Name: Een Alternant Methode om de traditionele NASA achterbeen Lossen Model in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Leer een vereenvoudigde methode voor achterpootontlading bij muizen met staartringimplantatie. Deze techniek induceert spieratrofie zonder de algehele gezondheid en lichaamsgewicht te compromitteren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag Andrew J Dunn, een uitstekende undergraduate research student in ons laboratorium, bedanken voor zijn technische bijstand en verzorging van de dieren. Het Nationaal Instituut voor Gezondheid verlenen HD058834 en de Universiteit van Missouri Life Sciences Fellowship gefinancierd dit werk.

Pre-Surgery Instrumenten / materialen <ul><li> Draadtang / tang </li><li> Gaas 2 x 2 "pads </li><li> Verwarming pad </li><li> Zilvernitraat sticks </li><li> Steriele chirurgische handschoenen </li><li> Isofluraan inhalatie </li><li> Chloorhexidinegluconaat 4% (Antiseptische chirurgische scrub) </li><li> Steriele 2-0 chirurgisch staal hechtdraad </li><li> 25 X 5 / 8 A gauge naald (geautoclaveerd) </li><li> Hemostaat (geautoclaveerd) </li><li> Chirurgisch staal hechtdraad </li></ul> Chirurgie Procedure <ol><li> Maak een steriel veld. Volg steriele procedure. </li><li> Verdoven muis met 2 - 3% isofluraan. </li><li> Plaats muis op de verwarming pad. </li><li> Scrub staart met Chloorhexidine oplossing. </li><li> Zoek 5, 6 of 7 e de ruimte tussen de (tussen twee benige bulten op de staart, beginnen te tellen vanaf het einde van het lichaam van haar, aan de basis van de staart). </li><li> Gebruik hemostaat en 25G naald om een ​​gaatje te maken tussen twee wervels, in de intervertebrale ruimte. </li><li> Gebruik de kniptang op de stalen hechting cut 10 cm lang. </li><li> Verwijder de naald en steek stalen hechtdraad door het gat, 5 cm van de hechtdraad aan beide uiteinde van de staart. </li><li> Elke kant van de staart moeten hebben + 5 cm van de hechtdraad. </li><li> Plaats duim tip op staart. </li><li> Gebruik je vrije hand en wind de stalen hechting op het topje van je duim en draai de uiteinden om een ​​grote lus te vormen. De wond of ronde gedeelte moet worden + 3 mm lang. </li><li> Verwijder uw duim. </li><li> Klem een ​​streng van hechtdraad met de hemostaat en buig het in een kleinere lus, aan het einde van die zo dicht mogelijk aan de draai op de originele grote lus. </li><li> Knip overtollige draad, en buig de gedraaide draad terug. </li><li> Als er een overschot bloeden, kunt u stoppen met de zilvernitraat sticks. </li><li> Schakel de isofluraan en leg de muis in een enkel huis kooi om te herstellen voor 5-7 dagen voorafgaand aan de achterbeen lossen. De staart ringen verstrikt raken als er meer dan een muis is samen gehuisvest. </li></ol> 1. Achterbeen Lossen Procedure Materialen <ul><li> Maat 10-24 X 4 machine schroeven, een per dier. </li><li> Nylon moer maat 10 - 24, een per dier. </li><li> Vleugelmoer maat 10 x 24, twee per dier. </li><li> Washer size ¼ X 1, twee per dier. </li><li> Vissen draaibare met karabijnhaak size # 6, 1-11/16 ", en een per dier. </li><li> Metalen naaimachine spoel. Een per dier. </li><li> Kleine paperclip voor de S-vormige haak, een per dier </li><li> Tang. </li><li> 2 x 2 "gaas. </li><li> 2 "zwart papier bindmiddel klemmen. </li><li> Duct tape / lab tape. </li><li> 1-3/8 "Plated sleuven stalen staaf die zich iets verder dan de volledige lengte van de kooi </li><li> 50cm x 40cm x 20cm kooi (rat kooi). </li><li> Water Bottle met gebogen buis. </li><li> Roestvrij staaldraad, U-vormige om water fles te ondersteunen. </li></ul> Kooi Setup <ol><li> Leg de 1-38 "Plated sleuven stalen balk over de bovenkant van de kooi, en plak hem tijdelijk af met duct tape. </li><li> Schroef een vleugelmoer om de machine te schroeven, plaatst u een wasmachine, en plaats de machine schroef via de sleuf stalen plaat ± 15 cm van de rand van de kooi. </li><li> Voeg nog een ring en vleugelmoer. Draai beide vleugelmoeren, maar niet volledig vast, want het zal nodig zijn om later te doen aanpassingen. </li><li> Steek de machine schroef door het middelste gat van de spoel. </li><li> Om te voorkomen dat de spoel van vallen, schroef de nylon borgmoer aan het einde van de machine schroef. De spoel moet vrij kunnen draaien. </li><li> Plaats de haak van de vissershaven draaien door het onderste deel van de spoel. </li><li> Gebruik een tang om een ​​S-vormige haak vorm van de paperclip. (Cut 2cm van de paperclip aan een haak vorm). </li><li> Steek een uiteinde van de S-vormige haak door de opening van de visserij-zwenk-en knijp deze dicht met de tang. </li><li> Plaats de U-vormige draad, parallel aan de machine schroef, aan de binnenkant van de kooi kant, en terug buig de uiteinden om een ​​volledige fles water te ondersteunen. </li><li> Plaats de fles water in de U-vormige draad, met de spicket naar beneden, maar niet contact met de bodem. </li><li> Buig de twee "bindmiddel klem te openen, zodat ze niet dicht te sluiten. Net genoeg spanning voor 3 tot 4 stukken voedsel houden zonder te vallen. Dit is de kracht van de klem te voorkomen van het neerslaan van de voeding, of klemmen neer op de muis neus. </li><li> Plaats 3 tot 4 objecten van knaagdieren voer in het bindmiddel klem. </li></ol> Achterbeen Lossen van Muis <ol><li> Steek het open uiteinde van de S-vormige haak door de kleinste ring van de staart ring. </li><li> Stel de muis hoogte vast door of het losmaken van de onderste vleugel moer op de machine vast. De onderste extremiteiten mag niet het gewicht dragen. Zodra de optimale hoogte is bereikt draait u de bovenste vleugel moer. </li><li> Verplaats de waterfles, en U-vormige draad, zodat de muis niet kan op de spicket klim met zijn achterpoten. Zet de fles met water Duct tape aan de zijkant van de kooi. </li><li> Plaats het bindmiddel klem met voedsel op de bodem van de kooi, zodat de muis niet kan klimmen op het; plak hem vast met duct tape. </li><li> Herhaal dezelfde procedure als er meer dan een dier is achterbeen gelost aan de andere kant van de kooi. Huis twee dieren per kooi, de ruimte van de dieren, zodat ze kunnen elkaar bijna raken. </li><li> Met de 2 X 2 gaas aan de staart van de muis losjes wrap op de vis swivel. Gebruik een klein stukje tape te wikkelen rond het gaas, het veiligstellen van de gaas aan de staart. Deze stap is belangrijk om de staart te voorkomen dat hangende naar beneden, wat leidt tot bloedophoping in het puntje van de staart en die staart het necrotisch wordt. </li><li> Voeg een kleine hoeveelheid cob beddengoed naar de kooi. Voeg geen te veel strooisel anders wordt de muis van een heuvel van beddengoed en proberen achterpoten belasting van beddengoed. </li></ol> 2. Representatieve resultaten: Om vast te stellen het succes van de staart-ring HU techniek die we gemeten lichaamsgewicht van de dieren voor de staart ring chirurgie, en voorafgaand aan en na HU en herstel; soleus spiermassa, en bijnier massa in alle groepen. Lichaamsgewicht van de muizen gedurende het hele experiment zijn weergegeven in figuur 1. Lichaamsgewicht van de muizen voorafgaand aan de staart ring operatie (24,7 ± 3,5 g) waren niet significant verschillend na 5 dagen van herstel van de staart ring operatie (24,3 ± 2.9g) voorafgaand aan de HU. Evenmin heeft het lichaamsgewicht significant onmiddellijk dalen na 14 dagen van de HU (22,7 ± 1.9g), 28 dagen van HU (21,3 + 2,1 g) of na 3 dagen herstel van HU (24,0 ± 1,8 g). Hoewel de HU voor 14 en 28 dagen resulteerde in een kleine (-6,8% en 12%), maar niet-significant verlies in body-mass, de muizen volledig hersteld van hun pre-HU lichaamsgewicht na 3 dagen van herstel. Voedselconsumptie voor ambulante controle muizen en muizen HU is weergegeven in figuur 3. Gemiddelde dagelijkse inname van voedsel was niet anders in HU muizen meer dan 28 dagen in vergelijking met de controlegroep. We zagen grote soleus spieratrofie volgende HU voor 14 en 28 dagen (-39,1%, en -46,6%), wat wijst op een effectieve HU procedure (figuur 2). Bovendien is deze mate van atrofie is in overeenstemming met de verwachte literatuur waarden voor 2-4 weken van de HU 2, 7, 8. Na drie dagen van herstel van de HU soleus massa sterk toegenomen tot 74% van de controle waarden. Soleus massa in het herstel groep was significant groter dan de beide HU groepen, maar nog steeds aanzienlijk minder dan de ambulante controle dieren. Bijnier gewichten werden gemeten als een indicator van het dier stress; zowel de linker-en rechter bijnieren werden uitgesneden en gewogen. De gemiddelde gewichten waren vergelijkbaar voor de controle en HU muizen muizen in alle groepen (zie figuur 4). Eerder bij ratten hebben we laten zien dat het slagingspercentage voor het aantal dieren aan het begin van de HU in vergelijking met het aantal dieren dat HU afgerond zonder coming out van de schorsing apparatuur (als gevolg van dieren kauwen door middel van de staart-tractie tape) was 10 van 12 het gebruik van de Morey-Holton techniek 1. Geen van de muizen (n = 54) in dit onderzoek ooit naar beneden kwam van schorsing voorafgaand aan de voltooiing van de HU periode. We hebben echter wel een muis die met een zwaar ontstoken staart ontwikkeld. Toen ontsteking duidelijk werd, hebben we verwijderd van de staart ring om het ontstoken gebied om te genezen, en vervolgens in een andere tail-ring om de duur van de HU te voltooien. In het verleden, toen we de Morey-Holton methode van HU wordt gebruikt, hebben we meestal te elimineren 1-2 muizen / groep, omdat ze komen uit de opschorting apparaat. Met de trail-ring methode waren er geen afleveringen van muizen per ongeluk coming out van de HU apparaat tijdens de periode van de HU voor 14 of 28 dagen (n = 54 muizen). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Veranderingen in het lichaamsgewicht (gemiddelde ± SD). Afkortingen: CON: dragende controle muizen (n = 76), Pre-HU: alle muizen voorafgaand aan de HU (n = 54); HU14: muizen achterbeen gelost voor 14 dagen (n = 34); HU28: muizen achterbeen gelost 28 dagen (n = 20), REC: achterbeen gelost muizen toegestaan ​​om kooi te herstellen voor 3 dagen (n = 22). Er werden geen significante verschillen in lichaamsgewicht werden waargenomen tussen de groepen. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Soleus spieratrofie (gemiddelde ± SD). Afkortingen: CON: dragende controle muizen (n = 76); HU14: muizen achterbeen gelost voor 14 dagen (n = 34); HU28: muizen achterbeen gelost gedurende 28 dagen (n = 20), en REC: achterbeen toegestaan ​​gelost muizen te kooi te herstellen voor 3 dagen (n = 22). * Significant verschillend (p &lt;0,001) dan dragende control (CON). δSignificantly verschillend (p &lt;0,01) dan de beide HU groepen. 467fig3.jpg "alt =" Figuur 3 "/&gt; Figuur 3. Voedselconsumptiepeiling (gemiddelde ± SD). Gemiddelde dagelijkse inname van voedsel (g / dag) tijdens dragende achterbeen en lossen. Afkortingen: dragende controle muizen (n = 76), HU: muizen achterbeen unloaded14 - 28 dagen. Er werden geen significante verschillen tussen de CON en HU groepen waargenomen. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4. Bijnier Massa (gemiddelde ± SD). Afkortingen: CON: dragende controle muizen (n = 76); HU14: muizen achterbeen gelost voor 14 dagen (n = 34); HU28: muizen achterbeen gelost gedurende 28 dagen (n = 20), en REC: achterbeen toegestaan ​​gelost muizen te kooi te herstellen voor 3 dagen (n = 22). Er werden geen significante verschillen waargenomen tussen de groepen.

<ol><li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gravitational+Physiol%22%5BJournal%5D)">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li>
<li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+disuse%3A+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li>
<li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Ca2%2B+transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li>
<li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spaceflight+and+bone+turnover%3A+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness%5BTitle%5D)+AND+%22BioScience%22%5BJournal%5D)">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+of+growing+rats%3A+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+rodent+model%3A+technical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li>
<li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li>
<li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li>
</ol>

Evalueerden we een alternatieve methode voor het achterbeen lossen muizen, die we vastbesloten om zijn zeer succesvol. De staart-ring methode zoals hier beschreven werd gebruikt voor de lange termijn achterbeen vering, en herstel na HU studeren. Onder elk van deze voorwaarden, er was geen bewijs van het niet aan te passen, zoals blijkt uit een stabiele voedselinname, lichaamsgewicht, en de bijnieren gewichten van de muizen. Deze staart-ring HU techniek is eenvoudig uit te voeren en kan gemakkelijk worden opgenomen met zeer weinig chirurgische praktijk. Er zijn verschillende voordelen van de staart-ring methode in vergelijking met de traditionele Morey-Holton 5, 6 methode. Ten eerste, de huid en de ring implantatie op die staart altijd zichtbaar zijn, dus als er problemen ontstaan ​​is het meteen duidelijk, niet alleen op het einde van de periode van opschorting. Ten tweede, dieren zijn niet in staat om eruit te komen van de suspensie apparaat op elk moment tijdens HU, het wegnemen van de noodzaak om te bepalen of een muis dan niet in de dataset te houden te maken. Bovendien hebben de muizen geen moeite de ring apparatuur en zodra ze zijn vrijgegeven van de HU voor herstel, dat doen ze niet knoeien met hun staart, waardoor een naadloze fase van herstel na HU. Tot slot, achterbeen gelost muizen met de staart-ring methode behouden van hun lichaamsgewicht beter dan muizen achterbeen gelost door de Morey-Holton tail-tractie techniek. In onze handen na 14 dagen van de HU zagen we een kleine (-6,8%), maar niet-significant verlies in body-mass. Overwegende dat de Ingalls et al.. Waargenomen een significante daling van -12% in lichaamsgewicht in muizen na 14 dagen van HU door de Morey-Holton methode 3. Hoewel Ingalls geen rapport bijnier gewichten, lijkt het erop dat onze staart-ring methode minder stress geeft de muis (bijnieren gewichten in onze HU muizen zijn niet anders dan controles) en beter onderhoud van het lichaamsgewicht de hele achterbeen lossen periode. In het kort, was een staart ring methode achterbeen lossen ontwikkeld en getest op muizen HU voor 14 en 28 dagen, en op muizen terug naar kooi herstel voor 3 dagen na de HU. Op basis van de bijnier gewicht, body mass en voedselinname, muizen lijken te goed hebben aangepast aan de staart-ring apparaat. De staart-ring achterbeen lossen methode is een handig, eenvoudig alternatief voor de traditionele Morey-Holton achterbeen lossen techniek.

<table><tbody><tr><td>Kniptang/combinatietang</td><td>Ace Hardware</td><td>84-056</td><td></td></tr><tr><td>Gaas</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-901</td><td></td></tr><tr><td>Warmtekussen</td><td>Sunbeam</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>Zilvernitraat-applicatoren</td><td>ARZOL</td><td>0001-2</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan, USP</td><td>Novaplus</td><td>NDC 0409-3292-49</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhexidinegluconaat 4%</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-200-01</td><td></td></tr><tr><td>Steriele 2-0 chirurgische stalen hechtdraad</td><td>Ethicon Inc.</td><td>SS-28</td><td></td></tr><tr><td>25 X 5/8 A maat naald</td><td>Terumo Medical Corp.</td><td>NN 2516R</td><td></td></tr><tr><td>Hemostaat/naaldhouder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Machinebouten maat 10-24 X 4</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>90272</td><td></td></tr><tr><td>Nylon borgmoer maat 10 X 24</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180141</td><td></td></tr><tr><td>Vleugelmoer maat 10 X 24</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180243</td><td></td></tr><tr><td>Carrosseriering maat &amp;#188; X 1</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>290012</td><td></td></tr><tr><td>Visdraai met klikslot maat #6, 1-11/16&amp;#8221;</td><td>Bass Pro Shop</td><td>38-481-554-01</td><td></td></tr><tr><td>Metalen spoel voor naaimachine</td><td>Singer Instruments</td><td>45785</td><td></td></tr><tr><td>Paperclip</td><td>Office Depot</td><td>221720</td><td></td></tr><tr><td>2&amp;#8221; zwarte papierklemmen</td><td>Office Depot</td><td>308957</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Multi-Use ducttape</td><td>Office Depot</td><td>790710</td><td></td></tr><tr><td>1-3/8&amp;#8221; verzinkte gesleufde stalen staaf</td><td>Home Depot</td><td>548932</td><td>Steekt iets buiten de totale lengte van de kooi</td></tr><tr><td>50cm X 40cm X 20cm kooi (rattenkooi)</td><td>Alternative Design Manufacturing</td><td>RC88D-PC</td><td></td></tr><tr><td>Waterfles</td><td>Alternative Design Manufacturing</td><td>WB16FS</td><td></td></tr><tr><td>Roestvrijstalen draad</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>SWX-4029</td><td>U-vormige draad ter ondersteuning van de waterfles</td></tr></tbody></table>

een alternant methode om de traditionele nasa achterbeen lossen model in muizen

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

De Morey-Holton achterbeen lossen (HU) methode is een algemeen aanvaarde National Aeronautics and Space Administration (NASA) op de grond model voor het bestuderen van onbruik-atrofie bij knaagdieren 4-6. Onze studie evalueerde een alternant methode om de gouden standaard Morey-Holton HU tail-tractie techniek in muizen. Vierenvijftig vrouwelijke muizen (4-8 ma.) Waren HU voor 14 dagen (n = 34) of 28 dagen (n = 20). Herstel van HU werd vastgesteld na 3 dagen van het normale kooi ambulantie volgende HU (n = 22). Leeftijd afgestemd muizen (n = 76) diende als dragende controles. Voorafgaand aan de HU een staart ring werd gevormd met een 2-0 steriel chirurgisch staaldraad die werd door de 5 e, 6 e of 7 e inter-vertebrale schijfruimte en gevormd tot een ring, waaruit de muizen werden opgeschort. Vertebrale locatie voor de staart-ring werd geselecteerd om lichaamsgewicht van de dieren de juiste balans zonder zich te bemoeien met de ontlasting. We bepalen het succes van deze roman HU techniek door het beoordelen van het lichaamsgewicht voor en na de HU, de mate van soleus atrofie, en bijnier massa na HU. Lichaamsgewicht van de muizen voorafgaand aan de HU (24,3 ± 2.9g) had geen significante daling direct na 14 quinquies van HU (22,7 ± 1.9g), 28d van de HU (21,3 + 2,1 g) of na 3 dagen herstel (24,0 ± 1,8 g) . Soleus spiermassa aanzienlijk gedaald (-39,1%, en -46,6%) na de HU voor 14 dagen en 28 dagen respectievelijk (p &lt;0,001). Na drie dagen van herstel soleus massa sterk toegenomen tot 74% van de controle waarden. Bijnier gewichten van HU muizen waren niet verschillend in vergelijking met controle muizen. Het succes van onze nieuwe HU methode is aangetoond door het behoud van lichaamsgewicht van de dieren, te vergelijken bijnier gewichten, en soleus atrofie volgende HU, wat overeenkomt met de verwachte waarden van de literatuur 2, 7, 8. De belangrijkste voordelen van deze HU methode zijn: 1) het gemak van de staart examen tijdens de schorsing, 2) verminderde kans op cyanotisch, ontstoken, en / of necrotische staarten frequent waargenomen met staart-taping en HU, 3) geen mogelijkheid om van de muizen het kauwen van de tractie tape en coming out van de opschorting apparaat, en 4) een snel herstel en normale kooi-activiteit direct na de HU.

We ontwikkelden een alternant achterbeen lossen model in muizen. Het belangrijkste voordeel van onze achterbeen lossen staart-ring methode over de conventionele Morey-Holton tail-tractie techniek is een simpele eenvoudige procedure dat stress vermindert op het dier.

Een Alternant Methode om de traditionele NASA achterbeen Lossen Model in Muizen

De Morey-Holton-methode voor het ontlasten van de achterpoten (hindlimb unloading, HU) is een algemeen geaccepteerd, op de grond gebaseerd model van de National Aeronautics and Space Administration (NASA) voor het bestuderen van ...

Het algemene doel van deze procedure is om hind limb unloading (hu) bij muizen uit te voeren met een eenvoudigere, meer directe methode die stress voor het dier minimaliseert. Deze tailing-methode induceert succesvol atrofie van de achterpoten zonder de algemene gezondheid en het lichaamsgewicht in gevaar te brengen. De eerste stap is het implanteren van een staartring in een volwassen muis.Het is belangrijk dat het lichaamsgewicht en gezondheidsobservaties gedurende de gehele studie worden geregistreerd. De apparatus voor het ontlasten van de achterpoten wordt vervolgens gemonteerd en in een kooi geplaatst waarin de ontlasting zal plaatsvinden. Zodra het dier is hersteld, wordt het in de apparatus geplaatst voor de ontlastingsprocedure.Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen via metingen van zowel het lichaams- als de spiermassa, die spieratrofie in de achterpoten van onbelaste muizen aantoonden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals de Maori Holton-tape-techniek, is dat de huid van de staart altijd zichtbaar is. Muizen zijn niet in staat om uit het ophangapparaat te ontsnappen of met de ring te spelen, en herstellen sneller en behouden een stabiel lichaamsgewicht.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in de velden van de muskuloskeletale fysiologie, evenals in de gravitationele biologie en ruimtebiologie, zoals het voorkomen van skeletspieratrofie en botverlies na langdurige perioden van fysieke inactiviteit, bedrust, ledematenmobilisatie, microzwaartekracht, neuromusculaire ziekten en bij toenemende leeftijd. We kregen dit idee toen we complicaties ervoeren met de Maury Holden-techniek voor het tapen van de staart. We verloren consequent dieren en experimentele gegevens doordat muizen ontsnapten uit het apparaat voor de achterpoten tijdens het demonstreren van deze techniek.Vandaag zijn we samen met Andres Ferrara, senior Research Associate uit mijn laboratorium. Andres wordt bijgestaan door Jacqueline Chrissy, een promovendus in het lab, en Andrew Dunn, een bachelorstudent die ook in het lab werkt. Begin met het steriliseren van het operatiegebied, anesthetiseer de volwassen muis met isofluorane, noteer vervolgens het gewicht van de muis en plaats deze op een warmtemat. Bereid de staart voor op de chirurgische ingreep door deze te scrubben met een chloorhexidine-oplossing.Begin met tellen vanaf het einde van de lichaamsharen aan de basis van de staart om de vijfde, zesde of zevende intervertebrale ruimte tussen twee benige uitsteeksels op de staart te lokaliseren. Gebruik een hemostat en een 20 5G naald om een gidsgat tussen twee wervels in de intervertebrale ruimte te maken. Verwijder de naald en breng een stalen hechtdraad in.Knip de hechtdraad door het gat af op een lengte van 10 centimeter. Er moeten aan beide zijden van de staart vijf centimeter hechtdraad uitsteken. Plaats de punt van uw duim op de staart en wikkel met uw vrije hand de stalen hechtdraad rond uw duim.Draai de uiteinden om een grote lus te vormen. Het gewonden of cirkelvormige gedeelte moet ongeveer drie millimeter lang zijn. Klem één draad van de hechtdraad vast met een hemostaat en buig deze tot een kleinere lus, waarvan het uiteinde zo dicht mogelijk bij de draaiing van de oorspronkelijke grote lus wordt bevestigd.Knip overtollige draad af en buig de getwiste draad terug. Stop eventuele resterende bloedingen met zilvernitraatstiften. Laat het dier vijf tot zeven dagen herstellen vóór het ontlasten van de achterpoten of hu na de operatie.Plaats de klemmen individueel om te voorkomen dat de staartringen in elkaar raken. Leg een gegalvaniseerde, gesleufde stalen staaf van één inch breed en drie-achtste inch dik over de bovenkant van de kooi en plak deze vast. Voeg nog een ring en vleugelmoer toe, maar draai deze niet volledig aan, zodat er later nog aanpassingen kunnen worden gemaakt.Plaats de machineschroef door het centergat van de bobine om te voorkomen dat de bobine eraf valt. Draai een nylon borgmoer op het uiteinde van de machineschroef. De bobine moet vrij kunnen draaien.Steek de snaphaak van een visdraaiverbinder door het onderste gedeelte van de bobin. Gebruik een tang om van een paperclip een S-vormige haak te buigen. Steek één uiteinde van de S-vormige haak door het gat van de visdraaiverbinder en knijp deze met de tang dicht.Plaats een U-vormige draad parallel aan de machineschroef aan de binnenzijde van de kooi en buig de uiteinden over de zijkant. Om een volle waterfles te ondersteunen, plaatst u een waterfles met de tuit naar beneden in de U-vormige draad, zonder dat deze de bodem raakt. Bevestig de waterfles aan de kooi met ducttape.Buig een binderklem van twee inch open, waarbij voldoende spanning overblijft om enkele stukjes voedsel vast te houden zonder de pellets te pletten voorafgaand aan de procedure voor het ontlasten van de achterpoten. Noteer het gewicht van de muis om als referentie te gebruiken voor vergelijkingen. Steek later het open uiteinde van de S-vormige haak door de kleinere ring die uit de staart steekt.Stel de hoogte van de muis in door de onderste vleugelmoer op de machineschroef aan te draaien of los te draaien. De onderste extremiteiten mogen niet gewichtsdragend zijn. Zodra de optimale hoogte is bereikt, draait u de bovenste vleugelmoer vast en positioneert u de waterfles met een nieuw gevormde draad, zodat de muis met zijn achterpoten niet op de tuit kan klimmen.Om de voedselconsumptie tijdens de studie te meten, weegt u de korrels voordat u ze in de klemplaat plaatst. Bied ongeveer 8 tot 10 gram aan om een consumptie van ongeveer vijf tot zes gram voer per dag mogelijk te maken. Bevestig per muis de klemplaat met voer op de bodem van de kooi, zodat de muis er niet op kan klimmen, en zet deze vast met ducttape.Gebruik losjes vierkante stukken van twee bij twee inch. Wikkel de staart om de visdraaiers. Wikkel een klein stukje staart om de stukken heen om ze aan de staart te bevestigen.Deze stap is belangrijk om te voorkomen dat de staart naar beneden hangt, waardoor bloed in de punt kan trekken en de staart necrotisch kan worden. Herhaal dezelfde procedure voor een extra dier aan de andere kant van de kooi. Wanneer er twee dieren per kooi worden gehuisvest, plaats ze zodanig dat ze elkaar bijna kunnen aanraken.In het midden van de kooi. Ik voeg een kleine hoeveelheid maïskolfstrooisel toe aan de kooi, waarbij ik ervoor zorg dat er niet genoeg is voor de muis om een hoopje van te maken. Verwijder na de procedure voor hind limb unloading het dier uit het apparaat en verwijder de staartring.Registreer met een draadknipper het lichaamsgewicht en plaats het dier terug in de thuiskooi voor herstel. Na een herstelperiode wachten de dieren opnieuw en worden de soleusspier en de bijniermassa's gemeten. Lichaamsgewichten voorafgaand aan de staartoperatie verschilden niet significant van die vijf dagen na de operatie en voorafgaand aan hu.Hoewel het ontlasten van de achterpoten gedurende 14 en 28 dagen leidde tot een klein maar niet significant verlies aan lichaamsmassa, herstelden de muizen volledig naar hun lichaamsgewicht van vóór de HU. Na drie dagen herstel. De voedselconsumptie voor de ambulante controlemuizen en de HU-muizen wordt hier weergegeven.De gemiddelde dagelijkse voedselinname was bij HU-muizen over 28 dagen niet verschillend vergeleken met de controlegroep. Significante atrofie van de soleusspier wordt waargenomen na HU gedurende 14 en 28 dagen, wat duidt op een effectieve procedure na drie dagen herstel. De soleusmassa was significant groter dan in beide HU-groepen, maar nog steeds significant lager dan bij de ambulante controledieren.Zowel de linker- als de rechterbijnier werden verwijderd en gewogen om een indicatie van de stress bij de dieren te verkrijgen. Zoals hier te zien is, waren de gemiddelde gewichten vergelijkbaar tussen de controlemuizen en de HU-muizen. Zodra de techniek onder de knie is, kan de chirurgische ingreep binnen vijf tot 10 minuten per muis worden voltooid, en kan de inrichting van de kooi binnen 15 minuten na deze procedure worden afgerond. Andere methoden, zoals muizen-hindlimb-reloading en herstel van disuse-atrofie, kunnen worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals de wijze waarop het spier- en skeletsysteem kan herstellen en reageren op deze langdurige perioden van inactiviteit.Nu u deze video heeft bekeken, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u hind limb unloading bij muizen uitvoert. Deze techniek maakt het mogelijk om meerdere weefsels en systemen, zoals het cardiovasculaire, het musculoskeletale en het interstitiële systeem, te bestuderen onder belastings- en herbelastingscondities, en dit met behulp van diverse muismodellen, zoals knock-outs of knock-ins.

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De chirurgische procedure voor het induceren van eenzijdige achterbeen ischemie is aangetoond, met bevestiging van ischemie door een laser Doppler perfusie beeldvorming.

Muizenmodel van achterbeen ischemie

De scheenbeenzenuw doorsnijding model is een goed verdragen, gevalideerde en reproduceerbaar model van de skeletspier atrofie. Het model chirurgische protocol wordt beschreven en gedemonstreerd in C57Black6 muizen.

Scheenbeen Nerve doorsnijding - Een gestandaardiseerd model voor denervatie-geïnduceerde Skeletal Muscle Atrofie in Muizen

MicroRNA's spelen een cruciale rol in de hersenen en zijn potentiële doelen voor het modelleren van neurodegeneratie. Het verstoren van miRNA-niveaus is echter een uitdaging vanwege de korte lengte van miRNA en de ontoegankelijkheid van hersenweefsel. Deze video presenteert een methode voor het ontwerpen van antagomir en specifieke levering aan de hersenen met behulp van een neuropeptide bij muizen.

Een eenvoudig alternatief voor stereotactische Injectie voor Brain Specifieke Knockdown van miRNA

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

Chirurgische inductie van hindlimbischemie bij muizen is nuttig om angiogenesis te onderzoeken, maar dit wordt bemoeilijkt bij bepaalde ingefokt muizenrassen die duidelijke ischemie-geïnduceerde weefsellethale schade vertonen. Er worden methoden beschreven om subacute ledemaatische ischemie te induceren met behulp van ameroïde constrictors om dit probleem te omzeilen door de inductie van geleidelijke arteriële occlusie.

Methoden voor acute en subacute muizen achterbeen ischemie

Met behulp van een innovatieve grond analoge model, zijn we in staat om te simuleren een ruimtemissie met inbegrip van een reis naar (0 g) en een verblijf op Mars (0.38-g) bij ratten. Dit model zorgt voor een longitudinale beoordeling van de fysiologische veranderingen die zich voordoen tijdens de twee hypo-gravitationele fasen van de missie.

Het nabootsen van een ruimtemissie naar Mars met behulp van stuk lossen en gedeeltelijke gewicht dragen bij ratten

Dit diermodel stelt onderzoekers in staat om statistisch significant secundair lymfoedeem in het achterlijf van muizen te induceren, met een minimumduur van 8 weken. Het model kan worden gebruikt om de pathofysiologie van lymfoedeem te bestuderen en nieuwe behandelingsopties te onderzoeken.

Een herziene methode voor het induceren van secundair lymfoedeem in het achterlijf van muizen

Dit protocol presenteert een robuust, reproduceerbaar model van vascularized composiet allotransplant (VCA) gericht op gelijktijdige studie van immunologie en functioneel herstel. De tijd geïnvesteerd in zorgvuldige techniek in een rechter mid-dij achterpoot orthotopische transplantatie met de hand genaaid vasculaire anastomoses en neurale coaptatie levert de mogelijkheid om functioneel herstel te bestuderen.

Het nemen van de volgende stap: een neurale coaptatie orthotopische achterste ledemaat transplantatie model om functioneel herstel in Rat maximaliseren

Dit artikel demonstreert een efficiënte chirurgische aanpak om acute ischemie vast te stellen bij muizen met een kleine incisie. Deze aanpak kan door de meeste onderzoeksgroepen worden toegepast zonder laboratoriumupgrades.

Een gewijzigd chirurgisch model van ischemie van de achterpoten in ApoE-/- Muizen met behulp van een miniatuurincisie

Minimaal invasieve technieken en een eenvoudig laboratoriumapparaat verbeteren de reproduceerbaarheid van het ruggenmergletselmodel door operatieve schade aan de proefdieren te verminderen en anatomisch morfologisch onderhoud mogelijk te maken. De methode is de moeite waard omdat de betrouwbare resultaten en reproduceerbare procedure het onderzoek naar de mechanismen van ziekteherstel vergemakkelijken.

Het opzetten van een muiskneuzingsletselmodel op basis van een minimaal invasieve techniek

Dit muizenmodel combineert een septische belediging met onbruik van de achterpootspieren om het bedlegerige kenmerk van de typische septische patiënt samen te vatten. Het model vertegenwoordigt een significante afwijking van eerdere modellen om spierdisfunctie bij sepsis te bestuderen en is een reproduceerbare benadering voor het aanpakken van therapeutische strategieën om deze aandoening te behandelen.

Een preklinisch model van door sepsis geïnduceerde myopathie met onbruik bij muizen

Leer een vereenvoudigde methode voor achterpootontlading bij muizen met staartringimplantatie. Deze techniek induceert spieratrofie zonder de algehele gezondheid en lichaamsgewicht te compromitteren.

Een Alternant Methode om de traditionele NASA achterbeen Lossen Model in Muizen

Meer video's verkennen