JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:08 min. • August 31st, 2026
Begin met een geanestheseerde muis in rugligging, waarbij de huid van de thorax is geschoren.
Desinfecteer de geschoren huid.
Gebruik echografie om het hart te visualiseren en de buitenwand van de linker ventrikel te identificeren.
Neem een microspuit met een recombinant virus dat een testgen codeert waarvan wordt vermoed dat het de hartfunctie beïnvloedt.
Breng onder echogeleiding de naald in de ventricelwand in.
Injecteer het virus in de spierlaag van de wand.
Voer een tweede en derde injectie uit, gericht op verschillende ventriculaire locaties om een bredere genexpressie te bereiken.
Trek de naald terug en laat de muis herstellen.
Het virus bindt aan receptoren op ventriculaire spiercellen, waardoor receptor-gemedieerde endocytose en transport van het virale genoom naar de nucleus worden geïnitieerd.
De expressie van het virale genoom leidt tot de synthese van het gecodeerde eiwit.
Het muismodel is nu gereed om de effecten van virus-geïnduceerde genexpressie op de hartfunctie te beoordelen.
Begin met het steriliseren van de linkeronderzijde van de borststreek van de geanestheseerde muis door drie keer in een cirkelvormige beweging afwisselend een scrub op basis van jodium of chloorhexidine en alcohol aan te brengen. Breng onder begeleiding van echografische beeldvorming de naald van de spuit met het virus in de borstkas van het dier in.
Breng de naaldpunt naar de voorste vrije wand van de linker ventrikel en injecteer langzaam 10 tot 15 µL van het virus. Verifieer de succesvolle injectie in de echobeelden aan de hand van de verhoogde helderheid nabij de naaldpunt. Trek de naald uit het hart en breng deze in andere regio's van de linker ventrikel voor een tweede en derde injectie van dezelfde hoeveelheid virus.