Name: Montage, Tuning en gebruik van een Apertureless Near Field Infrared Microscoop voor eiwit Imaging (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-25T03:33:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Leer de assemblage en afstemming van een apertureless near-field infraroodmicroscoop voor eiwitbeeldvorming. Deze methode combineert AFM-topografie met infrarooddetectie om eiwitaggregaten te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij dankbaar erkennen NSF, NSERC, NIH, en ONR.

<ol><li>Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+imaging+of+the+surface+of+self-assembled+polystyrene-b-poly%28methyl+methacrylate%29+diblock+copolymer+films+using+apertureless+near-field+IR+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy.</a> Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).</li>
<li>Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrared-reflection-mode+near-field+microscopy+using+an+apertureless+probe+with+a+resolution+of+lambda%2F600%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600.</a> Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).</li>
<li>Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+visible+and+mid-infrared+scattering-type+near-field+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes.</a> J. Microsc. 210, 311-314 (2003).</li>
<li>Kim, Z. H., Leone, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization-selective+mapping+of+near-field+intensity+and+phase+around+gold+nanoparticles+using+apertureless+near-field+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy.</a> Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).</li>
<li>Bridger, P. M., McGill, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+of+nanometer-scale+optical+property+discrimination+by+use+of+a+near-field+scanning+apertureless+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope.</a> Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).</li>
<li>Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+the+weak+scattered+signal+in+apertureless+near-field+scanning+infrared+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instrum%22%5BJournal%5D)">Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy.</a> Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).</li>
<li>Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apertureless+Scanning+Near-Field+Infrared+Microscopy+of+a+Rough+Polymeric+Surface%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface.</a> Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).</li>
<li>Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facts+and+Artifacts+in+Scanning+Near-Field+Optical+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy.</a> J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).</li>
<li>Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artifact-free+near-field+optical+imaging+by+apertureless+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Phys.+Lett%22%5BJournal%5D)">Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy.</a> Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).</li>
<li>Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+Contrast+Parameters+and+Topographic+Artifacts+in+Near-Field+Infrared+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy.</a> J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).</li>
<li>Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).</li>
<li>Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrared+Spectroscopic+Mapping+of+Single+Nanoparticles+and+Viruses+at+Nanoscale+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution.</a> Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).</li>
<li>Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nano-chemical+mapping+performed+by+an+AFM-based+%28%22AFMIR%22%29+acousto-optic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based ("AFMIR") acousto-optic technique.</a> Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).</li>
<li>Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulating+the+Amyloid-%CE%B2+Aggregation+Pathway+with+Chemical+Chaperones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones.</a> J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).</li>
<li>Meadows, P. Y., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+Microscopy+Studies+of+Fibronectin+Adsorption+and+Subsequent+Cellular+Adhesion+to+Substrates+with+Well-Defined+Surface+Chemistries%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries.</a> Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).</li>
</ol>

montage, tuning en gebruik van een apertureless near field infrared microscoop voor eiwit imaging

Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging

Dit document heeft tot doel de lezer te onderwijzen in de assemblage en de werking van een infrarood-nabije-veld microscoop voor beeldvorming verder dan de diffractielimiet. De apertureless nabije-veld microscoop is een lichtverstrooiing-type instrument dat infrarood spectra geeft aan circa 20 nm resolutie. Een complete lijst van componenten en een stap-voor-stap protocol voor het gebruik is voorzien. Voorkomende fouten in de montage en tuning instrument worden besproken. Een representatieve dataset die de secundaire structuur van een amyloïde fibrillen shows gepresenteerd.

De montage van een nearfield infrarood microscoop voor beeldvorming proteïneaggregaten wordt beschreven.

Montage, Tuning en gebruik van een Apertureless Near Field Infrared Microscoop voor eiwit Imaging

Dit artikel heeft tot doel de lezer te instrueren in de assemblage en bediening van een infrarood near-field microscoop voor beeldvorming voorbij de diffractielimiet. De ...

De initiële assemblage van de optische opstelling wordt voltooid door de multi-mode AFM en optische microscoop in te stellen. De uitlijning van de onzichtbare infraroodstraal wordt vergemakkelijkt door eerst uit te lijnen met een zichtbare rode heliumneonlaser. De doorgetrokken lijn overlapt de infraroodstraal, de stippellijn, met als doel het laserlicht te observeren dat de apex van de cantilever-tip en de infrarooddetector raakt.De uiteindelijke uitlijning van de infraroodstraal wordt uitgevoerd door de positie van de optische microscoop en de spiegels aan te passen, zodat een 1F-signaal met de juiste vorm wordt verkregen wanneer het gewenste nearfield-signaal is bereikt. Gelijktijdig worden FM-topografie en nearfield-beelden verzameld met behulp van de nanoscope-software. Hallo, ik ben professor Gilbert Walker van de afdeling scheikunde aan de Universiteit van Toronto.Hallo, ik ben Melissa Paulite, ook van het laboratorium van Gilbert Walker. Vandaag laten we u de procedure zien voor de initiële assemblage en uitlijning van de aperture-lijst, nabijveld infrarood scanning microscoop. We gebruiken deze procedure in ons laboratorium om proteïneaggregaten te bestuderen.Laten we beginnen. Voordat we de assemblage en afstelling van het beeldvormingssysteem beschrijven, bekijken we eerst een kort overzicht van het complete systeem. De onderdelen van het beeldvormingssysteem die we in deze video zullen beschrijven zijn de optische tafel, de basis van de multimode atoomkrachtmicroscoop, of AFM, de scanner van de multimode AFM, het verhoogde optische breadboard met geleidespiegels en de optische buis met iris en center.Blokkeer de optische kubus met de gedeeltelijke reflector van zinkselenide, de optische buis die wordt gebruikt om de opstelling op het hefplatform te bevestigen. De infraroodobjectief, de optische buis voor het verzamelen van terugverstrooid licht. De kubus met een off-axis paraboolspiegel, de kubus om de germaniumplaat onder een hoek van 45 graden te houden.Het oculair van de microscoop, de pinhole gemonteerd op de XY-tafel, de kwikcadmiumtelluride- of MCT-infrarooddetector. De voorversterker van de infrarooddetector, de XY-tafel om de bundelpositie te verplaatsen, de elevateurtafel om de bundel te focussen, de Z-tafel om de infrarooddetector te positioneren en de X-tafel om de infrarooddetector te positioneren. Om de assemblage van de optische opstelling te beginnen, worden afstelspiegels gebruikt om de heliumneonbundel parallel aan de optische tafel te positioneren.Richt vervolgens, zonder bundelsplitser in de kubus en met de verlengde optische buis aan het andere uiteinde van de kubus, de heliumneonstraal door de irissen die aan de uiteinden van de buizen zijn bevestigd. Verwijder nu de scanner en bevestig de verlengde optische buis in plaats van het infraroodobjectief. Plaats de zinkselenide-deelspiegel om de straal naar het monster te richten.Het moet zodanig worden gemonteerd dat de heliumneonstraal het voorvlak van de reflector raakt in het geometrische centrum van de optische kubus. Richt de straal door de gesloten uitgang door de gedeeltelijke reflector te draaien. Aangezien de houder van de gedeeltelijke reflector deze niet exact loodrecht vastzet, gebruiken we twee zelf geïnstalleerde stelschroeven om een verticale beweging van de straal mogelijk te maken.Gebruik vervolgens rubberen O-ringen om de paraloidspiegel te monteren door de schroeven aan te draaien. De O-ringen worden samengedrukt, waardoor de spiegel kan worden afgesteld. Gebruik extra spiegels om de heliumneonstraal in de tegenovergestelde richting te sturen, waarbij deze zo wordt afgesteld dat hij door de eerder gebruikte irisdiafragma's gaat.Deze straal zal worden gebruikt om de paraboolspiegel af te stellen. De paraboolspiegel in de optische kubus reflecteert het licht naar de detector, die achter de pinhole zal worden geplaatst. Met stelschroeven kan de straal door de pinhole worden geleid, die zich aan de uitgang van de kubus bevindt.Nadat de straal via het pinhole is afgesteld, plaatst u de MCT-detector dicht bij het pinhole. Pas de positie van de infrarooddetector aan zodat de heliumneonstraal op het sensorelement van de detector valt. Verplaats de detector ongeveer twee millimeter naar beneden.Plaats nu de houder met het germaniumvenster in de optische kubus die zich vóór het pinhole bevindt. Het germaniumvenster met antireflectiecoating dient als infraroodfilter en maakt visuele observaties van de cantilever en de sample mogelijk. Bevestig vervolgens het oculair.Door de hoek van de kubus te draaien kan het oculair in de gewenste richting worden gericht door de houder van het germaniumvenster te roteren. Richt de helium-neonstraal door het midden van het oculair. Sluit het infraroodobjectief en een FM-scanner aan en bevestig de straalstop.Plaats een monster op de scanner en richt de helium-neonstraal door de optische invoerbuis. Zorg ervoor dat de straal breed genoeg is om over de bundel heen te vallen. Stop door de schroefdraad van het oculair aan te passen.Breng het beeld van de bundel die op het monster is gefocust scherp. Bevestig vervolgens de FM-kop en plaats de probe op het monster. Focus de helium-neonbundel op het uiteinde van de beeldgevende cantilever.Indien dit de straal uit het midden van de optische ingangsbuis verdringt, moeten de afstemstappen worden herhaald totdat de straal gecentreerd is. Om de laatste afstellingen van de parabolische spiegel te starten, vervangt u het uitgangsgatje door de iris op de brandpuntspositie van de paraboolspiegel en verwijdert u het germaniumvenster en de infrarooddetector.Vergeet niet de positie van de infrarooddetector te markeren. Bevestig na het diafragma een extra lens op de geschatte brandpuntsafstand van de lens. De geëngageerde cantilever zou nu zichtbaar moeten zijn door de lens.Pas de positie van de paraboolspiegel aan om het uiteinde van de tip via het gesloten iris te centreren. Let erop dat wanneer de helium-neonstraal correct op de tip is gefocust, er een heldere schittering ontstaat tussen de tip en de reflectie ervan in het oppervlak van de monsters. Bevestig het germaniumvenster opnieuw en stel het zo in dat de cantilever gemakkelijk visueel kan worden waargenomen.Vervang de iris door het pinhole. Houd er rekening mee dat het pinhole dat wordt gebruikt voor infrarooddetectie, uit het midden moet worden verschoven vanwege de verplaatsing van de infraroodstraal door het germaniumvenster. Plaats de infrarooddetector op de eerder gemarkeerde positie en richt de infraroodstraal zo dat deze samenloopt met de zichtbare straal die wordt gebruikt voor de afstelling.We zijn nu klaar om de routineprocedure voor het afstellen te bekijken. De opstelling is gemakkelijker uit te lijnen met de zichtbare helium-neonstraal dan met de onzichtbare infraroodstraal. Het pad van de helium-neonstraal en de infraroodstraal komen samen bij de kantelbare spiegel.Als deze spiegel naar beneden wordt gekanteld, kan het heliumneonlicht passeren. Als de spiegel in positie is, gaat het infrarood naar het nabijveld. Opstelling voor de uitlijning van een van de bundels.Gebruik twee spiegels die niet gemeenschappelijk zijn met het andere pad. Als u naar de bundel in de homodyne-arm kijkt, zou u een coronawit-achtig bundelprofiel moeten zien. De FM is nu ingeschakeld met force-feedback voor fijne uitlijning met de near-field stage.Verplaats het objectief van de reflecterende microscoop om het licht te focussen op de punt waar het wordt verstrooid. Plaats het germaniumvenster in de optische kubus. Na de paraloidspiegel wordt de bundel door een paraloidspiegel op dit punt gefocust.Beweeg de tafel naar achteren of naar voren totdat u via het germaniumvenster een scherp beeld ziet van de punt en de reflectie ervan op het sampleoppervlak. Kijk nu door de telescoop, waar u de cantilever en de punt kunt zien zonder de helium-neonbundel. U ziet mogelijk nog wat rood licht, maar dit is intern licht van de AFM-afstandsbesturing.Beweeg de tafel in de richtingen rechts, links, omhoog en omlaag totdat er een heldere rode schittering op de punt verschijnt. Om het homodyne-veld te laten overlappen met het verstrooide licht, opent u eerst de homodyne-arm. Kijk vervolgens door het oculair.U zult drie of meer vlekken in een lijn zien met een afnemende intensiteit. Verplaats de spiegel in de homodyne-arm zodanig dat de tweede vlek samenvalt met het beeld van de tip, op het punt waar de tip en zijn reflectie samenkomen. Verwijder de extra spiegel om de detector te positioneren.De helium-neonstraal zal nu in de richting van de detector achter de buis gaan. Er zijn ten minste twee ringvormige vlekken zichtbaar. De tweede vlek van rechts moet door het gat in de hittebeschermende folie voor de detector gaan en het detectorelement raken.Het spotje met de hoogste intensiteit moet in het midden van het gat zichtbaar zijn nadat de routineuze afstelling is voltooid. Laten we nu kijken naar de uitlijning van de infraroodbundel. Gebruik voor het uitlijnen van de infraroodbundel een koolmonoxidelaserlijn met een intensiteit van ten minste 100 milliwatts.Dit maakt de uitlijning eenvoudiger. Begin hiermee door de detector te vullen met vloeibare stikstof. Klap de spiegel die op een kinematische kantelhouder is gemonteerd omhoog, zodat de infraroodstraal naar de microscoop wordt gericht.Plaats een vermogensmeter achter de eerste iris en stel de spiegel aan voordat de spiegel op een kinematische flip-mount wordt geplaatst. Om het hoogste vermogen te verkrijgen, houdt u de vermogensmeter achter de iris die zich het dichtst bij de near-field stage bevindt en beweegt u de kantelbare spiegel totdat u het maximale vermogen bereikt. Tijdens dit uitlijningsproces herhaalt u deze stappen enkele keren terwijl u het one F-signaal in de gaten houdt.Om het one-F-signaal te controleren, schakelt u de referentie van de lock in de versterker in naar one f gelijk aan een FM-oscillatiefrequentie en gaat u naar een scanmaat van 3 meter Zs in de force plot-modus. Bij een slechte uitlijning ziet u een brede bult op de schaal van 3 meter. Om dit te verhelpen, moet u de eerdere stappen herhaaldelijk uitvoeren totdat de uitlijning is verbeterd.Bij een matige uitlijning zal de kromming van de eerste piek er enigszins concaaf uitzien, hoewel de tweede piek groter zal zijn dan de eerste. Hier kunt u proberen de uitlijning te corrigeren door één of beide uitlijningsspiegels aan te passen. Als de uitlijning goed is, ziet u slechts twee pieken waarbij de eerste hoger is dan de tweede.De kromming aan de rechterzijde van de eerste piek zal negatief zijn. Zodra u een goede uitlijning heeft, kunt u de spiegels verplaatsen om het maximum van de eerste piek te verhogen. Het one F-signaal moet ergens tussen de 5 en 12 volt liggen, hoewel de vorm van de eerste piek kritischer is.Schakel tot slot over naar twee F en probeer het signaal nog iets verder te verbeteren. Door de spiegels licht te draaien en zo de fase te wijzigen, moet het twee F-signaal ergens tussen 0,6 en twee volt liggen. Experimentele topografie en nabijveld.Afbeeldingen van 21 tot 31 peptidefibrillen worden getoond. De bovenste schaal geeft de hoogte in nanometers weer en de onderste schaal toont het near-field contrast in lock-in spanning; hier is een topografie-afbeelding te zien, gelijktijdig verzameld met de near-field afbeelding verkregen met 1, 631 inverse centimeters straling. Een topografie-afbeelding verzameld gelijktijdig met de near-field afbeelding verkregen met 1, 691 inverse centimeters.Straling wordt getoond. De labels vertegenwoordigen specifieke fis en worden gebruikt om het type secundaire bevestiging aan te geven dat elke FI heeft. We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u een lijn assembleert en een near-field scanning infraroodmicroscoop met een apertuurlijst gebruikt.Onthoud de stappen die tijdens de uitlijning zijn ondernomen, zodat u deze kunt teruglopen als de uitlijning onjuist is, en wees bovenal geduldig. Dat is alles. Bedankt voor het kijken.Veel succes met uw experimenten.

assembly-tuning-use-an-apertureless-near-field-infrared-microscope

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Topologie van celhechting op een substraat wordt gemeten met nanometer precisie door variabele hoek totale interne reflectie fluorescentiemicroscopie (VA-TIRFM).

Nanotopology van Celadhesie op variabele-Angle Total Internal Reflection fluorescentie microscopie (VA-TIRFM)

Belangrijke stappen van eiwitfunctie, met name conformationele veranderingen in de ruggengraat en protonoverdrachtreacties, vinden vaak plaats op de microseconden tot milliseconden tijdschaal. Deze dynamische processen kunnen worden bestudeerd door middel van tijdopgeloste step-scan Fourier-transform infraroodspectroscopie, met name voor eiwitten waarvan de functie wordt geactiveerd door licht.

Proton Transfer en eiwitconformatie Dynamiek in lichtgevoelige eiwitten door Tijdsgeresolveerde Step-scan Fourier-Transform Infrared Spectroscopy

We presenteren een protocol voor de real-time optische detectie van één labelloze eiwitten zoals ze worden uitgescheiden uit levende cellen. Dit is gebaseerd op de microscopie interferometrische verstrooiing (iSCAT), die kan worden toegepast op een verscheidenheid van verschillende biologische systemen en configuraties.

Label-Free Imaging van één eiwitten uitgescheiden door levende cellen via iSCAT microscopie

Dit protocol is een leidraad voor het implementeren van interferentie reflectie microscopie op een standaard fluorescentiemicroscoop voor etiket-vrije, hoog-contrast, High-Speed beeldvorming van microtubuli met behulp van in vitro oppervlakken assays.

Implementatie van interferentie reflectie microscopie voor etiket vrije, High-Speed beeldvorming van microtubuli

Hier presenteren we een protocol dat near-infrarood kleurstoffen gebruikt in combinatie met Immunohistochemistry en hoge-resolutie scannen naar eiwitten in hersengebieden te testen.

Het gebruiken van dichtbijgelegen-infrarode fluorescentie en hoge resolutie het scannen om eiwituitdrukking in de knaagdieren hersenen te meten

We beschrijven de toepassing van infrarood nano spectroscopie en hoge-resolutie atomaire kracht microscopie om het proces van eiwit zelf montage te visualiseren in oligomere aggregaten en amyloïde fibrils, die nauw verbonden is met het ontstaan en de ontwikkeling van een breed scala aan humane neurodegeneratieve aandoeningen.

Karakteriseren van individuele eiwit aggregaten door infrarood nano spectroscopie en Atoom kracht microscopie

We beschrijven een beeldvormings aanpak voor de bepaling van de gemiddelde oligomere toestand van mEGFP-Tagged-receptor oligomeren geïnduceerd door ligand binding in het plasma membraan van levende cellen. Het protocol is gebaseerd op de totale inwendige reflectie fluorescentie (TIRF) microscopie gecombineerd met getal en helderheid (N &amp; B) analyse.

Oligomerisatie dynamiek van celoppervlak receptoren in levende cellen door totale inwendige reflectie fluorescentiemicroscopie gecombineerd met cijfer-en helderheids analyse

Dit protocol presenteert een methode voor het meten van adenine nucleotide binding aan receptoren in real time in een cellulaire omgeving. Binding wordt gemeten als Förster resonantie energieoverdracht (FRET) tussen trinitrofenylnucleotidederivaten en eiwit gelabeld met een niet-canoniek, fluorescerend aminozuur.

Het meten van nucleotidebinding aan intacte, functionele membraaneiwitten in realtime

Atomic Force Microscopy-Infrared Spectroscopy (AFM-IR) biedt een krachtig platform voor bacteriële studies, waardoor resolutie op nanoschaal kan worden bereikt. Zowel het in kaart brengen van subcellulaire veranderingen (bijvoorbeeld bij celdeling) als vergelijkende studies van de chemische samenstelling (bijvoorbeeld als gevolg van medicijnresistentie) kunnen worden uitgevoerd op een enkel celniveau in bacteriën.

Atomic Force Microscopie gecombineerd met infraroodspectroscopie als hulpmiddel om single bacterium chemistry te onderzoeken

We presenteren een protocol voor het implementeren van interferentie-reflectiemicroscopie en totaal-interne-reflectie-fluorescentiemicroscopie voor de gelijktijdige beeldvorming van dynamische microtubuli en fluorescerend gelabelde microtubuli-geassocieerde eiwitten.

Gelijktijdige interferentiereflectie en totale interne reflectie fluorescentiemicroscopie voor beeldvorming van dynamische microtubuli en bijbehorende eiwitten

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van hoe monsters te maken voor single-eiwittracking in solid-supported lipid bilayers. Het verklaart ook een eenvoudige fluorescentiemicroscoop met enkelvoudige moleculegevoeligheid en een hoge framerate. Tot slot beschrijven we de procedure voor het extraheren van single-protein trajecten.

Tracking van enkele eiwitten in lipide-dubbellagen met behulp van fluorescentiemicroscopie

Leer de assemblage en afstemming van een apertureless near-field infraroodmicroscoop voor eiwitbeeldvorming. Deze methode combineert AFM-topografie met infrarooddetectie om eiwitaggregaten te bestuderen.

Montage, Tuning en gebruik van een Apertureless Near Field Infrared Microscoop voor eiwit Imaging

Meer video's verkennen