Name: Uitvoeren en verwerken van de FNA-anterior Fat Pad voor Amyloid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-30T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Leer een minimaal invasieve vetkaspunctie voor de diagnose van systemische amyloïdose. Deze techniek omvat lokale anesthesie, fijne naaldaspiratie en verwerking van weefselmonsters in glutaraldehyde en formaline voor microscopisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Mevr. Bonnie Phetteplace, RN voor hulp tijdens de video-grafieken van de FNAB procedure demonstratie.

Introductie Systemische amyloïdose is een zeer variabel ziekte die verwijst naar de extracellulaire afzetting van verschillende eiwitten die gezamenlijk worden aangeduid als amyloid. Afzetting van amyloid fibrillen met deze beta geplooide configuratie leidt tot verschillende klinische presentaties, afhankelijk van de betrokken organen. De klinisch meest relevante manifestaties van systemische amyloïdose worden genoteerd wanneer er sprake is betrokkenheid van de kritieke organen zoals het hart, de lever en / of nieren. Historisch gezien, zouden deze betrokken organen worden gebiopteerd aan de aanwezigheid van amyloïde te tonen. Deze matig invasieve procedures droeg een aanzienlijk risico met bloeding. Vetkussentje aspiratie is inmiddels aangetoond dat het een betrouwbare en niet-invasieve methode voor de detectie van amyloïde in systemische amyloïdose een te verstrekken. Deze procedure is in wezen vergelijkbaar met de liposuctie van het onderhuidse vet in de voorste buikwand onder plaatselijke verdoving te fibroadipose weefsel op te halen voor het evalueren van weinig amyloïd afzettingen in de kleine bloedvaten wanden 2. De meest gebruikte methode voor identificatie amyloïd in weefsel blijft de karakteristieke appelgroene dubbelbreking patroon zien als Congo rood gekleurde coupes worden gevisualiseerd in een gepolariseerde lichtmicroscoop 3. Wanneer vet pad aspiratie wordt uitgevoerd, kan Congo rode vlekken worden gedaan op zowel de directe uitgesmeerd dia's of celblok voorbereidingen van het vetweefsel weggezogen. Echter, patiënten in de vroege stadia van amyloïdose hebben weinig amyloid deposito's, die sterk vermindert de gevoeligheid van Congo rood gekleurde cel blokkeren secties 4,5. Ultrastructurele evaluatie van vet pad aspiraten met behulp van elektronenmicroscopie heeft een betere reproduceerbaarheid en verbeterde gevoeligheid 4. Daarom is het aan te raden om al het vet pad zuigt in te dienen voor zowel de voorbereiding van een cel blok en voor het uitvoeren van elektronenmicroscopie 2. Vetkussentje aspiratie is een relatief goedkope en niet-invasieve methode voor het verkrijgen van weefsel systemische amyloïdose vast te stellen. Dit artikel beschrijft vetkussentje aspiratie procedure samen met de details over het monster verwerking exemplaar in te dienen voor zowel Congo rode vlekken en ultrastructurele evaluatie door elektronenmicroscopie. In deze video, tonen we deze reproduceerbare en eenvoudige procedure om een ​​optimale diagnostisch materiaal op te halen. 1. Het uitvoeren van de FNA van Anterior Fat Pad A. verdoving van de lokale omgeving (zie figuur 1 &amp; 2) <ol><li> Met behulp van alcoholdoekjes of het huidreinigingsmiddel, de voorkeur van een bepaalde instelling, het reinigen van de huid op de onderste kwadrant gedeelte van de buik lateraal van de middellijn en onder de navel (figuur 1). </li><li> Markeer een ruitvormige vormig gebied ongeveer 2 x 2 cm, zoals aangegeven in figuur 1 met een markering pen. </li><li> Aspireren ongeveer 10 ml van 1% lidocaïne met een 18G naald. Bevestig een 25G 1 ½ inch naald op de spuit. Verwijder eventuele ingesloten lucht door te tikken op de spuit rechtop terwijl u op de zuiger tot vloeistof is afgegeven en er geen luchtbellen aanwezig zijn. </li><li> Verdoven langs de grenzen van het ruitvormige gebied al aangeduid als weergegeven in figuur 2. Begin met het inbrengen van de naald 25G net onder de huid bij punt A en zorgvuldig subcutaan duw de naald naar punt X terug te Trek aan de zuiger om ervoor te zorgen dat u niet binnen een schip. Vervolgens duw de zuiger langzaam op te infiltreren tot 2,5 ml lidocaïne (ongeveer ¼ van de lidocaïne in 10 ml spuit), terwijl het intrekken van de naald naar punt A zonder dat de naald naar buiten komen van de huid op punt A (figuur 2A3). Met de naald nog wijzigen onder de huid de richting punt Y (figuur 2A4) en subcutaan duw de naald naar punt Y (Figuur 2b1). Net als voorheen, te bevestigen dat de naald niet in een vat en breng ongeveer 2,5 ml lidocaïne, terwijl langzaam het intrekken van de naald door punt A (zie figuur 2B3 door 2B4). Herhaal dezelfde stappen vanaf punt B en het doseren van lidocaïne subcutane van de punten B tot X en B naar Y (figuur 2C1 door 2d4). Te voorkomen dat bloeden van de prikken A en B door firma toepassing van steriele meter stuk. </li><li> U kunt nu controleren dat het gebied wordt verdoofd door licht aanraken van de huid binnen de verdoofde ruit met de punt / hoek van katoen gaas stuk, door deze te vergelijken met aangrenzende unanesthetized huid. </li></ol> B. Het uitvoeren van vetkussentje aspiratie (Figuur 3) (Toepassing van lokale anesthesie voorafgaand aan de prestaties van vet pad aspiratie kan worden overbrugd, afhankelijk van de regionale en individuele voorkeuren. Correct is uitgevoerd FNAB procedure voor de voorste vetkussentje aspiratie kan worden ingevuld in een prik. Echter, afhankelijk van de pijngrens van de individuele patiënt , manoeuvreren van 18 G naald heen en weer in het onderhuidse vetweefsel is relatief distreszingen. De verdoving hier beschreven methode bereikt het effect in slechts twee prikken met een 25G naald en afwendt van de pijn met een verbeterde tolerantie voor de procedure.) <ol><li> Monteer 18G 1 ½ inch naald op een 10 ml spuit. Monteer de spuit-naald assemblage in de spuit greep ("FNAB grip / geweer ') voor de juiste toepassing en het vrijgeven van vacuüm. </li><li> Steek de punt van de naald in het onderhuidse vet in het gereinigd en verdoofde ruitvormige gebied (Figuur 3a). </li><li> Volledig in te trekken van de zuiger van de spuit met de naald in het onderhuidse weefsel om vacuüm (figuur 3b) te genereren. </li><li> Handhaving van de stofzuiger en manoeuvreren van de naald heen en weer in verschillende richtingen in het onderhuidse vet (figuur 3c door 3i). Elke slag moet zo lang mogelijk te zijn met de lengte van de naald geselecteerde zonder dat de naald komt uit de huid. Maximale sampling wordt bereikt door het veranderen van richting met elke slag (Figuur 3i). Het is belangrijk om de richting van de naald raakt aan de serosa en parallel aan het huidoppervlak om te voorkomen dat het doorprikken van de buikholte. </li><li> De fibroadipose weefsel hoopt zich op in de spuit. Zodra er voldoende fibroadipose weefselfragmenten (tot 1 mL van fragmenten rijk bloed vermengd specimen) worden opgehaald, volledig los van de stofzuiger en verwijder de naald (afbeelding 3k). </li><li> Laat de patiënt of de assistent stevige druk toe te passen op het gebied van de procedure met een kussen van gaas om extravasatie van bloed te voorkomen. </li></ol> 2. Specimen Processing <ol><li> Plaats minimaal 5-6 fragmenten van fibroadipose weefsel in glutaaraldehyde-oplossing voor elektronenmicroscopie (Figuur 4B). </li><li> Afhankelijk van de institutionele protocol, kunnen een paar uitstrijkjes van de fibroadipose weefselfragmenten worden voorbereid door het verspreiden van deze tussen twee dia's (Figuur 4A). </li><li> Het resterende materiaal is toegestaan ​​te stollen in de spuit (dit kan 5-7 minuten, afhankelijk van de stollingstijd) (Figuur 4C). </li><li> Aspireren 10% formaline in de spuit, zodat de clotted fibroadipose weefsel materiaal is verdreven van de wand van de spuit en de vrij zwevende (figuur 4C2). Verwijder de zuiger van de spuit (Figuur 4C3) en breng de clotted fibroadipose weefsel in de 10% formaline container van het open uiteinde van de spuit tegenover de sproeieruiteinde (Figuur 4C4). </li><li> Passend etiket van de containers en legt de glutaraldehyde voor elektronenmicroscopie en de formaline voor H &amp; E sectie en Congo rode vlek voor de evaluatie in het kader polariserende microscopie. Als uitstrijkjes zijn voorbereid, kunnen ze worden verwerkt volgens het protocol van het betreffende laboratorium. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Gebied om onder narcose te zijn voor FNAB van anterior vet pad. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Verdoving van de omgeving. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Het uitvoeren van FNAB van de voorste vet pad. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4. Verwerking van de voorste vetkussentje aspireren te worden voorgelegd aan het laboratorium voor de detectie van amyloïd afzettingen. 3. Representatieve resultaten <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="Figuur 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 5"> Figuur 5. Amyloïde in de wand van kleine bloedvaten in fibroadipose weefselfragmenten. Fibroadipose weefsel was formaline-verwerkt, paraffine ingebed, gekleurd met Congo rood, en onderzocht door polariserende lichtmicroscopie. Amyloïde in de wand van kleine bloedvaten toont appel groene dubbelbreking (witte pijl). <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="Figuur 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 6"> Figuur 6. Tissue ontbreekt amyloïdose. De appel groene dubbelbreking is afwezig in de weefsels van een andere patiënt zonder amyloïdose. Blauw dubbele breking (witte pijl) van collageen vezels, zijn meestal aanwezig in bijna alle exemplaren. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="Figuur 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 7"> Figuur 7. Fibrillen in overeenstemming met amyloid in de vaatwand. Electron microfoto van rechte, niet-vertakkende, willekeurig verspreide 80-10 nm diameter fibrillen gevormd door amyloïde in de vaatwand.

<ol><li>Westermark, P., Stenkvist, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+the+diagnosis+of+systemic+amyloidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">A new method for the diagnosis of systemic amyloidosis.</a> Arch Intern Med. 132, 522-523 (1973).</li>
<li>Devata, S., Hari, P., Markelova, N., Li, R., Shidham, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+AL+Amyloid+in+Abdominal+fat+pad+aspirates%3A+Is+Congo+red+sufficient%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">Detecting AL Amyloid in Abdominal fat pad aspirates: Is Congo red sufficient?</a> Amyloid. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Merlini, G., Bellotti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+Amyloidosis%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of Amyloidosis.</a> New Engl J Med. 349 (6), 583-596 (2003).</li>
<li>Shidham, V. B., Kumar, N., Cihlar, K., Varsegi, G., Markelova, N., Li, R., Hari, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+needle+aspiration+of+abdominal+fat+pad+for+diagnosis+of+early+amyloidosis%3A+How+can+the+clinical+role+of+the+test+be+improved%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Fine needle aspiration of abdominal fat pad for diagnosis of early amyloidosis: How can the clinical role of the test be improved?</a> Mod Pathol. 20, Suppl ement 2. 1A-380A (2007).</li>
<li>Halloush, R., Lavrovskaya, E., Mody, D., Lager, D., Truong, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+typing+of+systemic+amyloidosis%3A+The+role+of+abdominal+fat+pad+fine+needle+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytojournal%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and typing of systemic amyloidosis: The role of abdominal fat pad fine needle aspiration.</a> Cytojournal. 6, 24-24 (2010).</li>
<li>Hazenberg, I. I., Rijswijk, C. V. an, H, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+Accuracy+of+Subcutaneous+Abdominal+Fat+Tissue+Aspiration+for+Detecting+Systemic+Amyloidosis+and+Its+Utility+in+Clinical+Practice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Diagnostic Accuracy of Subcutaneous Abdominal Fat Tissue Aspiration for Detecting Systemic Amyloidosis and Its Utility in Clinical Practice.</a> Arthritis Rheum. , 54-546 (2006).</li>
<li>Guy, C. D., Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+fat+pad+aspiration+biopsy+for+tissue+confirmation+of+systemic+amyloidosis%3A+specificity%2C+positive+predictive+value%2C+and+diagnostic+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Abdominal fat pad aspiration biopsy for tissue confirmation of systemic amyloidosis: specificity, positive predictive value, and diagnostic pitfalls.</a> Diagn Cytopathol. 24, 181-185 (2001).</li>
<li>Westermark, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosing+Amyloidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Rheumatol+Suppl%22%5BJournal%5D)">Diagnosing Amyloidosis.</a> Scand J Rheumatol Suppl. 24, 327-329 (1995).</li>
<li>Linke, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Sensitive+Diagnosis+of+Amyloid+and+Various+Amyloid+Syndromes+Using+Congo+Red+Fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Virchow+Arch%22%5BJournal%5D)">Highly Sensitive Diagnosis of Amyloid and Various Amyloid Syndromes Using Congo Red Fluorescence.</a> Virchow Arch. 436, 439-448 (2000).</li>
<li>Giorgadze, T. A., Shiina, N., Baloch, Z. W., Tomaszewski, J. E., Gupta, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+detection+of+amyloid+in+fat+pad+aspiration%3A+an+evaluation+of+Congo+red+stain+by+fluorescent+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Improved detection of amyloid in fat pad aspiration: an evaluation of Congo red stain by fluorescent microscopy.</a> Diagn Cytopathol. 31, 300-306 (2004).</li>
<li>DeMay, R. M. Fine Needle Aspiration Biopsy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDeMay%2C+RM+%22The+Art+%26+Science+of+Cytopathology%22">The Art & Science of Cytopathology</a>. , ASCP Press, American Society of Clinical Pathology. Chicago. 465-46 (1996).</li>
<li>Arbustini, E., Vrga, L., Concardi, M., Pallandini, G., Obici, L., Merlini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+and+Immuno-electron+Microscopy+of+Abdominal+Fat+Identifies+and+Characterizes+Amyloid+Fibrils+in+Suspected+Cardiac+Amyloidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">Electron and Immuno-electron Microscopy of Abdominal Fat Identifies and Characterizes Amyloid Fibrils in Suspected Cardiac Amyloidosis.</a> Amyloid. 9, 108-114 (2002).</li>
</ol>

De diagnose van amyloïdose wordt meestal bereikt met een tissue biopsie van de aangedane organen zoals de nieren, de lever en / of het hart. Deze aanpak heeft een hoge diagnostische opbrengst is echter invasief en kan gepaard gaan met complicaties zoals bloedingen 2. Rectaal, tandvlees, en het beenmerg biopsieën men de voorkeur voor de diagnose als relatief minder invasieve aanpak in 1960 6,7,8. Buikvet pad aspiratie werd gerapporteerd in 1973 als een veilige, minimaal invasieve, eenvoudige en minder dure procedure voor het weefsel diagnose van systemische amyloïdose 1. Echter, de details van de procedure en aanpak van de verwerking van de opgehaalde monster niet coherent gemeld. Deze video en het artikel beschrijven de procedure stap voor stap. De aanpak voor het opsporen van amyloid in vet pad aspiratie, net, is ook niet goed gestandaardiseerd met een paar studies vergelijken en evalueren van verschillende benaderingen 1,5,6,7,8. Evaluatie van de voorste vetkussentje zuigt met Congo rood kleuring is minder gevoelig met een lager interobserver reproduceerbaarheid vooral in het begin gevallen van amyloïdose met weinig amyloïd afzettingen 5. Immunohistochemie uitgevoerd op formaline gefixeerd paraffine ingebedde celblok secties en Congo rode fluorescentie uitgevoerd op cytologie uitstrijkjes zijn gemeld aan de diagnostische gevoeligheid 9,10 te verbeteren. Elektronenmicroscopie verbetert de detectie en identificatie van geringe amyloïd fibrillen in kleine wanden van bloedvaten in de fibroadipose weefsel in vet pad zuigt 4, 5. Op basis van deze informatie, dit artikel beschrijft de verwerking van het monster naar cel blokken (voor de evaluatie van Congo rood gekleurde celblok secties onder polarisatie microscoop voor diagnostische appelgroen dubbelbreking en ook voor immunohistochemie zoals aangegeven) en voor elektronenmicroscopie voor te bereiden. Echter, afhankelijk van de gekozen aanpak voor de evaluatie van het monster voor het amyloid, kan het worden onderworpen aan cytologie uitstrijkje voorbereiding, celblok voorbereiding en verwerking voor elektronenmicroscopie. Sommige laboratoria uitvoeren van de tests op de uitstrijkjes bereid uit de aangezogen fibroadipose weefselfragmenten en gekleurd met Congo rood naar de fluorescentie 10 studiepunten. Over het algemeen in een late amyloïdose, kan de lichtmicroscopie met Congo rood polariserende microscopie voldoende, maar in de vroege stadia van de ziekte Congo rood kleuring met polariserende microscopie op celblok secties is minder gevoelig en betrouwbaar voor vetkussentje zuigt 4,5,11 . Andere speciale vlekken inclusief thioflavin T kan gebruikt worden met dezelfde beperkingen. Andere benaderingen van amyloid sporen bestaan ​​uit de beoordeling van het aspiraat uitstrijkjes voor het amyloid met Congo rood polariserend microscopie en fluorescentie 10. In onze ervaring is deze methode minder reproduceerbaar. Evaluatie van de bloedvaten in vet pad voor amyloïde met behulp van elektronenmicroscopie overwint deze beperkingen 4,11. Verdere karakterisering van amyloid is gemeld door de immunoelectron microscopie 12, maar deze methoden niet op grote schaal beschikbaar zijn in een niet-tertiaire zorg instelling. Naalden worden gebruikt voor het uitvoeren van aspiratie procedures kunnen worden ingedeeld volgens hun peilen maten in fijne (21-25G), tussenproduct (18-20G) en grote (bijv.-14G) 11. Anterieure vetkussentje aspiraties zijn gemeld te worden uitgevoerd met behulp van een variabele kalibers gaande van tussenproduct (18 tot 20G) naar fijn (21 tot en met 22G) 2,10. De meeste van de massa-laesies zijn opgezogen met fijnere gauge naalden (zoals 25G) om een ​​goede cytologie uitstrijkjes te krijgen, samen met extra bewegingen met bredere gauge naald (zoals 18G) om extra monsters op te halen voor cel-blokken. Tijdens de voorste vetkussentje aspiratie, wordt de samenhangende fibroadipose weefsel niet goed te zuigen met fijnere naalden. Cellenblok voorbereiding en elektronenmicroscopie zijn belangrijk voor de evaluatie van de kleine bloedvaten muren in fibroadipose weefsel fragmenten in het vet zuigt. Bredere gauge naalden (zoals 18G) worden aanbevolen om diagnostisch adequaat materiaal 2,10 opleveren. Als de procedure is vergelijkbaar met de conventionele FNAB, is vet pad streven aangeduid als FNAB ook al breder gauge naalden kan worden gebruikt voor het uitvoeren van het 5.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/index/details.stp?id=1747">Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to:
Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Alcoholdoekjes, gaasjes, markering pen, 10 ml spuiten x2, 1% lidocaïne (lokaal verdovingsmiddel lidocaïne-Als alleen wordt gebruikt, veroorzaakt het een eerste branderig gevoel na indruppelen. Dit kan worden voorkomen door het gebruik van een 1:1 mengsel van 1% lidocaïne en 1% natrium-bi-carbonaat), 18 gauge (G) 1 ½ inch naalden x2 (voor het uitvoeren van FNAB), 25G 1 ½ inch naald (voor het inspuiten van lokale verdoving), FNA spuit houder (&quot;gun&quot;), verband, flacon glutaraldehyde (voor elektronenmicroscopie) en biopsie container van 10% formaline.

uitvoeren en verwerken van de fna-anterior fat pad voor amyloid

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Historisch gezien, werd het hart, de lever en nieren biopsieën uitgevoerd om amyloïdeafzettingen demonstreren in amyloïdose. Omdat de klinische presentatie van deze ziekte is zo variabel en niet-specifieke, de daaraan verbonden risico&#39;s van deze biopten zijn te groot voor de diagnostische opbrengst. Andere sites die een lagere biopsie risico, zoals huid of gingivale hebben, zijn ook relatief invasief en duur. Daarnaast kunnen deze biopsies niet altijd over voldoende amyloïdeafzettingen om een ​​diagnose te stellen. Vetkussentje aspiratie heeft aangetoond een goede klinische correlatie met lage kosten en minimale morbiditeit. Echter, er zijn geen gestandaardiseerde protocollen voor het uitvoeren van deze procedure of verwerking van de aangezogen monster, wat leidt tot variabele en nonreproducible resultaten. De meest gebruikte modaliteit voor het opsporen van amyloïd in weefsel is een appelgroene dubbelbreking op Congo rood gekleurde coupes met behulp van een polariserende microscoop. Deze techniek vereist celblok voorbereiding van de opgezogen materiaal. Helaas, patiënten die in een vroeg stadium van amyloïdose hebben minimale hoeveelheden amyloïde, die sterk vermindert de gevoeligheid van Congo rood gekleurde celblok delen van vet pad aspiraten. Daarom moet ultrastructurele evaluatie van vet pad aspiraten met behulp van elektronenmicroscopie worden gebruikt, gezien de verhoogde gevoeligheid voor amyloid detectie. Dit artikel toont een eenvoudige en reproduceerbare procedure voor het uitvoeren van anterior vetkussentje aspiratie voor de detectie van amyloïde gebruik te maken van zowel Congo rood kleuring van cellen te blokkeren profielen en elektronenmicroscopie voor ultrastructurele identificatie.

Vetkussentje aspiratie is een voorkeur, minimaal invasieve, en lage kosten aanpak in vergelijking met andere methoden om amyloïd te detecteren voor de diagnose van systemische amyloïdose. Deze video artikel wordt een procedurele schets voor het uitvoeren van dikke pad aspiratie met de juiste verwerking van het monster voor de optimale diagnostische resultaat.

Uitvoeren en verwerken van de FNA-anterior Fat Pad voor Amyloid

Historisch gezien werden biopsieën van het hart, de lever en de nieren uitgevoerd om amyloïde afzettingen bij amyloïdose aan te tonen. Aangezien het klinische beeld van deze ...

Deze video demonstreert fijne naaldaspiratie, biopsie van het anterieure vetkussen en een procedure voor het verwerken van de biopsiematerialen voor microscopie. De huid in het onderste kwadrant van de buik, lateraal van de middellijn en onder de navel, wordt gereinigd en een ruitvormig gebied wordt met een markeerstift aangegeven. Het lokale gebied wordt verdoofd en er wordt een biopsie van het anterieure vetkussen uitgevoerd middels fijne naaldaspiratie.Vijf tot zes fragmenten van het fibro-adipeuze weefsel worden vanuit de biopsiespuit overgebracht naar een glutaraldehyde-oplossing, waarna het resterende materiaal in de spuit mag stollen. Er wordt 10%formaline in de spuit opgezogen en de zuiger wordt verwijderd om het gestolde fibro-adipeuze weefsel over te brengen naar 10%formaline. Hallo, ik ben Dr. Ham van de afdeling Pathologie van het Medical College of Wisconsin in Milwaukee.Ik ben Dr. Parri, verbonden aan de afdeling Neoplastische Aandoeningen en Gerelateerde Ziekten van het Medical College of Wisconsin. Vandaag demonstreren we de procedure voor het uitvoeren van een fijnnaaldaspiratiebiopsie van het vetkussentje, ter aspiratie voor het bestuderen van AMY-amyloïdose.Dit is een protocol dat we gebruiken voor het bemonsteren van fibroadipose weefsel uit het anterieure abdominale vet voor demonstratie en het uitsluiten van amyloïdose. Laten we beginnen. Wanneer de procedure correct wordt uitgevoerd, kan de dunne-naaldaspiratiebiopsie (FNAB) voor aspiratie van het anterieure vetkussentje in één prik worden voltooid.Het heen en weer bewegen van een naald van 18 gauge in het subcutane vetweefsel is echter relatief belastend. De hier beschreven anesthetisatiemethode bereikt het gewenste effect met slechts twee prikken met een 25 gauge naald en leidt de pijn af, wat resulteert in een verbeterde tolerantie voor de procedure. Bereid de procedure voor door alle benodigde materialen te verzamelen, waaronder een één-op-één mengsel van 1% lidocaïne en 1% natriumbicarbonaat, alcoholdoekjes, gaasjes, een markeerpen, twee spuiten van 10 milliliter, twee 18 gauge naalden van 1,5 inch, één 25 gauge naald van 1,5 inch, een FNA-spuitenhouder of -pistool, een verbandmiddel, een flacon glutaraldehyde voor elektronenmicroscopie en een biopsiecontainer met 10% Four.Reinig met alcoholswabs de huid in het onderste kwadrant van de buik, lateraal van de middellijn en onder de markering van de umbilicus. Markeer een rond gebied van ongeveer twee bij twee inch met een markeerstift. Aspireer met een naald van 18 gauge en een spuit van 10 milliliter ongeveer 10 milliliter van de 1% lidocaïne, 1% natriumbicarbonaat-oplossing om als plaatselijke verdoving te gebruiken.Hoewel 1% lidocaïne alleen kan worden gebruikt, voorkomt de toevoeging van natriumbicarbonaat het aanvankelijke korte branderige gevoel. Koppel na het klaarmaken de met lidocaïne gevulde spuit los van de 18 gauge naald die nog in het lidocaïne-vial zit. Bevestig aan de spuit een 25 gauge naald van een halve inch terwijl u de spuit rechtop houdt.Druk op de zuiger en tik tegen de spuitcilinder om eventuele luchtbellen uit de spuit te verwijderen en anestheseer langs de randen van het gebied. Begin met het inbrengen van de 25 gauge naald net onder de huid bij punt A. Duw de naald vervolgens voorzichtig subcutaan en tangentieel parallel aan het bovenliggende huidoppervlak in de richting van punt X. Trek bij punt X de zuiger van de spuit terug om er zeker van te zijn dat de naald zich niet in een bloedvat bevindt.Trek vervolgens de naald terug naar punt A terwijl u de zuiger langzaam indrukt om tot 2,5 milliliters lidocaïne te infiltreren. Zorg ervoor dat de naald niet uit de huid komt. Verander nu de richting en breng de naald subcutaan door naar punt Y. Bevestig, zoals voorheen, dat de naald zich niet in een vat bevindt door aan de zuiger van de spuit te trekken, en doseer tot 2,5 milliliters lidocaïne terwijl u de naald langzaam door punt A terugtrekt. Voorkom na het terugtrekken van de naald bloedingen door stevig steriel gaas aan te brengen.Herhaal vervolgens dit proces, beginnend bij punt B, door lidocaïne subcutaan toe te dienen van punt X naar punt B. Doe dit vervolgens van punt B naar punt Y. Breng opnieuw gaas aan om bloedingen te voorkomen. Controleer nu of het gebied is verdoofd door met de hoek van een stukje watten met lichte druk de huid binnen de ruitvorm aan te raken en dit te vergelijken met de aangrenzende, niet-verdoofde huid. Bevestig een 18 gauge naald van een halve inch aan een spuit van 10 milliliter.Plaats de naaldassemble van de spuit in de FNAB-gripgun om een correcte toepassing en het loslaten van het vacuüm te vergemakkelijken. Steek de naaldpunt in het subcutane vet binnen het gereinigde en geanestheseerde rhomboïde gebied en trek de zuiger van de spuit volledig terug om een vacuüm te creëren. Beweeg de naald, terwijl het vacuüm wordt gehandhaafd, heen en weer binnen het subcutane vet.Elke haal moet zo lang mogelijk zijn zonder dat de naald uit de huid komt. Maximale bemonstering wordt bereikt door bij elke haal van richting te veranderen. Het is belangrijk om de richting van de naald tangentiaal aan de serosa en parallel aan het huidoppervlak te houden om punctie van de peritoneale holte te voorkomen.Zodra er ongeveer één milliliter fibroadipose weefselfragmenten in de spuit is verzameld, wordt het vacuüm losgelaten en wordt de naald verwijderd. Laat de patiënt stevige druk uitoefenen op het behandelingsgebied met een gaasje om subcutane bloedingen te minimaliseren. Het monster kan nu worden verwerkt voor verzending naar het laboratorium.Verwijder voor verdere testen de spuitnaald en breng vijf tot zes fragmenten fibreus vetweefsel via de tuit van de spuit over naar een 2% glutaraldehyde-oplossing. Breng aanvullende kleine weefselfragmenten via de tuit van de spuit aan op een glazen objectglas dat tussen twee glaasjes is geplaatst. Om uitstrijkjes voor te bereiden, laat u het resterende materiaal in de spuit stollen.Dit kan vijf tot zeven minuten duren. Aspireer vervolgens 10% formaline in de spuit, zodat het gestolde fibro-adipeuze weefselmateriaal loskomt van de wand van de spuit en vrij gaat zweven. Verwijder nu de zuiger uit de spuit en breng het gestolde fibro-adipeuze weefsel vanuit het open uiteinde van de spuit, tegenover het tuituiteinde, over naar de gelabelde container met 10% formaline.De verzamelde monsters kunnen nu worden ingediend voor elektronenmicroscopie, celblokpreparatie en paraffine-inbedding of fluorescentiemicroscopie. Het verkregen fibro-adipeuze weefsel werd conform de in deze video getoonde methode gefixeerd, verwerkt, in paraffine ingebed, gekleurd met Congo-rood en onderzocht met gepolariseerd lichtmicroscopie. Amyloïde in de wand van kleine bloedvaten in het fibro-adipeuze weefsel. Fragmenten vertonen een appelgroene birefringentie, zoals aangegeven door de gele pijl.De appelgroene dubbelbreking is afwezig in weefsels van een andere patiënt zonder amyloïdose. De blauwe dubbelbreking van collageenvezels, aangegeven door de gele pijlpunt, is gewoonlijk aanwezig in bijna alle monsters. Naar onze ervaring kan deze collageen-gerelateerde blauwe dubbelbreking moeilijk te onderscheiden zijn van de appelgroene dubbelbreking van amyloïd.Dit is een belangrijke valkuil bij de interpretatie van Congo-rood gekleurde preparaten onder een polarisatiemicroscoop. Deze elektronenmicrografie toont rechte, niet-vertakkende, willekeurig verspreide fibrillen met een diameter van 8 tot 10 nm, wat consistent is met amyloïde in een bloedvatwand.We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u een dunne-naaldaspiratiebiopsie van het anterieure vetkussen voor amyloïd uitvoert. Bij het uitvoeren van deze en andere soortgelijke FNAB-procedures is het zeer belangrijk om het vacuüm in de juiste volgorde toe te passen en los te laten. Bovendien, om het risico op het binnendringen van de peritoneumholte te vermijden, mag de naald nooit schuin worden gericht.Daarom is het belangrijk om de richting van de heen-en-weergaande bewegingen parallel aan de huid in het subcutane vlak van het fibreuze weefsel te houden. Dit zijn zeer belangrijke punten. Dat is alles.Bedankt voor het kijken. Dank u wel.

performing-and-processing-fna-of-anterior-fat-pad-for-amyloid

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video describes a technique to stain amyloids in tissue sections using a luminescent-conjugated oligothiophene dye - heptamer-formyl thiophene acetic acid, or hFTAA - for fluorescence imaging. Amyloids are β-sheet-rich abnormal protein aggregates. Their detection in tissue samples is helpful in the diagnosis and treatment of amyloid-associated diseases or proteinopathies.

hFTAA Staining of Amyloid Deposits: A Technique to Visualize Amyloid Fibrils Using Oligothiophene-Based Dye for Fluorescence Imaging in Tissue Sections

Met behulp van atoomkrachtmicroscopie in combinatie met biopanning-technologie hebben we een negatief en positief biopanning-systeem gemaakt om antilichamen te verkrijgen tegen ziektespecifieke eiwitvarianten die aanwezig zijn in elk biologisch materiaal, zelfs bij lage concentraties. We zijn erin geslaagd om antilichamen te verkrijgen voor TDP-43-eiwitvarianten die betrokken zijn bij Amyotrofe Laterale Sclerose.

Roman Atomic Force Microscopy Based Biopanning voor isolatie van morfologie specifieke reagentia tegen TDP-43 Varianten in Amyotrofische Lateraal Sclerose

Het doel van deze studie is om op beloning van gedistribueerde hersenprocessen netwerken te identificeren door het afbakenen van een betrouwbare immunohistologische techniek met behulp van mobiele c-fos activering gelijktijdige veranderingen in de dopamine wegen en terminal plaatsen na roman inname van vet en suiker in ratten te meten.

Gelijktijdige detectie van c-Fos Activering van mesolimbic en mesocorticale Dopamine Beloning Sites Na Naive suiker en vet inname bij ratten

Het doel van deze studie is te rapporteren een protocol voor de artroscopische behandeling van een osteochondraal laesies van de talus met behulp van microfractured en gezuiverde adipeus-afgeleide cellen van de stam.

Autologe Microfractured en gezuiverde adipeus weefsel voor artroscopische beheer van osteochondrale laesies van de Talus

Als gevolg van het hoge vetgehalte, heeft adipeus weefsel is uitdagend om te visualiseren met behulp van traditionele histologische methoden. Adipo-Clear is een weefsel clearing techniek waarmee robuuste labeling en hoge resolutie volumetrische fluorescerende beeldvorming van vetweefsel. Hier beschrijven we de methoden voor de bereiding van de monsters, voorbehandeling, kleuring, clearing en montage voor imaging.

Adipo-Clear: Een weefsel Clearing methode voor driedimensionale beeldvorming van vetweefsel

Dit protocol schetst een methode om Fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en myogene voorlopers (MP's) te isoleren uit de skeletspieren van ratten. Het gebruik van de rat in spierletselmodellen zorgt voor een verhoogde beschikbaarheid van weefsel van atrofische spieren voor de analyse en een groter repertoire van gevalideerde methoden om spierkracht en gang bij vrij bewegende dieren te beoordelen.

Identificatie, isolatie en karakterisering van fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en myogene voorlopercellen (MP's) in skeletspieren bij de rat

De vervanging van gezond spierweefsel door intramusculair vet is een prominent kenmerk van menselijke ziekten en aandoeningen. Dit protocol schetst hoe intramusculair vet kan worden gevisualiseerd, afgebeeld en gekwantificeerd, waardoor de mechanismen die ten grondslag liggen aan intramusculaire vetvorming kunnen worden bestudeerd.

Een gids voor het onderzoeken van intramusculaire vetvorming en de cellulaire oorsprong ervan in skeletspieren

Dit protocol onderzoekt de beschermende effecten van platycodine D op niet-alcoholische leververvetting in een palmitinezuur-geïnduceerd in vitro model.

Onderzoek naar de beschermende effecten van Platycodin D op niet-alcoholische leververvetting in een palmitinezuur-geïnduceerd in vitro model

Met behulp van een dieet-geïnduceerde niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) muismodel, beschrijven we het gebruik van nieuwe in vivo micro-computertomografie beeldvormingstechnieken als een niet-invasieve methode om de progressiestadia van NAFLD te beoordelen, voornamelijk gericht op het hepatische vasculaire netwerk vanwege de significante betrokkenheid bij NAFLD-gerelateerde leverontregeling.

Nieuwe in vivo micro-computertomografie beeldvormingstechnieken voor het beoordelen van de progressie van niet-alcoholische leververvetting

Dit protocol beschrijft procedures voor het isoleren van hoogwaardige kernen uit bevroren niet-menselijke pancreaseilandjes van primaten voor gebruik in single-nucleus gelijktijdige RNA-sequencing en ATAC-sequencing, terwijl de bulkcytosolische fractie voor metabolomische analyses uit dezelfde monsters behouden blijft.

Bereiding van ingevroren foetale eilandjes van niet-menselijke primaten voor gecombineerde RNA-sequencing met één kern en ATAC-sequencing, en bulkmetabolomics

Hier presenteren we een protocol dat autoloog vetweefsel kan transformeren in verschillende vetbestanddelen met verschillende fysisch-chemische eigenschappen en functies.

Innovatieve fractionering van vetweefsel voor het omzetten van vet in gespecialiseerde componenten

Leer een minimaal invasieve vetkaspunctie voor de diagnose van systemische amyloïdose. Deze techniek omvat lokale anesthesie, fijne naaldaspiratie en verwerking van weefselmonsters in glutaraldehyde en formaline voor microscopisch onderzoek.

Uitvoeren en verwerken van de FNA-anterior Fat Pad voor Amyloid

Meer video's verkennen