Name: Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Leer een eenvoudige methode voor het isoleren en injecteren van Wolbachia-bacteriën in Drosophila-vliegen. Dit protocol maakt gebruik van een filterapparaat en helpt onderzoekers bij het bestuderen van infectiedynamiek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben niets te melden.

wolbachia bacteriële infectie in drosophila

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila

Mijn naam is Voia Friedman. Ik ben associate researcher aan de Princeton University. Vandaag ga ik u vertellen over een aantal protocollen die ik heb ontwikkeld om hemolymfe te isoleren uit geïnfecteerde vliegen en deze vervolgens in niet-geïnfecteerde vliegen te injecteren.In essentie is dit een zeer eenvoudig protocol om hem uitsluitend voor basisdoeleinden te isoleren. Hiervoor gebruikt u dit apparaat van Mepo, dat een filter bevat dat bovenop een Eppendorf-buisje wordt geplaatst. U begint met ongeveer honderd vliegen. U narcotiseert de vliegen, plaatst ze in het filterapparaat — u kunt hiervoor gewoon een trechter gebruiken om ze gemakkelijk in dit apparaat te krijgen — en wast ze vervolgens met 70% ethanol.U verwijdert simpelweg de vloeistof, u kunt de ethanol weggooien, en na drie keer is uw laatste wasbeurt met moleculair water, omdat u geen bacteriën wilt hebben met sporen van ethanol. Vervolgens gaat u naar een nieuwe centrifugebuis en centrifugeert u dit twee minuten in een microcentrifuge. Daarna kunt u dit injecteren. Voed alleen de onbehandelde vliegen.Gebruik in feite dubbelzijdige plakband; deze tapes hebben gewoonlijk twee zijden, waarbij de ene zijde een beschermlaag heeft en de andere niet. Laat de zijde met de beschermlaag naar boven wijzen, aangezien dit de zijde is waarop u de vliegen gaat plakken. In essentie zal, indien u dit object bovenop het gasapparaat plaatst, de gasstroom worden onderbroken en zullen de vliegen ontwaken wanneer ze zich bovenop het object bevinden.U kunt dus eenvoudig de stroom sturen door met tape een kleine kap of kamer te maken. Vervolgens leidt u het gas over de vliegen. Plaats daarna deze lamp hier met de tape, en dan heeft u uw vliegen.Plak de vliegen op de bovenkant van de tape, allemaal in dezelfde oriëntatie, en richt hun kop in de richting van waaruit u de naald zult inbrengen. Zo kunt u gemakkelijk over de vleugel gaan; aangezien het vliegen zijn, wilt u voorkomen dat ze wegvliegen. Mocht er tijdens de procedure een vlieg ontwaken, dan wilt u niet dat deze ontsnapt.Zorg er dus voor dat u een kleine tik en druk uitoefent op de vleugels van de vlieg bij het achterlijf. Het is geen probleem als de vleugels beschadigd raken. Wanneer u de vliegen na de injectie verwijdert, zullen ze waarschijnlijk sowieso hun vleugels verliezen, maar ze zullen overleven.Dat kan nuttig zijn, omdat je de vliegen zo niet verliest. Daarom brengt hij minerale olie aan op de micrometer aan de achterzijde van de naald, vervolgens de naaldinjectiepool, en daarna kun je de druk gewoon aanpassen om het materiaal naar de punt van de naald te brengen. Ik injecteerde ergens tussen de 10 en 15 nanoliters, maar het belangrijkste is dat ik consistent blijf. Oké, een belangrijk detail bij dit experiment is dat, zodra de vlieg wordt geïnjecteerd, zoals u zag, de naald zo ver mogelijk door het bovenste gedeelte van het abdomen moet worden gebracht.Omdat er hier, in essentie wanneer de naald binnendringt, een grotere ruimte is om op en neer te bewegen. En in principe is het, wanneer het dichter bij de cuticle ligt, minder waarschijnlijk dat vitale organen van de vlieg worden gepenetreerd. Het is zeer onwaarschijnlijk dat u bijvoorbeeld een gat in de darm prikt, wat de vlieg waarop u de chirurgische ingreep uitvoert zou doden.Mijn naam is Voia Friedman. Ik ben associate researcher aan de Princeton University in het laboratorium van Eric Hels. Vandaag wil ik u vertellen over dit protocol dat u zojuist in de demonstratie heeft gezien.Dit protocol is uitgevoerd omdat we wilden aantonen dat UBA in staat is om weefsels te passeren. UBA is een van de meest succesvolle intracellulaire parasieten ter wereld. Het infecteert 20 tot 70% van de insecten en vele andere organismen.Daarnaast is het zeer belangrijk in termen van menselijke ziekten, omdat het ook nematoden infecteert die ziekten overbrengen zoals rivierblindheid of onchocerciasis. En CCA is onze obligate endosymbiont in deze wormen. Er is een grote, zeer grote belangstelling voor het gebruik van CCA ook als middel om parasitaire ziekten te beheersen die worden overgebracht door muggen, zoals malaria en dengue.Dit protocol is in basis ontwikkeld om aan te tonen dat CCA, eenmaal aanwezig in de abdominale holte van een vlieg, door weefsels heen kan trekken om de kiemcellen te bereiken. Wat u hier ziet is de morfologie van de Drosophila-ovarium; zodra het in de hemolymfe aanwezig is, kan het door het peritoneale vlies trekken dat zich rond het ovarium bevindt.Vervolgens passeren ze een spierlaag. Een van de eerste plaatsen waar ze de eierstok binnendringen, is de somatische stamcelomgeving. Van daaruit kunnen ze de kiemlijn bereiken.Deze bacterie wordt op dezelfde manier overgedragen als mitochondriën, namelijk via de moeder, via het cytoplasma dat in de eicel aanwezig is. Daarom moeten ze noodzakelijkerwijs aanwezig zijn in de kiemlijn. Dat is de reden waarom dit protocol is ontwikkeld.En dit protocol kan zeer nuttig zijn, aangezien de traditionele manier waarop men zou proberen wbaa te transinfecteren, door wbaa te nemen en een nieuwe insectensoort te introduceren, normaal gesproken via micro-injecties in het embryo zou gebeuren. Die methoden zijn echter veel gecompliceerder.En in feite maken we hier simpelweg gebruik van de biologie van het organisme, aangezien ze in staat zijn om weefsels te doorkruisen en naar de stamcelweefsels te trekken, waardoor ze door kunnen gaan naar de kiemlijn. Hierdoor is het eenvoudiger om UBA te verkrijgen van bepaalde insectensoorten die geïnfecteerd zijn, waarna deze kunnen worden overgedragen op niet-geïnfecteerde soorten. Waarschijnlijk denk ik dat het de injectie zelf is.In principe moet u er zorg voor dragen dat de vlieg zo goed mogelijk wordt gefixeerd. We gebruiken dubbelzijdige plakband en de naald moet zo dicht mogelijk bij, en zo parallel mogelijk aan de vlieg worden ingevoerd, om te voorkomen dat u te diep gaat. Zo is de kans kleiner dat de vlieg na de chirurgische ingreep sterft.

wolbachia-bacterial-infection-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Sluipwesp (parasitaire) wespen vormen een belangrijke klasse van natuurlijke vijanden van veel insecten...

Een inleiding tot sluipwespen van<em&gt; Drosophila</em&gt; En de Antiparasite immuunrespons

Source: Siva-Jothy, J. A., et al. Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates the oral infection of Drosophila melanogaster with pathogenic bacteria. It includes the preparation of infection vials and the transfer of starved flies to enable bacterial ingestion. The procedure captures gut colonization, followed by surface sterilization and homogenization of flies. Finally, it shows quantification of internal bacterial load through...

Oral Infection of Drosophila melanogaster with Pathogenic Bacteria

Source: Hiroyasu, A., D et. al., Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure for establishing a bacterial infection in Drosophila larvae by placing them into a bacterial droplet and pricking them with a tungsten needle. The larvae are then incubated on a grooved, nutrient-rich agar plate to study host-pathogen interactions.

Establishing Bacterial Infection in Drosophila Larvae

Drosophila melanogaster is een uitstekend modelorganisme voor het bestuderen van aangeboren immuunsystemen en de fysiologische gevolgen van infectie en ziekte. Dit protocol beschrijft hoe robuuste en kwantitatief herhaalbare bacteriële infecties aan D. melanogaster kunnen worden toegediend, en hoe vervolgens de ernst van de infectie kan worden gemeten en de immuunrespons van de gastheer kan worden gekwantificeerd.

Systemische bacteriële infectie en afweer Phenotypes in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Een methode voor het kweken van Drosophila melanogaster onder axenic en gnotobiotische voorwaarden wordt gepresenteerd. Fly embryo's worden dechorionated in natriumhypochloriet, aseptisch in steriele voeding en grootgebracht in gesloten containers. Inenten van voeding en embryo's met bacteriën leidt tot gnotobiotische verenigingen, en bacteriële aanwezigheid wordt bevestigd door plating whole-body Drosophila homogenaten.

Het grootbrengen de fruitvlieg<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Onder Axenische en gnotobiotische voorwaarden

Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia worden vrijgegeven in natuurlijke populaties te onderdrukken van de overdracht van arboviruses. We worden methoden beschreven aan achterzijde Ae. aegypti met Wolbachia infecties in het laboratorium voor experimenten en veld release, voorzorgsmaatregelen nemen om laboratorium aanpassing en selectie te minimaliseren.

Behoud van Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia

Dit protocol wordt beschreven methoden om mondeling bloot en de fruitvlieg Drosophila melanogaster met bacteriële pathogenen infecteren, en voor het meten van het aantal infectieuze bacteriën schuur na infectie van de darm. Verder beschrijven we het effect van immuun mutanten op vliegen overleving na mondelinge bacteriële infectie.

Mondelinge bacteriële infectie en Shedding bij Drosophila melanogaster

Dit protocol wordt beschreven hoe om virale infectie in vivo bij Drosophila melanogaster met behulp van de methode van de nano-injectie en de basistechnieken voor het analyseren van virus-gastheer interactie.

Oprichting van virale infectie en analyse van Host-Virus interactie bij Drosophila Melanogaster

Drosophila melanogaster volwassen vliegen zijn uitgebreid gebruikt als modelorganismen om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan antimicrobiële aangeboren immuunresponsen van de gastheer en microbiële infectiestrategieën. Om het D. melanogaster larvestadium als aanvullend of alternatief modelsysteem te promoten, wordt een larvale injectietechniek beschreven.

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Vier methoden werden gebruikt om intracellulaire Wolbachia te detecteren, die elkaar aanvulden en de detectienauwkeurigheid van Wolbachia-infectie van Aedes albopictus-afgeleide Aa23 en Aa23-T genezen van inheemse Wolbachia-infectie met behulp van antibiotica verbeterden.

Detectie van Wolbachia Stam wAlbB in Aedes albopictus cellijnen

Cellijnen zijn nuttig bij studies naar intracellulaire organismen die niet buiten hun gastheercellen kunnen worden gekweekt. Hoewel met Wolbachia geïnfecteerde lijnen veel ontdekkingen mogelijk hebben gemaakt, kan de heterogeniteit binnen deze lijnen leiden tot variabele experimentele resultaten. We presenteren een protocol voor het genereren van eencellige klonen en continue culturen van met Wolbachia geïnfecteerde JW18-cellen.

Generatie van monoklonale culturen uit met Wolbachia geïnfecteerde Drosophila melanogaster JW18-cellijn

Leer een eenvoudige methode voor het isoleren en injecteren van Wolbachia-bacteriën in Drosophila-vliegen. Dit protocol maakt gebruik van een filterapparaat en helpt onderzoekers bij het bestuderen van infectiedynamiek.

Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila

Meer video's verkennen