Name: Dun snijden van Slice voorbereidingen voor immunohistochemie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Leer dun snijden van hersenslices voor immunohistochemie met een aluminium vriesstadium en standaard cryostaat. Deze methode produceert reproduceerbare 5-10 micron secties van 400 micron dik weefsel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Voorbereiden mal van tape voor oktober platform. </li><li> Vul de vorm met oktober Freeze binnen de cryostaat of met behulp van gemalen droog ijs. </li><li> Verwijder de tape van rond bevroren oktober platform. </li><li> Lijn markeringen op bevriezing chucks and cryostaat montage fase en lock in Chuck. </li><li> Doorsnede van oktober platform totdat het oppervlak is vlak. </li><li> Verwijder dook oktober platform en leg ze op cryostaat bevriezing podium. </li><li> Plaats weefselmonster (voorheen gecryopreserveerd met 30% glycerol of sucrose in PBS) in oktober </li><li> Bereid bevriezing kolom met buitenste ring het projecteren van ongeveer 5 mm boven de bovenkant van kolom vormen goed voor oktober </li><li> Zorgvuldig positie weefselmonster naar het centrum van invriezen kolom oppervlak en langzaam oktober tot goed gevuld is toe te voegen. </li><li> Surround bevriezing kolom met gemalen droog ijs. Weefsel en de LGO moet volledig bevriezen binnen 20-60 seconden. </li><li> Als voorbereiding op stijgingen van de temperatuur krijgt, kan de buitenste ring worden verwijderd terwijl het monster blijft bevroren. </li><li> Schuif de steekproef uit het bevriezen kolom zijwaarts en plaats in de cryostaat. </li><li> Plaats druppel oktober op het oppervlak van LGO-platform en positie monster (weefsel naar beneden) het toepassen van een stevige druk. Specimen zal snel bevriezen op oktober platform. </li><li> Secure chuck op cryostaat montage podium met uitgelijnd merken. </li><li> Doorsnede van oktober oppervlakkig om het weefsel monster. </li><li> Dooi monteren dunne secties op glas dia&#39;s en op te slaan bevroren of op kamertemperatuur. </li><li> Afweerreacties kan worden uitgevoerd voor tissue gemonteerd op glasplaatjes. </li><li> Reagens wordt gebundeld op glijbaan, kan voorzichtig worden geschud, en kunnen worden gedekt als licht-gevoelig. </li><li> Volgende fasen van de reactie zijn eenvoudig uit te voeren door het omkeren van afglijden in afvalbak, wicking de dia en daarna het toepassen van de volgende reagens. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

Het protocol hier gepresenteerde biedt onderzoekers met een beknopte, gemakkelijk te volgen schetsen van hoe dun cryostaatcoupes van de kleine, moeilijk te beheren, weefsel stukken, zoals biopsieën en de hersenen plakjes voor verdere studies moeten worden uitgevoerd, zoals het verkrijgen van verschillende kleuringsmethoden, in situ hybridisatie, of immunohistochemie.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Glyceroloplossing</td><td></td><td></td><td>30% glyceroloplossing in PBS w/v</td></tr><tr><td>Sucroseoplossing</td><td></td><td></td><td>30% sucroseoplossing in PBS w/v</td></tr></tbody></table>

dun snijden van slice voorbereidingen voor immunohistochemie

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Veel onderzoek in de neurowetenschappen, evenals andere disciplines, te betrekken het bestuderen van kleine, maar macroscopische stukken of delen van weefsel die bewaard zijn gebleven, vers verwijderd of weggesneden maar bleef levensvatbaar, zoals in het stukje voorbereiding van het hersenweefsel. Latere microscopisch onderzoek van dit materiaal kan lastig zijn, omdat het weefsel monsters kunnen worden moeilijk te hanteren. Aangetoond hier is een methode voor het verkrijgen van dunne cryostaatcoupes van weefsel met een dikte die kan variëren +0,2 tot +5,0 mm. We routinematig geknipt 400 micron dikke Vibratome hersencoupes serieel in 50-10 micron coronale cryostaat secties. De schijfjes worden doorgaans het eerst gebruikt voor elektrofysiologie experimenten en vervolgens vereisen microscopische analyse van de cytoarchitecture van de regio waar de opnames werden waargenomen. We hebben geconstrueerd een eenvoudig apparaat dat gecontroleerde en reproduceerbare voorbereiding en positionering van het weefsel slice toelaat. Dit apparaat bestaat uit een cilinder 5 cm lang met een diameter van 1,2 cm, die dienst doet als een beslissing tot bevriezing podium voor de slice. Een ring schuift precies over de cilinder het verstrekken van muren rond de slice waardoor het weefsel te worden ondergedompeld in de vrieskou verbinding (bijv. LGO). Dit is dan snel bevroren met gemalen droog ijs en de daaruit voortvloeiende wafer kan eenvoudig worden positie voor cryostaat snijden. Dunne secties kunnen ontdooien gemonteerd op gecoate dia&#39;s te laten verdere studies moeten worden uitgevoerd, zoals diverse kleuringsmethoden, in situ hybridisatie, of immunohistochemie, zoals hier aangetoond.

De huidige methode maakt het mogelijk reproduceerbaar cryostaat opdeling van de kleine, moeilijk te beheren, weefsel stukken, zoals biopsieën en hersenen plakjes. Wij gebruiken een eenvoudige aluminium bevriezing stadium bij het verwerken van weefsel en een standaard cryostaat om routinematig produceren 5-10 micron seriële secties van 400 micron dikke sneden hersenen te vergemakkelijken.

Dun snijden van Slice voorbereidingen voor immunohistochemie

Veel onderzoeken in de neurowetenschappen, evenals in andere disciplines, houden in dat er kleine, maar macroscopische stukjes of secties weefsel worden bestudeerd die zijn ...

Hallo, mijn naam is Jun Park, onderzoeker aan de Harvard Medical School en tevens MD-student aan het Y University College of Medicine Severance Hospital, Zuid-Korea. Dit zijn de materialen voor het maken van dunne coupes van slice-preparaten. Ik bereid een mal voor met tape op een OCT-platform.Ik breng OCT aan en vries het in binnen de cryostaat, of gebruik verbrijzeld droogijs om TAFE rondom het bevroren OCT-platform te verwijderen. Ik laat de uitlijningsmarkeringen op het vriesblok en de montageplaat van de cryostaat zien en vergrendel het blok. Vervolgens maak ik coupes door het OCT-platform.Het oppervlak van Ontario is vlak. Ik verwijder het opnieuw opgebouwde OCT-platform en plaats dit op de vriesplateau van de cryostaat. Ik plaats dit monster in OCT en dit monster is eerder cryogepreserveerd met 30% glycerol of sucrose in PBS.Dit is de stap voor het voorbereiden van de vrieskolom, waarbij de buitenring ongeveer vijf millimeter boven de bovenkant van de kolom uitsteekt om een putje voor OCT te vormen. Ik plaats het weefselmonster zorgvuldig in het midden van het oppervlak van de vrieskolom en voeg langzaam OCT toe totdat het putje gevuld is. Vervolgens omring ik de vrieskolom

thin-sectioning-of-slice-preparations-for-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

The following video describes how to preserve morphology of a tissue with formalin fixation and paraffin embedding.

Formalin-Fixed Paraffin Embedded (FFPE) Tissue Preservation: A Method for Studying Tissue Morphology

Dit protocol op inleidend niveau beschrijft de reagentia, apparatuur en technieken die nodig zijn om immunohistochemische kleuring van knaagdierhersenen te voltooien, gebruikmakend van markeringen voor microglia en neuronale elementen als voorbeeld.

Primer voor Immunohistochemie op Cryosectioned Rat Brain Tissue: Voorbeeld kleuring voor Microglia en Neuronen

De indirecte immunofluorescentie protocol beschreven in dit artikel laat de detectie en de lokalisatie van eiwitten in de muis borstklier. Een complete methode wordt gegeven voor te bereiden borstklier monsters, om immunohistochemie uit te voeren, om de afbeelding van het weefsel secties met behulp van fluorescentie microscopie, en om beelden te reconstrueren.

Indirecte Immunofluorescentie op Bevroren Secties van Muis borstklier

Veel typen menselijke hersentumoren zijn gelokaliseerd in specifieke gebieden in de hersenen en zijn moeilijk te laten groeien in cultuur. Dit protocol behandelt de rol van de tumormicro-omgeving en onderzoekt nieuwe medicamenteuze behandelingen door fluorescerende primaire hersentumorcellen te analyseren die groeien in een organotypische muizenhersensnede.

Een hersentumor / organotypische Slice Co-cultuur voor het bestuderen tumor micro en Gerichte Drug therapieën

Hier geven we een eenvoudige, goedkope en tijdbesparende protocol chemisch fixeren primaten hersenweefsel met acroleïne fixatief, waardoor langdurig bewaren die compatibel zijn met pre-inbedding immunohistochemie voor transmissie elektronenmicroscopie is.

De bereiding van niet-menselijke primaten Brain Tissue voor Pre-embedding immunohistochemie en elektronenmicroscopie

Hier presenteren we een protocol om paraffine segmenteren. Deze methode combineert snijden en zwevende met behulp van een eenvoudige thermostatische kamer om te voorkomen dat het proces van de overdracht vereist met de conventionele methode. Dientengevolge, waren de efficiëntie en het aantal intact paraffine secties sterk verbeterd.

Het snijden en drijvende methode voor paraffine-ingebedde weefsel voor het segmenteren

Wij bieden een methode voor de generatie, de teelt en de systematische analyse van organotypic plakjes afgeleid van lymfkliertest Long tumoren. Ook beschrijven we hoe u kunt optimaliseren voor segment dikte en drug concentraties te behandelen tumor segmenten te selecteren.

Vaststelling en analyse van Tumor segment Explants als een voorwaarde voor het kenmerkende testen

Een protocol om vrij zwevende segment culturen van volwassen menselijk brein voor te bereiden wordt gepresenteerd. Het protocol is een variatie van de veelgebruikte segment cultuurmethode met behulp van membraan inserts. Het is eenvoudig, kosteneffectief, en aanbevolen voor het uitvoeren van korte termijn testen gericht op het ontrafelen van mechanismen van neurodegeneratie achter de leeftijd geassocieerde hersenziekten.

Korte-termijn vrij zwevende segment culturen van het volwassen menselijk brein

De vrij zwevende techniek stelt onderzoekers in staat om histologische kleuringen uit te voeren, waaronder immunohistochemie op vaste weefselsecties om biologische structuren, celtype en eiwitexpressie en lokalisatie te visualiseren. Dit is een efficiënte en betrouwbare histochemische techniek die nuttig kan zijn voor het onderzoeken van een groot aantal weefsels, zoals hersenen, hart en lever.

Histologische kleuringen met behulp van vrij zwevende weefselsecties

Dit protocol beschrijft een betrouwbare methode voor het verkrijgen van hoogwaardige cryosecties van hele konijnenogen. Het beschrijft procedures voor dissectie, fixatie, inbedding en secties van konijnenogen, die gemakkelijk kunnen worden aangepast voor gebruik in elk onderzoek waarbij immunohistochemie in grotere ogen wordt gebruikt.

Het verkrijgen van cryosecties van het hele konijnenoog van hoge kwaliteit 

Leer dun snijden van hersenslices voor immunohistochemie met een aluminium vriesstadium en standaard cryostaat. Deze methode produceert reproduceerbare 5-10 micron secties van 400 micron dik weefsel.

Dun snijden van Slice voorbereidingen voor immunohistochemie

Meer video's verkennen