Name: Behoud van Wolbachia in Cell-vrij medium (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Leer Wolbachia pipientis te zuiveren uit Anopheles gambiae-cellen en te kweken in celvrij medium. Deze methode omvat glaskralenlyse, differentiële centrifugatie en viabiliteitsbepassing voor microbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs hebben niets te melden.

behoud van wolbachia in cell-vrij medium

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

In deze video protocol worden de procedures aangetoond dat (1) te zuiveren Wolbachia symbionten uit gekweekte muggen cellen, (2) gebruik maken van een fluorescerende test om de levensvatbaarheid van het gezuiverde Wolbachia vast te stellen en (3) handhaven van de nu extracellulaire Wolbachia in cel-vrij medium . Gezuiverd Wolbachia in leven blijven in de extracellulaire fase, maar niet repliceren pas weer geënt in eukaryote cellen. Extracellulaire Wolbachia gezuiverd op deze manier zal levensvatbaar blijven voor minstens een week op kamertemperatuur, en mogelijk langer. Gezuiverd Wolbachia zijn geschikt voor micro-injectie, DNA-extractie en andere toepassingen.

Deze video beschrijft een methode voor het zuiveren van Wolbachia pipientis van een Anopheles gambiae cellijn en vervolgens het kweken van de endosymbiont in cel-vrij medium. Een test voor de levensvatbaarheid van de bacterie is aangetoond.

Behoud van Wolbachia in Cell-vrij medium

In dit videoprotocol worden procedures gedemonstreerd om (1) Wolbachia-symbionten te zuiveren uit gekweekte muggencellen, (2) een fluorescentie-assay te gebruiken om ...

Mijn naam is Courtney Ston. Ik werk bij de Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health in het laboratorium van Dr. Jason Rascon. Vandaag gaan we bacteriën zuiveren uit gekweekte insectencellen.Het is in feite een zeer eenvoudige procedure. We beginnen met het oogsten van onze cellen en vervolgens worden de membranen van de eukaryote gastheercel fysiek afgebroken middels lysis met glaskralen. Daarna gebruiken we differentiële centrifugatie om de bacteriën te scheiden van het celpuin van de gastheer.Vervolgens gebruiken we een reeks filtratiestappen om gastcelpartikels verder te verwijderen, zodat we aan het einde alleen het gezuiverde bacteriële pellet overhouden. Dit is overigens een van de belangrijkste vereisten. Dit is een celcultuurkap, die wordt gebruikt om alles steriel te houden omdat celculturen zeer gemakkelijk besmet raken.We hebben ook celkweekmedium nodig, de cellen zelf, en we kweken deze in plastic kolfjes. Daarnaast hebben we glaskralen van drie millimeter, conische buizen van 50 ml en een centrifuge nodig die in staat is tot hoge centrifugatiesnelheden, ongeveer 18.000 G om onze bacteriën te pelleteren, maar die ook ongeveer 3000 G of 2500 G kan draaien om onze

maintaining-wolbachia-in-cell-free-medium

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila

We beschrijven een protocol met behulp...

Kwantitatieve en geautomatiseerde high-throughput genoomwijde RNAi schermen in C. elegans</em

Vampiric Isolatie van extracellulaire vloeistof uit<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Deze video introduceert een methode om embryonale C. eleganscellen in vitro te isoleren en steriel te gekweekt.

Enzymatische spijsvertering en handmatige dissociatie: een methode om C. elegans-embryo's voor celcultuur te bereiden

C. elegans is meestal gekweekt op vaste agar platen of in vloeibare culturen bezaaid met E. coli. Om te voorkomen dat bacteriële bijproducten van verstorende toxicologische en nutritionele studies, hebben we gebruik gemaakt van een axenische vloeibaar medium, CeHR, te groeien en te synchroniseren een groot aantal wormen voor een reeks afgeleide toepassingen.

Kweken Caenorhabditis elegans In Axenische Liquid Media en Creatie van transgene Worms door bombardement met microdeeltjes

Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia worden vrijgegeven in natuurlijke populaties te onderdrukken van de overdracht van arboviruses. We worden methoden beschreven aan achterzijde Ae. aegypti met Wolbachia infecties in het laboratorium voor experimenten en veld release, voorzorgsmaatregelen nemen om laboratorium aanpassing en selectie te minimaliseren.

Behoud van Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia

Dit protocol wordt beschreven hoe om virale infectie in vivo bij Drosophila melanogaster met behulp van de methode van de nano-injectie en de basistechnieken voor het analyseren van virus-gastheer interactie.

Oprichting van virale infectie en analyse van Host-Virus interactie bij Drosophila Melanogaster

Vier methoden werden gebruikt om intracellulaire Wolbachia te detecteren, die elkaar aanvulden en de detectienauwkeurigheid van Wolbachia-infectie van Aedes albopictus-afgeleide Aa23 en Aa23-T genezen van inheemse Wolbachia-infectie met behulp van antibiotica verbeterden.

Detectie van Wolbachia Stam wAlbB in Aedes albopictus cellijnen

Hier wordt een geoptimaliseerd protocol gepresenteerd voor het kweken van geïsoleerde individuele nematoden op vaste media in microgefabriceerde multi-well-apparaten. Met deze aanpak kunnen individuele dieren gedurende hun hele leven worden gevolgd op een verscheidenheid aan fenotypen die verband houden met veroudering en gezondheid, waaronder activiteit, lichaamsgrootte en -vorm, bewegingsgeometrie en overleving.

Langetermijnkweek en monitoring van geïsoleerde Caenorhabditis elegans op vaste media in multiwell-apparaten

Hier presenteren we een protocol om geïsoleerde individuele nematoden op vaste media te kweken voor levenslange fysiologische parametertracking en fluorescentiekwantificering. Dit kweeksysteem omvat een palmitinezuurbarrière rond putten met één worm om te voorkomen dat dieren vluchten, waardoor aversieve interventies mogelijk zijn, waaronder pathogene bacteriën en chemische stressoren.

Langetermijnkweek van individuele Caenorhabditis elegans op vaste media voor longitudinale fluorescentiemonitoring en aversieve interventies

Cellijnen zijn nuttig bij studies naar intracellulaire organismen die niet buiten hun gastheercellen kunnen worden gekweekt. Hoewel met Wolbachia geïnfecteerde lijnen veel ontdekkingen mogelijk hebben gemaakt, kan de heterogeniteit binnen deze lijnen leiden tot variabele experimentele resultaten. We presenteren een protocol voor het genereren van eencellige klonen en continue culturen van met Wolbachia geïnfecteerde JW18-cellen.

Generatie van monoklonale culturen uit met Wolbachia geïnfecteerde Drosophila melanogaster JW18-cellijn

Leer Wolbachia pipientis te zuiveren uit Anopheles gambiae-cellen en te kweken in celvrij medium. Deze methode omvat glaskralenlyse, differentiële centrifugatie en viabiliteitsbepassing voor microbiologisch onderzoek.

Behoud van Wolbachia in Cell-vrij medium

Meer video's verkennen