Name: Het gebruik van carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFSE) om lymfocytproliferatie Monitor (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-12T17:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: Leer hoe u lymfocyten labelt met CFSE om celdeling te monitoren via flowcytometrie. Deze methode maakt het mogelijk om T-celproliferatie tijdens immuunresponsen nauwkeurig te volgen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Het werk beschreven in dit artikel werd ondersteund door een National Health en Medical Research Council (NHMRC) van Australië Programma Grant (CRP) en een NHMRC Project Grant (CRP en BJCQ). Ook BJCQ is een NHMRC Peter Doherty Postdoctoraal.

1) Reagens Setup 1.1) CFSE voorraad-oplossing De CFSE kleurstof wordt gekocht als carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFDA, SE) (MW 557,47 g / mol), meestal in 25 mg flacons. Los van de 25 mg in 8,96 ml DMSO voor een definitieve oplossing voorraad van 5 mm (op te slaan als 50-100 pi porties bij -20 ° C gedurende enkele maanden). CFDA, SE zal reageren met waterige oplossing dus het is cruciaal dat een dergelijke blootstelling vermeden te worden tijdens de opslag. 1.2) Lymfocyten Isoleer lymfocyten uit de milt en of de lymfeklieren van muizen en resuspendeer in 1 ml kweekmedium (bijv. RPMI) met 5% hitte-geïnactiveerd (HI) foetaal kalf serum (FCS), met een cel concentratie van 0,5 x 06 tot 10 oktober x 10 7 / ml. 2) CFSE Labeling 2.1) Routine methode: <ol class="lalpha"><li> Grondig Resuspendeer cellen in de 1 ml van de middelgrote en plaats zorgvuldig in de bodem van een verse (niet-bevochtigd) 10 ml conische buis. </li><li> Horizontaal Leg de buis (met een niet-bevochtigd buis zal de 1 ml-celsuspensie te voorkomen dat bewegen en voortijdig mengen met de CFDA, SE oplossingen). </li><li> Voeg voorzichtig 110 pi PBS van de niet-bevochtigd gedeelte van de plastic aan de bovenkant van de buis ervoor te zorgen dat geen contact maken met de cel oplossing. </li><li> Resuspendeer 1,1 pi van de 5 mM voorraad van CFDA, SE in de 110 pi PBS. </li><li> Snel dop de tube en omkeren en vortex goed om snel een uniforme mengen van de oplossingen te krijgen. Merk op dat de CFSE kleurstof wordt bij een uiteindelijke concentratie van 5 uM, maar kan de optimale concentratie moeten worden bepaald voor elke bereide charge, en daarna iedere 6 maanden gecontroleerd om te zorgen dat effectief is. </li><li> Incubeer cellen voor 5 min bij kamertemperatuur. Merk op dat bij conversie van CFDA, SE om te CFSE (zie discussie) de kleurstof wordt fluorescerende en dus vatbaar voor bleken door blootstelling aan overmatig licht. Zo is het raadzaam om de buis te beschermen tegen het licht van dit punt, bijvoorbeeld door te bedekken met aluminium folie. </li><li> Was cellen door verdunning in 10 volumes van 20 ° C PBS met 5% FCS HI, sedimenting door centrifugeren bij 300 xg gedurende 5 minuten bij 20 ° C en het teruggooien van het supernatant. Herhaal dit nog twee keer wassen. </li></ol> 2.2) Alternatieve methode, die ook geschikt is voor hogere aantal cellen (10 - 30 x 10 7): <ol class="lalpha"><li> Bereid een 2 x (10 uM) CFDA, SE-oplossing door het toevoegen van 2 pi van de 5 mM voorraad 1 ml PBS en snel toe te voegen aan 1 ml van grondig geresuspendeerd cellen, dan snel de dop op de tube en omkeren en vortex goed te krijgen snelle uniform mengen. </li><li> Incubeer de cellen gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur en was net als in de stappen 2.1 (f) en 2.1 (g). </li></ol> 2.3) De cellen kunnen vervolgens worden toegepast op een protocol van belang zijn voor de inductie van de celdeling. Gelabelde cellen kan worden gebruikt in zowel in vitro als in vivo testen. 2.4) Bij de voltooiing van de proliferatie assay worden de cellen geoogst en geanalyseerd door flowcytometrie (zie hieronder voor representatieve voorbeelden). 3) representatieve resultaten Voor de beoordeling van lymfocyten proliferatie door CFSE verdunning, is het nuttig om de fluorescentie van de onverdeelde cellen (dwz maximale fluorescentie) en niet-gelabelde cellen (dwz minimaal fluorescentie) te leren kennen. Daarom moet je experimenteel ontwerp met deze controles worden gehouden. Hieronder staan ​​voorbeelden van in vitro en in vivo testen met behulp van CFSE aan CD8 + T-celdeling te meten door flowcytometrie. 3.1) In vitro stimulatie Figuur 1 toont de CFSE profielen van CFSE-gelabelde ovalbumine (OVA)-specifieke T-cel-receptor transgene CD8 + OT-I T-cellen na 3 dagen cultuur met dendritische cellen gepulst met verschillende hoeveelheden OVA. CD8 + T-cellen gezuiverd van de milt en de lymfeklieren van de OT-I muizen werden gelabeld met CFSE en 1 x 10 5 cellen gekweekt met 3,3 x 10 4 DC. DC, waar gepulst met OVA gedurende 1 uur bij 37 ° C en tweemaal gewassen voorafgaand aan de cultuur. Na 3 dagen, waar de cellen geoogst en voorzien van anti-CD8-APC antilichamen en Hoechst 33258 en vervolgens geanalyseerd door flowcytometrie (50.000 gebeurtenissen verzameld). Live (Hoechst 33258 -) CD8 + cellen worden weergegeven. Als controles, CD8 + T-cellen alleen gekweekt, toont de CFSE intensiteit van de niet-verdeelde cellen, terwijl de niet-gemerkte cellen toont de auto-fluorescentie van de cellen en de grenzen van detecteerbare celdelingen. Merk op dat 4 CFSE pieken te zien in elk van de panelen in dit voorbeeld, wat aangeeft dat de cellen hebben ondergaan tot 3 divisies. 3.2) In vivo stimulatie Figuur 2 toont de CFSE profielen van CFSE-gelabelde OVA-specifieke T-cel-receptor transgene CD8 + OT-I T-cellen na 3 dagen in vivo in de aanwezigheid van 20 ug OVA. CD8 + T-cellen gezuiverd van de milt en de lymfklieren van CD45.1 congenic OT-I muizen werden gelabeld met CFSE en 5 x 10 6 cellen geïnjecteerd iv in de laterale staartader van C56BL/6J (CD45.2 +) muizen. Na 2 uur muizen werden geïnjecteerd iv met 20 ug van OVA. Na 3 dagen werden de milt van de muizen verzameld, gemaakt in een enkele celsuspensie, voorzien van anti-B220-PerCP, anti-CD8-APC-Cy7 en anti-CD45.1-PE-Cy7 antilichamen en Hoechst 33258 en vervolgens geanalyseerd door flow cytometrie (1.000.000 gebeurtenissen verzameld). Live (Hoechst 33258 -) B220-cellen worden getoond in de linker paneel en gated CD8 + CD45.1 + cellen getoond in rechter paneel. Als controles, ongestimuleerde CFSE-gelabelde CD8 + T-cellen, toont de CFSE intensiteit van de niet-verdeelde cellen, terwijl de niet-gemerkte cellen toont de auto-fluorescentie van de cellen en de grenzen van detecteerbare celdelingen. Merk op dat het gebruik van het CD45 allotypic verschil is van vitaal belang in het oplossen van de overgedragen CD8 + T-cellen van de gastheer, omdat ze een kleine subset van de totale CD8 + T-cellen (linker paneel). Merk op dat de meeste cellen binnen 7 CFSE pieken in dit voorbeeld (rechter paneel), wat aangeeft dat de cellen hebben ondergaan tot zes divisies. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Vermogen van CFSE-gelabelde ovalbumine (OVA)-specifieke T-cel-receptor transgene CD8 + OT-I T-cellen om te reageren in vitro op DC gepulst met verschillende concentraties van de OVA, gegevens getoond worden na drie dagen cultuur. Nota niet-verdeelde populatie van CD8 + T cellen in de afwezigheid van antigeen (licht grijs histogram) en auto-fluorescentie van de niet-gemerkte bevolking (donker grijs histogram). De figuur toont CD8 + T-cellen die 1-3 keer zijn verdeeld op basis van CFSE verdunning pieken, met meer T-cellen te delen bij de hogere concentraties antigeen. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Vermogen van CFSE-gelabelde ovalbumine (OVA)-specifieke T-cel-receptor transgene CD8 + OT-I T-cellen, als adoptief overgebracht naar C57BL / 6 muizen om te reageren op OVA, data getoond 3 dagen na de adoptieve overdracht Linkerpaneel:. CD8 +, CD45. 1 + OT-1 T-cellen in de ontvangende muizen. Rechts panel: CFSE proliferatie profiel. Let op niet-verdeelde populatie van CD8 + T-cellen in de ontvangende muizen niet ontvangen antigeen (licht grijs histogram) en auto-fluorescentie van de niet-gemerkte lymfocyten (donker grijs histogram). De figuur toont CD8 + T-cellen die 1-6 keer zijn verdeeld op basis van CFSE verdunning pieken. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Een vertegenwoordiging van de verschillende moleculaire gebeurtenissen die zich voordoen tijdens de etikettering van cellen met carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFDA, SE). Voor details van het proces zie Discussie tekst. Opmerking: De generieke acroniem 'CFSE', niet CFDA, SE, wordt gebruikt om de etikettering reagens en de etikettering procedure in het algemeen te beschrijven. Cijfer op basis Parish 4.

<ol><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 171, 131-137 (1994).</li>
<li>Parish, C. R., Glidden, M. H., Quah, B. J., Warren, H. S. Use of the intracellular fluorescent dye CFSE to monitor lymphocyte migration and proliferation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParish%2C+CR+%22Current+protocols+in+immunology%22">Current protocols in immunology</a>. Coligan, J. E. , (2009).</li>
<li>Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+with+the+intracellular+fluorescent+dye+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.</a> Nature Protocols. 2, 2049-2056 (2007).</li>
<li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li>
</ol>

Om te beseffen hoe CFSE werkt en waarom een ​​snelle uniforme etikettering is vereist voor het gebruik ervan in verspreiding analyse is het nuttig om te begrijpen van de moleculaire basis van CFSE cel etikettering. Dit kan worden onderverdeeld in twee fasen, 1) Mobiele toegang en 2) Protein etikettering (figuur 3). 1) Cel entry: Het invoeren van de kleurstof in de cel wordt gemedieerd door het Gediacetyleerde vorm van de kleurstof, carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFDA, SE). De acetaten maken de kleurstof zeer membraan permeant waardoor zijn snelle flux doorheen het plasmamembraan. Esterases, aanwezig in de cel, splijten de acetaten van CFDA, SE en zo aanleiding geven tot de CFSE vorm van de kleurstof die veel minder membraan permeant, waardoor het concentreren van de kleurstof in de cel. 2) Eiwitten etikettering: Hoewel beide CFDA, SE en CFSE hebben amino-reactieve succinimidyl zijketens, alleen de CFSE is fluorescerend. De hoge intracellulaire concentratie van CFSE maakt een snelle en hoge intracellulaire labeling van eiwitten. CFSE labeling van cellen moet snel worden uitgevoerd om een ​​homogeen gelabelde populatie van cellen, die essentieel is voor het oplossen van cellen die hebben ondergaan verschillende divisies, zoals aangegeven in de representatieve resultaten (figuur 1 en 2) te verkrijgen.

<table><tbody><tr><td>CFDA,SE</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Cambridge Isotope Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lymfocyten</td><td>bijv. muis of mens</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>SAFC Global</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-15ml conische buisjes</td><td>Falcon BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumfolie</td><td>Capral Aluminium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Scientific Industries Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flowcytometer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

het gebruik van carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (cfse) om lymfocytproliferatie monitor

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

Carboxyfluoresceïne succinimidylester (CFSE) is een effectief en populair middel om lymfocyten divisie 1-3 te controleren. CFSE labels covalent langlevende intracellulaire moleculen met de fluorescente kleurstof, carboxyfluoresceïne. Dus, als een CFSE-gelabelde cel zich deelt, zijn de nakomelingen begiftigd met de helft van het aantal carboxyfluoresceïne-gelabelde moleculen en dus elke celdeling kan worden beoordeeld door het meten van de overeenkomstige daling in cel fluorescentie via flowcytometrie. De capaciteit van CFSE te lymfocytenpopulaties met een hoge fluorescentie-intensiteit van de uitzonderlijk lage variantie, in combinatie met de lage cel toxiciteit label, maken het een ideale kleurstof om de celdeling te meten. Aangezien het een fluoresceïne-gebaseerde kleurstof is ook compatibel met een breed scala van andere fluorochromen waardoor het van toepassing is op multi-color flowcytometrie. Dit artikel beschrijft de procedures doorgaans gebruikt voor het labelen van de muis lymfocyten in het kader van de controle tot 8 celdelingen. Deze gelabelde cellen kunnen worden gebruikt zowel voor in vitro en in vivo studies.

CFSE labels covalent langlevende intracellulaire moleculen met de fluorescente kleurstof, carboxyfluoresceïne. Als zodanig, als een CFSE-gelabelde cel zich deelt, zijn nakomelingen hebben de helft van de fluorescentie, die daarmee kan worden gebruikt om de celdeling te beoordelen. Dit artikel beschrijft de procedures doorgaans gebruikt voor het labelen muis lymfocyten met CFSE.

Het gebruik van carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFSE) om lymfocytproliferatie Monitor

Carboxyfluoresceïne-succinimidylester (CFSE) is een effectieve en populaire methode om lymfocytendeling te monitoren1-3. CFSE labelt covalent langlevende ...

Het algemene doel van dit experiment is om lymfocyten te labelen met de intracellulaire fluorescerende kleurstof CFSE, zodat de celdeling van lymfocyten kan worden gemonitord via flowcytometrie. Dit wordt bereikt door lymfocyten te mengen met CFDA se, wat de diacetylvorm van CFSE is. De twee acetylgroepen zorgen ervoor dat de kleurstof snel de cellen binnen de lymfocyten kan binnendringen.Esterases verwijderen de acetylgroepen van de C-F-D-A-S-E, waardoor de CFSE-vorm van de kleurstof wordt gevormd. Zonder de acetylgroepen wordt CFSE fluorescent en minder membraanpermeabel, waardoor de kleurstof zich in de cellen concentreert. De amino-reactieve AL-zijketen van CFSE koppelt de kleurstof vervolgens covalent aan intracellulaire eiwitten, waardoor de cellen vrijwel permanent fluorescent worden.CFSE kan worden gebruikt om de deling van lymfocyten te monitoren op basis van de opeenvolgende afname van de fluorescentie-intensiteit van dochtercellen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals de incorporatie van tritium-gemarkeerd thymidine, is dat individuele cellen gemonitord kunnen worden op celdeling. Ben Qua, een research fellow uit mijn laboratorium, zal de procedure voor het labelen van cellen demonstreren.Begin met vers geïsoleerde lymfocyten uit de milt of lymfeklieren van muizen en voeg een concentratie van tussen een halve en 10 miljoen cellen per milliliter kweekmedium toe, aangevuld met 5% hitte-geïnactiveerd foetaal kalfsserum. Resuspendeer de cellen grondig en breng voorzichtig één milliliter over naar de bodem van een nieuwe conische buis van 10 milliliter. Leg de buis voorzichtig horizontaal.Voeg 110 µL PBS toe aan de bovenkant van de buis in het niet-bevochtigde gedeelte van het plastic, waarbij u ervoor zorgt dat het geen contact maakt met de celoplossing. Voeg een verse kleurstofoplossing van 1,1 µL van de 5 mM stockoplossing van C-F-D-A-S-E toe aan de 110 µL PBS. Sluit de buis snel af met de dop, keer deze om en vortex goed voor een snelle, uniforme menging van de oplossingen, aangezien de kleurstof fluorescent wordt en dus gevoelig is voor bleaching.Bescherm de buis tegen licht door deze te omwikkelen met aluminiumfolie. Incubeer de cellen vijf minuten bij kamertemperatuur en was de cellen door deze te verdunnen in 10 volumes PBS van 20 °C met 5% H-I-F-C-S; sedimenteer door centrifugatie bij 300 Gs gedurende vijf minuten bij 20 °C en verwijder het supernatant. Herhaal de wasstap nog twee keer.De cellen kunnen vervolgens worden onderworpen aan een relevant protocol voor de inductie van celdeling. Gelabelde cellen kunnen worden gebruikt in zowel in vitro als in vivo assays. Na voltooiing van de proliferatieassay worden de cellen geoogst en geanalyseerd via flowcytometrie.In dit voorbeeld wordt CFSE-labeling in vitro gebruikt om te meten hoe T-cellen van genetisch gemodificeerde transgene muizen reageren op dendritische cellen die zijn gepulseerd met verschillende concentraties antigeen. De niet-gearceerde CFSE-verdunningspieken stellen transgene CD8-positieve T-cellen voor die één tot drie keer zijn gedeeld. Er is te zien dat meer T-cellen delen bij de hogere concentraties van het antigeen.De CFSE-labelingsmethode is ook geschikt voor in vivo assays, zoals adoptieve transfer-experimenten. Hier wordt FACS gebruikt om de populatie T-cellen te identificeren waarin men in ontvanger-muizen geïnteresseerd is. Een daaropvolgend CFSE-proliferatieprofiel toont CD8-positieve T-cellen die, op basis van CFSE-dilutiepieken na de ontwikkeling, één tot zes keer zijn gedeeld.Deze procedure maakte de weg vrij voor onderzoekers en de immunologie om de lymfocytenproliferatie tijdens een immuunrespons te onderzoeken.

the-use-carboxyfluorescein-diacetate-succinimidyl-ester-cfse-to

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Veel infecties roepen een sterke CTL-respons, maar af en toe, de hoeveelheid cellen die reageren niet correleren met de controle van de...

Antigen Specifieke In Vivo Killing Assay met behulp van CFSE Labeled doelcellen

Deze video protocol toont de toepassing van de fluorescente kleurstof carboxyfluoresceïne succinimidylester (CFSE) voor de identificatie en scheiding van verschillende sub-populaties van cellen in humane glioblastoma gebaseerd op de frequentie van de celdeling.

Identificatie en isolatie van Slow-delende cellen in Human Glioblastoma Met behulp van Carboxy fluoresceïne succinimidylester (CFSE)

The video showcases a flow cytometry-based assay for assaying immunodominance in cytotoxic T lymphocytes or CTL responses. Injected fluorescent target cells exhibit varying fluorescence corresponding to immunogenic epitopes. Post-spleen collection and sorting reveal a reduction in high-intensity fluorescent cells, confirming immunodominance in CTL responses.

An Assay to Evaluate Immunodominance in Cytotoxic T Lymphocyte Responses

This video demonstrates an in vitro assay to explore the immunomodulatory influence of mesenchymal stem cells (MSCs) on effector T cell proliferation. The assay includes co-culturing MSCs with PBMCs to induce the monocyte population to acquire an immunomodulatory phenotype, leading to the secretion of interleukin-10 (IL-10). Following incubation with activated CD4+ T cells, the induced monocytes effectively suppress T cell proliferation.

An In Vitro Assay for Evaluating the Immunomodulatory Impact of Monocytes on Leukocyte Proliferation

Het vermogen om T-cel responsen in detail volgen in vivo is belangrijk voor de ontwikkeling van ons begrip van de immuunrespons. Hier beschrijven we het gebruik van fluorescerende doel arrays (FTA's) in een in vivo T-cel test die&gt; 250 parameters beoordeelt gelijktijdig door flowcytometrie.

Het gebruik van TL-Target Arrays voor het beoordelen van de T-cel responsen<em&gt; In vivo</em

Macrofagen zijn plastic cellen van het hematopoietische systeem die een cruciale rol spelen in beschermende immuniteit en homeostase. In dit rapport beschrijven we geoptimaliseerde in vitro technieken voor het fenotypisch en functioneel karakteriseren van transplantatie-infiltrerende regulerende macrofagen die zich in het getransplanteerde orgaan verzamelen onder tolerogene omstandigheden.

Functionele karakterisering van regulerende macrofagen die de transplantaatreactieve immuniteit verhinderen

Lymfocyten zijn de belangrijkste spelers in adaptieve immuunresponsen. Hier presenteren we een protocol voor de zuivering van lymfocyten om de fysiologische functies van de gewenste moleculen bij lymfocytenactivatie in vitro en in vivo te bepalen. De beschreven experimentele procedures zijn geschikt voor het vergelijken van functionele capaciteiten tussen controle- en genetisch gemodificeerde lymfocyten.

Isolatie en Activering van Muizen lymfocyten

Live-imaging van de gelabelde bloedcellen in de oculaire circulatie kan informatie verschaffen over ontsteking en ischemie bij diabetische retinopathie en leeftijdgerelateerde macular degeneratie. Een protocol om bloedcellen te labelen en de gemarkeerde cellen in de retinale circulatie af te beelden is beschreven.

Fluorescent Dye Etikettering van Erythrocyten en Leukocyten voor het bestuderen van de Flow Dynamics in de retinale circulatie van de muis

Gepresenteerd hier is een protocol voor het meten van prolifererende CD4+ T cellen in reactie op antigene eiwitten of peptiden met behulp van kleurstof verdunning. Deze bepaling is bijzonder gevoelig voor zeldzame antigeen-specifieke T-cellen en kan worden gewijzigd om het klonen van antigeen-specifieke cellen te vergemakkelijken.

Kwantificering van prolifererende humane antigeen-specifieke CD4+ T-cellen met behulp van Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Hier presenteren we een op flowcytometrie gebaseerde methode voor visualisatie en kwantificering van meerdere senescentie-geassocieerde markers in enkele cellen.

Gelijktijdige beeldvorming en flowcytometrie-gebaseerde detectie van meerdere fluorescerende senescentiemarkers in therapie-geïnduceerde senescente kankercellen

Leer hoe u lymfocyten labelt met CFSE om celdeling te monitoren via flowcytometrie. Deze methode maakt het mogelijk om T-celproliferatie tijdens immuunresponsen nauwkeurig te volgen.

Het gebruik van carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFSE) om lymfocytproliferatie Monitor

Meer video's verkennen