Name: Snuit Extension Response (PER) assay in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 40 s
Description: Leer de proboscis extension response (PER) assay in Drosophila voor gedragsbiologie en neurowetenschap. Deze methode meet smaakgedrag door reacties op suikeroplossingen te observeren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Paul Graham voor het serveren als een camera man in de video-presentatie.

Uithongering <ol><li> De eerste, verhongeren de vlieg. </li><li> Leg een klein stukje van Kim-wipe doorweekt met water in een lege flacon. </li><li> Transfer 20-30 weldoorvoede vliegt naar de lege flacon. </li><li> Controleer om de 12 -24 uur om er zeker van het papier vochtig is. </li><li> Verhongeren het vliegen voor 36 tot 72 uur. </li></ol> Bevestig de fly <ol><li> Neem een ​​vlieg in een afzuiger. </li><li> Plaats een 200 ul geel tip over de opening. Tegelijkertijd flippen en blazen, kunt u knijp de vliegen in de gele tip. </li><li> Voorzichtig toe te passen wat lucht op de vlieg duwen tot een punt waar het niet kan bewegen. </li><li> Door het gebruik van een scheermes, een merkteken ongeveer ter oog van de vlieg, dan zuigen de vlieg terug en sneed de tip. </li><li> Voorzichtig terug blazen vliegen naar positie, maar vlak voor het bereiken van het einde, maak een schuin afsnijden op de plaats waar de proboscis zal worden gevestigd. U kunt dit doen zonder deze schuin afsnijden, maar het zou zeker de volgende proces gemakkelijker te maken. </li></ol> Bereid sucrose wieken <ol><li> Twist een 6 mm brede strook Kimwipes ® papier in een draad, en trek uit elkaar in kleine stukjes van de kegel-achtige vorm van Wick (&lt;1 cm). </li><li> Deze kleine wieken werden ondergedompeld in sucrose oplossingen of water en aan de proboscis door het maken van contact. </li></ol> Bereid controles en proefdieren <ol><li> Voor het testen een tastants, geven een 4% sucrose oplossing voor het vliegen. Dit werkt als een positieve controle. Gooi alle vliegen die niet reageren. </li><li> Vervolgens testen dH 2 0 on the fly. Deze fungeren als een negatieve controle. Gooi het vliegen als het deed reageren. </li><li> Test deze controles na het testen van uw tastants. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).</li>
</ol>

In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen voor de Proboscis extensie respons test. De methode klinkt vrij eenvoudig, maar net als in veel ander gedrag testen, veel kleine dingen kunnen de test te voorkomen werken. We hebben meegemaakt veel van dergelijke stappen die zorgvuldige aandacht nodig hebben. Hier, ik reemphasize een aantal van de belangrijkste factoren. Een zo&#39;n factor is de vorm van de lont. Ik heb laten zien een paar van de goede voorbeelden, maar natuurlijk in werkelijkheid alles zou een continu spectrum t...

<table><tbody><tr><td>HDR-HC1</td><td>Camera</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SMZ800</td><td>Microscoop</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-IBSS</td><td>Camera-adapter</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DC10LN</td><td>Camera-adapter</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>257010</td><td>Camera-adapter</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TREKKER Mk2</td><td>Statief</td><td>BENBO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gorillapod SLR</td><td>Statief</td><td>Joby</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMac G5</td><td>Computer</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power Mac G5</td><td>Computer</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>Software</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MPEG Streamclip</td><td>Software</td><td>SQUARED 5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

snuit extension response (per) assay in drosophila

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Snuit extensie respons (PER) is een smaak gedrag test die is gebruikt in vliegt als in honingbijen. Op het oppervlak van de mond van de vlieg (labellum), zijn er haar-achtige structuren, genaamd sensilla die smaak neuronen huizen. Wanneer een aantrekkelijke stof maakt contact met de labellum, de vlieg breidt zijn slurf te consumeren het materiaal. Snuit Extension Response (PER) test meet deze smaak gedrag reactie, en het is een bruikbare methode om te leren over voedsel voorkeur in een enkele vlieg. Oplossingen van verschillende suikers, zoals sucrose, glucose en fructose, zijn zeer aantrekkelijk voor de vliegen. Het effect van aversieve stoffen kunnen ook worden getest als vermindering van PER bij menging in een zoete oplossing. Ondanks de eenvoud van de basis-procedure, er zijn veel dingen die het kan verhinderen te werken. Een van de factoren die aandacht verdient, is de vlieg responsieve toestand. De benodigde tijd om de honger vliegen te brengen naar de juiste responsieve toestand varieert drastisch van 36 tot 72 uur. We een reeks controles om de vlieg staat en die het mogelijk maakt uit de exploitatie van niet-responsieve of hyper-responsieve individuele dieren te evalueren. Een andere belangrijke factor is de invloed niveau en de positie van het contact met de labellum, die moeilijk te beschrijven met woorden. Deze video presentatie toont al deze samen met een aantal andere verbeteringen die de reproduceerbaarheid van deze methode zou toenemen.

Snuit uitbreiding reactie of PER is een smaak gedrag test die is gebruikt in vliegt als in honingbijen. Toen de snuit contact maakt met een mooie stof, de vlieg breidt zijn slurf om te consumeren van de stof. Oplossingen van verschillende suikers zijn zeer aantrekkelijk voor de vliegen.

Snuit Extension Response (PER) assay in Drosophila

De proboscisextensiereactie (PER) is een proef voor smaakgedrag die is gebruikt bij zowel vliegen als honingbijen.
Op het oppervlak van de mond van de vlieg ...

Hallo. In deze presentatie willen we u laten zien hoe u de proboscis-extensiereactie-assay uitvoert bij Drosophila. De proboscis-extensiereactie of PER is een assay voor smaakgedrag die is gebruikt bij zowel vliegen als honingbijen. Wanneer de proboscis in contact komt met een aantrekkende stof, strekt de vlieg zijn proboscis uit om de stof te consumeren.Oplossingen van diverse suikers, zoals sucrose, glucose en fructose, zijn zeer aantrekkelijk voor de vlieg. PR kan ook worden waargenomen via contact met het pootje, maar in deze presentatie willen we ons concentreren op het contact met de proboscis. De eerste stap voor de PR-assay is daarom het uithongeren van de vlieg.Het optimaliseren van de uithongeringsconditie is een van de belangrijkste factoren voor deze assay. Hierbij zijn twee zaken van essentieel belang: de uithongeringsduur en de lichaamsgrootte van de vlieg voorafgaand aan de uithongering.Er lijkt een positieve correlatie tussen deze twee te bestaan. Als de vlieg groot en dik is, moet de vlieg langer worden uitgehongerd. De lichaamsgrootte hangt af van de voeding van de vlieg en de dichtheid van de vliegen in het buisje.Laat me u een goed voorbeeld tonen. In dit buisje kunt u zien dat de vliegen niet overbevolkt zijn. Er zijn ongeveer, laten we zien, zo'n honderd tot 150 PPE in het buisje.Zodra de vlieg vanuit hier uitkomt, houdt u ze nog drie tot vijf dagen op vers voedsel, waarna u ze overbrengt naar een leeg vial met een stukje papier. Dit papier wordt constant vochtig gehouden, en de uithongeringstijd kan variëren van 24 tot 96 uur. We komen later terug op de beschrijving van de uithongeringstijd.Hier wordt uitgelegd hoe u een vlieg fixeert voor PER. Neem eerst één vlieg en een aspi-aspirator. Plaats vervolgens een gele tip van 200 µL over de opening.Nu tegelijkertijd omkeren en erop blazen. U kunt de vlieg voorzichtig in de gele tip knijpen en vervolgens wat lucht aanvoeren om de vlieg naar een punt te duwen waar deze niet meer kan bewegen. Zet met een scheermesje een markering ter hoogte van het oog van de vlieg, zuig de vlieg vervolgens terug en snijd de tip eraf. Blaas nu voorzichtig terug om de vlieg weer in de oorspronkelijke positie te brengen.Maar vlak voordat u het uiteinde bereikt, maakt u een SL-snede op de positie waar de proboscis zal komen te zitten. U kunt dit zonder de SL-snede doen, maar het zou het volgende proces zeker vergemakkelijken als u deze zou hebben. Snij nu de gele punt onder de vlieg af, vul de onderkant op met klei en plaats deze rechtop.U kunt de uiteindelijke afstelling maken door meer klei aan de punt toe te voegen. Een belangrijk punt is om te proberen de vlieg niet te hard aan te drukken. Laat me me hierop concentreren en misschien druk ik hem gewoon iets verder omhoog.De kop van de vlieg zou dus iets boven dat punt komen te zitten. Dit is hoe het eronder de microscoop uit zou zien wanneer u dit probeert; dit is een zijaanzicht en dit is een vooraanzicht. U kunt nu beginnen met het testen van pr.Het WIC dat we gebruiken om de smaak over te brengen, wordt op de volgende manier gemaakt. We gebruiken Kim wipes en halen deze door een versnipperaar, wat een strip oplevert zoals deze. De breedte van de strip is ongeveer zes millimeter, zes millimeter, rond de vijf tot zes millimeter.Draai nu deze strip om er een draad van te maken, draai deze stevig aan. Ik draai hem aan, en nu hebben we een draad, waardoor het zo'n draad wordt. Vervolgens nemen we een pincet en trekken we deze kleine plukjes van de draad af.En dit is hoe we een wake maken. In dit videoclip willen we de juiste positie demonstreren om contact te maken met de Pro Bois. We gebruiken een draad gedrenkt in 4%sucrose en we willen het verschil in gevoeligheid aantonen door verschillende regio's in de dorsoventrale as aan te raken.Het centrum van het labellum is hier; dit is de meest gevoelige positie. Daarom moet u altijd proberen contact te maken met het centrum, zoals hier. Wanneer u de bovenkant of het dorsale gebied van het labellum aanraakt, zal de vlieg niet reageren.We maken dus contact, maar u kunt zien dat de vlieg de ssis niet uitstrekt. Hetzelfde gebeurt wanneer u het meest ventrale deel van het labum aanraakt. Dit is iets moeilijker, maar laten we kijken of we een goed contact kunnen maken met het uiterste onderste deel van het labum.We zullen een zeer voorzichtige aanpak hanteren. En laten we eens kijken. Ik raak het centrum opnieuw aan om er zeker van te zijn dat deze vlieg er nog in zit.Geïnteresseerd in de zoete smaak. In de lum moeten we dus altijd het centrum aanraken, dit gebied in het midden. Wanneer je er verticaal in de assay naar kijkt, wijst het centrum van de lum in deze richting, een beetje naar beneden.Wanneer u het legum dus horizontaal nadert, in deze richting, in deze richting, bevindt het dichtstbijzijnde punt zich tussen het gevoelige en het ongevoelige gebied. Dat zal reageren. Maar als het slechts een klein beetje erboven is, zal het niet reageren.Ik zal nu verder onderzoeken. Er is geen respons bij de eerste rij van de silla, de tweede rij, de derde rij, ja. Je moet dus minstens onder de derde rij van de silla gaan.Laat me nu een soortgelijk onderzoek doen vanaf de onderkant. Dit is iets moeilijker. Ik raak de tweede rij van onderen aan.Nu ga ik daarheen. De derde rij daar, vierde rij, nee, hij reageert niet. Vijfde rij daar.U dient dus ten minste de vierde tot vijfde rij Sula vanaf de onderkant aan te raken. Dit betekent dat u voortdurend het centrum moet raken, anders zou dit de variantie van uw gegevens aanzienlijk vergroten. Het is raadzaam om dit herhaaldelijk te oefenen.En de belangrijkste factor is om contact te maken net onder het dichtstbijzijnde punt vanuit een horizontale benadering, wat hier het geval is. Vervolgens wil ik u het verschil in gevoeligheid laten zien tussen het mediale en laterale gebied van het labum. Ik verplaats de positie van de vlieg zodat deze in dit beeld naar boven is gericht.Eerst raak ik het centrum of het mediale deel van de labellum-plaat van de vlieg aan, en u kunt zien dat de vlieg goed reageert. Vervolgens raak ik de sensor aan die zich aan het uiterste laterale deel van het labellum bevindt, en u ziet dat de vlieg hier niet reageert. Laat me nu vanuit de zijkant naar het centrum tasten; ik raak nu de uiterste zijde aan.Ik beweeg langzaam naar het midden. En zoals u kunt zien, reageert de vlieg zodra hij het exacte centrum bereikt. Ik doe het nogmaals vanaf de zijkant richting het midden.Daarom is het belangrijk om het midden van het niveau zowel verticaal als horizontaal aan te raken. In dit gedeelte wil ik demonstreren hoe u contact maakt met de osis. In algemene zin is het de bedoeling om het contact zo zachtjes mogelijk te maken.Een goede indicatie van de impact is de resulterende hoofdbeweging van de vlieg. De ideale aanraking is dus een aanraking waarbij u helemaal geen achterwaartse beweging van de kop ziet. De andere belangrijke factor is de vorm van de lont.Ik zal enkele voorbeelden laten zien. De vorm van de lont is hier erg goed. Deze is niet te dik en niet te dun.Als het te dik is, wordt het moeilijk om een precies contact te maken en neigt de impact groter te zijn. Als het te dun is, weet u niet of de oplossing correct tot aan de uiterste punt wordt afgeleverd, wat erger is dan een dikke laag. Laat mij hiermee een paar keer het labum aanraken.En daar, daar, daar, en u ziet bijna geen enkele beweging van de kop bij het contact daar. Soms krijgt u een lont die er zo uitziet. Het tipgedeelte is dan duidelijk te dun.Je bent er niet zeker van, je kunt niet zeker weten of de concentratie op de punt is wat je wilt afleveren. Wat je hierbij kunt doen, is dat je het gele gedeelte van de punt een paar keer kunt omvouwen, zoals hier, en door dit te doen kun je het in deze mooie vorm brengen; laat me hiermee contact maken. Je kunt dan zien dat er niet veel hoofdbewegingen zijn.Er was daar een kleine beweging van de heup, maar ja, dit is een ander goed voorbeeld. Je hoeft de dikke niet altijd weg te gooien, zolang je maar een nauwkeurig, zacht contact kunt maken. Deze kun je ook nog steeds gebruiken.De kopbeweging is mogelijk iets groter dan bij de dunne varianten, maar zolang u een vaste hand heeft, kunt u nog steeds een goed contact maken zoals deze. Dit is iets wat u niet moet gebruiken. Er komen te veel vezels uit en het is moeilijk om deze samen te bundelen.U dient deze weg te gooien en een andere te zoeken. Deze is ook niet geschikt. De punt is te dun en te kort om om te buigen om een dikkere punt te maken.En de omliggende delen zijn te dik om een nauwkeurig contact te maken. Deze moet u ook weggooien. Het probleem met deze is dat er te veel vloeistof op zit, waardoor het moeilijk is om een nauwkeurig contact te maken.Dit zou een grotere hoeveelheid vloeistof op de prop Bois achterlaten, wat de volgende procedure kan verstoren. Zelfs met een zeer goede lont zou het niet gunstig zijn als er geen voorzichtig contact wordt gemaakt. Hier is een slecht voorbeeld.U kunt zien dat de kop van de vlieg gewelddadig wordt bewogen. Een harde impact zou de vlieg kunnen ontmoedigen om op een stof te reageren en de vlieg kan gemakkelijk de interesse verliezen bij volgende proefsessies. Vervolgens wil ik enkele tips geven over hoe de impact kan worden verminderd.Stop eerst de lont boven de gele tip, vlak voordat deze contact maakt. Op deze manier kunt u de amplitude van het trillen van uw hand op dat moment observeren. Door hiernaar te kijken, kunt u de afstand van de uiteindelijke nadering visualiseren; verplaats de lont zodanig dat het verste punt van het trillen van uw hand de illa van het perkament bereikt.En natuurlijk is het beter als er helemaal geen handelingen nodig zijn. Maar deze methode stelt u in staat om hiermee te werken en het zou de totale impact verminderen. Eén ding dat we opmerken is dat zelfs als u de vliegen voor dezelfde tijdsduur start, u een groep vliegen krijgt die nergens op reageren vanwege een onvoldoende uithongeringstijd.Aan de andere kant kunt u een groep vliegen tegenkomen die allemaal dood zijn. Het testen van vliegen na een vaste uithongeringstijd, ongeacht de conditie van de vliegen, is daarom niet erg verstandig. Dit zou de variatie in de gegevens zo sterk vergroten dat het fenomeen waarnaar u op zoek bent, overschaduwd kan worden.Om deze situatie te verbeteren, willen we u een reeks controles introduceren om de toestand van de vlieg te evalueren. De eerste stap is het testen van de PER van een positieve controle, namelijk 4% sucrose. Deze concentratie is hoog genoeg om een respons op te wekken.Voor de meeste ster-vliegen betekent het, als de vlieg niet reageert op deze positieve controle, dat de vlieg ofwel meer uithongeringstijd nodig heeft of inactief is vanwege diverse andere redenen, zoals verwondingen. Deze vliegen moeten worden weggegooid. Als ze wel reageren, probeer dan een negatieve controle, namelijk water.Als de vlieg wel reageerde op water, betekent dit dat ze dorstig zijn, dat ze simpelweg op alles reageren of dat ze geconditioneerd zijn om alles te eten dat nadert. Dit komt door de aantrekkende stof die we hier als positieve controle hebben toegediend. De vlieg heeft geleerd dat een naderend object waarschijnlijk zoet is.We proberen dus een smaakgedrag te meten, en geen leergedrag. Men wil voorkomen dat de vorige trial de volgende trial beïnvloedt door middel van leren. En het lijkt erop dat wanneer een hogere concentratie als positieve controle wordt gebruikt, de kans op een respons op een negatieve controle toeneemt.Nu kunt u de vlieg testen op PER met de door u gekozen stof of conditie. Na de test is het echter raadzaam om de positieve en negatieve controle opnieuw uit te voeren. Als de vlieg namelijk niet reageert op de positieve controle, betekent dit dat de vlieg tijdens de test zijn interesse in stimulantia is verloren; u zou dan niet weten of het gebrek aan respons tijdens de test te wijten is aan een algemeen gebrek aan interesse van de vlieg. Daarnaast betekent een reactie op de negatieve controle dat de vlieg dorstig is geworden of geconditioneerd is geraakt aan een naderend object. Indien de vlieg niet reageert op de negatieve controle, beschikt u over gegevens die u kunt verzamelen.Dit venster duurt gewoonlijk ongeveer 5 tot 10 of 15 minuten. In sommige gevallen heb ik gezien dat dit venster tot 30 minuten kan duren. Na verloop van tijd realiseerden we ons dat, dus dit is een grafiek van de relatie tussen de tijd van de zeester en de mortaliteit.Dit is de tijd en dit is het percentage vliegen dat nog in leven is in een flacon. Natuurlijk zullen ze beginnen te sterven en dat verschilt sterk. Eén ding dat ik me realiseerde, is dat er tot een zeker punt geen vliegen zullen zijn die reageren op de positieve controle, maar plotseling zul je een vlieg zien die begint te reageren.En natuurlijk kunt u het naarmate de tijd verstrijkt blijven gebruiken. Maar vanaf een zeker punt realiseerden we ons dat er meer vliegen zouden reageren op de negatieve controle. Dit is dus het tijdsbestek dat u wilt hanteren om ER's uit te voeren.De vraag is dus: wanneer zal dit gebeuren? Naar mijn ervaring gebeurt dit onder zeer goede omstandigheden meestal na ongeveer 36 tot misschien 48 uur, maar soms kan dit oplopen tot 72 uur en het varieert enorm. Daarom is het raadzaam om meerdere vials klaar te hebben staan, zodat u dit kleine tijdsbestek kunt benutten.Nogmaals: zelfs bij dezelfde uithongeringstijden, hetzelfde voedsel en verder alles gelijk, varieert dit sterk. Dus zelfs met dezelfde genetische achtergrond, of een zeer vergelijkbare genetische achtergrond, varieert dit proces enorm. Dat is waar u echt voorzichtig mee moet zijn.We hebben gesproken over de vliegen die geconditioneerd waren aan de stimuli en die nu op alles reageren. Eén manier om dit te voorkomen is door niet herhaaldelijk een aantrekkelijke smaak te geven en tussendoor negatieve controles te mengen. Laat me u laten zien hoe dit werkt.Dit is dus een positieve controle. Dat is 4%sucrose, wat we hier twee keer hebben toegediend. Als we dit blijven doen, als we steeds een zoet substituut blijven geven, zou het uiteindelijk geconditioneerd raken.We voegen nu in plaats daarvan een negatieve controle toe. Zoals u ziet, is er geen reactie bij de negatieve controle. Laat me dit nogmaals doen.Eerste positieve controle, 4% met 4% sucrose. Laat me dit een beetje buigen. Opnieuw een zeer sterke, zeer snelle rustrespons.En nu gaan we nogmaals naar de negatieve controle. En laten we kijken, er is geen goede, laat me dit eens omdraaien. Oké, hier.Dit is dus water als negatieve controle. En zoals u ziet, reageert het niet op een negatieve controle. Nu laat ik u een slecht voorbeeld zien.Dus we geven 8%sucrose, wat hoger is dan de positieve controle die we gebruiken. De vlieg vindt dit dus erg prettig en probeert het op te zoeken, laat me, laten we het nog eens proberen. Laten we kijken naar een voorzichtig contact daar.En het is zeer actief op zoek. Het is nog steeds met uitgestrekte sonden. Laten we dus even wachten en daar opnieuw contact leggen.Oh, daar. Dus het is, ja, nog steeds aan het zoeken. Aan het zoeken.Zorg ervoor, ja, dat het nog steeds in orde is. En misschien nog een keer, nog een keer, nogmaals. Oh, daar, ja, het is een zeer sterke respons.Laten we nu in plaats van de 8% sucrose een negatieve controle toevoegen. Dus, laten we deze lont hier plaatsen. Deze is iets te dun.Ik vouw dit nu en maak er een mooie trap van. Maar dit is water. Hier kunt u dus zien hoe de vlieg reageert op water.In dit voorbeeld hebben we een zeer aantrekkelijke stof vijf keer toegediend. Dit betekent niet dat twee keer voldoende is en vijf keer te veel, maar er zijn veel gevallen waarin de vlieg al geconditioneerd raakt na slechts één toediening van 4% sucrose of zelfs een lagere concentratie.Een belangrijke opmerking is dat u moet proberen het aantal herhaalde toepassingen van een attractieve stof te verminderen. Indien u een reeks concentraties van een attractieve smaakstof gebruikt, is het veiliger om te beginnen bij de laagste concentratie en stapsgewijs naar een hogere concentratie te gaan; het zo snel mogelijk terugtrekken van de smaakstof, zodat de vlieg er niet veel van kan consumeren, zal de conditionering van de vlieg eveneens verminderen. Hallo, in deze presentatie hebben we alle stappen voor de pro-extensie respons assay doorlopen.De methode zelf klinkt vrij eenvoudig, maar net als bij veel andere gedragstesten zijn er kleine zaken die kunnen voorkomen dat deze test slaagt. We zijn diverse stappen doorgegaan die zorgvuldige aandacht vereisen. Hier wil ik enkele van de belangrijkste factoren nogmaals benadrukken.En het eerste punt is de vorm van de lont. Ik heb enkele afbeeldingen van zeer goede voorbeelden getoond, maar in werkelijkheid zal alles zich bevinden op een continu spectrum tussen zeer goed en zeer slecht. In het begin gebruikt u mogelijk iets in dit zeer goede bereik, maar naarmate de dagen verstrijken, kan dit beginnen te verschuiven.Het kan gebeuren dat de weken die u gebruikt, verschuiven naar een minder gunstig bereik. De menselijke perceptie van wat als 'goed' wordt beschouwd, kan bovendien zeer gemakkelijk verschuiven zonder dat men dit merkt. Een manier om dit te voorkomen, is door één goede foto te maken van een WIC die zeer goed functioneert en naar deze foto te kijken vlak voordat u P test. De tweede belangrijke factor is de impact.En dit is eenvoudiger te beheersen omdat het beste contact, de impact, het ideale contact een contact is waarbij je helemaal geen beweging van de kop ziet. Dus, als je het zo voorzichtig mogelijk kunt doen en je ziet de kop van de vlieg op geen enkele manier verschuiven, dan is dat het beste. Nu de uithongeringsconditie, het derde punt, de uithongeringsconditie is de moeilijkste factor om te controleren.En in veel smaakgedragsassays of reukgedragsassays wordt een uithongeringstijd van 24 uur zeer vaak gebruikt, wat voor ons mensen wellicht erg praktisch is om het experiment uit te voeren. Maar als u uw vliegen onder zeer goede omstandigheden opkweekt, is deze 24 uur vrij kort. Zelfs bij het gebruik van zeer rijk vliegenvoedsel en een nauwkeurige controle van de vliegendichtheid kan dit experimentele venster variëren van bijvoorbeeld 36 uur tot 72 uur.Wat betreft het experiment moet ik zeggen dat het erg onhandig is voor een mens of mensen om dit experiment uit te voeren, maar er is nog een andere factor die het voor experimentateurs lastiger maakt. In feite zullen er veel batches zijn waarbij het experimentele venster zeer kort kan zijn of zelfs helemaal niet kan voorkomen. Er zijn dus enkele grote hindernissen die u moet overwinnen.Maar het belangrijkste zijn de positieve controle en de negatieve controle. Door deze standaarden zeer strikt te handhaven, kunt u betrouwbare datasets verzamelen.

proboscis-extension-response-per-assay-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Elektrofysiologische reacties van olfactorische sensorische neuronen aan geurstoffen kan worden gemeten bij insecten met behulp van enkele sensillum opnames. In deze video artikel zullen we laten zien hoe je een sensillum opnamen in de antennes van de azijn fly uit te voeren...

Single Sensillum Opnamen in de Insecten Drosophila melanogaster En Anopheles gambiae</em

Gelijktijdig opnemen van Calcium Signalen van geïdentificeerde neuronen en eetgedrag van de Drosophila melanogaster</em

Fruitvliegen hebben een complex reuksysteem, kunnen honderden geurstoffen onderscheiden en hun reukvermogen gebruiken om gedragsbeslissingen te sturen. Deze video beschrijft de vierweg olfactometertest, een methode om reukgedragsreacties bij vliegen te bestuderen. De uitgelichte protocolclip laat zien hoe om te gaan met testvliegen en wat kritieke stappen zijn tijdens het uitvoeren van de test.

Vierweg Olfactometer-test: een methode om odorant-cued-reacties in Drosophila te beoordelen

Deze video beschrijft een methode om reukgedrag in de fruitvlieg te testen, het Y-doolhof. De aanbevolen protocolclip laat zien hoe u de test instelt en uitvoert.

Drosophila Y-doolhoftest: een methode om reukreacties bij vliegen te beoordelen

In deze video artikel beschrijven we een geautomatiseerde test om het effect van honger of verzadiging op olfactorische afhankelijke voedsel zoekgedrag meten de volwassen fruitvlieg Drosophila melanogaster.

A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila

Het Proboscis Extension Response (PER) conditioneringsprotocol, ontwikkeld voor de honingbij (Apis mellifera), biedt een ecologisch relevante en gemakkelijk kwantificeerbare manier om verschillende mechanismen van leren bij veel insectensoorten te bestuderen.

Een Proboscis Extension Response Protocol voor het onderzoeken van Behavioral Plasticiteit in Insecten: Toepassing op Basic, Biomedische en Landbouwkundig Onderzoek

Wij stellen een keuze test om de invloed van geurstoffen op Drosophila gedrag via een Y-doolhof test onthullen.

Testen<em&gt; Drosophila</em&gt; Reukzin met een Y-doolhof Assay

Om nieuwe mutaties die de mechanosensatie beïnvloeden te identificeren, ontwierpen we een test die de gedragsreactie op tactiele stimulatie van vliegborsten meet in mutante klonen die gegenereerd zijn door de MARCM-methode. De combinatie van technieken maakt het mogelijk om mechanogevoelige mutaties te identificeren die anders dodelijk zouden zijn.

Een Behavioral Assay voor Mechanosensation van MARCM-gebaseerde klonen in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dit protocol analyseert navigatie gedrag van Drosophila larve in reactie op de stimulatie van de gelijktijdige optogenetic van haar olfactorische neuronen. Licht van 630 nm golflengte wordt gebruikt voor het activeren van individuele olfactorische neuronen uitdrukken van een rood-verschoven kanaal rodopsine. Larvale verkeer gelijktijdig wordt bijgehouden, digitaal opgenomen en geanalyseerd met behulp van aangepaste-geschreven software.

Bijhouden van Drosophila larvale gedrag in reactie op de stimulatie van de Optogenetic van olfactorische neuronen

Het doel van dit protocol is om te laten zien hoe een verbeterde test voor mechanische nociceptie in Drosophila-larven kan worden uitgevoerd. We gebruiken de test hier om aan te tonen dat mechanische overgevoeligheid (allodynie en hyperalgesie) bestaat in Drosophila-larven.

Een verbeterde test en tools voor het meten van mechanische nociceptie in Drosophila-larven

Dit artikel presenteert methoden voor optogenetische manipulatie in Drosophila melanogaster, waarbij CsChrimson en GtACR2 worden gebruikt om specifieke neuronen te activeren en tot zwijgen te brengen. Er worden vier experimenten beschreven om optogenetica te gebruiken om thermotactisch en smaakgedrag te onderzoeken, en inzicht te geven in de onderliggende neurale mechanismen die deze processen beheersen.

Gedragstesten voor optogenetische manipulatie van neurale circuits in Drosophila melanogaster

Leer de proboscis extension response (PER) assay in Drosophila voor gedragsbiologie en neurowetenschap. Deze methode meet smaakgedrag door reacties op suikeroplossingen te observeren.

Snuit Extension Response (PER) assay in Drosophila

Meer video's verkennen