Name: Organotypische hippocampus Slice culturen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T17:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Leer organotypische hippocampus-sliceculturen voor neurowetenschappelijk onderzoek. Deze methode behoudt de hippocampusarchitectuur tot twee weken en is aanpasbaar voor andere hersengebieden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gefinancierd door NINDS - NIH R01NS060756

1. Voor het starten van de voorbereiding van de hippocampus Slices. <ol><li> Bereid het weefsel slicer door het plaatsen van een stuk van Teflon plaat en montage van een nieuw blad. </li><li> Veeg de weefselkweek (TC) kap met 70% ethanol en stel het ontleden microscoop binnen. Steriliseer de motorkap, microscoop, weefsel snijmachine en alle instrumenten voor het ontleden van 15 minuten met UV-licht. </li><li> Bereid zes goed TC platen. Voeg 750 ul slice cultuur media (SCM) per goed en plaats celcultuur inserts in elk putje. Zorg ervoor dat de membranen worden grondig nat zonder bubbels eronder. Leg de platen in de broedstoof bij 35 ° C vergast met 5% CO 2 totdat het nodig is. </li><li> Giet 50 mL lage Na + ACSF (ontleden oplossing) in een 100 ml beker en plaats het op ijs-zout mix. Bubble de lage Na + ACSF met 5% CO 2 / 95% O 2 tot de kleur verandert en ACSF vormt een brij mix van bevroren en vloeibare oplossing (10-20 min). </li><li> Hier krijg je een P5-P7 ratten pup. Maximaal drie pups worden gebruikt. </li></ol> 2. Hippocampus Slices Voorbereiding. <ol><li> Snijd de kop van het dier met scherpe utility schaar. Snijd de huid en de schedel bloot te leggen. Open de schedel door het snijden van links naar rechts langs de interaurale lijn en dan langs de pijlnaad met een klein schaartje. Een optionele gesneden van links naar rechts in de voorkant kan worden gedaan om te bevorderen het verwijderen van de botten en de blootstelling van de hersenen. Schep uit de hersenen snel met een ronde lepel micro-spatel en plaats deze in de brij van ontleden oplossing om te relaxen voor ~ 1 minuut. Giet ~ 10 ml ijskoude ontleden oplossing op een 60 mm schaal en overdracht van de hersenen van de beker aan het gerecht. De hersenen moeten worden gedekt met ontleden oplossing. </li><li> Onder de microscoop ontleden: Plaats de hersenen en houd hem bij de middenlijn met het ontleden tang ingedrukt om de bodem van de 60 mm schaal. Gebruik de hippocampus ontleden instrument om de hemisferen weglaten van de middenhersenen te scheiden. De hippocampus worden dan blootgesteld op elk halfrond. Dan voorzichtig schep de hippocampus uit met de hippocampus ontleden tool. Gebruik het ontleden naald volledig isoleren van de hippocampus en het schoon zo veel mogelijk. </li><li> Met behulp van een geknipt tip van een P1000 filter pipettip voorzichtig zuigen de hippocampus en het overbrengen naar het Teflon vel op het weefsel snijmachine. Plaats de hippocampus op zijn concave kant. </li><li> Lijn de hippocampus loodrecht op het blad te coronale secties te verkrijgen en overmaat vloeistof uitlekken. </li><li> Snijd de hippocampus elke 400 micrometer. </li><li> Giet ~ 10 ml koud SCM in een 60 mm schaal en overdracht gesneden hippocampus van de snijmachine met een andere geknipt P1000 filtertip en koud SCM. Vermijd het maken van bubbels. </li><li> Met de hulp van een iris spatel en een rechte spatel voorzichtig los van de schijfjes van elkaar. </li><li> Aparte goed gedefinieerd en onbeschadigd plakjes van beschadigde schijfjes. </li></ol> 3. Hippocampus Slices Cultuur <ol><li> Breng de zes-well platen met SCM en celkweek inserts uit de incubator. Met de hulp van een ander geknipt P1000 filtertip, transfer afzonderlijke segmenten op het membraan. Leg 4-5 plakjes per membraan. Wees voorzichtig niet te plaatsen de plakjes ofwel dicht bij het invoegen muur of dicht bij elkaar. Indien nodig, gebruik iris spatel te scheiden plakken. Verwijder overtollig medium. Touch plakjes zo weinig mogelijk als ze eenmaal op het membraan. </li><li> Verhuizen plaat terug naar incubator en cultuur bij 35 ° C en 5% CO 2. </li><li> Verandering SCM elke 48 uur in de TC kap door opzuigen van de SCM met een Pasteur pipet. Voeg 750 ul van verse voorverwarmde SCM per well. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen worden gevormd onder het membraan. </li></ol> 4. Oplossingen <ol><li> Een lage Na + ACSF - Dissecting Oplossing voor slice culturen Om gedeïoniseerd en steriele H 2 O toe te voegen: <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Voor 500 ml </td><td> Voor 1000 ml </td><td> Uiteindelijke concentratie </td></tr><tr><td> CaCl 2 (1 M) </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> D-Glucose </td><td> 0,901 g </td><td> 1,802 g </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 0,149 g </td><td> 0,298 g </td><td> 4 mM </td></tr><tr><td> MgCl 2 (1 M) </td><td> 2,5 ml </td><td> 5 ml </td><td> 5 mM </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 1,092 g </td><td> 2,184 g </td><td> 26 mM </td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> 40 g </td><td> 80 g </td><td> 234 mM </td></tr><tr><td> Fenolroodoplossing 0,5% in DPBS </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 0,1% v / v </td></tr></tbody></table> Mix ~ 30 min Sterilize door passage door 0.22μm filter Maak 50 ml porties en bewaar bij 4 ° C niet langer dan 2 maanden. </li><li> Slice Cultuur Medium (SCM) <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Voor 500 ml </td><td> Voor 1000 ml </td><td> Uiteindelijke concentratie </td></tr><tr><td> MEM Eagle medium </td><td> 4,2 g </td><td> 8,4 g </td><td> 8,4 g / l </td></tr><tr><td> Paardenserum hitte geïnactiveerd </td><td> 100 ml </td><td> 200 ml </td><td> 20% </td></tr><tr><td> L-Glutamine (200 mm) </td><td> 2,5 ml </td><td> 5 ml </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> CaCl 2 (1 M) </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> MgSO 4 (1 M) </td><td> 1 mL </td><td> 2 mL </td><td> 2 mM </td></tr><tr><td> Insuline (1 mg / ml), opgelost in HCl 0,01 N </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 1 mg / l </td></tr><tr><td> Ascorbinezuur, oplossing (25% w / v) </td><td> 0,024 mL </td><td> 0,048 mL </td><td> 0,00125% </td></tr><tr><td> D-Glucose </td><td> 1.16g </td><td> 2.32g </td><td> 13 mM </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 0.22g </td><td> 0.44g </td><td> 5.2 mM </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 3.58g </td><td> 7.16g </td><td> 30 mM </td></tr></tbody></table> Meng tot alles goed opgelost en breng aan de kamertemperatuur. Pas de pH op 7,27-7,28 met 1 N NaOH Meten osmolariteit. Aan te passen aan 320 mmol / kg met gedeïoniseerd en gesteriliseerd H 2 O. Verwachten dat ongeveer 25 tot 40 ml toe te voegen. Controleer opnieuw osmolariteit. *** PH kan iets veranderen tijdens het instellen van osmolariteit, is dit ok is, is het belangrijker dat de osmolariteit is in de juiste range (317-323). Steriliseren passage door 0.22 urn filter. Maak 20 ml porties en op te slaan voor maximaal twee-drie weken bij 4 ° C. Gluatamine voorraad: voor te bereiden op een concentratie van 200 mM en bewaar bij -20 ° C in porties van 2,5 mL. Ascorbinezuur voorraad: voor te bereiden op een concentratie van 25% (w / v) en opgeslagen bij -20 ° C in fracties van 100 pi. </li></ol> 5. Representatieve resultaten: Slices moet wit kijk onder een dissectie bereik zonder zwarte vlekken en goed gedefinieerd en onbeschadigd CA1, CA3, en de dentate gyrus regio&#39;s. Bacteriële besmetting is gemakkelijk te zien als het verplaatsen zwarte vlekjes op de middellange of troebelheid van het SCM. Bij plaatsing onder de microscoop, moet het oppervlak van het plakje schoon te kijken na 4 dagen in cultuur met een duidelijke en waarneembaar cellichamen. Als er geen duidelijke cellichamen worden gezien en nog veel puin beslaat de oppervlakte na 4 dagen, dan is geen gezonde slice.

<ol><li>Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+and+memory%3A+an+evaluation+of+the+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis.</a> Annu Rev Neurosci. 23, 649-711 (2000).</li>
<li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. I. ntroduction <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+potentiation+and+structure+of+the+issue%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term potentiation and structure of the issue.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 358, 607-611 (2003).</li>
<li>Shepherd, G. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShepherd%2C+GM+%22The+synaptic+organization+of+the+brain%22">The synaptic organization of the brain</a>. , 5th edn, University Press. Oxford. (2004).</li>
<li>Malinow, R., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+enhancement+shown+by+whole-cell+recordings+of+long-term+potentiation+in+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Presynaptic enhancement shown by whole-cell recordings of long-term potentiation in hippocampal slices.</a> Nature. 346, 177-180 (1990).</li>
<li>Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+green+fluorescent+protein+%28GFP%29+into+hippocampal+neurons+through+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Introduction of green fluorescent protein (GFP) into hippocampal neurons through viral infection.</a> Cold Spring Harb Protoc. , (2010).</li>
<li>Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit-specific+rules+governing+AMPA+receptor+trafficking+to+synapses+in+hippocampal+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons.</a> Cell. 105, 331-343 (2001).</li>
<li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Esteban, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA+phosphorylation+of+AMPA+receptor+subunits+controls+synaptic+trafficking+underlying+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKA phosphorylation of AMPA receptor subunits controls synaptic trafficking underlying plasticity.</a> Nat Neurosci. 6, 136-143 (2003).</li>
<li>Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+in+living+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18, 231-239 (1999).</li>
<li>Barria, A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit-specific+NMDA+receptor+trafficking+to+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Subunit-specific NMDA receptor trafficking to synapses.</a> Neuron. 35, 345-353 (2002).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Simoni, A. D. e, Griesinger, C. B., Edwards, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+rat+CA1+neurones+in+acute+versus+organotypic+slices%3A+role+of+experience+in+synaptic+morphology+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity.</a> J Physiol. 550, 135-147 (2003).</li>
</ol>

Deze methode is gebaseerd op de methode eerst beschreven door Stoppini et al.. Elf en biedt een snelle manier om de cultuur hippocampale slices. Het belangrijkste aspect van dit protocol is het handhaven van plakjes steriel, daarom is het van cruciaal belang voor geschikte steriele technieken te gebruiken en goed te desinfecteren en steriliseren van al het materiaal in contact met het weefsel. Verschillende serums bronnen kunnen invloed hebben op de kwaliteit van de schij...

<table><tbody><tr><td>Celcultuur-inserts</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM03050</td><td></td></tr><tr><td>6-wells platen</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Weefselsnijder</td><td>Stoelting Co.</td><td>51425/51415</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZX7-ILLD2-100</td><td></td></tr><tr><td>Dissectie-instrument voor hippocampus</td><td>F.S.T.</td><td>10099-15</td><td></td></tr><tr><td>Grote gebruiksschaar. Perfection</td><td>F.S.T.</td><td>37500-00/37000-00 Rechts/ Linkshandig</td><td></td></tr><tr><td>Irisspatel</td><td>F.S.T.</td><td>10093-13</td><td></td></tr><tr><td>Rechte spatel</td><td>F.S.T.</td><td>10094-13</td><td></td></tr><tr><td>Afgeronde lepel-microspatel</td><td>VWR international</td><td>57949-039</td><td></td></tr><tr><td>Dissectienaald met enkele snijkant</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72946</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiepincet</td><td>Dumont</td><td>#2</td><td></td></tr><tr><td>Kleine dissectieschaar</td><td>F.S.T.</td><td>14060-10</td><td></td></tr><tr><td>MEM Eagle medium</td><td>Cellgro</td><td>50-019 PB</td><td></td></tr><tr><td>Paardenserum hitte-geïnactiveerd</td><td>Invitrogen</td><td>26050-88</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)</td><td>Invitrogen</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3881</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2773</td><td></td></tr><tr><td>Insuline (1 mg/ml), opgelost in HCl 0,01 N</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Ascorbinezuur, oplossing (25%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td></td></tr><tr><td>Fenolrood oplossing 0,5% in DPBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr></tbody></table>

organotypische hippocampus slice culturen

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

De hippocampus, een onderdeel van het limbisch systeem, speelt een belangrijke rol in het lange termijn geheugen en ruimtelijke navigatie 1. Hippocampale neuronen kunt de kracht van hun verbindingen na korte periodes van sterke activering. Dit fenomeen, bekend als de lange termijn potentiatie (LTP) kan duren voor uren of dagen en is uitgegroeid tot de beste kandidaat mechanisme voor leren en geheugen 2. Daarnaast is het goed gedefinieerde anatomie en de connectiviteit van de hippocampus drie maakten het tot een klassiek model systeem om synaptische transmissie en synaptische plasticiteit 4 te bestuderen. Als ons begrip van de fysiologie van de hippocampus synapsen groeide en moleculaire spelers werd geïdentificeerd, een behoefte om synaptische proteïnen te manipuleren werd noodzakelijk. Organotypische hippocampus culturen bieden de mogelijkheid voor een eenvoudige genetische manipulatie en precies farmacologische interventie, maar behouden synaptische organisatie die is van cruciaal belang voor het begrijpen van synaps functioneren in een meer naturalistische context dan routine cultuur gedissocieerd neuronen methoden. Hier presenteren wij een methode voor te bereiden en cultuur hippocampale slices die gemakkelijk kunnen worden aangepast aan andere hersengebieden. Deze methode maakt een eenvoudige toegang tot de plakjes voor genetische manipulatie met behulp van verschillende methoden zoals virale infectie 5,6 of biolistics 7. Daarnaast kunnen plakken eenvoudig worden teruggewonnen voor biochemische assays 8, of overgedragen aan microscopen voor beeldvorming 9 of elektrofysiologische experimenten 10.

We beschrijven een methode om organotypische hippocampale slices die gemakkelijk kan worden aangepast aan andere hersengebieden te bereiden. Brain plakjes worden gelegd op poreuze membranen en cultuur media is toegestaan ​​om een ​​interface te vormen. Deze methode behoudt de bruto-architectuur van de hippocampus voor maximaal 2 weken in cultuur.

Organotypische hippocampus Slice culturen

De hippocampus, een onderdeel van het limbisch systeem, speelt een belangrijke rol bij het langetermijngeheugen en ruimtelijke navigatie 1. Hippocampale neuronen kunnen de ...

Het algemene doel van deze procedure is het kweken van organotypische hippocampuscoupes. Dit wordt bereikt door eerst de hippocampus te dissekeren. De tweede stap van de procedure is het snijden van de hippocampus.De derde stap van de procedure is het scheiden en sorteren van de hippocampale plakken. De laatste stap van de procedure is het kweken van de hippocampale plakken. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die gezonde organische hippocampale plakken tonen via visualisatie met een dissectiescoop of een microscoop.Hallo, mijn naam is Jimena Opitz en ik ben een onderzoeker in het laboratorium van Dr. Andres bar aan de University of Washington in Seattle. Ik zal de procedure voor de organotypische kweek van hippocampus-plakjes demonstreren. Over het algemeen hebben mensen die nieuw zijn met deze methode moeite met de noodzaak om de hippocampus snel te dissekeren en in plakjes te snijden, en om contaminatie te voorkomen, is een steriele dissectie-oplossing en plakjeskweek essentieel.Media kunnen tot drie weken van tevoren worden bereid en bewaard bij vier graden Celsius, zoals beschreven in het schriftelijke protocol. Voordat de hippocampale coupes worden gemaakt, kunnen

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De organoptypic hippocampus slice cultuur-model is...

De organotypische hippocampus Slice Cultuur Model is voor de behandeling Neuronale Letsel

This video demonstrates a method for preparing organotypic hippocampal slice cultures from the brain of a rat pup. It outlines the steps involved in the dissection of the hippocampus, slicing, and culture conditions required to promote cell viability and growth in the hippocampal slices, ultimately generating organotypic slice cultures.

Preparation of Organotypic Slice Cultures from a Rat Pup&#39;s Hippocampus

Een techniek om NG2-cellen en oligodendrocyten te bestuderen met behulp van een slice-kweeksysteem van de voorhersenen en het cerebellum wordt beschreven. Deze methode maakt onderzoek van de dynamica van proliferatie en differentiatie van cellen binnen de oligodendrocytlijn mogelijk, waarbij de extracellulaire omgeving gemakkelijk kan worden gemanipuleerd terwijl de weefselcytoarchitectuur behouden blijft.

Organotypische Slice culturen om te studeren Oligodendrocyte Dynamics en Myelination

Paaropnamen zijn gelijktijdige gehele cel patch clamp opnamen van twee synaptisch verbonden neuronen, waardoor een nauwkeurige elektrofysiologische en farmacologische karakterisering van de synapsen tussen individuele neuronen mogelijk wordt. Hier beschrijven we de gedetailleerde methodologie en vereisten voor het vestigen van deze techniek in organotypische hippocampale plakculturen in elk laboratorium dat is uitgerust voor elektrofysiologie.

Gepaarde Whole Cell Opnamen in Organotypische hippocampus Slices

Een protocol voor entorhino-hippocampus organotypische slice culturen, die het mogelijk maakt het reproduceren vele aspecten van ischemisch hersenletsel, wordt gepresenteerd. Door het bestuderen van veranderingen in de neurovasculatuur naast veranderingen in de neuronen, dit protocol is een veelzijdig gereedschap plastic veranderingen in hersenweefsel bestuderen na beschadiging.

De Analyse van Neurovascular Verbouwing in Entorhino-hippocampus Organotypische Slice Culturen

Hier beschrijven we een techniek voor het bestuderen van de hippocampus postnatale neurogenese met de organotypische slice cultuur techniek. Deze werkwijze maakt in vitro manipulatie van volwassen neurogenese en maakt de directe toepassing van farmacologische middelen aan de gekweekte hippocampus.

Organotypische Slice Culturen voor Studies van Postnatale Neurogenese

Organotypic hippocampal segment culturen (OHSC) vormen een in vitro model dat de in vivo situatie heel goed simuleert. Hier beschrijven we een op vibratome gebaseerde verbeterd snijden protocol om te verkrijgen van hoge kwaliteit segmenten voor gebruik bij de beoordeling van het neuroprotectieve potentieel van nieuwe stoffen of het biologisch gedrag van de tumorcellen.

Organotypic Hippocampal Slice culturen als een Model voor de studie neuroprotectie en invasiviteit van tumorcellen

We beschrijven een protocol voor cel-type specifieke uitdrukking van de genetisch gecodeerde FRET-gebaseerde sensor ATeam 1.03Yemk in organotypische segment culturen van de muis forebrain. Bovendien, we laten zien hoe deze sensor gebruiken voor dynamische beeldvorming van cellulaire ATP niveaus in neuronen en astrocyten.

Imaging van intracellulaire ATP in Organotypic weefsel segmenten van de muis hersenen met behulp van de FRET-gebaseerde sensor ATeam 1.03Yemk

Hier beschrijven we de bereiding van rhinale cortex-hippocampus organotypische plakjes. Onder een geleidelijke en gecontroleerde deprivatie van serum, deze plakken verbeelden evoluerende epileptische-achtige gebeurtenissen en kan worden beschouwd als een ex vivo model van epileptogenese. Dit systeem is een uitstekend hulpmiddel voor het monitoren van de dynamiek van spontane activiteit, evenals voor het beoordelen van de progressie van neuro-inflammatoire kenmerken gedurende de loop van...

Een model van epileptogenese in rhinale cortex-hippocampus organotypische plakculturen

Dit protocol beschrijft de voorbereiding van horizontale hippocampal-entorhinal cortex (HEC) plakjes van muizen die spontane scherpe golf rimpelactiviteit vertonen. Plakjes worden geïncubeerd in een vereenvoudigde interface-holdingkamer en opnames worden uitgevoerd onder ondergedompelde omstandigheden met snelstromende kunstmatige cerebrospinale vloeistof om weefsel oxygenatie en de spontane opkomst van activiteit op netwerkniveau te bevorderen.

Acute muis hersenen snijden om spontane Hippocampal Netwerk activiteit te onderzoeken

Dit artikel is bedoeld om een systematisch protocol te beschrijven om horizontale hippocampale hersenplakken bij muizen te verkrijgen. Het doel van deze methodologie is om de integriteit van hippocampale vezelroutes te behouden, zoals het perforantpad en het bemoste vezelkanaal om deukende gyrusgerelateerde neurologische processen te beoordelen.

Horizontale Hippocampal Plakjes van de Hersenen van de Muis

Leer organotypische hippocampus-sliceculturen voor neurowetenschappelijk onderzoek. Deze methode behoudt de hippocampusarchitectuur tot twee weken en is aanpasbaar voor andere hersengebieden.

Organotypische hippocampus Slice culturen

Meer video's verkennen