Name: Het beoordelen van stomatale Reactie op bacteriële cellen Live met behulp van Whole Leaf Imaging (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-02T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Leer een intact-bladmethode om stomatale reacties op levende bacteriën te beoordelen met fluorescentiemicroscopie. Deze techniek minimaliseert weefselschade en bootst natuurlijke omstandigheden na.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd ondersteund door een subsidie ​​van het National Institute of Health en de Universiteit van Texas in Arlington fondsen opgericht op MM.

1. Groeiende planten en voorbereiden van bacteriën <ol><li> Om te beginnen deze procedure te zaaien Arabidopsis zaden op een 1:01:01 v: v: v mengsel van groeimedium (Redi-aarde stekker en zaailing mix, zon Gro), fijne vermiculiet, perliet en. </li><li> Groeien de planten in een groeikamer (22 ° C, 12 uur van 100 mmol / mm 2 / sec per dag licht en 65 ± 5% vocht) en water als dat nodig is. De planten zijn klaar voor gebruik in 4-6 weken als ze jong volledig uitgevouwen blaadjes voorafgaand aan de bouten. </li><li> Twee dagen vóór het begin van het experiment voor te bereiden de bacterie cultuur. Streak Pseudomonas syringae uit glycerol voorraad van gemodificeerde LB-medium (10 g / L trypton, 5 g / L gistextract, 5 g / L NaCl pH 7,0, en 1,5% agar) en incubeer gedurende 24 uur bij 28 ° C. Gebruik verse cultuur aan de inoculum voor te bereiden en altijd kweekplaten vanaf glycerol voorraden als bacteriën minder virulent na sub-kweken. </li><li> Gebruik bacteriën die groeiden op de plaat om een 10 ml vloeibare cultuur van P. start syringae in een 50 mL erlenmeyer. 'S nachts Incubeer de cultuur bij 28 ° C met heftig schudden totdat het optische dichtheid of OD bij 600 nm tussen 0,8 en 1. </li><li> Meet de OD bij 600 en oogsten van de cellen door centrifugatie bij 1360 xg gedurende 10 minuten. Resuspendeer de cellen in gedestilleerd water, zodat het uiteindelijke OD is 0,2. Deze OD komt overeen met 10 8 kolonievormende eenheden (CFU) / ml. Met de bacteriën klaar, ga dan naar de bladeren te bereiden en de test uit te voeren. </li></ol> 2. Leaf Kleuring en Incubatie met bacteriën <ol><li> Om vlekken op de bladeren eerst voor te bereiden 20 uM propidiumjodide of PI-oplossing in water. 10 ml oplossing is voldoende om drie kleine blaadjes vlek op een moment. </li><li> Haal de planten uit de groei van kamer en met een pincet los 3 jonge, volledig uitgebreid bladeren. Dompel de hele bladeren in de PI-oplossing gedurende 5 minuten. Verwijder vervolgens de bladeren en spoel ze kort met gedestilleerd water. </li><li> Volgende plaats een blad met de onderkant naar beneden op een microscoopglaasje. Snijd het blad met een scherp scheermesje in vier stukken met uitzondering van het midden van de ader, zodat het blad ligt plat op de dia. </li><li> Tot broeden de bacteriën met de bladeren, voeg 300 ul van bacteriële suspensie onder het blad stukken op de dia. Zorg ervoor dat de onderkant van het blad is in contact met de inoculum. </li><li> Incubeer de monsters onder dezelfde omgevingsomstandigheden die werden gebruikt om de planten te laten groeien. Op het moment om te bladeren in acht onder de microscoop, de overdracht van het blad stukken om een ​​nieuwe dia met een lager oppervlak naar boven. Merk op dat dekglas niet wordt gebruikt bij de montage van de dia's. Hetzelfde blad monster kan worden afgebeeld meerdere keren tijdens de incubatietijd en een tijdsverloop kan worden ingesteld op basis van de onderzoeksdoelstellingen. </li></ol> 3. Microscopie, meting en data-analyse <ol><li> Hier een laser scanning confocale microscoop (LSM 510 Meta, Carl Zeiss Inc) wordt gebruikt om de bladeren te onderzoeken. Let op de onderkant van de bladeren naar de fluorescentie van PI (excitatie 453 nm, emissie 543 en 620 nm) te detecteren. </li><li> Met dezelfde bladmonsters beelden vastleggen van huidmondjes in de tijd. Sla de foto's voor het meten van de breedte van de stomatale diafragma. </li><li> Meet stomatale opening breedte van ten minste 60 huidmondjes voor elke behandeling op elk tijdstip met behulp van LSM image browser. </li><li> Bereken de gemiddelde en standaardfout voor de stomatale opening breedte. Statistische significantie van de resultaten kan worden berekend met behulp van twee-staart, gekoppeld verstandig Student's t-test. </li></ol> 4. Vertegenwoordiger Beelden van stomatale Reactie op Incubatie met bacteriën <ol><li> Hier is een typisch microscopisch beeld (met behulp van een 20x objectief) van een Arabidopsis bladoppervlak onder laser scanning confocale microscoop in fel gezichtsveld (figuur 1). </li><li> Propidiumjodide vlekken de celwand van levensvatbare cellen het vergroten van de zichtbaarheid van sluitcellen Naast het feit dat voor de identificatie van de onbeschadigde cellen voor het verzamelen van gegevens (figuur 2). Een reeks van stomatale porie-openingen zijn te zien in deze microfoto van volledig gesloten huidmondjes te wijd open huidmondjes. </li><li> Volledig gesloten huidmondjes zijn te herkennen aan de vorm van de wacht cellen (figuur 3). Het diafragma breedte wordt beschouwd als 0 um. </li><li> Voor open huidmondjes (figuur 4) de getoonde diafragma breedte wordt gemeten met behulp van een rechte lijn over het breedste gedeelte van de stomatale porie. </li><li> Dit zijn typische experimentele resultaten van deze test stomatale. Arabidopsis bladeren werden geïncubeerd in het donker met drie verschillende stammen van Pseudomonas syringae. Alleen de bacterie Pst DC3000 was in staat om donkere gesloten huidmondjes, zoals gemeten door de opening breedte van willekeurig geselecteerde 60 huidmondjes per bacteriestam (figuur 5) te openen. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Microfoto van het oppervlak van een blad Arabidopsis. Een beeldveld van het bladoppervlak onder laser scanning confocale microscoop (LSCM) met de 20x doelstelling. Merk op dat stomatale opening is niet zo evident in vergelijking met de fluorescerende te bekijken geholpen door propidiumjodide kleuring (figuur 2). <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Microfoto van het oppervlak van een propidiumjodide gekleurd Arabidopsis blad. Een beeldveld van het bladoppervlak onder laser scanning confocale microscoop (LSCM) met de 20x doelstelling. Let op een reeks van stomatale porie opening. Gele pijlen zijn gewezen op volledig te sluiten huidmondjes en groene pijlen zijn gewezen op wijd open huidmondjes. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Volledig te sluiten huidmondjes geïdentificeerd door de vorm van en de opening tussen de sluitcellen. Het diafragma breedte wordt beschouwd als 0 um. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4. Open huidmondjes met de opening breedte in um. Metingen werden genomen met behulp van de LSCM browser gebaseerd op een rechte lijn over het breedste gedeelte van de stomatale porie. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig5.jpg" alt="Figuur 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 5"> Figuur 5. Stomatale opening van Arabidopsis bladeren geïncubeerd met drie stammen van Pseudomonas syringae pv tomaat:.. DC3118, DB29 en de DC3000 planten werden bewaard in het donker tijdens het experimenteren tijd. De resultaten zijn weergegeven als de gemiddelde (n = 50-70) ± standaard fout. Statistische significantie werd gedetecteerd met tweezijdig Student's t-test. Het experiment werd drie keer herhaald met vergelijkbare resultaten.

<ol><li>Brooks, D. M., Hernandez-Guzman, G., Kloek, A. P., Alarcon-Chaidez, F., Sreedharan, A., Rangaswamy, V., Penaloza-Vazquez, A., Bender, C. L., Kunkel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+a+well-defined+series+of+coronatine+biosynthetic+mutants+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant-Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of a well-defined series of coronatine biosynthetic mutants of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000.</a> Mol Plant-Microbe Interact. 17, 162-174 (2004).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKatagiri%2C+F+%22The+Arabidopsis+Book%22">The Arabidopsis Book</a>. Somerville, C. R., Meyerowitz, E. M. , American Society of Plant Biologists. Rockville, MD. (2002).</li>
<li>Ma, S. W., Morris, V. L., Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+DNA+region+required+for+production+of+the+phytotoxin+coronatine+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant-Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Characterization of a DNA region required for production of the phytotoxin coronatine by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Mol Plant-Microbe Interact. 4, 69-74 (1991).</li>
<li>Melotto, M., Underwood, W., Koczan, J., Nomura, K., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata+function+in+innate+immunity+against+bacterial+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Plant stomata function in innate immunity against bacterial invasion.</a> Cell. 126, 969-980 (2006).</li>
</ol>

We hebben presenteerde een rechttoe rechtaan procedure om stomatale diafragma te meten in intacte bladweefsel waardoor een eenvoudige beoordeling van stomatale reactie op de verschillende behandelingen. Hoewel we hebben gepresenteerde resultaten met behulp van het modelsysteem Arabidopsis / Pseudomonas syringae, kan de intacte blad stomatale test mogelijk worden uitgevoerd met een plant-bacterie combinatie. Het protocol kan eenvoudig worden aangepast om de gewenste groei van andere planten en bacteriële pathogenen te passen. Het algemene principe en de procedure blijven hetzelfde. Daarnaast kan deze methode nuttig voor onderzoekers die willen functionele output van sluitcellen niet alleen tegen microben leven studeren, maar ook voor andere stimuli en chemische stoffen onder omstandigheden die het blad de natuurlijke omgeving te behouden. Hele blad kan moeilijk zijn om de afbeelding door zijn dikte en ongelijke topografie. Dit probleem kan worden verholpen door het verwijderen van het midden van de ader van het blad, zodat het ligt plat op de glijbaan en het gebruik van confocale microscopie. Maar ook andere vormen van fluorescentie microscoop gebruikt worden om hoge resolutie afbeeldingen van het bladoppervlak te verkrijgen.

<table><tbody><tr><td>Propidiumjodide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1421-1</td><td></td></tr><tr><td>Gistextract</td><td>Difco Laboratories</td><td>0127-01-7</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride</td><td>VWR international</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio Express</td><td>J637-2500G</td><td></td></tr><tr><td>Plantengroeikamer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Schudincubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laser scanning confocale microscoop</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

het beoordelen van stomatale reactie op bacteriële cellen live met behulp van whole leaf imaging

Assessing Stomatal Response to Live Bacterial Cells using Whole Leaf Imaging

Huidmondjes zijn natuurlijke openingen in de installatie epidermis die verantwoordelijk is voor de uitwisseling van gassen tussen plant interieur en omgeving. Ze worden gevormd door een paar van de wacht cellen, die in staat zijn om de stomatale porie dicht in reactie op een aantal externe factoren, zoals lichtintensiteit, koolstofdioxide concentratie, en de relatieve vochtigheid (RH). De stomatale porie is ook de belangrijkste route voor pathogeen toegang tot bladeren, een cruciale stap voor de ziekte van ontwikkeling. Recente studies hebben onthuld dat de sluiting van de porie is effectief in het minimaliseren van bacteriële ziekte in Arabidopsis planten, een integraal onderdeel van plant aangeboren immuniteit. Eerder hebben we gebruikt epidermale peelings om stomatale respons te beoordelen op bacteriën (Melotto et al., 2006.) Leven; ook om de gunstige milieu-omstandigheden voor zowel planten epidermale peelings en ​​bacteriële cellen is uitdagend. Bladepidermis levend gehouden kan worden en gezond met MES buffer (10 mM KCl, 25 mM MES-KOH, pH 6,15) voor de elektrofysiologische experimenten sluitcellen. Echter, deze buffer is niet geschikt voor het verkrijgen van bacteriële suspensie. Aan de andere kant kan bacteriële cellen worden in leven gehouden in water dat niet eigen is aan epidermale schillen te behouden voor een lange periode van tijd. Wanneer een epidermale schil drijft op het water, de cellen in de schil, die aan de lucht drogen blootgesteld binnen 4 uur het beperken van de timing om het experiment uit te voeren. Een ideale methode voor het beoordelen van het effect van een bepaalde stimulus op sluitcellen moet indienen minimale interferentie stomatale fysiologie en om de natuurlijke omgeving van de plant zoveel mogelijk. We daarom een ​​nieuwe methode ontwikkeld om stomatale respons te beoordelen aan bacteriën in die bladeren verwonden en manipulatie sterk wordt geminimaliseerd gericht op een gemakkelijk reproduceerbaar en betrouwbaar stomatale assay te bieden wonen. Het protocol is gebaseerd op de kleuren van intacte blad met propidiumjodide (PI), incubatie van kleuren blad met bacteriële suspensie, en observatie van de bladeren onder laser scanning confocale microscoop. Tot slot is deze methode laat voor de observatie van dezelfde live-blad steekproef over langere tijd met behulp van omstandigheden die nauw nabootsen van de natuurlijke omstandigheden waaronder planten worden aangevallen door ziekteverwekkers.

We hebben een eenvoudige en reproduceerbare protocol om stomatale reactie op de levende bacteriën te openen. Deze methode minimaliseert verwonden en manipulatie van het blad ten opzichte van het gebruik van de epidermale schillen eerder gerapporteerd.

Het beoordelen van stomatale Reactie op bacteriële cellen Live met behulp van Whole Leaf Imaging

Huidmondjes zijn natuurlijke openingen in de epidermis van de plant die verantwoordelijk zijn voor de gasuitwisseling tussen het binnenste van de plant en de omgeving. Ze worden gevormd door een paar...

In deze procedure wordt bladbeeldvorming gebruikt om de beweging van sluitcellen als reactie op levende bacteriële cellen te beoordelen. Eerst worden de bacteriën gekweekt vanuit een glycerolstock en wordt een inoculum voorbereid. Vervolgens worden jonge, gezonde bladeren verzameld en gekleurd met propidiumjodide.De gekleurde bladeren worden uitgesneden en de bladfragmenten worden geïncubeerd bovenop een bacteriële suspensie. Ten slotte wordt het bladoppervlak onder de microscoop waargenomen, waarna de stomata-openingen kunnen worden gemeten. De resultaten verkregen met fluorescentiemicroscopie tonen veranderingen in de stomata-opening als reactie op bacteriën.Het belangrijkste voordeel van deze methode ten opzichte van bestaande methoden, zoals het gebruik van epidermale peels, is dat het blad dat in contact komt met de bacteriën intact blijft, waardoor de natuurlijke omstandigheden voor bacteriële penetratie in de bladeren worden nagebootst. Om deze procedure te starten, worden Arabidopsis-zaden gezaaid op een mengsel van groeimedium, vermiculiet en perliet in een verhouding van 1:1:1. Laat de planten groeien in een groeikamer en bewater indien nodig.De planten zijn na vier tot zes weken klaar voor gebruik, wanneer ze jonge, volledig uitgevouwen bladeren hebben voordat ze in bloei schieten. Bereid twee dagen voor aanvang van het experiment de bacteriecultuur-streek voor. Streep Pseudomonas ringe uit een glycerolvoorraad op gemodificeerd LB-medium en incubeer dit gedurende 24 uur bij 28 °C.Gebruik een verse cultuur voor het bereiden van het inoculum en start cultuurplaten altijd vanuit glycerolstocks. Aangezien bacteriën na subcultivering minder virulent worden, moeten bacteriën die op de plaat zijn gegroeid worden gebruikt om een vloeibare cultuur van 10 milliliter pseudomona singe te starten. Incubeer de cultuur gedurende de nacht in een erlenmeyer van 50 milliliter bij 28 degrees Celsius onder krachtig schudden tot een optische dichtheid (OD) bij 600 nanometers tussen 0,8 en 1 is bereikt.Meet de OD bij 600 en oogst de cellen door centrifugatie bij 1.360 ×g gedurende 10 minuten. Resuspendeer de cellen in gedestilleerd water zodat de uiteindelijke OD 0,2 is. Deze OD komt overeen met 10⁸ colony forming units per milliliter.Nadat de bacteriën gereed zijn, kunt u overgaan tot het voorbereiden van de bladeren en het uitvoeren van de assay om de bladeren te kleuren. Bereid eerst een 20 µM propidiumjodide- of PI-oplossing in water. 10 mL van deze oplossing is voldoende om drie kleine bladeren tegelijk te kleuren.Haal de planten uit de groeikamer en verwijder met een pincet drie jonge, volledig ontplooide bladeren. Dompel de volledige bladeren vijf minuten lang onder in de PI-oplossing. Verwijder vervolgens de bladeren en spoel ze kort af met gedestilleerd water.Plaats vervolgens een blad met de onderzijde naar beneden op een objectglas. Snijd het blad met een scherp scheermesje in vier stukken, zonder de hoofdnerf mee te nemen, zodat het blad plat op het objectglas ligt om de bacteriën met de bladeren te incuberen. Voeg 300 µL bacteriële suspensie toe onder de bladstukjes op het objectglas en zorg ervoor dat de onderzijde van het blad in contact is met het inoculum.Incubeer de monsters onder dezelfde omgevingsomstandigheden die zijn gebruikt voor de kweek van de planten. Wanneer het tijd is om de bladeren onder de microscoop te observeren, brengt u de bladfragmenten over naar een nieuw objectglas met de onderzijde naar boven gericht. Let op dat er geen dekglas wordt gebruikt bij het monteren van de preparaten.Hetzelfde bladsample kan meerdere malen tijdens de incubatie worden afgebeeld, waarbij een tijdreeks kan worden opgezet op basis van de onderzoeksdoelstellingen. Hier wordt een laser scanning confocale microscoop gebruikt om de bladeren te bestuderen, de onderzijde van de bladeren te observeren om de fluorescentie van PI in dezelfde bladsamples te detecteren en beelden van de huidmondjes gedurende een bepaalde tijd vast te leggen. Bewaar de beelden om de breedte van de huidmondopening te meten.Meet de breedte van de stomatale opening van ten minste 60 huidmondjes per behandeling op elk tijdstip. Bereken met de LSM-afbeeldingsbrowser het gemiddelde en de standaardfout voor de breedte van de stomatale opening. De statistische significantie van de resultaten kan worden berekend met behulp van tweezijdige gepaarde t-toetsen van Student.Hier is een typische microscopische afbeelding van het bladoppervlak van arabidopsis onder een laser-scanning confocale microscoop. In brightfield-weergave kleurt propidiumjodide de celwand van levensvatbare cellen, waardoor de zichtbaarheid van sluitcellen wordt vergroot en de identificatie van onbeschadigde cellen mogelijk wordt. In deze micrografen is een reeks stomatale openingen te zien, van volledig gesloten stoma tot wijd open stoma.Volledig gesloten huidmondjes worden geïdentificeerd aan de hand van de vorm van de sluitcellen. De openingbreedte wordt beschouwd als 0 µm voor open huidmondjes. De weergegeven openingbreedte is gemeten met een rechte lijn die door het breedste deel van de huidmondjesopening is getrokken.Dit zijn typische experimentele resultaten van de assay voor inoculatie van levende bladeren. Arabidopsis-bladeren werden in het donker geïncubeerd met drie verschillende stammen van Pseudomonas; alleen de bacterie P-S-T-D-C 3000 was in staat om donker-gesloten huidmondjes te openen, gemeten aan de hand van de openingwijdte van 60 willekeurig geselecteerde huidmondjes per bacteriële stam. Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van geplande bacteriële interacties om de mechanismen van de vroege respons op pathogenen in plantensoorten te onderzoeken.

assessing-stomatal-response-to-live-bacterial-cells-using-whole-leaf

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

We beschrijven het gebruik van perfluorodecalin als een infiltratieve montage medium. Dit is een eenvoudige methode voor het verbeteren van de diepte van beeldvorming...

Een eenvoudige methode voor de Imaging Arabidopsis Met behulp van Leaves Perfluorodecalin als een Infiltratieve Imaging Medium

Source: Lee, H. et. al., Split Green Fluorescent Protein System to Visualize Effectors Delivered from Bacteria During Infection. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates a method for monitoring bacterial infection and effector protein delivery in plant cells using split superfolder green fluorescent protein (sfGFP) complementation combined with confocal microscopy. The approach enables precise visualization of effector translocation into the host cell cytosol.

Monitoring Bacterial Infection and Effector Protein Delivery in Plant Cells

Ontrafelen hoe fysiologie en morfologie worden gekoppeld staat een dieper inzicht in de mechanistische werking van de bladeren van de planten. We presenteren zowel een procedure om de parameters van stomataire regelgeving ontlenen stomatale geleidbaarheid metingen en correlaties met traditionele functionele blad kenmerken.

Betrekking stomatale geleidbaarheid om Leaf functionele kenmerken

Kwantificering van ziekteverwekkergroei is een krachtig hulpmiddel om verschillende Arabidopsis thaliana (hierna: Arabidopsis) immuunresponsen te karakteriseren. De hier beschreven methode presenteert een geoptimaliseerde spuitinfiltratie-assay om de groei van Pseudomonas syringae pv. maculicola ES4326 in volwassen Arabidopsis-bladeren te kwantificeren.

Bacteriële Leaf Infiltratie Assay voor Beeldende karakterisatie van Plant Defense Reacties met behulp van de<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystem

Protocollen om de dynamica van chloroplast-stromules te onderzoeken, de stroma-gevulde buisjes die zich uitstrekken vanaf het oppervlak van chloroplasten, worden beschreven.

Visualiseren Stromule Frequency met fluorescentiemicroscopie

Wij rapporteren een eenvoudig en veelzijdig methode voor het uitvoeren van fluorescerende live-imaging van Arabidopsis thaliana bladeren gedurende een langere periode van tijd. We gebruiken een transgene Arabidopsis plant die een fluorescerende verslaggever-gen uitdrukt onder de controle van een promotor immuniteit-gerelateerde als voorbeeld voor het verkrijgen van Spatio begrip van de immuunreacties van de plant.

Een veelzijdige methode voor de montage van Arabidopsis vertrekt naar Intravital Time-lapse Imaging

Hier beschrijven we een hydroponische plantengroei test om de aanwezigheid van soorten te kwantificeren en de ruimtelijke verdeling van bacteriën te visualiseren tijdens de initiële kolonisatie van planten wortels en na hun overdracht in verschillende groei omgevingen.

Monitoring van bacteriële kolonisatie en onderhoud op Arabidopsis thaliana wortels in een drijvend Hydroponisch systeem

Het huidige protocol beschrijft een methode die eencellige genexpressieanalyse mogelijk maakt op Pseudomonas syringae-populaties die in de apoplast van de plant worden gekweekt.

Eencellige analyse van de expressie van Pseudomonas syringae-genen in het plantenweefsel

Hier presenteren we een eenvoudige methode voor directe observatie en geautomatiseerde meting van stomatale reacties op bacteriële invasie in Arabidopsis thaliana. Deze methode maakt gebruik van een draagbaar stomatale beeldvormingsapparaat, samen met een beeldanalysepijplijn die is ontworpen voor bladbeelden die door het apparaat zijn vastgelegd.

Directe observatie en geautomatiseerde meting van stomatale responsen op Pseudomonas syringae pv. tomaat DC3000 in Arabidopsis thaliana

Dit protocol beschrijft een high-throughput benadering voor het evalueren van plantionenlekkage, peroxidaseactiviteit en calloseproductie in hetzelfde monster.

Evaluatie van bladreacties op microbiële secundaire metabolieten met behulp van een high-throughput formaat

Dit protocol presenteert een vergelijkende methode om huidmondjes- en epidermale kenmerken bij twee verschillende soorten te beoordelen met behulp van epidermale peelings, clearingtechnieken en AI-ondersteunde beeldanalyse. Het doel is om een hoog-doorvoerbare, reproduceerbare kwantificatie van cellulaire structuren die ten grondslag liggen aan de functie van huidmondjes mogelijk te maken voor landbouwtoepassingen en breed plantenonderzoek.

Karakterisering van huidmondjes en epidermale kenmerken met behulp van peelings, clearing en AI-gebaseerde beeldanalyse

Leer een intact-bladmethode om stomatale reacties op levende bacteriën te beoordelen met fluorescentiemicroscopie. Deze techniek minimaliseert weefselschade en bootst natuurlijke omstandigheden na.

Het beoordelen van stomatale Reactie op bacteriële cellen Live met behulp van Whole Leaf Imaging

Meer video's verkennen