereiding moet worden toegestaan ​​om equilibreren gedurende 20-30 minuten met zuurstof vóór elke manipulaties. Als het preparaat zal worden gehandhaafd voor langer dan 60 minuten moet worden geperfuseerd met verse AHL. </li></ol> Immobiliseren van Drosophila larven voor optische recording <ol><li> Breng een druppel lijm Histoacryl dicht bij elke hoek van de Sylgard dekglaasjes. Voeg 50μl van B &amp; B buffer om de lijm druppels die zal verharden direct. Vul de ruimte tussen de verlijmde vlekken met B &amp; B - de lijm zal de buffer te houden op de dia. </li><li> Neem een ​​zwervende L3 larve en plaats deze op een stuk nat zijdepapier op ijs gedurende 2 minuten. Dit zal vertragen de beweging. Vervolgens overbrengen van de larve in de buffer en het oriënteren met de dorsale zijde naar boven (dit is de kant van de larve die de denticle riemen mist). Snel toe te passen wat lijm tussen het hoofd regio en de Sylgard. De lijm zal zeer snel uitharden en te voorkomen dat het hoofd van de larve van de bewegende. </li><li> Met behulp van een tang voorzichtig grijpen het dier door de achterste siphonen en voorzichtig uitrekken. Bevestig de larve in deze positie door het aanbrengen van de lijm langs beide zijden van de larve op de achterste helft. Om verdere beweging van de cuticula te verminderen door het lichaam muur spieren, voeg meer lijm op de flanken van het dier. De larve is nu opgelost in deze positie. De dekglaasje kan worden geplaatst in een kleine petrischaal gevuld met AHL of PBS. Hart klopt kan nu worden opgenomen zonder tussenkomst van het lichaam muur bewegingen. </li></ol> Representatieve resultaten: De semi-intacte volwassen Drosophila hart zal ritmisch kloppen voor de uren na dissectie bij het onderhouden in vers, zuurstofrijk AH (zie aanvullende gegevens, Ocorr, et al., 2007).. Een representatief voorbeeld is te zien in Movie 1. Harten van 3 e instar larven en jonge vliegt (1 - 3 weken na Eclosion) in het algemeen vertonen een regelmatige hartslag bij snelheden tussen de 1 - 3 Hz. Vliegen ouder dan 3 weken over het algemeen meer aritmisch, desondanks, deze harten nog steeds in staat om spontaan verslaan urenlang in zuurstofrijk AHL. Hearts bij volwassen vliegen die zijn beschadigd als gevolg van de dissectie procedure Typisch voor gelokaliseerde gebieden van extreme vernauwing die niet in staat zijn om te ontspannen. Heartbeat tarieven langzamer dan 1 Hz worden zelden waargenomen in vliegen jonger dan 3 weken; daarom dergelijke preparaten worden beschouwd als beschadigd en worden verwijderd. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1425/MOVIE1.avi">Klik hier om een film te downloaden.</a> - Een een week oude volwassen wild-type fly (w 1118 laboratorium-stam) met de buik bloot hart buis (anterior aan de linkerkant). Let op regelmatige, ritmische samentrekkingen. Opaque regio&#39;s in de rechter bovenhoek zijn de resterende buikvet organen; ronde cellen aan weerszijden van het hart zijn pericardiale cellen.

<ol><li>Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Metzger, J., Giles, W., Posakony, J. W., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 3943-3948 (2007).</li>
<li>Broadie, K. S., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+embryonic+neuromuscular+synapse+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of the embryonic neuromuscular synapse of Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 13, 144-166 (1993).</li>
</ol>

Het Drosophila model heeft bewezen een krachtig instrument dat genetische is gebruikt om een ​​verscheidenheid aan wetenschappelijke vragen, variërend van embryonale ontwikkeling tot leren en geheugen adres. Onlangs is dit veelzijdige model organisme is gebruikt om de genetica van de hartfunctie te onderzoeken in de vliegen. Een aantal pogingen om het hart fysiologie kwantificeren bij volwassen Drosophila hebben vertrouwd op de waarnemingen in intacte vliegt door de buik cuticula. De meeste van deze benaderingen hebben ...

<table><tbody><tr><td>Micro-dissectieschaar met veer (gebogen)</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5611</td><td>Geschikt voor grove sneden (Stap 3)</td></tr><tr><td>Micro-dissectieschaar met veer (recht)</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5620</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>Glazen capillairen, 100ul</td><td>VWR international</td><td>53432-921</td><td></td></tr><tr><td>Glazen capillairen, fijn</td><td>Science Products</td><td>GB100T8P</td><td></td></tr><tr><td>Pipetentrekkers</td><td>Sutter Equipment</td><td>P-97</td><td>Zowel horizontale als verticale pipetentrekkers zijn bruikbaar</td></tr><tr><td>Plastic slang</td><td>Tygon</td><td>1/16&amp;#8221; binnendiameter</td><td>voor 100&amp;#x03BC;l capillairen</td></tr><tr><td>Plastic slang</td><td>Tygon</td><td>1/32&amp;#8221; binnendiameter</td><td>voor kleine capillairen</td></tr><tr><td>Histoacryl&amp;#174; weefsellijm</td><td>B. Braun Medical</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

het visualiseren van de beating heart in drosophila</em

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Hart heeft onlangs ontpopt als een goed model voor onderzoek van de genetische, cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen functie in myogene harten. Een belangrijke stap bij het onderzoeken van de hartfunctie in de vlieg is het vinden van een manier om het hart op een manier die haar myogene functie behouden, terwijl nog het toestaan ​​het kloppend hart orgaan te worden geobserveerd en geregistreerd toegang. Twee verschillende methoden voor het observeren en vastleggen van het kloppende hart, zowel in larve en volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Worden hier beschreven. Onze semi-intact voorbereiding met behulp van volwassen vliegen kunt u heldere visualisatie van de buik hart zonder tussenkomst van de gepigmenteerde nagelriem en de bovenliggende vet lichamen. Voor het opnemen van larvale hart klopt is het noodzakelijk om de larve, die het lichaam muur bewegingen waardoor het hart bewegingen die niet zijn gekoppeld aan een myocard contracties minimaliseert immobiliseren. Onze methodes produceren stabiele volwassen en larvale hart voorbereidingen die kan voor uren verslaan met snelheden van 1-3 Hz.

Techniek die nodig is voor het visualiseren van het kloppend hart in de larven en volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Worden gepresenteerd. Elke levensfase vraagt ​​om een ​​andere methodologie.

Het visualiseren van de Beating Heart in Drosophila</em

Het hart van de Drosophila is recentelijk naar voren gekomen als een goed modelsysteem voor het onderzoeken van de genetische, cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de functie in ...

Hier worden twee technieken gepresenteerd voor de visualisatie van een kloppend hart in Drosophila voor de dissectie van het volwassen hart. Eerst worden de kop en thorax verwijderd door een enkele snede langs de aangegeven lijn. Vervolgens worden de genitaliën verwijderd en wordt de abdominale lichaamsholte geopend met een pincet; de darm en, in het geval van een vrouwelijke vlieg, de eierstokken worden verwijderd.Het abdominale vetlichaam in abdominale segmenten drie en vier wordt zorgvuldig weggezogen om het volwassen hart bloot te leggen voor de immobilisatie van het larvale hart. Een enkele larve die in een bufferoplossing is geplaatst, wordt gefixeerd door eerst histo acral-lijm aan te brengen rond de kopregio van de larve. De larve wordt voorzichtig uitgerekt en er wordt meer lijm aangebracht op het posterieure uiteinde, en vervolgens op de flanken van de lichaamswand van de larve.Hoi, ik ben GI Fler. Hoi, ik ben Karen er. We zijn beiden leden van het programma Ontwikkeling en Veroudering aan het Burnham Institute for Medical Research.Vandaag laten we u de procedures zien die we hebben ontwikkeld om het kloppende hart van larvale en volwassen drosophila te visualiseren. We gebruiken beide preparaten om hartslagparameters bij de fruitvlieg, Drosophila, te visualiseren, te onderzoeken en te kwantificeren. Voordat we beginnen, bereiden we eerst een kunstmatige hemolymfe-oplossing voor.Deze oplossing bevat sucrose, helo, die vlak voor gebruik vanuit gekoelde voorraadoplossingen aan de kunstmatige hemolymfe moet worden toegevoegd. Om bacteriële contaminatie te voorkomen, moet de kunstmatige hemolymfe op kamertemperatuur worden gebracht en de oplossing gedurende ten minste 15 minuten worden gezatureerd met zuurstof door middel van luchtbellen. Trek vervolgens met een standaard pipette-puller enkele fijne capillairen, die nodig zullen zijn voor het verwijderen van vetlichamen in de vlieg.Zodra alles is voorbereid, moeten de volwassen vliegen worden genarceerd. Dit kan door ze gedurende twee tot vijf minuten kort bloot te stellen aan fly nap, maar zorg ervoor dat de vliegen niet langer dan vijf minuten in de fly nap blijven. Kortstondige blootstelling aan kou kan ook worden gebruikt om de vliegen te narcotiseren, maar koolstofdioxide wordt niet aanbevolen vanwege de langdurige effecten op de hartslag en mobiliteit.Vervolgens worden de genarceerde vliegen met de rugzijde naar beneden in een Petrischaal geplaatst die is bekleed met een dunne laag vaseline. De hydrofobe cuticula van de vleugels en het lichaam zou reversibel aan de vaseline moeten hechten, maar de vlieg kan indien nodig opnieuw worden gepositioneerd. Er wordt een eerste incisie gemaakt met een gebogen veerschaartje.Dit gebeurt door de schaarbaden onder de poten van de vlieg te plaatsen en deze schuin naar beneden te richten naar het dorsale oppervlak nabij de nek. Zodra er is geknipt, worden de kop, het ventrale zenuwstreng en de poten met één enkele snede verwijderd. De preparaat wordt vervolgens met een veerschaar ondergedompeld in de gezuurstofte vloeistof van kunstmatige hemolymfe.De posterieure punt van het abdomen, bestaande uit abdominale segment zeven en acht, wordt met één snede verwijderd. Dit biedt toegang voor het maken van laterale sneden langs beide randen van het abdomen en dient om de verbinding tussen het posterieure darmkanaal en de abdominale cuticula door te snijden. Steek de schaarbladen in de kleine opening in de punt van het abdomen en snijd de cuticula lateraal door.Hierdoor komt één rand van de ventrale cuticula vrij. Pak de flap met een pincet vast en maak een soortgelijke snede langs de tegenoverliggende laterale rand van het abdomen. De vrijgekomen flap van de ventrale abdominale cuticula kan nu worden verwijderd.De darmen en andere abdominale organen kunnen gewoonlijk als één geheel worden verwijderd met behulp van pincetten en voorzichtig trekken. Het verwijderen van de interne organen legt de kloppende hartbuis bloot, die nog via kleine spiervezels aan de dorsale cuticula is bevestigd en omgeven is door vetlichamen. De getrokken capillairen worden ingebracht in plastic buisjes van 1/16 inch die zijn aangesloten op een vacuümpomp.De zuigkracht is proportioneel aan de diameter van de tip, waardoor pipetten met tips met een diameter groter dan 40 microns niet gebruikt mogen worden zodra deze zijn ingesteld. Dit zuigsysteem wordt gebruikt om overtollig vet rondom de hartbuis af te zuigen. Het kan ook worden gebruikt om luchtbellen die zich rond de cuticula ophopen en eventueel debris te verwijderen.Er moet uiterste zorg worden betracht om contact met het hart zelf te vermijden, en aangezien het posterieure deel van het hart zeer fragiel is, moet deze regio tevens worden vermeden. De hartbuis van de volwassen drosophila is nu blootgelegd en zou, indien nodig, moeten kloppen. De cuticula en het vastgehechte hart kunnen worden herpositioneerd door de cuticula voorzichtig uit de vaseline te tillen en deze vervolgens zorgvuldig weer terug te drukken.Vermijd elk contact met het hartweefsel. Op dit punt moet de oplossing waarin het preparaat ligt, worden vervangen door verse kunstmatige hemolymfe. Dit preparaat moet gedurende 20 tot 30 minuten onder oxygenatie equilibreren voordat er manipulaties worden uitgevoerd.Als de preparatie langer dan 60 minuten in stand moet worden gehouden, moet deze opnieuw worden geperfuseerd met verse kunsthemolymfe. Deze preparatie is nu klaar voor gebruik bij optische registratie en kan ook worden gebruikt voor elektrofysiologische registratie of voor histologische manipulaties. Voor het visualiseren van het kloppende hart in de larven is een andere techniek vereist.Bereid eerst de dekglasjes voor op de dag vóór de procedure. Dit gebeurt door met een tandenstoker ongeveer 50 tot 70 µL Sylgard-oplossing op een dekglasje van 22 bij 22 millimeter over te brengen. Laat de Sylgard gedurende de nacht uitharden bij 65 °C.Maak vervolgens de Brody- en Bates-buffer; zodra deze bereid is, kunnen aliquoten worden bewaard bij -20 °C en ontdooid worden wanneer nodig. Bereid tot slot de benodigdheden voor het aanbrengen van de histo-acryllijm. Trek eerst enkele fijne capillairen.Verbind vervolgens een pipetpunt van 1,5 milliliter met een klein plastic slangetje met een diameter van ongeveer 1/32 inch. Plaats een capillair door het smalle uiteinde in het slangetje te steken, waarbij de brede opening aan het andere uiteinde is gericht. Zodra dit is opgezet, wordt het capillair gevuld met histo glue door het capillair in een druppel lijm te dopen en deze voorzichtig op te zuigen in de plastic punt.Bij het werken met de lijm dient men een tweede glazen capillair bij de hand te hebben om overtollige lijm van de punt van het lijmcapillair te verwijderen. De lijm is vloeibaar totdat deze in contact komt met gebufferde zoutoplossing, waarna deze binnen enkele seconden uithardt. Meestal blijft de lijm echter lang genoeg plastisch om deze van de punt van het lijmcapillair te kunnen verwijderen of aan te brengen op het specimen.Om nu te beginnen met de immobilisatie van de larven, plaatst u een druppel histo acral-lijm dicht bij elke hoek van het syl guard-dekglas. Voeg 50 µL B&amp;B-buffer toe aan de lijmdruppels, die onmiddellijk zullen uitharden, en vul de ruimte tussen de gelijmde plekken met B&amp;B-buffer. De lijm houdt de buffer op het objectglas vast.Neem een dwalende L3-larve en plaats deze gedurende twee minuten op een stukje natten weefselpapier op ijs. Dit zal de beweging vertragen. Breng de larve vervolgens over naar de buffer en positioneer deze met de dorsale zijde naar boven.Dit is de zijde van de larven waar de identieke banden ontbreken. Breng snel wat lijm aan tussen de kopregio en de drempelbescherming. De lijm zal zeer snel uitharden en voorkomen dat de kop van de larven beweegt.Pak het dier voorzichtig met een pincet vast bij de posterieure sparkles en rek het zachtjes uit. Fixeer de larven in deze positie door de lijm langs beide zijden van de larven aan de posterieure helft aan te brengen. Voeg meer lijm toe aan de flanken van het dier om verdere beweging van de cuticula door de spieren van de lichaamswand te verminderen.De larve is nu in deze positie gefixeerd. Het dekglas kan in een kleine Petrischaal gevuld met kunstmatige hemolymfe of PBS worden geplaatst, waarna hartslagen kunnen worden geregistreerd zonder interferentie van bewegingen van de lichaamswand. Het semi-intacte hart van de volwassen Drosophila zal na dissectie urenlang ritmisch kloppen wanneer het wordt onderhouden in verse, zuurstofrijke kunstmatige hemolymfe.Een representatief voorbeeld is hier en in aanvullende video één te zien van harten van larven in het derde stadium; jonge vliegen van één tot drie weken oud vertonen over het algemeen een regelmatige hartslag met frequenties tussen 1 en 3 Hz, terwijl vliegen ouder dan drie weken over het algemeen meer aritmisch zijn. Desondanks zijn deze harten nog steeds in staat om urenlang spontaan te kloppen in zuurstofrijke kunstmatige hemolymfe. Harten van volwassen vliegen die beschadigd zijn geraakt als gevolg van de dissectieprocedure vertonen doorgaans gelokaliseerde regio's van extreme constrictie die niet kunnen ontspannen en vaak ongecontroleerd kloppen. Hartslagen trager dan 1 Hz worden zelden waargenomen bij vliegen jonger dan drie weken oud.Bijgevolg worden dergelijke preparaten als beschadigd beschouwd en weggegooid. We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u harten van fruitvliegen in het larvale stadium en van volwassen fruitvliegen kunt prepareren voor optische beeldvorming. Onthoud dat u bij het maken van het semi-intacte preparaat het hart zelf nooit mag aanraken.Dat is alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

visualizing-the-beating-heart-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschrijven we een basisprotocol voor TL-etikettering van de verschillende elementen van het hart buizen van larven en...

TL-etikettering van Drosophila Hart Structuren

Hebben we een semi-automatische Optical Heartbeat Analysis-methode (Soha) voor het analyseren van snelle optische opnamen...

Semi-automatische Optical Heartbeat Analyse van kleine hart

We presenten verschillende manieren om de hartfunctie in de larve van Drosophila te monitoren voor het beantwoorden van vragen over de functie van gap junctions, ionkanaalmutaties, modulatie van pacemakeractiviteit en farmacologische studies.

Monitoring Heart Functie in larvale Drosophila melanogaster Voor Fysiologische Studies

We beschrijven een proces voor fixatie, inbedden, snijden, en de beeldvorming van laat...

De voorbereiding van embryo&#39;s voor Elektronenmicroscopie van de Drosophila Embryonale hart buis

Drosophila hemocytes verspreiden over het geheel van de zich ontwikkelende embryo. Dit protocol laat zien hoe te monteren en het imago van deze migraties met behulp van embryo's met fluorescent gelabelde hemocytes.

Live-beeldvorming van Drosophila melanogaster Embryonale Hemocyte Migraties

Beschrijven we de procedure voor te bereiden...

Visualisatie van de embryonale zenuwstelsel in zijn geheel-mount Drosophila Embryo&#39;s

Deze video beschrijft het volwassen hart van de vlieg, of anders het Drosophila dorsale vat genoemd. Het aanbevolen protocol demonstreert een dissectieprocedure voor levende hartpreparaten.

Voorbereiding van Drosophila Heart: een techniek om hartfysiologie in de volwassen vlieg te bestuderen

Hier worden de experimentele protocollen beschreven voor het voorbereiden van Drosophila in verschillende ontwikkelingsstadia en het uitvoeren van longitudinale optische beeldvorming van Drosophila hartslagen met behulp van een aangepast systeem voor optische coherentiemicroscopie (OCM). De morfologische en dynamische veranderingen in het hart kunnen kwantitatief worden gekenmerkt door het analyseren van de structurele en functionele parameters van het hart uit OCM-beelden.

Drosophila Voorbereiding en longitudinale beeldvorming van het hart functie in vivo met behulp van Optical Coherence Microscopy (OCM)

We beschrijven geoptimaliseerde hulpmiddelen om het hart van de zebravis in vivo te bestuderen met fluorescentiemicroscopie van lichtplaten. In het bijzonder stellen we heldere cardiale transgene lijnen voor en presenteren we nieuwe zachte inbeddings- en immobilisatietechnieken die ontwikkelings- en hartafwijkingen voorkomen. Een mogelijke data-acquisitie- en analysepijplijn aangepast aan cardiale beeldvorming wordt ook verstrekt.

Light Sheet Microscopie van snelle hartdynamica in zebravisembryo's

Het huidige protocol beschrijft de generatie van Drosophila melanogaster die eNpHR2.0 of ReaChR-opsinen in het hart tot expressie brengt voor OCT-beeldvorming en optogenetische hartpacing. Gedetailleerde instructies voor Drosophila OCT beeldvorming en hartslagmodulatie, inclusief de simulatie van herstelbare hartstilstand, bradycardie en tachycardie bij levende dieren in verschillende ontwikkelingsstadia, worden gerapporteerd.

Ontwikkeling van Drosophila melanogaster modellen voor beeldvorming en optogenetische controle van de hartfunctie

Het Drosophila-protocol voor hartdoorsnede en fluorescentiebeeldvorming vereenvoudigt het bestuderen van de hartstructuur en pathologieën. Deze aanpak omvat eenvoudige secties, kleuringen en beeldvorming, waarbij de technische expertise die nodig is voor traditionele dissectie wordt omzeild. Het verbetert de toegankelijkheid, waardoor Drosophila een breder bruikbaar model wordt voor hartgerelateerd onderzoek binnen de bredere wetenschappelijke gemeenschap.

Nieuwe en efficiënte methode voor Drosophila-hartfluorescentiekleuring met cryosectie

Leer technieken voor het visualiseren van het kloppende hart in larven en volwassen Drosophila. Deze methoden omvatten dissectie en immobilisatie met histo acral lijm voor cardiologisch onderzoek.

Het visualiseren van de Beating Heart in Drosophila

Meer video's verkennen