Name: Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Leer kunstmatige inseminatie bij muizen voor reproductief onderzoek met sperma-extractie en injectie. Deze methode biedt nauwkeurige timing voor fokprogramma's en transgene studies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ik wil Mike bedanken Dewey uit de Peromyscus Genetische Stock Center voor zijn waardevolle inzicht, geduld en kennis over knaagdieren reproductie.

Kunstmatige Inseminatie Kunstmatige inseminatie is in plaats van natuurlijke dekkingen gebruikt worden om de kans dat alle vrouwtjes hebben zal zwanger toenemen. Twee mannen werd gebruikt voor elke 1 gesuperovuleerde vrouwen of een vrouw bekend is dat in oestrische. De caudae epididymides van de volwassen mannelijke muizen werden geplaatst in een 9% melk suspensie en opengesneden met 18 gauge naalden. Het sperma was vrij kunnen zwemmen voor een paar minuten en vervolgens de epididymides werden genomen uit het mengsel. De suspensie werd geëvalueerd met een microscoop voor samenvloeiing en beweeglijk sperma. Een stomp 22 gauge 1 ½ inch lange naald werd gebruikt om het sperma te beheren. Een 120 °-bocht werd geplaatst ongeveer 3 / 4 e van de weg naar beneden de naald. De naald werd ingebracht in de vagina tot aan de bocht en 0,025 - 0.05mls geïnjecteerd. Als een assistent wordt gebruikt om de vrouwelijke te houden in de juiste positie, is het gebruik van verdovingsmiddelen niet nodig. Voorbereiding <ol><li> Gebruik vier mannen voor zes vrouwen </li><li> Euthanaseren mannetjes op de vivarium </li><li> Bereid ongeveer 5 ml van 9% melk van melkpoeder </li><li> Doe 1,5 ml in kleine petrischaal </li><li> Knip de Epididymus en de zaadleider </li><li> Zet in 1,5 ml van 9% melk </li><li> Met behulp van twee 18 gauge naalden, en het gebruik van lange snijbeweging met naalden, slice open de Epididymus en zaadleider om het sperma op los </li><li> Haal overgebleven weefsel en controleer voor het sperma onder de microscoop </li></ol> Injectie <ol><li> Gebruik stompe naald op 120 ° hoek </li><li> Houd de muis in de hand en injecteer mengsel. Indien een oncomfortabel gevoel met een persoon aanhouden en injecteren, kunnen twee personen worden gebruikt. Geen verdoving te worden gebruikt, als op een weet hoe dit kan invloed hebben op de procedure. </li><li> Gebruik 0.05ml van sperma / melk mix per vrouwtje </li></ol> Ontvanger vrouwen <ol><li> Doe vaginaal uitstrijkje de ontvangende vrouwen (tegen die tijd de ontvanger vrouwen moet worden in pro-oestrus / estrus) </li><li> Vrouwtjes die niet loops bereikt op dag 5 moet waarschijnlijk niet gebruikt </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Petrischaal</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>18 G naald</td><td>Instrument</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Poedermelk</td><td>Reagens</td><td>Alle leveranciers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL spuit</td><td>Instrument</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Instrument</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>Schaar</td><td>Instrument</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline</td><td>Reagens</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>22 G stompe naald</td><td>Instrument</td><td>Give to me</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

oogsten sperma en kunstmatige inseminatie van muizen

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Knaagdieren van het geslacht Peromyscus (herten muizen) zijn de meest voorkomende inheemse Noord-Amerikaanse zoogdieren. Peromyscus soorten worden gebruikt in een breed scala van onderzoek met inbegrip van toxicologie, epidemiologie, ecologie, gedrags-en genetische studies. Hier bieden ze een nuttig model voor demonstraties van kunstmatige inseminatie. Methoden zoals die hier weergegeven zijn eerder gebruikt in verschillende herten muizen studies, nog geen gedetailleerd protocol is gepubliceerd. Hier laten we zien de basis methode van kunstmatige inseminatie. Deze methode houdt in extraheren van de testes van de knaagdieren, dan is het isoleren van de zaadcellen uit de bijbal en zaadleiders. De rijpe zaadcellen, die nu in een melkmengsel, worden in de vrouwelijke reproductieve-darmkanaal op het moment van de ovulatie. Bemesting wordt geteld als dag 0 voor de timing van de embryo-ontwikkeling. Embryo&#39;s kunnen worden opgehaald op het gewenste tijdstip-point en gemanipuleerd. Kunstmatige inseminatie kan worden gebruikt in een verscheidenheid van knaagdiersoort waar exact embryo timing is cruciaal of moeilijk te verkrijgen. Deze techniek is van vitaal belang voor soorten of stammen (waaronder de meeste Peromyscus) die niet kunnen paren onmiddellijk en / of waar paring is moeilijk in te schatten. Daarnaast, kunstmatige inseminatie biedt exacte timing voor de ontwikkeling van het embryo, hetzij in kaart brengen van ontwikkeling vooruitgang en / of transgene werk. Verminderde aantallen dieren kunnen worden gebruikt, omdat de bevruchting is gegarandeerd. Deze methode is van vitaal belang voor het bevorderen van de Peromyscus systeem, en hopelijk profiteren anderen.

Dit protocol laat zien methoden voor de extractie van sperma van de testikels van de mannetjes en daarna inseminatie vrouwelijke muizen. Deze procedure is handig wanneer precieze tijd nodig is in ontwikkeling studies als transgene werken.

Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen

Knaagdieren van het geslacht Peromyscus (hertsmuizen) zijn de meest voorkomende inheemse zoogdieren van Noord-Amerika. Soorten van het geslacht Peromyscus worden gebruikt in een breed scala aan onderzoek ...

Mijn naam is Amanda Dli van het laboratorium van Dr. Paul Verana aan de University of California Irvine. Vandaag zal ik de procedure van kunstmatige inseminatie demonstreren. Dit houdt in dat het sperma bij het mannetje wordt gewonnen, om dit sperma vervolgens bij een ovulerend vrouwtje in te brengen.De reden waarom u dit zou willen doen, is dat het mannetje en het vrouwtje mogelijk niet paren op het gewenste tijdstip of helemaal niet paren. Daarnaast kan deze methode worden toegepast met bevroren sperma als een muizenlijn zeer belangrijk is. Het is essentieel om deze procedure gedemonstreerd te zien, omdat veel handleidingen en vakbladen de juiste procedure voor het hanteren van de muis niet laten zien.De muis kan door één persoon worden gehanteerd en geïnjecteerd zonder dat er een anestheticum bij het vrouwtje wordt gebruikt. Dit voorkomt dat het vrouwtje op enige manier gewond raakt en zorgt ervoor dat de bevruchting op de best mogelijke wijze kan verlopen. De dissectie-instrumenten die we gebruiken zijn twee sets scherpe pincetten en één schaar met een scherpe snede.Deze zullen worden gebruikt om de beste differentiatie in de gehele testes en het vetweefsel te isoleren. Zodra d

harvesting-sperm-and-artificial-insemination-of-mice

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier laten we zien de nieuw ontwikkelde I • Cryo-kit voor de muis sperma cryopreservatie. Twee-cellig stadium embryo ontwikkeling met ingevroren-ontdooid sperma werd steeds verbeterd in 5 muizenstammen met het gebruik van deze kit. Over een periode van 1,5 jaar werden 49 genetisch gemodificeerde muis lijnen gearchiveerd door sperma cryopreservatie met de I • Cryo-kit en later met succes teruggevorderd door IVF.

Muis Sperma Cryopreservatie en herstel met behulp van de I · Cryo Kit

De microinjectie van muis oocyten wordt vaak gebruikt voor zowel klassieke transgenese ( dwz de willekeurige integratie van transgenen) en CRISPR-gemedieerde gen targeting. Dit protocol beoordeelt de nieuwste ontwikkelingen in microinjectie, met speciale nadruk op kwaliteitscontrole en genotyping strategieën.

Generatie van genetisch gemodificeerde muizen via de microinjectie van oocyten

Sperma vloeibaar is vereist voor sperma worden bevrijd van de rudimentaire gel. Deze studie bevat de procedures voor het verzamelen van sperma van de vrouwelijke voortplantingssysteem na coïtus en sperma vloeibaar tijdmeting.

Verzameling na paring sperma van de vrouwelijke voortplantingssysteem en de waardering van sperma vloeibaar in muizen

Hier presenteren we een protocol ter bevordering van de integratie van transgenic en productie van oprichter transgene muizen met hoge doeltreffendheid door een eenvoudige injectie van een lentivirale vector in de ruimte van de perivitelline van een bevruchte oöcyt.

Lentivirale gemedieerde productie van transgene muizen: een eenvoudige en zeer efficiënte methode voor directe studie van oprichters

Hier presenteren we een aangepaste methode voor cryopreservatie van eencellige embryo's, evenals een protocol dat het gebruik van gevriesontdooide embryo's en elektroporatie koppelt voor de efficiënte generatie van genetisch gemodificeerde muizen.

Gebruik van gevriesde embryo's voor hoogrendementproductie van genetisch gemodificeerde muizen

Veel knaagdiermodellen van endometriose worden beperkt door technische complexiteit, reproduceerbaarheid en/of behoefte aan immuungecompromitteerde dieren of speciale reportermuizen. We presenteren een vereenvoudigd systeem van laesie-inductie met behulp van elke experimentele muis met een onafhankelijk verifieerbaar, objectief scoresysteem en zonder vereiste voor ovariëctomie of overlevingsoperaties.

Een syngeneïsch murinemodel van endometriose met natuurlijk fietsende muizen

Hier beschrijven we een eenvoudige techniek die bedoeld is voor de efficiënte generatie van genetisch gemodificeerde muizen, CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Deze methode levert bewerkingsreagentia door elektroporatie in embryo's met een efficiëntie van bijna 100%. Dit protocol is effectief voor puntmutaties, kleine genomische inserties en deleties in zoogdierembryo's.

Efficiënte genoombewerking van muizen door CRISPR-elektroporatie van zygoten

De gepresenteerde cervicale manipulatiemethode kan pseudozwangerschap bij muizen induceren zonder dat het nodig is om vrouwtjes te fokken met vasectomie mannetjes. De inductie van pseudozwangerschap is vereist voor het succes van niet-chirurgische embryotransfer en niet-chirurgische kunstmatige inseminatie, die beide ook worden gepresenteerd.

Het induceren van pseudopregnancy bij vrouwelijke muizen zonder de noodzaak van vasectomie bij mannen voorafgaand aan niet-chirurgische embryotransfer of kunstmatige inseminatie

Hier introduceren we een methode voor het uitvoeren van ronde spermatide-injectie (ROSI) bij muizen, een techniek met veelbelovende klinische toepassingen en bruikbaarheid voor het onderzoeken van de mechanismen die ten grondslag liggen aan de embryonale ontwikkeling.

Muis Ronde Spermatide Injectie

Hier presenteren we een protocol om een intracytoplasmatisch sperma-injectie (ICSI)-embryotransfer (ET) muismodel op te zetten, waardoor we leeftijdsgerelateerde veranderingen in het glucosemetabolisme kunnen observeren die kunnen worden toegeschreven aan ICSI, waardoor we inzicht krijgen in de mogelijke langetermijneffecten op de menselijke ontwikkeling.

Controle van de bloedglucose bij nakomelingen van muizen na intracytoplasmatische sperma-injectie

Leer kunstmatige inseminatie bij muizen voor reproductief onderzoek met sperma-extractie en injectie. Deze methode biedt nauwkeurige timing voor fokprogramma's en transgene studies.

Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen

Meer video's verkennen