Name: Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Leer orthotope achterpoottransplantatie bij ratten voor onderzoek naar ischemie, reperfusie en immunologische afstoting. Deze cuff-techniek vermindert operatietijd en bloedverlies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Donor Bediening en Hind-Limb Harvest <ol><li> Voor de operatieve procedure een steriele set van microchirurgische instrumenten wordt gebruikt. De chirurg zou moeten dragen de juiste kleding met inbegrip van steriele handschoenen, die vooraf worden veranderd aan de start van de chirurgische procedure. </li><li> De rat is verdoofd met een intraperitoneale injectie van pentobarbital (50mg/kg IP) en geplaatst rug op een verwarmd operatie veld, dat een stabiele dierlijk lichaam temperatuur vergemakkelijkt de gehele chirurgische procedure. </li><li> Voorafgaand aan de huid incisie van de ingediende van de operatie is gesaneerde elk drie keer met beide, een ontsmettingsmiddel en alcohol. Om te voorkomen dat de dieren hoornvliezen uitdroogt, zijn ogen gesmeerd met een oogzalf (Vidisic) voorafgaand aan de operatie. </li><li> Een huid incisie gemaakt in de rechter lies ongeveer op het niveau van de lies ligament. De femorale schepen zijn vrij gesneden met een bipolaire cauterisatie en stompe dissectie; diepe takken zijn geligeerd met 8-0 zijde. </li><li> 300μl (50 IE) heparine worden geïnjecteerd via de penis ader voor anti-coagulatie. </li><li> Femorale schepen worden geligeerd op het niveau van de lies ligament en snijd distaal van de ligatuur. </li><li> De achterste ledematen wordt gespoeld met ijs-koud (4 ° C) HTK-oplossing (5 ml) via de liesslagader meer dan 5 minuten. </li><li> Alle spiergroepen zijn scherp verdeeld met een schaar en osteotomie wordt uitgevoerd met een roterende elektrische zaag op het niveau van de distale derde deel van het dijbeen. </li><li> De geoogste ledematen wordt dan ondergedompeld in 20 ml ijskoude HTK oplossing voor het behoud en koude opslag tot de transplantatie. </li></ol> Ontvanger Bediening en Transplantatie <ol><li> De rat is verdoofd met een intraperitoneale injectie van pentobarbital en geplaatst rug over de werking veld. </li><li> Een huid incisie gemaakt in de rechter lies ongeveer op het niveau van de lies ligament. De femorale schepen zijn vrij gesneden met een bipolaire cauterisatie en stompe dissectie. </li><li> Femorale vaten worden geligeerd zo distaal mogelijk, maar proximaal van de epigastrische schip opstijgen. Vasculaire klemmen worden geplaatst op het niveau van de lies ligament op de slagader en ader. </li><li> Een polyethyleen manchet is getrokken over de slagader (in de manchet diameter: 0.912 mm, manchetknopen wanddikte: 0.010 mm, manchet lengte: 2,0 mm) en ader (binnen manchet diameter: 1.151 mm, manchetknopen wanddikte: 0.010 mm, manchet lengte : 2,0 mm). De rand van het schip lumen wordt dan getrokken met een schip dilatator en de femorale slagader en ader zijn eversie over het hele lichaam van de manchet (ongeveer 2mm) en vastgezet met een omtrek 8-0 zijden ligatuur. </li><li> Om plaats te maken voor de donor ledemaat van de ontvanger been wordt verwijderd met scherpe ontleding van spiergroepen en osteotomie wordt uitgevoerd in het midden dijbeen. </li><li> De donor onderdeel is verwijderd uit de HTK oplossing en transplantatie begint met osteosynthese van het femur met behulp van een 18-gauge naald (lengte: 1,5-2,0 cm) als een intramedullaire staaf. </li><li> Ventrale spiergroepen zijn nauw benaderd met 4-0 Vicryl of Prolene onderbroken hechtingen. </li><li> Vasculaire anastomosen worden uitgevoerd door het trekken van de donor ader en slagader over de ontvangers ader en manchet complex. Een omtrek 8-0 zijden ligatuur is opnieuw geplaatst om de anastomose te beveiligen. </li><li> De veneuze klem wordt vrijgegeven, gevolgd door de arteriële klem, en reperfusie wordt gevisualiseerd door de terugkeer van kleur aan de distale ledematen en de voet, evenals pulsatiele flow door de slagader. </li><li> De resterende dorsale spiergroepen worden opnieuw benaderd met 4-0 Vicryl of Prolene onderbroken hechtingen. </li><li> De huid wordt gesloten met 4-0 Vicryl of prolene onderbroken hechtingen. </li><li> De ontvanger rat is geplaatst op een verwarmings-pad en de voet gevolgd tot herstel. </li><li> Ontvanger dieren ontvangen profylactisch antibiotica (Cefazolin, 20 mg / dag, IM) en Buprenex (0,1 mg / kg, SC) voor de drie dagen na transplantatie. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Tientallen jaren van experimenteel onderzoek zijn voorgegaan en ingeschakeld succesvolle transplantatie menselijke hand in het recente verleden. In 1978, Shapiro et al.. ontwikkeld, een orthotope achterste ledematen transplantatie model in ratten, zeer geschikt voor diverse pathologische, fysiologische en immunologische aspecten als functionele resultaat van samengestelde weefsels enten te bestuderen. We hebben wijzigde de meest uitdagende deel van de procedure, namelijk de vasculaire anastomose, door de invoering van e...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparine Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK-oplossing</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adventitia-schaar</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Dilatatiepincet</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Polymide buisjes</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotope hind-limb transplantatie bij ratten

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite weefsel allotransplantatie (CTA) vertegenwoordigt nu een geldig therapeutische optie na het verlies van een hand, onderarm of cijfers en is uitgegroeid tot een nieuwe therapeutische entiteit in de reconstructieve chirurgie. Echter, op lange termijn een hoge dosis multi-drug immunosuppressieve therapie nodig is om te enten overleven, met het risico van ernstige bijwerkingen die een bredere toepassing halters. Verdere progressie op dit gebied kan afhangen van een beter begrip van de fundamentele immunologie en ischemie-reperfusie schade in samengestelde weefsel enten. Tot op heden orthotopische achterste ledematen transplantatie bij ratten heeft de voorkeur knaagdier model voor reconstructieve transplantatie (RT) is, is het echter een bijzonder veeleisende procedure die buitengewone microchirurgische vaardigheden vereist voor de herbevestiging van vaatstelsel, botten, spieren en zenuwen. Hebben we het vasculaire manchet anastomose techniek om dit model, waardoor een snelle en betrouwbare benadering van de achterste ledematen transplantatie rat. Deze techniek vereenvoudigt en verkort de chirurgische ingreep en stelt chirurgen met basis microchirurgische ervaring om succesvol uitvoeren van de operatie met een hoge overleving en lage complicatie tarieven. De techniek lijkt goed geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade (IRI) studies.

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden standaard<em&gt; In vivo</em&gt; Model voor samengestelde weefsel allotransplantatie onderzoek.

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

Allo-transplantatie van compositeweefsel (CTA) vormt thans een valide therapeutische optie na het verlies van een hand, onderarm of vingers en is een vernieuwende ...

Ik ben Robert Suha van het Daniels Roski Research Laboratory van de afdeling Viscerale Transplantatie en Thoracale Chirurgie van de Innsbrook Medical University. Vandaag laten we u de procedure voor ledemaattransplantatie bij de rat zien, waarbij een cuff-techniek voor revascularisatie wordt geïntroduceerd. Deze operatie voor ledemaattransplantatie wordt uitgevoerd door onze arts-assistenten chirurgie, inclusief ikzelf.We gebruiken dit diermodel om letsels als gevolg van ischemie en reperfusie in een composiet weefselallograft te bestuderen. Bovendien gebruiken we deze procedure om immunologische gebeurtenissen bij de afstoting van composiet weefselallografts te onderzoeken, evenals strategieën om afstoting te voorkomen. Deze strategieën omvatten het minimaliseren of zelfs vermijden van onderhoudsimmunosuppressie door het gebruik van gerichte immunomodulerende schema's.De procedure voor de transplantatie van het rode achterbeen begint met het oogsten van het samengestelde donorweefseltransplantaat, waarbij het rechterachterbeen uit de donorrat wordt verwijderd en op ijs wordt bewaard. Vervolgens wordt het rechterachterbeen van de recipientrat verwijderd om ruimte te maken voor het donorbeen. Het donorbeen wordt daarna van het ijs gehaald en getransplanteerd naar de recipientrat.In dit model worden vasculaire anastomosen uitgevoerd met behulp van een cuff-techniek. Voor onze experimenten werden mannelijke Louis Reds met een gewicht van 250 gram gebruikt. De anesthesie werd geïnduceerd met een intraperitoneale injectie van 50 milligram per kilogram pentobarbital.De genarceerde rat wordt geschoren en gedesinfecteerd bij de lies en de poot ter voorbereiding op de procedure. Een complete set microsurgische instrumenten is vereist, waaronder een recht microsurgisch instrument, scharen, vatdilatatoren en twee gebogen pincetten. Bovendien zijn de hier getoonde microsurgische vatklemmen de belangrijkste instrumenten.Om de diepte van de anesthesie te testen, wordt de tenenknijpreflex gebruikt. De rat wordt op een steriel platform geplaatst en vastgezet met alle vier de ledematen in volledige extensie voorafgaand aan de incisie. De ledemaat wordt vrijgemaakt van alle haar om contaminatie te voorkomen.Er wordt een incisie gemaakt over de rechterlies, ongeveer op het niveau van het ligamentum inguinale. De femorale vaten worden direct onder de huid zichtbaar en worden vrijgeprepareerd middels bipolaire coagulatie en botte dissectie. Vervolgens worden de epigastrische vaten vrijgeprepareerd en gecauteriseerd.Een enkele lus als houdahechting wordt rond de vene en arterie geplaatst om tractie mogelijk te maken zonder de vaten na separatie direct met instrumenten te hanteren. De diepe takken van de arterie en vene worden proximaal afgebonden met 8-0 zijden hechtdraad en distaal gecauteriseerd vóór het oogsten van het donorlidmaat. 50 units heparine worden toegediend via de penale vene.Na één minuut wordt de aandacht opnieuw gericht op de femorale vaten. De arteria femoralis wordt zo nauwkeurig mogelijk afgebonden met 8-0 zijde, en dezelfde procedure wordt herhaald voor de vena femoralis. Beide vaten worden vervolgens distaal van de ligatuur doorgesneden en het achterpoot wordt gedurende vijf minuten gespoeld via de arterie met ijskoude, gehepariniseerde HDK-oplossing.Vervolgens worden alle spiergroepen zorgvuldig met een schaar gescheiden. De osteotomie wordt uitgevoerd met een roterende elektrische zaag op het niveau van het distale derde deel van het femur. Het geoogste ledemaat wordt daarna ondergedompeld in 20 milliliters ijskoude HDK-oplossing voor conservering en koude opslag tot aan de transplantatie.De operatie bij de ontvanger begint op een vergelijkbare wijze als de operatie bij de donor, met de isolatie en dissectie van de femorale vaten. Na zorgvuldige dissectie worden de vaten geligeerd met 8-0 zijde zo distaal mogelijk, maar proximaal van de afsplitsing van de epigastrische vaten. Vervolgens gaan we over tot de cuffmontage van de ontvangende vene door de polyline-cuff over het vat te trekken.Een enkele aderklem wordt proximaal van de manchet over de ader en de handgreep van de manchet aangebracht om volledige hemostase te waarborgen. De ligatuur aan het distale uiteinde van de ader wordt doorgesneden, waarna de ader over de manchet wordt geslagen. Een 8-0 ligatuur wordt circumferentieel rond het vat en de manchet geknoopt om de ontvangende ader op zijn plaats te fixeren.De exact dezelfde procedure wordt uitgevoerd voor de arterie met de manchet met de kleinere diameter. De poot van de ontvanger wordt op een vergelijkbare manier geprepareerd als de poot van de donor, met scherpe dissectie van spiergroepen en een osteotomie in het midden van het femur. We zijn nu klaar om de achterpoot te transplanteren.De donorledemaat wordt uit de HDK-oplossing gehaald. De transplantatie begint met de osteosynthese van het femur, waarbij een naald van 18 gauge als intramedullaire pen dient. De punt wordt eraf gesneden en de resterende naald wordt op een lengte van anderhalf tot twee centimeter afgekort.De ventrale spiergroepen worden nauw bij elkaar gebracht met onderbroken hechtingen van 4-0 Vicryl of Prolene om het ledemaat te stabiliseren en voor te bereiden op de vasculaire anastomose. Voor de cuff-anastomose wordt de donorvene gedilateerd, over de vene en cuff van de ontvanger getrokken en vastgezet met een andere circumferentiële 8-0 ligatuur. Dezelfde procedure wordt uitgevoerd voor de donorarterie.Ten slotte, zodra beide vaten zijn geanastomoseerd, wordt de veneuze klem losgelaten, gevolgd door de arteriële klem. Reperfusie treedt onmiddellijk op en is eenvoudig te visualiseren door het terugkeren van de kleur van het distale ledemaat en de voet, evenals door een pulserende stroom door de arterie. De overige dorsale spiergroepen worden opnieuw benaderd.De huid wordt gesloten met vier-nul Vicryl of proline onderbroken hechtingen, waarna de transplantatie postoperatief voltooid is. De rat wordt op een warmtepad verwarmd en er worden analgetica en antibiotica toegediend. De rat wordt gedurende 48 tot 72 uur nauwgezet gemonitord op tekenen van distress of chirurgische complicaties.De cuff-techniek voor re-anastomose is de afgelopen decennia op grote schaal toegepast in verschillende chirurgische onderzoeksgebieden, van mariene niertransplantatiemodellen tot heterotope harttransplantatiemodellen. Hiermee kunnen diverse aspecten van ischemie-reperfusie-gerelateerde letsels, evenals immunologische fenomenen, worden bestudeerd. Na onze transplantatie.Hier presenteren we de eerste toepassing van deze unieke cuff-techniek bij compositeweefseltransplantatie van ledematen. In een klein diermodel vermindert de cuff-techniek de operatietijd, de vereiste microsurgische expertise van de operateur en het intraoperatieve bloedverlies aanzienlijk in vergelijking met conventionele hechttechnieken voor anastomose.

orthotopic-hind-limb-transplantation-in-rats

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

We een gemakkelijk te stellen herziening van de klassieke twee manchet techniek orthotope levertransplantatie in rat.

Orthotope levertransplantatie bij ratten

We beschrijven een nieuwe techniek voor heterotope abdominale hart-longtransplantatie (HAHLT) bij ratten. De transplantaatconfiguratie resulteert in een gedeeltelijk belaste graftcirculatie, waardoor een directe functionele beoordeling mogelijk is. Dit model kan worden gebruikt voor acute of chronische studies van de functie en het immunologische status van het getransplanteerde graft.

Rat Heterotope Abdominale Hart / Single-longtransplantatie in een Volume geladen configuratie

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

Het doel van dit manuscript en protocol is uit te leggen en in detail de chirurgische ingreep van orthotopic nier transplantatie bij ratten te tonen. Deze methode is vereenvoudigd om de juiste doorbloeding van de donor nier te bereiken en de reperfusie tijd te verkorten met behulp van de veneuze en urineleider manchet anastomosis techniek.

Orthotopic rat nier transplantatie: een nieuwe en vereenvoudigde chirurgische aanpak

Dit protocol presenteert een robuust, reproduceerbaar model van vascularized composiet allotransplant (VCA) gericht op gelijktijdige studie van immunologie en functioneel herstel. De tijd geïnvesteerd in zorgvuldige techniek in een rechter mid-dij achterpoot orthotopische transplantatie met de hand genaaid vasculaire anastomoses en neurale coaptatie levert de mogelijkheid om functioneel herstel te bestuderen.

Het nemen van de volgende stap: een neurale coaptatie orthotopische achterste ledemaat transplantatie model om functioneel herstel in Rat maximaliseren

We beschrijven een model van heterotopische buikharttransplantatie bij ratten, wat wijzigingen van de huidige strategieën impliceert, die leiden tot een vereenvoudigde chirurgische aanpak. Daarnaast beschrijven we een nieuw afstotingsmodel door in-ear injectie van vitale hartspiercellen, waardoor verdere transplantatie immunologische analyses bij ratten mogelijk zijn.

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Dit artikel presenteert een partieel heterotopisch osteomyocutaan flaptransplantatieprotocol bij ratten en de mogelijke uitkomsten ervan in de follow-up op middellange termijn.

Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Het orthotopische niertransplantatiemodel bij ratten draagt bij aan het onderzoek naar het mechanisme van renale allograftafstoting. Het huidige model verhoogt de overleving van de ontvangers zonder interferentie met de bloedtoevoer en veneuze reflux van het onderlichaam met behulp van een end-to-end anastomose van nierimplantatie en een end-to-side "tunnel" -methode van ureter-blaasanastomose.

Een rat orthotopisch niertransplantatiemodel voor niertransplantaatafstoting

Dit artikel beschrijft een aangepaste techniek voor heterotope gevasculariseerde harttransplantatie met bijgewerkte aseptische techniek, analgesie en anesthesie.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

Dit protocol beschrijft een verbeterde techniek voor orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten, gericht op het verminderen van operationele problemen en het verbeteren van overlevingskansen.

Orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten

Leer orthotope achterpoottransplantatie bij ratten voor onderzoek naar ischemie, reperfusie en immunologische afstoting. Deze cuff-techniek vermindert operatietijd en bloedverlies.

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

Meer video's verkennen