Name: In vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door Intra-vitale Microscopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Leer intravital microscopie voor continue meting van microcirculatie in skeletspier. Deze techniek kwantificeert rode bloedcelflux en plasmastroom bij levende muizen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken JW Lichtman voor zijn advies in in vivo observatie van spieren.

RBC membraankleuring <ol><li> Muis rode bloedcellen werden gecorrigeerd uit dezelfde muizenstam met heparinization. </li><li> Muis RBC werden gekleurd met PKH26 kleurstof (551/567 nm; Red fluorescent cel linker kit, Sigma, USA). </li><li> RBC werden gewassen in PBS en geïncubeerd met 2μM oplossing van PKH26 kleurstof gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. De reactie werd gestopt door het toevoegen van plasma (geïnactiveerd met warmte gedurende 1 uur bij 65 ° C op voorhand) en geïncubeerd gedurende 1 minuut. </li><li> De gebrandschilderde RBC werden gewassen 5 maal met PBS. </li></ol> Muis Voorbereiding <ol><li> Drie tot zes maanden oude mannelijke C57BL/10 muizen werden gebruikt in deze studie. We verdoofde muizen door intraperitoneale injectie van pentobarbital (50mg/kgBW). </li><li> Muizen werden vervolgens geïntubeerd met een 20-gage polyethyleen buis, mechanisch geventileerd en verwarmd bij 37 ° C op een vel Kapton verwarming aangesloten op een thermokoppel sensor en feedback temperatuurregelaar systeem. </li><li> De ventrale zijde van de nek was geschoren. De rechter en linker musculus sternocleidomastoideus spieren werden blootgesteld. De spieren werden ondersteund door een roestvrij stalen houder en superfused met steriele Krebs Ringer-oplossing. </li></ol> Injectie <ol><li> Stained RBC werden verwarmd bij 37 ° C, verdund met Krebs Ringer. 50ul van gekleurde RBC (hematocriet 12%) werd geïnjecteerd in muizen uit de penis ader. </li></ol> In vivo Microscopische observatie van de skeletspieren We volgden Jeff W. Lichtman &#39;s methode met een wijziging: <ol><li> Dieren werden geplaatst op een verwarmings-pad op de top van een met de hand gemaakte ijzeren fase van een Nikon Eclipse-800 microscoop. Water dompelen-objectieven werden gebruikt voor live epi-fluorescent observatie. We zagen PKH26 gebrandschilderde RBC stroomt de binnenkant van bloedvaten onder TL-licht van een kwiklamp. We primaire arteriolen, secundaire arteriolen, capillairen en aderen herkenbaar aan hun rode bloedcellen stromen richting en architecturen. </li><li> Een intensievere SIT Camera (Hamamatsu Photonics, C2400, Japan) en video-frame grabber werden geïnstalleerd om de lage-intensiteit signaal vast te leggen op het real-time video-tarief (30 frames per seconde). Beelden werden opgenomen op DVD als video-bestanden. </li></ol> Spierstimulatie <ol><li> Een elektrische puls werd gegenereerd met behulp van een Peripheral Nerve Stimulator (Innervator 252, Fisher &amp; Paykel Healthcare, Nieuw-Zeeland), en afgeleverd bij spier oppervlak via een gecoate RVS sonde. Een minus sonde eind werd geplaatst op het proximale deel van spier-en een plus einde werd geplaatst op het distale deel van de spier. Tetanus prikkels werden gegeven tegen het tarief van 50 Hz gedurende 5 seconden. De elektrische prikkels veroorzaakte geen directe myofiber schade aan de omgeving van contactoppervlak. </li></ol> RBC flux analyse <ol><li> Opgenomen DVD video-opnames werden overgebracht Video Savant image bestanden via framegrabber software (Video Savant, USA). Video-opnames werden beoordeeld in aangepaste snelheid om de individuele gekleurde RBC te visualiseren. RBC flux werd gemeten door het tellen van RBC, die vloog door middel van een gerichte primaire arteriole per minuut. </li></ol>

<ol><li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).</li>
</ol>

Alle procedures met betrekking tot dierproeven werden beoordeeld en goedgekeurd door de Subcommissie Onderzoek Animal Care van het Massachusetts General Hospital.

Belangrijke techinical punten zijn als volgt: (1) onderhoud van de fysiologische status van het dier (ventilatie, pH van de perfusative oplossing, lichaamstemperatuur), (2) injectie volume van de gebrandschilderde RBC, en (3) de voorwaarden voor observatie (optimale lens selectie, fluorescentie-intensiteit). Mogelijke toekomstige toepassingen zijn als volgt: (a) combinatie met pharmacophysiological en / of moleculaire biologische interventies, (b) lange termijn observatie van de arterioveneuze / arteriolo-sclerose en neovascularisatie.

<table><tbody><tr><td>PKH26-kleurstof</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>551/567 nm; Rode fluorescerende cel-linkerkit</td></tr><tr><td>C57BL/10-muizen</td><td>Dier</td><td></td><td></td><td>Mannen van drie tot zes maanden oud</td></tr><tr><td>pentobarbital</td><td></td><td></td><td></td><td>anestheticum, 50 mg/kgBW, i.p.</td></tr></tbody></table>

in vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door intra-vitale microscopie

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

ACHTERGROND: Regulatory factoren en gedetailleerde fysiologie van in vivo microcirculatie zijn gebleven niet volledig duidelijk na vele verschillende modaliteiten van beeldvorming had uitgevonden. Terwijl veel macroscopische parameters van de bloedstroom reflecteren stroomsnelheid, veranderingen in de snelheid van de bloedstroom en rode bloedcellen (RBC) flux heeft lineaire relatie niet te houden in de microscopische waarnemingen. Er zijn meldingen van discrepantie tussen RBC snelheid en RBC flux, RBC flux en plasma flow volume, en van de ruimtelijke en temporele heterogeniteit van debietregeling in de perifere weefsels in microscopische waarnemingen, een wetenschappelijke basis voor de eis van meer gedetailleerde studies in microcirculatie regelgeving met behulp van intravitale microscopie. METHODEN: We gewijzigd Jeff Lichtman de methode van in vivo microscopische observatie van de muis musculus sternocleidomastoideus spieren. Muizen zijn verdoofd, geventileerd, en geïnjecteerd met PKH26L-fluorescent gelabelde rode bloedcellen voor microscopisch observatie. RESULTAAT &amp; CONCLUSIES: fluorescent gelabelde RBC worden gedetecteerd en goed herkenbaar aan een wide-field microscoop. Spiercontractie opgewekt door elektrische stimulatie geïnduceerde toename van RBC flux. Kwantificering van andere parameters zoals RBC snelheid en de capillaire dichtheid waren haalbaar zijn. Muizen goed verdragen de operatie, injectie van gebrandschilderd RBC, microscopische observatie, en elektrische stimulatie. Geen spieren of bloedvaten zijn aangetast werd waargenomen, wat suggereert dat onze methode is relatief minder invasieve en geschikt voor lange-termijn observaties.

Een nieuwe veelzijdige methode voor het observeren van de microcirculatie wordt gepresenteerd. Het wordt beschouwd als geschikt voor waarneming op lange termijn, en voor de combinatie met pharmacophysiological of moleculaire biologische interventies.

In vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door Intra-vitale Microscopie

ACHTERGROND: De regulerende factoren en de gedetailleerde fysiologie van de in vivo microcirculatie zijn, ondanks vele verschillende modaliteiten van ..., nog niet volledig opgehelderd.

Hallo, mijn naam is Aki, onderzoeker aan de Harvard Medical School, Massachusetts General Hospital. In dit videojournaal laat ik een nieuwe in vivo microscopiemethode zien. Met deze techniek kunnen we de kwantitatieve bloedstroom in microsecretie meten.Het doel van ons experiment is om een systeem op te zetten voor de continue meting van in vivo microsecretie. We hebben dit project ontworpen om de bloedstroom op het niveau van haarvaten en in de voorzijde van spieren van een levend dier onder de microscoop te visualiseren. In vergelijking met conventionele methoden voor in vivo ionmeting, zoals bloedechografie of zuurstofspanning, maakt onze methode de meting van meerdere parameters van de bloedstroom mogelijk, namelijk de flux van rode bloedcellen of de stroomsnelheid en de plasmastroom. Het meten van deze parameters zal veranderingen in de microcirculatie in meer detail onthullen.Vervolgens wordt onze methode toegepast om veranderingen in de bloedstroom te detecteren als reactie op fysiologische stimulatie in levend spierweefsel. Onze methode is eenvoudiger en minder invasief dan conventionele in vivo microscopie, waardoor spieren direct toegankelijk zijn en we in staat zijn om e

in-vivo-micro-circulation-measurement-skeletal-muscle-intra-vital

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Intravitale microscopie om temporele en ruimtelijke hemodynamische en inflammatoire gebeurtenissen in de pial microcirculatie te volgen.

Intravitale Microscopie van de hersenen van muizen microcirculatie met behulp van een gesloten Cranial Window

De endotheliale glycocalyx / endotheliale oppervlaktelaag is ideaal bestudeerd met behulp van intravitale microscopie. Intravitale microscopie is technisch uitdagend in een bewegend orgaan zoals de longen. We zien hoe gelijktijdige helderveld en fluorescentiemicroscopie kan worden gebruikt om endotheeloppervlak laagdikte schatten in een vrij...

In vivo meting van de muis Pulmonary Endothelial oppervlaktelaag

In dit artikel presenteren we een methode om tumor bloedvaten analyseren in vivo met behulp van dynamische contrast-verbeterde fluorescentie videomicroscopie. Twee kwantitatieve parameters werden overgenomen: functionele capillaire dichtheid als gevolg van de doorbloeding van de tumor, en de index lekkage als gevolg van de lekkage van de endotheliale wand.

In vivo beeldvorming van tumorale angiogenese met behulp van fluorescentie confocale videomicroscopie

Intravitale microscopie van de muis M. cremaster microcirculatie biedt een unieke en goed gestandaardiseerd in vivo model voor de analyse van perifere beenmerg stamcellen migratie.

Intravitale Microscopie van de microcirculatie in de Muis cremasterspier voor de Analyse van de perifere stamcelmigratie

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methode voor de dynamische meting en kwantificering van bloedstroomsnelheid binnen individuele bloedvaten van de muizenlevervaten met behulp van intravitale microscopie-beeldvorming in combinatie met een specifieke methodologie voor beeldverwerving en analyse.

Intravitale Microscopie Imaging van de lever volgende<em&gt; Leishmania</em&gt; Infectie: een beoordeling van de lever Hemodynamica

Deze methode beschrijft het gebruik van Quantum Micro-Computed Tomography (MicroCT) om de hartmorfologie, functie, perfusie, metabolisme en levensvatbaarheid te beoordelen met behulp van een gejodeerd contrastmiddel bij muizen met experimenteel geïnduceerde myocardischemie. De techniek kan worden toegepast voor niet-destructieve, longitudinale in vivo beeldvorming met hoge doorvoer van verschillende diermodellen van menselijke hartaandoeningen.

In vivo kwantitatieve beoordeling van myocard structuur, functie, perfusie en levensvatbaarheid Met behulp van Cardiac Micro-computertomografie

Insuline-geïnduceerde vasodilatatie regelt spier perfusie en verhoogt de Microvasculaire oppervlakte (microvasculaire werving) beschikbaar voor opgeloste uitwisseling tussen bloed en weefsel interstitium. Gecombineerde intravital microscopie en contrast-enhanced Ultrasonografie is bedoeld om te beoordelen gelijktijdig insuline de actie op de grotere schepen en de microcirculatie in vivo.

Gecombineerde Intravital microscopie en Contrast-enhanced Ultrasonografie van het stuk van de muis om te bestuderen van de insuline-geïnduceerde vasodilatatie en spier perfusie

Videomicroscopy systemen worden gebruikt voor het onderzoeken van de functionele eigenschappen van geïsoleerde adipeus weefsel arteriolen in reactie op fysiologische en farmacologische stimuli. Deze techniek kan worden gebruikt om te onderzoeken microvasculaire fenotypen in verschillende adipeus weefsel domeinen bij zwaarlijvige mensen.

Beoordeling van menselijk vetweefsel microvasculaire functie met behulp van Videomicroscopy

Hier beschrijven we een eenvoudige, niet-invasieve benadering met behulp van nabij-infrarood spectroscopie en moeten beoordelen reactieve hyperemia, neurovasculaire koppeling skeletspieren oxidatieve capaciteit een enkel bezoek kliniek of laboratorium.

Skeletal Muscle neurovasculaire koppeling, oxidatieve capaciteit en microvasculaire functie met 'One Stop Shop' nabij-infrarood spectroscopie

Het huidige protocol beschrijft beknopte experimentele details over de evaluatie en interpretatie van in vivo koppelgegevens verkregen via elektrische stimulatie van de gemeenschappelijke peroneuszenuw bij verdoofde varkens.

In vivo Meting van Hindlimb Dorsiflexor Isometrisch koppel van varken

Intravitale fluorescentiemicroscopie kan worden gebruikt om leukocyten-endotheelinteracties en capillaire perfusie in realtime te bestuderen. Dit protocol beschrijft methoden om deze parameters in de pulmonale microcirculatie in beeld te brengen en te kwantificeren met behulp van een vacuümgestabiliseerd longbeeldvormingssysteem.

Intravitale widefield fluorescentiemicroscopie van pulmonale microcirculatie bij experimenteel acuut longletsel met behulp van een vacuümgestabiliseerd beeldvormingssysteem

Leer intravital microscopie voor continue meting van microcirculatie in skeletspier. Deze techniek kwantificeert rode bloedcelflux en plasmastroom bij levende muizen.

In vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door Intra-vitale Microscopie

Meer video's verkennen