Name: Milieuvriendelijk Induced erfelijke veranderingen in de Flax (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Leer hoe je vlas kweekt onder voedingsstres om erfelijke genomische variatie te induceren. Deze methode combineert PCR en Q-R-T-P-C-R om genexpressieveranderingen te analyseren en gewasresistentie te verbeteren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Groei van het vlas onder inducerende omstandigheden. <ol><li> 5 "potten zijn gevuld met grond en verstevigd. </li><li> Drie zaden per pot worden geplant ¼ inch diep en de bodem verstevigd over de zaden. </li><li> De potten worden vervolgens besproeid met 100 ml van de juiste voedingsstoffen oplossingen <ol><li> De niet-inducerende control (C) voorwaarden gebruik maken van een 1 / 10 e kracht van Miracle-Gro elke week. De hoge voedingsstoffen aandoening (NPK behandeling) had volle kracht Miracle Grow toegepast per week. Lage voedingsstof - planten alleen had leidingwater toegepast tijdens hun groei. (Durrant 1971, Cullis 1980). </li></ol></li><li> De planten worden geteeld onder natuurlijk licht in de zomer. Tijdens de winter zijn ze geteeld onder natrium lampen met een 16 / 8 uur licht / donker-cyclus. </li><li> Met wekelijkse intervallen bladeren en meristemen worden verzameld. </li><li> Het plantmateriaal is snel ingevroren in vloeibare stikstof. </li></ol> Resultaten De drie genotypen groeien met verschillende relatieve tarieven afhankelijk van de omstandigheden (figuur 1). Daarom onder controle van de voorwaarden Pl lijn groeit het beste met L zijn krachtiger dan S (figuur 1a). Onder lage voedingsstoffen (water), S groeit beter dan zowel L of Pl (Figuur 1b). Onder hoge voedingsstoffen (NPK) L groeit beter dan Pl die alleen groeit iets beter dan S (figuur 1c). Een vergelijking tussen elk van de lijnen gekweekt onder de drie verschillende behandelingen is weergegeven in figuur 1 d - f. Pl groeit het beste onder controle omstandigheden (figuur 1d), L de beste onder hoge voedingsstof (Figuur 1e) en S eveneens onder zowel hoge concentraties nutriënten en controle omstandigheden (figuur 1f). Deze gegevens tonen aan dat de drie lijnen kunnen worden gedifferentieerd op basis van hun groei onder de drie omgevingen. Van de nota is dat de Pl best groeit onder de controle condities, terwijl L groeit het beste onder de NPK omstandigheden (waaronder het werd geïnduceerd). S groeit ongeveer hetzelfde in alle drie de voorwaarden, dat wil zeggen, het is niet in staat om te profiteren van de verbeterde voedingsstoffen voorwaarden, maar is beter in staat om te groeien onder zeer lage voedingsstoffen omstandigheden. De groei parameters die relevant zijn voor de differentiatie van de planten zijn de hoogte van de plant (en in verband met deze internodium de lengte is, dat de afstand tussen elk blad), het blad grootte en de mate van vertakking. Voor de Pl onder controle omstandigheden de plant is lang met takken en de bladeren zijn groot en donker groen. Onder lage voedingsstoffen van de plant is erg kort, de afstand tussen elk blad is ook erg kort en de bladeren zijn klein en licht groen. De bladeren aan het uiteinde donkerder groen dan die lager op de stengel. Onder hoge voedingsstoffen de plant lijkt veel op dat de omstandigheden onder controle, behalve dat zowel de belangrijkste stam en de zijscheuten korter zijn dan in de controle planten. Voor de grote genotroph de planten erg lijken op die van de Pl, behalve dat de meest krachtige groei van de onder hoge voedingsstoffen. Weer onder een laag voor de plant is erg kort en heeft lichtgroene bladeren. De S genotroph groeit eveneens in alle drie de omgevingen, hoewel de bladeren zijn lichter groen onder het lage voedingsstoffen. Echter, in de lage voedingsstoffen voorwaarden de S genotroph is veel krachtiger dan een van de Pl-of L-lijnen. 2. RNA en DNA extracties uit vlas meristemen en bladeren worden afzonderlijk gedaan. De Roche totale RNA prep-kit werd gebruikt voor de RNA-extracties en de Qiagen DNeasy Plant DNA-prep-kit werd gebruikt voor de DNA-extracties. RNA-extractie <ol><li> 3 meristemen plus een aantal omliggende bladeren zijn verplaatst van de opslag cryovial in eppendorfbuisje en geplaatst in vloeibare stikstof tot klaar om te worden gemalen. </li><li> Steriel zand wordt toegevoegd aan buis en weefsel is de grond met behulp van een micropestle tot boete. </li><li> 400 ul lysis / bindingsbuffer van Roche in totaal RNA prep kit is toegevoegd en weefsel is verder de grond totdat er geen klontjes zichtbaar zijn. </li><li> Monster wordt vortex gedurende 15 seconden om vervolgens lysis hulp en gecentrifugeerd gedurende 1 minuut bij 13.000 rpm om zand en vuil te verzamelen. </li><li> Supernatant wordt toegevoegd aan kolom draaien en de rest van de RNA-prep-kit instructies worden gevolgd zoals aangegeven. </li></ol> DNAse behandeling <ol><li> 1 / 10 RNA monstervolume van 10X DNAse buffer wordt toegevoegd. </li><li> 30 eenheden van DNAse wordt toegevoegd en de reactie wordt geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 30 min en 70 ° C gedurende 5 minuten. </li></ol> Reverse transcriptie <ol><li> Applied Biosystems RNA naar cDNA kit wordt gebruikt als per richtingen reactie geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 1 uur en 95 ° C gedurende 5 minuten. </li></ol> Het cDNA wordt vervolgens gebruikt in PCR of voor qPCR qPCR qPCR werd uitgevoerd met behulp van een ABI Stap een systeem. Alle testen werden uitgevoerd in drievoud op elke run. De actine-gen werd gebruikt als een kopie-aantal controlede beste beschikbare housekeeping gen. <ol><li> De juiste primer paar werd toegevoegd aan elke buis in 1μl. </li><li> Het cDNA werd verdund tot de juiste concentratie en 9μl toegevoegd aan elke buis </li><li> 10μl van de 2x Macht SYBR Green PCR mastermix (ABI) en werd toegevoegd aan elke buis </li><li> Het programma versterking programma is: <ul><li> 10 minuten bij 95 ° C </li><li> 40 cycli van 15 seconden bij 95 ° C, 1 min bij 60 ° C </li></ul> Thermische denaturatie stap naar versterking specificiteit te controleren </li><li> De relatieve expressie niveaus werden bepaald door de waarde van 2 (CTunknown - CTactin). </li></ol> DNA-voorbereiding <ol><li> Buffer AP1 van Qiagen DNeasy Plant DNA-prep-kit is toegevoegd aan 6 blaadjes met steriele zand in een microfugebuis. Het weefsel is grond met micropestle totdat er geen klontjes zichtbaar zijn. </li><li> De kit instructies worden gevolgd zoals aangegeven. </li></ol> Resultaten PCR-amplificatie van het DNA geïsoleerd van bladeren op verschillende posities langs de stengel toont aan dat de verschijning van LIS-1 gebeurt, terwijl de planten groeien onder inducerende omstandigheden (4). De qPCR resultaten tonen aan dat de aanwezigheid van LIS-1 (of een andere genomische veranderingen geassocieerd met de inductie) de expressie van genen beïnvloedt in de directe omgeving van de LIS-1 (Figuur 2). De zes genen weergegeven in figuur 2 zijn alle differentieel tot expressie in de Pl-en S met vier met een hogere expressie in PL (zonder LIS-1) en twee met hogere expressie in S (die wel LIS-1). Paneel 1 en 2 zijn de twee genen die het dichtst bij het invoegpunt van LIS-1. De expressie van deze genen is in de grote genotroph (dat heeft geleid tot wijzigingen, maar heeft geen LIS-1) en de expressie onder verschillende groeiomstandigheden nodig zal zijn om een ​​oorzakelijk verband tussen LIS-1 en de expressie veranderingen vast te stellen. <img src="/files/ftp_upload/2332/2332fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Pl, L en S geteeld onder drie verschillende voedingsstoffen regimes. Panelen een - controle, b - een lage voedingsstoffen en c - NPK. d - Pl, e - S, f - L. Panelen d - f van links naar rechts: laag voedingsstoffen, controle en NPK. D - Pl, e - L, F - S. <img src="/files/ftp_upload/2332/2332fig2tmb.jpg" alt="Duimfiguur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2 duim"> Figuur 2. Genexpressie rond het punt van insertie van LIS-1. Gen 1 (Inhibitor van de groei) is onmiddellijk 5 'naar LIs1 en het gen 2 (Kip-gerelateerde cycline-afhankelijke kinase-inhibitor id 3 "van LIS-1. De andere genen zijn allemaal langs dezelfde steiger (~ 500kb) opgebouwd uit de volledige vlas genoomsequentie. alstublieft <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/2332/2332fig2.jpg">Klik hier om een grotere afbeelding te zien</a> . <img src="/files/ftp_upload/2332/2332fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. PCR amplificaties van DNA's uit individuele bladeren van planten van Stormont Cirrus gegroeid onder lage voedingsstoffen omstandigheden. De PCR-producten werden gescheiden op een 2% agarose-TBE gel. De uninserted site is weergegeven in een panel, zijn de twee uiteinden van de ingevoegde plaats die op Panels b en c. Bladmonsters 1-6 werden geïsoleerd met wekelijkse intervallen met het monster 1 de vroegste na het zaaien.

<ol><li>Durrant, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+environmental+induction+of+heritablel+change+in+Linum%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">The environmental induction of heritablel change in Linum.</a> Heredity. 17, 27-61 (1962).</li>
<li>Cullis, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+aspects+of+the+environmental+induction+of+heritable+changes+in+flax%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Molecular aspects of the environmental induction of heritable changes in flax.</a> Heredity. 38, 129-154 (1977).</li>
<li>Chen, Y., Schneeberger, R. G., Cullis, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+site-specific+insertion+sequence+in+flax+genotrophs+induced+by+the+environment.+New+Phytol%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A site-specific insertion sequence in flax genotrophs induced by the environment. New Phytol.</a> , 167-171 (2005).</li>
<li>Chen, Y., Lowenfeld, R., Cullis, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+environmentally+induced+adaptive+%28%3F%29+insertion+event+in+flax%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Genet.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">An environmentally induced adaptive (?) insertion event in flax.</a> Int. J. Genet. Mol. Biol. 1, 38-47 (2009).</li>
</ol>

Vlas lijkt te hebben een inherent instabiel genoom. Een aantal commerciële vezelvlas soorten in korte tijd uitgegroeid niet-uniforme wanneer gekweekt voor een paar generaties. Dezelfde observaties lijken niet te gelden voor de olie vlas rassen. Daarom lijkt er een verband tussen de selectie voor vezels kwaliteit en genoom instabiliteit. De milieuvriendelijke geïnduceerde erfelijke veranderingen in de sector vezelvlas werden oorspronkelijk geïdentificeerd door middel van het onderzoek van de agronomische opmerkingen van de groei van de vezel gewas. Deze herhaalbare waarnemingen van de specifieke fenotypische en genomische veranderingen roept de vraag op hoe de milieu-stress kan de suite van de genomische herschikkingen die zich kunnen voordoen beïnvloeden. De herhaalde verschijning van LIS-1 in reactie op bepaalde omgevingen is in overeenstemming met deze mutatie wordt direct of indirect gekozen. De groei van de lijnen veroorzaakt door verschillende behandelingen geeft ook aan een verbeterde prestatie onder de relevante inducerende omstandigheden. De veranderingen in expressie ook in verband gebracht met de aanwezigheid van LIS-1 weer geeft aan dat deze toevoeging van invloed zijn plant performance. De video presentatie biedt een forum voor het observeren van de plant fenotypische veranderingen op een manier die onmogelijk over te brengen via de traditionele drukwerk.

<ul><li> Vlas zaden van de oorspronkelijke Stormont Cirrus diverse aangeduid Pl en de genotrophs L en S. </li><li> 5 &quot;potten </li><li> potgrond </li><li> Miracle-Gro </li><li> broeikas </li><li> Hoge druk natrium lampen </li><li> Vloeibare stikstof </li><li> Mortel en stampers </li><li> Micropestles en microfugebuizen buizen </li><li> Thermocycler </li><li> Agarosegelelektroforese apparatuur </li><li> Digitale beeldbewerking setup </li><li> StepOne qPCR module </li><li> Qiagen DNeasy Plant DNA-prep-kit </li><li> Applied Biosystems RNA naar cDNA kit </li><li> Roche totaal RNA prep-kit </li></ul>

milieuvriendelijk induced erfelijke veranderingen in de flax

Environmentally Induced Heritable Changes in Flax

Sommige soorten vlas te reageren op voedingsstoffen stress door aanpassing van hun genoom en deze aanpassingen kunnen worden overgenomen door vele generaties. Ook in verband gebracht met deze genomische veranderingen erfelijk fenotypische variaties 1,2. Het vlas variëteit Stormont Cirrus (Pl), de teelt onder drie verschillende voedingsstoffen omstandigheden kan blijven induceerbaar (onder de controle voorwaarden), of wordt stabiel aangepast om de grote of kleine genotroph door de groei bij hoge of lage voedingsstoffen voorwaarden respectievelijk niet. De lijnen die voortvloeit uit de initiële groei in elk van deze voorwaarden lijken beter te groeien wanneer ze groeien onder dezelfde voorwaarden in de volgende generaties, met name de Pl lijn groeit het beste onder de controle behandeling te geven dat de planten groeien onder zowel de hoge als lage voedingsstoffen zijn onder stress. Een van de genomische veranderingen die worden geassocieerd met de inductie van erfelijke veranderingen is het verschijnen van een insertie element (LIS-1) 3, 4, terwijl de planten groeien onder de voedingsstoffen stress. Met betrekking tot deze plaatsing evenement, het vlas variëteit Stormont Cirrus (Pl), de teelt onder drie verschillende voedingsstoffen omstandigheden kan blijven ongewijzigd (onder de controle condities), hebben de toevoeging verschijnen in alle planten (onder lage voedingsstoffen) en hebben dit doorgegeven aan de volgende generatie, of het inbrengen (of delen ervan) verschijnen, maar niet worden overgedragen van generatie op generatie (onder hoge voedingsstoffen) 4. De frequentie van het verschijnen van deze toevoeging geeft aan dat het onder positieve selectie, die ook in overeenstemming is met de groei van respons in de volgende generaties. Bladeren of meristemen geoogst in verschillende stadia van de groei worden gebruikt voor DNA-en RNA-isolatie. Het RNA wordt gebruikt om de variatie te identificeren in de expressie geassocieerd met de verschillende groei-omgevingen en / of t hij de aanwezigheid / afwezigheid van LIS-1. De geïsoleerde DNA wordt gebruikt om die installaties waarin de invoeging zich heeft voorgedaan te identificeren.

Groeiende aantal vlas variëteiten onder voedingsstoffen stress resulteert in genomische variatie binnen een subset van het genoom en fenotypische variatie. Een complex plaatsing op een bepaalde locatie wordt geassocieerd met de groei onder verschillende voedingsstoffen regimes en met veranderingen in genexpressie rond deze site.

Milieuvriendelijk Induced erfelijke veranderingen in de Flax

Sommige vlasvariëteiten reageren op nutriëntenstress door hun genoom aan te passen, en deze modificaties kunnen over vele generaties worden overgeërfd. Daarnaast ...

Het algemene doel van deze procedure is het demonstreren van een methode voor het kweken van een induceerbare vlasvariëteit onder omstandigheden die leiden tot erfelijk genomisch variatie. Daarnaast worden genomische veranderingen gemonitord en wordt de groei van de geïnduceerde planten in opeenvolgende generaties waargenomen onder diverse omgevingsfactoren. Om dit te bereiken, wordt vlas gekweekt onder verschillende inducerende omstandigheden.Vervolgens wordt blad- en Maris-stengelweefsel verzameld op verschillende tijdstippen tijdens de groei van de planten onder de diverse omgevingscondities. Daarna worden DNA en RNA geïsoleerd uit de weefselmonsters. De laatste stap van de procedure is het uitvoeren van PCR met de DNA-monsters en Q-R-T-P-C-R met het geïsoleerde RNA om genomische veranderingen en veranderingen in genexpressie te identificeren die het resultaat zijn van groei onder verschillende omgevingscondities.Uiteindelijk kunnen resultaten worden behaald die de genomische respons op groeicondities aantonen, met de verschijning van het LIS one-insertie-element op een specifiek punt in het genoom en expressieverschillen geassocieerd met de aanwezigheid van dat element, gevisualiseerd via PCR en R-T-P-C-R uitgevoerd met nucleïnezuren geïsoleerd uit de weefsels van behandelde planten. Hallo, ik ben Chris Cull van de afdeling Biologie aan de Case Western Reserve University. Ik ben Cory Johnson van het Cull Lab.En ik ben Tiffany Moss, ook van het Cull-lab. En ik ben Marshall Lucas, een undergraduate in het zomerprogramma voor undergraduate onderzoek bij het Cull-lab.Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om veranderingen in het genoom en de genexpressie te bestuderen die voortvloeien uit variaties in de groeinomgeving. Laten we beginnen. Om vlas te kweken onder inducerende omstandigheden, begint u met het vullen van potten van vijf inch met grond en het stevig aandrukken ervan.Plant vervolgens drie vlaszaadjes per pot op een diepte van een kwart inch. Bedek ze vervolgens met aarde voor de niet-inducerende controlecondities. Bewater de planten met 100 milliliters van een Miracle-Gro-oplossing met een sterkte van 1/10.Behandel de planten onder hoge nutriëntencondities met 100 milliliters van volledige sterkte Miracle grow. Breng dit tot slot aan.Geef alleen kraanwater aan de planten met een laag nutrientengehalte. Kweek de planten tijdens de zomer onder natuurlijk licht terwijl ze groeien. Bewater alle planten twee keer per dag gedurende vijf minuten met een automatisch sproEISysteem.Pas de groeicondities eenmaal per week toe op de planten. Verzamel de bladeren en de stengels met wekelijkse intervallen. Er worden zes bladeren verzameld voor DNA-extractie en drie stengels zijn nodig voor RNA-extractie. Plaats het plantmateriaal na verzameling in een cryovial, vries het snel in met vloeibare stikstof en bewaar de monsters bij -80 °C tot aan de extractie.De drie genotypen groeien met verschillende relatieve snelheden, afhankelijk van de omstandigheden. Onder controlecondities groeit de ingedutte vlasvariëteit storm of de PL-lijn het best. Verschillende lijnen zijn afgeleid van deze ouder, waarbij een grote of L-variëteit krachtiger is dan de kleine of S-variëteit.Echter, bij een laag nutriëntengehalte groeit S beter dan zowel L als pl. En onder omstandigheden met een hoog nutriëntengehalte groeit L beter dan pl, dat slechts iets beter groeit dan S. Een vergelijking tussen elk van de lijnen die onder de drie verschillende behandelingen zijn gekweekt, onthult dat PL het best groeit onder controleomstandigheden. L groeit het best onder omstandigheden met een hoog nutriëntengehalte, en S groeit vergelijkbaar onder zowel omstandigheden met een hoog nutriëntengehalte als controleomstandigheden.Deze gegevens tonen aan dat de drie lijnen kunnen worden onderscheiden op basis van hun groei onder de drie omgevingen. Terwijl PL en L beter groeien onder specifieke omgevingen, groeit S ongeveer hetzelfde in alle drie de condities. S is niet in staat om te profiteren van verbeterde voedingsomstandigheden, maar is beter in staat om te groeien onder omstandigheden met zeer lage voedingswaarden.Voeg voor DNA-extractie buffer AP1 van de Qiagen DNEasy Plant DNA Prep Kit toe aan zes bladeren met steriel zand in een microcentrifugebuis en maal het weefsel met een microvijzel totdat er geen klonten meer zichtbaar zijn. Zet de extractie voort door de instructies van de kit te volgen. Om te beginnen met de RNA-extractie, breng drie stengels van maris plus enkele omliggende bladeren over van een cryobewaarbuis naar een microcentrifugebuis. Voeg steriel zand toe aan de buis en maal het weefsel met een microvijzel tot het fijn is gemalen.Vortex het monster 15 seconden om de lysis te bevorderen en centrifugeer vervolgens één minuut bij 13.000 RPM om zand en eventuele resten te verzamelen. Voeg de SNAT toe aan de spincolumn en ga verder met de RNA-preparatie volgens de instructies van de fabrikant. Zodra het RNA uit het weefsel is geëxtraheerd, brengt u 10 XDNA-buffer aan in de reactie, in een volume van één tiende van het RNA-monstervolume.Voeg 30 units DNase toe en incubeer de reactie bij 37 °C gedurende 30 minuten, gevolgd door 70 °C gedurende vijf minuten. Voer de reverse transcriptie uit met de Applied Biosystems RNA-to-cDNA kit. Volgens de instructies van de fabrikant wordt de reactie geïncubeerd bij 37 °C gedurende één uur en vervolgens bij 95 °C gedurende vijf minuten.Voer ten slotte een run uit van vijf microliters van het cDNA op een 1,5% agarosegel om de opbrengst te bepalen. Zodra het cDNA van de vlasplant is geprepareerd, wordt dit gebruikt voor qPCR. Voer de qPCR uit met behulp van een ABI StepOne-systeem.Voer alle assays in drievoud uit voor elke run en gebruik het housekeeping-gen Acton als kopienaantalcontrole voor het voorbereiden van de qPCR-reacties. Voeg één µL van het juiste primerpaar toe aan elke buis. Verdun het CD NA tot de juiste concentratie en voeg negen µL toe aan elke buis.Voeg tot slot 10 µL van de two x cyberg green PCR master mix toe aan elke buis. Stel vervolgens het amplificatieprogramma in volgens de amplificatieprocedure. Bereken de relatieve expressieniveaus op basis van het cyclusgetal voor de drempelwaarde, dat wordt bepaald door de standaardparameters in de step one software en wordt bevestigd door inspectie van de amplificatiecurven.PCR-amplificatie van het DNA, geïsoleerd uit bladeren op verschillende posities langs de stengel, demonstreert de verschijning van een enkelvoudige kopie van een 5,7 kilobase DNA-fragment, aangeduid als line insertion sequence, of LIS one, wanneer de planten onder inducerende omstandigheden worden gekweekt. LIS one verschijnt wanneer PL wordt gekweekt onder inducerende omstandigheden met een laag nutriëntengehalte en wordt uiteindelijk homozygoot. Hier werden bladmonsters één tot en met zes met wekelijkse intervallen geïsoleerd, waarbij monster één het vroegst na het zaaien was; vervolgens werd het DNA uit de monsters geëxtraheerd.PCR-amplificatie onthult de aanwezigheid van beide termini van LAS one in alle monsters, behalve in het eerste. Dit komt overeen met het verdwijnen van de unins geïnserteerde site en het gebrek aan bewijs hiervoor bij de vijfde blad-QPCR. Resultaten tonen aan dat de aanwezigheid van LAS one of andere genomische veranderingen geassocieerd met de inductie de expressie van genen in de directe nabijheid van a S one beïnvloedt.De zes hier getoonde genen vertonen allemaal een differentiële expressie in PL en S; vier van de genen hebben een hogere expressie in pl, dat geen LIS één heeft. Omgekeerd hebben twee genen een hogere expressie in S, dat wel LIS één heeft. We hebben zojuist gedemonstreerd hoe induceerbare vlaslijnen kunnen worden gekweekt. Zo verandert het genoom als reactie op de groeimgeving en de groeikenmerken van opeenvolgende generaties.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat de groeiomstandigheden gereproduceerd moeten worden voor een reproduceerbare inductie van veranderingen. Dat is alles. Ik weet dat velen van u sceptisch zijn over dit fenomeen, maar nu kunt u de waarnemingen zelf reproduceren.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

environmentally-induced-heritable-changes-in-flax

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een dubbelstrengs RNA interferentie (dsRNAi) techniek wordt toegepast om down-reguleren van de maïs cinnamoyl co-enzym A-reductase (ZmCCR1) gen tot lagere planten ligninegehalte. Lignine down-regulatie van de celwand wordt gevisualiseerd door microscopische analyses en gekwantificeerd door de Klason methode. Compositionele veranderingen in hemicellulose en cellulose geanalyseerd.

Lignine Neerregeling van<em&gt; Zea mays</em&gt; Via dsRNAi en Klason Lignine Analyse

Hier presenteren we een protocol om vlas te transformeren met behulp van Agrobacterium-gemedieerde transformatie van planten via florale-dip. Dit protocol is eenvoudig uit te voeren en goedkoop, maar levert een hogere transformatie tarief dan de huidige beschikbare methoden voor vlas transformatie.

Bloemen-Dip Transformatie van vlas ( Linum usitatissimum) Om Transgene progenies Genereer met een High Transformation Rate

Dit protocol beschrijft een methode om de hypothese te testen dat de omkering van het effectieve geomagnetische veld (GMF) differentiële genexpressie induceert en de morfologie van Arabidopsis thaliana verandert. Een triaxial octagonaal systeem van Helmholtz spoelparen werd gebruikt om kunstmatig omgekeerde GMF-condities in de plantengroeikamerber te genereren.

Aardmagneetveld (Gmf) en Plant Evolutie: Onderzoek naar de effecten van Gmf Reversal op<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Ontwikkeling en Gene Expression

Dit protocol beschrijft een high-throughput methodologie om functioneel scherm op basis van eiwitten erfdeel in S. cerevisiae.

High-throughput Screening op basis van eiwitten erfdeel in S. cerevisiae

BLISS, een dubbele labeling protocol voor het bestuderen van de dynamiek van de lignification, werd ontwikkeld. Synthetische monolignol Klik verslaggevers en een sequentiële combinatie van SPAAC en CuAAC bioorthogonal met reacties, deze methodologie baant de weg naar diepgaande analyse van de factoren die de biogenese van Ligninen in plantaregelen.

Visualiseren van Lignification Dynamics in planten met Klik op chemie: Dual Labeling is BLISS!

Hier presenteren we een protocol om Aspergillus flavus groei en productie van aflatoxine in maïs kernels uiting van een antischimmel eiwit te analyseren.  Met behulp van een stam GFP-uiten A. flavus bewaakt we de infectie en de verspreiding van de schimmel in volwassen kernels in real-time. De bepaling is snel, betrouwbaar en reproduceerbaar.

Remming van de groei van de Aspergillus flavus en aflatoxine productie in transgene maïs uiten van de α-amylase Inhibitor van Lablab purpureus L.

Vroege ontwikkeling is afhankelijk van moederlijk overgeërfde producten en de rol van veel van deze producten is momenteel onbekend. Hierin beschreven we een protocol dat CRISPR-Cas9 gebruikt om fenotypen met maternale effecten in een enkele generatie te identificeren.

Het bepalen van de rol van maternale tot expressie gebrachte genen in de vroege ontwikkeling met maternale crispants

We beschrijven een benadering om veranderingen in fotosynthetische efficiëntie in planten te meten na behandeling met lage CO2 met behulp van chlorofylfluorescentie.

Evaluatie van fotosynthetische efficiëntie in fotorespiratoire mutanten door chlorofylfluorescentieanalyse

Dit protocol beschrijft een RNA-interferentie en ChIP-test om de epigenetische overerving van RNAi-geïnduceerde uitschakeling en geassocieerde chromatinemodificaties in C. elegans te bestuderen.

Analyse van transgenerationele epigenetische overerving in C. elegans met behulp van een fluorescerende reporter en chromatine-immunoprecipitatie (ChIP)

We ontwikkelden de Visual-Motor Reactie op het motorvermogen van larvale zebravis kwantificeren in reactie op licht stappen en verlaagt. We hebben ook onderzocht zebravis visie mutanten, waaronder de no optokinetische reactie (NRC) mutanten, waarvan gedacht werd dat volledig blind wanneer het wordt getest door een andere visie assay, de optokinetische reflex.

Een Behavioral Assay aan responsiviteit van zebravis Maatregel om veranderingen in lichtintensiteit

Leer hoe je vlas kweekt onder voedingsstres om erfelijke genomische variatie te induceren. Deze methode combineert PCR en Q-R-T-P-C-R om genexpressieveranderingen te analyseren en gewasresistentie te verbeteren.

Milieuvriendelijk Induced erfelijke veranderingen in de Flax

Meer video's verkennen