Name: Inductie en Klinische Scoring van chronische-Relapsing experimentele autoimmune encefalomyelitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Leer de inductie en klinische scoring van chronisch-relapsende experimentele auto-immuun encefalomyelitis bij DA-ratten. Deze methode ondersteunt onderzoek naar multiple sclerose en therapeutische strategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Inductie en monitoring van chronische recidiverende EAE De emulsie is een 1:1 mengsel van antigeen in waterige oplossing toegevoegd aan aangevuld met Freund&#39;s volledig adjuvans. Het is zeer belangrijk om het antigeen toe te voegen aan de hulpstof en niet andersom! Er is een veel afval bij het maken van en het injecteren van een emulsie. Altijd bereiden 1,5 of 2 keer meer dan wat je nodig hebt. Gebruik geautoclaveerd mortier, de stamper, glazen spuiten, en bruggen. Alle kunststoffen moet steriel zijn. Het preparaat kan worden gedaan op een regelmatige laboratoriumtafel. 1. Voorbereiding van de aangevuld met adjuvante Weeg 30 mg van het Mycobacterium tuberculosis (Difco catalogus # 231141) en plaats deze in een vijzel. Maak in dunne poeder zonder op te hard om te voorkomen dat het breken van de bacteriën. Voeg 10 ml van de volledige Freund&#39;s adjuvans H37Ra (Difco catalogus # 231131) en meng. Dit aangevuld met adjuvans bevat nu 4 mg / ml Mycobacterium tuberculosis. Transfer naar een buis. 2. Voorbereiding van het ruggenmerg homogenaat Verzamel ruggenmerg van DA ratten (leeftijd / geslacht onverschillig) en op te slaan ingevroren bij -80 ° C. Weeg de bevroren ruggenmerg te hebben genoeg aan 1:1 (gewicht: volume) mengen met het aangevulde adjuvans. Hak het ruggenmerg zo fijn mogelijk met een scheermesje, over te dragen aan de mortel worden gebruikt in paragraaf 1, en maken een pasta met de stamper. 3. De voorbereiding van de emulsie <ol><li> Plaats aangevuld volledig Freund&#39;s adjuvans in een buis. Vortex op hoge snelheid. Voeg het ruggenmerg homogenaat druppelsgewijs, terwijl vortexen. Wanneer alle van het ruggenmerg homogenaat wordt toegevoegd, vortex nog 5 minuten. Het mengsel moet draaien licht roze. </li><li> Doe de emulsie in een 5 ml glazen injectiespuit en een link naar een andere 5 ml glazen injectiespuit met behulp van een 18G brug (Fisher catalogus # 14 tot 825-17L). Stuur de emulsie uit een spuit naar de andere totdat het wordt moeilijk (5-10 min). Als er meer dan 5 ml van de emulsie wordt bereid, gebruik maken van verschillende 5 ml spuiten NIET groter spuiten gebruiken. </li><li> De emulsie kan worden opgeslagen in de spuiten bij 4 ° C gedurende 3 weken. Ik raad te bereiden op ten minste 12 uur van tevoren om te controleren dat het niet breken. Het moet blijven dik en niet gescheiden in 2 fasen. De kleur zal &#39;s nachts veranderen in een licht geel of beige. </li></ol> 4. Immunisatie van de ratten <ol><li> Meng de emulsie in de spuiten voor een paar minuten en transfer naar de spuit die voor de injectie. Subcutaan injecteren 200 ul aan de basis van de staart met behulp van 23G naalden en 3 ml Luer-Lock spuiten onder de kortlopende anesthesie. </li><li> De ontvangers zijn 7-9 weken oude vrouwelijke DA ratten. We krijgen onze ratten van Harlan Sprague-Dawley. </li><li> Ratten moeten tweemaal per dag worden geobserveerd en gewogen dagelijks. Klinische symptomen worden verwacht 7-15 dagen na de injectie van de emulsie. </li></ol> Klinische scoren: 0: geen ziekte 0.5: distale slap tail 1: slap tail 2: milde paraparese, ataxie 3: matig paraparese, de ratten trips van tijd tot tijd 3.5: een achterste ledematen is verlamd, de andere zetten 4: complete achterste ledematen verlamming 5: complete achterste ledematen verlamming en incontinentie 6: stervende, ademhalingsproblemen, niet eten of drinken. Euthanaseren onmiddellijk.

CB en KGC zijn mede-oprichters en consultants voor Airmid Inc

Er zijn een paar belangrijke overwegingen voor dit protocol. Genetica van DA ratten zullen enigszins verschillen afhankelijk van welke fokker ze zijn gekocht. Deze verschillen kunnen verhogen of verlagen van de gevoeligheid van ratten inductie EAE. Als je ratten zijn meer vatbaar voor EAE wil je de kracht van de immunisatie te verminderen door het gebruik van niet-aangevuld met volledig Freund&#39;s adjuvans of zelfs incompleet Freund&#39;s adjuvans. U kunt ook het verminderen van de hoeveelheid emulsie geïnjecteerd of verdunnen van...

<table><tbody><tr><td>Comple Freund&amp;rsquo;s adjuvant</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Geproduceerd door Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Geproduceerd door Difco</td></tr><tr><td>DA rat</td><td>Dier</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Vrouwtjes, 7-9 weken oud.</td></tr><tr><td>Glazen spuiten - 5 ml</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Metalen naald - 18G</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lok plastic spuiten - 3 ml</td><td>Instrument</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Naalden - 20G 1 1/2</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

inductie en klinische scoring van chronische-relapsing experimentele autoimmune encefalomyelitis

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerose (MS) is een chronische ontstekingsziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) die vaak bij jonge volwassenen. Het wordt gekenmerkt door demyelinisatie en gliale schrikken in gebieden verspreid in de hersenen en het ruggenmerg. Deze letsels veranderen zenuwgeleiding en induceren de invaliderende neurologische tekorten die variëren met de locatie van de gedemyeliniseerde plaques in het centraal zenuwstelsel (bijv. paraparese, verlamming, blindheid, incontinentie). Experimentele auto-immune encephalomyelitis (EAE) is een model voor MS. EAE werd voor het eerst per ongeluk veroorzaakt bij mensen tijdens de vaccinatie tegen hondsdolheid, met behulp van virussen gekweekt op konijnen ruggenmerg. Resten van spinale geïnjecteerd met het geïnactiveerd virus veroorzaakte het CZS ziekte. Naar aanleiding van deze waarnemingen, was een eerste model van EAE beschreven in de niet-menselijke primaten geïmmuniseerd met een CNS homogenaat door rivieren en Schwenther in 1935. EAE is sindsdien gegenereerd in een variëteit van soorten en kunnen volgen verschillende cursussen afhankelijk van de soort / stam en immuniseren gebruikte antigeen. Bijvoorbeeld, immuniseren Lewis ratten met myeline basisch eiwit in emulsie met adjuvans induceert een acute model van EAE, terwijl dezelfde antigeen veroorzaakt een chronische ziekte bij cavia&#39;s. De EAE-model hier beschreven wordt veroorzaakt door het immuniseren van DA ratten tegen DA rat het ruggenmerg in de emulsie in volledig Freund&#39;s adjuvans. Ratten ontwikkelen een oplopende slappe verlamming binnen 7-14 dagen na de immunisatie. Klinische symptomen volgen een relapsing-remitting koers over een aantal weken. Pathologie blijkt uit grote immuun infiltreert in het CZS en demyelinisatie plaques. Speciale overwegingen voor het nemen van de zorg voor dieren met EAE worden beschreven aan het eind van de video.

Deze video toont de inductie en de klinische scoren van een diermodel van multiple sclerose: chronisch-recidiverende experimentele auto-immune encephalomyelitis in DA ratten. De ziekte, veroorzaakt door het immuniseren van ratten met een emulsie met hele rat het ruggenmerg en de volledige Freund&#39;s adjuvans, presenteert klinische symptomen lijken op de menselijke ziekte.

Inductie en Klinische Scoring van chronische-Relapsing experimentele autoimmune encefalomyelitis

Multiple sclerose (MS) is een chronische inflammatoire ziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) die veel voorkomt bij jongvolwassenen. Het wordt gekenmerkt door ...

Ik ben Christine Beaton. Ik ben assistent-onderzoeker in het laboratorium van George Chen van de afdeling Fysiologie en Biofysica van de University of California in Irvine. De komende dagen zal ik u laten zien hoe u chronisch recidiverende EAE, wat staat voor Experimentele Auto-immuun Encefalomyelitis, induceert en monitort in DA-ratten.Dit is een diermodel voor multiple sclerose, of beter gezegd, een van de diermodellen voor multiple sclerose. Het wordt gekenmerkt door een opstijgende slapteverlamming bij deze dieren en histologische kenmerken die lijken op de menselijke ziekte. Dit proces zal enkele dagen in beslag nemen.Op de eerste dag zal ik u laten zien hoe u de genische emulsie bereidt met naïef rood ruggenmerghomogenaat in compleet trans-adjuvans. Op de tweede dag zal ik u laten zien hoe u de ratten immuniseert voor EAE, waarna we zeven tot 15 dagen wachten om de eerste klinische tekenen bij deze dieren te observeren, waarna ik u de verschillende stadia van progressie van EAE in verschillende dieren zal tonen. Ik zal u eerst alle reagentia en materialen laten zien die nodig zijn om de emulsie te bereiden.Ik gebruik compleet Freunds adjuvans H 37 Ra, maar hoewel dit al mycob

induction-clinical-scoring-chronic-relapsing-experimental-autoimmune

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In deze video laten we zien hoe de mononucleaire cellen van het centrale zenuwstelsel van ratten met experimentele auto-immune encephalomyelitis isoleren.

Isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE

The video demonstrates the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model by injecting a combination of myelin oligodendrocyte glycoproteins and inactivated Mycobacterium tuberculosis. The model enables researchers to study disease mechanisms and test therapeutic interventions.

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

Dit manuscript beschrijft de methoden voor inductie en scoren van het experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) model, samen met de beoordeling van immuunceldistributie en mRNA-cytokineniveaus in lymfeklieren, milt, bloed en ruggenmerg met behulp van flowcytometrie en kwantitatieve PCR, respectievelijk, in verschillende fasen van de ziekte.

Inductie van experimentele auto-immune Encefalomyelitis in Muizen en evaluatie van de ziekte-afhankelijke Verdeling van immuuncellen in verschillende weefsels

Hier presenteren we protocollen om te onderzoeken op bijzondere waardeverminderingen van de neurovasculaire eenheid tijdens de experimentele autoimmune encefalomyelitis in vivo. Wij ingaan specifiek op het bepalen van de bloed - hersenbarrière permeabiliteit en gelatinase activiteit die betrokken zijn bij migratie van leukocyten in de glia-limitans.

Visualiseren van de waardevermindering van het endotheel en gliale belemmeringen van de neurovasculaire eenheid tijdens de experimentele Autoimmune encefalomyelitis In Vivo

Dit manuscript presenteert een protocol om actieve experimentele auto-immuunenceomyelitis (EAE) bij muizen te induceren. Een methode voor de isolatie en karakterisering van de geïnfiltreerde lymfocyten in het centrale zenuwstelsel (CNS) wordt ook gepresenteerd om te laten zien hoe lymfocyten betrokken zijn bij de ontwikkeling van cns auto-immuunziekte.

Flow Cytometrische Analyse van lymfocyten infiltratie in het centrale zenuwstelsel tijdens experimentele auto-immuunenceomyelitis

Het huidige protocol beschrijft de inductie van experimentele auto-immune encefalomyelitis in een muismodel met behulp van myeline oligodendrocytenglycoproteïne en het monitoren van het ziekteproces met behulp van een klinisch scoresysteem. Experimentele auto-immuun encefalomyelitis-gerelateerde symptomen worden geanalyseerd met behulp van muis femur micro-computertomografie analyse en open veld test om het ziekteproces uitgebreid te beoordelen.

Inductie- en diverse beoordelingsindicatoren van experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) dient als een diermodel van multiple sclerose. Dit artikel beschrijft een benadering voor het scoren van ruggenmergontsteking, demyelinisatie en axonaal letsel bij EAE. Daarnaast wordt een methode gepresenteerd om oplosbare neurofilamentlichtniveaus in het muizenserum te kwantificeren, waardoor de beoordeling van axonaal letsel bij levende muizen wordt vergemakkelijkt.

Scoren van ontsteking, demyelinisatie en axonletsel van het centrale zenuwstelsel bij experimentele auto-immuunencefalomyelitis

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis is een van de meest gebruikte muizenmodellen van multiple sclerose. In het huidige protocol worden C57BL/6J-muizen van beide geslachten geïmmuniseerd met myeline-oligodendrocytglycoproteïnepeptide, wat voornamelijk resulteert in oplopende parese van de staart en ledematen. Hier bespreken we het protocol van EAE-inductie en -evaluatie.

Modellering van multiple sclerose bij de twee geslachten: MOG35-55-geïnduceerde experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) is een diermodel van multiple sclerose (MS), dat met de menselijke ziekte een robuuste humorale auto-immuunrespons deelt. Hier rapporteren we een eenvoudig en flexibel ELISA-protocol om auto-antilichamen in het serum van EAE-geïmmuniseerde muizen te kwantificeren.

Kwantificering van autoreactieve antilichamen bij muizen bij experimentele auto-immuunencefalomyelitis

Leer de inductie en klinische scoring van chronisch-relapsende experimentele auto-immuun encefalomyelitis bij DA-ratten. Deze methode ondersteunt onderzoek naar multiple sclerose en therapeutische strategieën.

Inductie en Klinische Scoring van chronische-Relapsing experimentele autoimmune encefalomyelitis

Meer video's verkennen