Name: Een organotypische Slice Assay voor High-Resolution Time-Lapse Imaging van neuronale migratie in de postnatale Brain (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Leer een organotypische slice-assay voor hoogresolutie time-lapse imaging van neuronale migratie in het postnatale brein van muizen. Deze methode maakt visualisatie van neuroblastmigratie in de rostrale migratiestroom mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Dan McWhorter voor vertellen het protocol in de video. Dit werk wordt ondersteund door NIH Grant 5R01NS062182, een subsidie ​​van de Amerikaanse Federatie voor Aging Research, en de institutionele fondsen toegekend aan HTG.

<ol><li>Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+migration+in+the+adult+brain%3A+are+we+there+yet%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal migration in the adult brain: are we there yet.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).</li>
<li>Valiente, M., Marin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+migration+mechanisms+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal migration mechanisms in development and disease.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).</li>
<li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+neocortex%3A+a+perspective+from+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology.</a> Nat. Rev. Neurosci. 10, 724-735 (2009).</li>
<li>Jaglin, X. H., Chelly, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubulin-related+cortical+dysgeneses%3A+microtubule+dysfunction+underlying+neuronal+migration+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Tubulin-related cortical dysgeneses: microtubule dysfunction underlying neuronal migration defects.</a> Trends Genet. 25, 555-566 (2009).</li>
<li>Carro, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcriptional+network+for+mesenchymal+transformation+of+brain+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The transcriptional network for mesenchymal transformation of brain tumours.</a> Nature. 463, 318-325 (2010).</li>
<li>Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directional+guidance+of+neuronal+migration+in+the+olfactory+system+by+the+protein+Slit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directional guidance of neuronal migration in the olfactory system by the protein Slit.</a> Nature. 400, 331-336 (1999).</li>
<li>Hu, H., Tomasiewicz, H., Magnuson, T., Rutishauser, U., U, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+polysialic+acid+in+migration+of+olfactory+bulb+interneuron+precursors+in+the+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The role of polysialic acid in migration of olfactory bulb interneuron precursors in the subventricular zone.</a> Neuron. 16, 735-743 (1996).</li>
<li>Shapiro, E. M., Gonzalez-Perez, O., Garcia-Verdugo, M. anuel, Alvarez-Buylla, J., &amp, A., Koretsky, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+the+migration+of+neuronal+precursors+generated+in+the+adult+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of the migration of neuronal precursors generated in the adult rodent brain.</a> Neuroimage. , (2006).</li>
<li>Vreys, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+visualization+of+endogenous+neural+progenitor+cell+migration+along+the+RMS+in+the+adult+mouse+brain%3A+validation+of+various+MPIO+labeling+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">MRI visualization of endogenous neural progenitor cell migration along the RMS in the adult mouse brain: validation of various MPIO labeling strategies.</a> Neuroimage. 49, 2094-2103 (2010).</li>
<li>Davenne, M., Custody, C., Charneau, P., Lledo, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+migrating+neurons+in+the+mammalian+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of migrating neurons in the mammalian forebrain.</a> Chem. Senses. 30, Suppl 1. 115-116 (2005).</li>
<li>Mirzadeh, Z., Doetsch, F., Sawamoto, K., Wichterle, H., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subventricular+zone+en-face%3A+wholemount+staining+and+ependymal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal.</a> J. Vis. Exp. , (2010).</li>
<li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche%3A+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li>
<li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li>
<li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Stem+Cells+Confer+Unique+Pinwheel+Architecture+to+the+Ventricular+Surface+in+Neurogenic+Regions+of+the+Adult+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Neural Stem Cells Confer Unique Pinwheel Architecture to the Ventricular Surface in Neurogenic Regions of the Adult Brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li>
<li>Polleux, F. &amp, Ghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+slice+overlay+assay%3A+a+versatile+tool+to+study+the+influence+of+extracellular+signals+on+neuronal%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+STKE%22%5BJournal%5D)">The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal.</a> Sci. STKE. , L9-L9 (2002).</li>
<li>Murase, S. &amp, Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deleted+in+colorectal+carcinoma+and+differentially+expressed+integrins+mediate+the+directional+migration+of+neural+precursors+in+the+rostral+migratory+stream%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream.</a> J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).</li>
<li>Suzuki, S. O. &amp, Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+cell+populations+in+the+early+postnatal+subventricular+zone+take+distinct+migratory+pathways%3A+a+dynamic+study+of+glial+and+neuronal+progenitor+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration.</a> J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).</li>
<li>Ghashghaei, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+neuregulin-ErbB4+interactions+on+the+proliferation+and+organization+of+cells+in+the+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">The role of neuregulin-ErbB4 interactions on the proliferation and organization of cells in the subventricular zone.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 1930-1935 (2006).</li>
<li>Khodosevich, K., Seeburg, P. H., Monyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+signaling+pathways+in+migrating+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Major signaling pathways in migrating neuroblasts.</a> Front Mol. Neurosci. 2, 7-7 (2009).</li>
<li>Jacquet, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+neuronal+proliferation%2C+migration+and+differentiation+in+the+postnatal+brain+using+equine+infectious+anemia+virus-based+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors.</a> Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).</li>
</ol>

Experimenten op dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door North Carolina State University en het College of Veterinary Medicine in te stellen. Geen belangenconflicten verklaard.

Neuronale migratie in de RMS is een essentieel onderdeel van postnatale neurogenese in de olfactorische bollen 1. Migratie door de RMS optreedt in een raakvlak aan het oppervlak van de hersenen. Tangentiaal migreren neuroblasts zijn te onderscheiden van radiaal migrerende cellen op basis van de locatie van hun stamvader bron, evenals de uiteenlopende lot van hun laatste neuronale producten 1, 2, 3. De relatief zuivere populatie van tangentiaal migrerende cellen in de postnatale RMS maakt deze anato...

een organotypische slice assay voor high-resolution time-lapse imaging van neuronale migratie in de postnatale brain

An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain

Neurogenese in de postnatale hersenen hangt af van het onderhoud van drie biologische gebeurtenissen: proliferatie van stamcellen, migratie van neuroblasts, evenals differentiatie en integratie van nieuwe neuronen in bestaande neurale circuits. Voor de postnatale neurogenese in de olfactorische bollen, zijn deze gebeurtenissen gescheiden binnen drie anatomisch verschillende domeinen: proliferatie grotendeels komt voor in de subependymal zone (SEZ) van de laterale ventrikels, migreren neuroblasts dwars door de rostrale migratie stroom (RMS), en nieuwe neuronen differentiëren en te integreren in de olfactorische lampen (OB). De drie domeinen dienen als ideaal platform om de cellulaire, moleculaire en fysiologische mechanismen die duidelijk regelen van elk van de biologische gebeurtenissen te bestuderen. Dit artikel beschrijft een organotypische slice assay geoptimaliseerd voor postnatale hersenweefsel, waarin de extracellulaire voorwaarden nauw aan bij de na te bootsen in vivo omgeving te migreren neuroblasts. We tonen aan dat onze test voorziet in een uniforme, georiënteerd, en snelle beweging van neuroblasts binnen de RMS. Deze test zal zijn uitermate geschikt voor de studie van de cel-autonome en niet-zelfstandige regulering van de neuronale migratie door gebruik te maken van cross-transplantatie benaderingen uit de muizen op verschillende genetische achtergronden.

Dit protocol beschrijft een organotypische slice assay geoptimaliseerd voor de postnatale hersenen en hoge-resolutie time-lapse beeldvorming van neuroblast migratie in de rostrale migratie stroom.

Een organotypische Slice Assay voor High-Resolution Time-Lapse Imaging van neuronale migratie in de postnatale Brain

Neurogenese in de postnatale hersenen is afhankelijk van het behoud van drie biologische gebeurtenissen: proliferatie van progenitorcellen, migratie van neuroblasten, als ...

Ik ben Troy Gasai. We gaan het hebben over een organotypische plak-assay die de afgelopen jaren in mijn laboratorium is geperfectioneerd. Ben Jacket uit mijn laboratorium zal demonstreren hoe deze assay wordt uitgevoerd.De organotypische slice-assay van de postnatale hersenen is een krachtige methode voor het testen van diverse factoren en hun rol bij neuronale migratie in de postnatale hersenen en de TRO-migratiestroom. Hallo, ik ben Ben Jakay. Ik ben postdoctoral fellow in het laboratorium van Dr. Troy gge aan het College of Veterinary Medicine van de North Carolina State University, en ik ben hier vandaag om u te laten zien hoe we weefsel-kruistransplantatie uitvoeren tussen organotypische muizenhersenslices om migrerende neuroblasten in de postnatale hersenen te visualiseren.Alle in deze video beschreven technieken moeten in een steriele omgeving worden uitgevoerd, bij voorkeur in een laminaire flowkast met gesteriliseerde instrumenten. Een druppel van 150 µL slice-medium wordt met een wegwerpspuit voorzien van een naald van 23 gauge in het midden van het glazen bodemgedeelte van de schaal geplaatst. Er worden verschillende lijmpunten aangebracht buiten het cirkelvormige glazen bodomdeckglas, waarbij één zijde ongelijmd blijft voor vloeistofuitwisseling A. Een kernporie-membraan wordt vervolgens voorzichtig met micropincetten op het medium geplaatst, waarbij erop wordt gelet dat er geen luchtbellen onder het membraan gevangen raken.De gebogen pincet wordt vervolgens gebruikt om de lijmpunten plat te drukken en het membraan op zijn plaats te fixeren. Er wordt één milliliter slice-medium bovenop het membraan toegevoegd, en tot slot worden de schaaltjes in een incubator geplaatst tot ze klaar zijn voor gebruik. De beste resultaten worden behaald wanneer coupes worden geprepareerd van jonge postnatale muizen, P1 tot en met P10; eerst wordt de kop gestabiliseerd door de snuit met micropincetten vast te houden.De huid wordt longitudinaal ingesneden van de nek tot de snuit. De hoofdhuid wordt weggepeld om het bot bloot te leggen en de schedel wordt longitudinaal en anterieur doorgesneden, beginnend bij het sternum magna, door één mediale en twee laterale sneden te maken, één aan elke zijde. Er moet zorgvuldig worden gewerkt om contact met het onderliggende corticale weefsel tot een minimum te beperken.Terwijl de schedelflappen worden verwijderd van de hersenen om de stabiliteit van het weefsel te verbeteren. Tijdens het vibrotoom-snijden worden de meest laterale en caudale aspecten van de hersenen met een scheermesje verwijderd. De twee hemisferen worden voorzichtig uit de schedel geschept en met het mediale oppervlak naar beneden in een inbedmal geplaatst.Ze worden onmiddellijk bedekt met gesmolten 3% DNA-grade agarosegel, opgelost in weefselpreparatiebuffer die op 37 °C wordt gehouden. Na twee minuten stabilisatie op een vlak horizontaal oppervlak worden de mallen op ijs geplaatst om het stollen te voltooien en zo een gelijkmatige uitharding van de agarose te waarborgen.Zodra de gel met de hemisferen is gestold, wordt deze uit de mal gehaald en rondom het hersenweefsel bijgesneden. Het in gel ingebedde weefsel wordt vervolgens op de monsterdisk van de vibratoom gemonteerd met het mediale oppervlak naar boven en vastgezet met cyanoacrylaatlijm. De disk wordt daarna geplaatst in de monsterbak van de vibratoom, gevuld met ijskoud weefselpreparatiemedium, waarna de hersenen worden gesneden met een dikte van 150 micrometer.Zodra de RMS-bevattende coupes van het mesje zijn vrijgemaakt, worden ze voorzichtig uitgeschept met een kleine platte spatel en plat in het midden van de kweekschalen geplaatst. Het is essentieel dat de manipulatie van de coupes tot een minimum wordt beperkt, aangezien het weefsel zeer fragiel is. De hoeveelheid medium in de kweekschalen wordt aangepast naar een niveau dat voldoende is om de hersendoorsneden te bedekken, terwijl wordt voorkomen dat ze verschuiven.De schaaltjes worden gelabeld en overgebracht naar een incubator. Donorhersenen worden op een soortgelijke wijze voorbereid als de hersenen van de ontvanger, behalve dat de secties worden gesneden met een dikte van 250 µm en de plakjes op ijs worden verzameld.Koude weefselpreparatie. Bufferplakjes worden onmiddellijk onder een dissectiemicroscoop met epi-fluorescentiecapaciteit geplaatst. De RMS is zichtbaar als een grijze U-vormige structuur die zich uitstrekt van de subependymale zone tot de bulbus olfactorius.De RMS wordt voorzichtig gemicrodisseceerd met behulp van micropincetten. Eén pincet wordt gebruikt om de slice te stabiliseren, terwijl het andere wordt gebruikt om kleine sneden rond de RMS te maken totdat deze uit de slice is losgemaakt. De uitgesneden RMS wordt vervolgens in kleine stukjes van ongeveer 200 tot 500 micrometers in diameter gesneden.In dit voorbeeld worden transplantaten voorbereid van muizen die het rode fluorescerende eiwit TD tomato glass tot expressie brengen. De schalen met gastheer-plakjes worden uit de incubator gehaald en onder een dissectiemicroscoop met zichtbaar licht geplaatst. Er wordt een kleine incisie gemaakt in het initiële segment van de RMS en met behulp van een pipetteerder uitgerust met een 20 µL tip wordt een enkel donor RMS-explantaat overgebracht naar de incisieplaats in de RMS van de gastheer.Het explantaat wordt voorzichtig in de incisie geduwd om contact tussen de twee weefsels te vestigen. Om te zorgen dat dit contact stabiel is, worden de explanaten lichtjes tussen de plak en het nucleair arm membraan geduwd. De schaaltjes worden vervolgens gedurende ten minste één uur teruggeplaatst in de incubator om de secties op het membraan te laten hechten.Neuroblasten zouden na ongeveer één tot twee uur vanuit het explantaat naar de RMS van de gastheer moeten migreren. Celmigratie kan het beste worden gevisualiseerd met behulp van 20x objectieven met een extra grote werkafstand. De weefselkweken worden vanuit de incubator overgebracht naar een bebroedingskamer op de microscoop.Fluorescerende neuroblasten kunnen worden afgebeeld met intervallen variërend van nul tot 10 minuten, afhankelijk van het gewenste type analyse. Ons organotypische plakcultuurprotocol is de afgelopen jaren grondig getest en geoptimaliseerd voor consistentie in migratiepatroon en oriëntatie in de RMS. In dit voorbeeld onthult de analyse van cellen die vanuit het explantaat migreren, verkregen uit muizen waarin TD tomato wordt tot expressie gebracht onder de nestine-promotor, een sterk georiënteerde en snelle migratie naar de gast-RMS.Hoge vergroting. Time-lapse-analyse toont een uitstekende resolutie van de volledige lengte van een migrerende neuroblast tijdens een beeldsessie van 20 minuten. Zodra de beeldvorming is voltooid, kunnen de coupes worden gefixeerd met ijskoud en vers bereid 4% paraformaldehyde, en immunostained voor verschillende componenten van de migratiestroom.In dit geval worden GFAP-positieve astrocyten in blauw en CD 31-positieve bloedvaten in groen weergegeven met behulp van fluorescente immunohistochemie; een analyse bij hoge vergroting van coupes gekleurd voor de cytoskeletale eiwitten actine in blauw en tubuline in groen onthult een niet-uniforme expressie van deze componenten door een cel tijdens de migratie. Ons protocol brengt enkele uitdagingen met zich mee die geduld, oefening en tijdsinvestering vereisen voor zowel de voorbereiding als de analyse van uw resultaten.Hier zijn enkele nuttige suggesties die u zullen helpen om de beste resultaten uit uw experimenten te halen. Op basis van onze ervaring leveren muizen in de leeftijdscategorie P1 tot P10 de beste resultaten. Het matchen van de leeftijd tussen donor- en recipientenhersenen verbetert bovendien de reproduceerbaarheid van de experimenten.Omdat de meeste reagentia en kweekschaaltjes vers moeten worden bereid, vereist onze slice-assay enkele uren aan ononderbroken preparatie en beeldvorming op één dag. Zodra de hersenen zijn geoogst, moeten de daaropvolgende stappen zo snel mogelijk worden uitgevoerd. Tussen de decapitatie en de bereiding van de slices moeten alle stappen op ijs worden uitgevoerd, met koude reagentia, en moet de manipulatie van het weefsel tot een minimum worden beperkt om anatomische verstoringen te voorkomen.De instrumenten die voor deze dissecties worden gebruikt, moeten steriel zijn en uitsluitend worden gereserveerd voor manipulaties aan levend weefsel. Gebruik nooit instrumenten die in contact zijn geweest met fixatiemiddelen zoals formaldehyde. De plakjes zijn over het algemeen tot 36 uur levensvatbaar, waarbij tussen 24 en 36 uur een zichtbare afname in migratie, snelheid en oriëntatie optreedt.Houd rekening met deze beperking bij het plannen van uw experimenten en analyses.

an-organotypic-slice-assay-for-high-resolution-time-lapse-imaging

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

We presenteren een methode om organotypische plakjes van mid-dracht muis embryo's voor te bereiden op de teelt en de time-lapse imaging van perifere zenuwen uitgroei.

Organotypische Slice Cultuur van GFP-expressie muis embryo&#39;s voor real-time beeldvorming van perifere zenuwen uitgroei

Een methode om organotypische segmenten van de E12.5 muriene embryonale middenhersenen genereren is beschreven. De organotypische slice culturen kan worden gebruikt om het gedrag van dopaminerge neuronen of andere ventrale middenhersenen neuronen te observeren.

Organotypische Slice culturen van embryonale ventrale middenhersenen: Een systeem om Dopaminerge Neuronale Development Study In vitro</em

Imaging embryonaal weefsel in real-time is een uitdaging gedurende een lange periode van tijd. Hier presenteren we een test voor het toezicht cellulaire en sub-cellulaire veranderingen in de chick ruggenmerg gedurende lange perioden met een hoge ruimtelijke en temporele resolutie. Deze techniek kan worden aangepast voor andere gebieden van het zenuwstelsel en zich ontwikkelende embryo.

Met een hoge resolutie Live-Imaging van cel gedrag in de ontwikkelingslanden Neuroepithelium

We beschrijven een protocol voor real-time videoimaging van neuronale migratie in de muis voorhersenen. De migratie van viraal gemerkte of geënte neuronale precursors opgenomen in acute levende plakjes met breedveld fluorescerende beeldvorming met een relatief snelle verwerving interval de verschillende fasen van celmigratie, zoals de duur van de stationaire en migratiefasen en de snelheid van bestuderen migratie.

Time-lapse imaging van neuroblast migratie in Acute Schijfjes van de volwassen muis voorhersenen

Source: Wiegreffe, C., et. al.,  Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation. J. Vis. Exp. (2017) This video demonstrates time-lapse confocal microscopy to observe cortical neuron radial migration from the subventricular zone to the cortical plate via radial glial scaffolds in transduced mouse embryonic brain slices.

Time-Lapse Imaging of Cortical Neuron Radial Migration in Transduced Mouse Embryonic Brain Slices

Neuroblast migratie is een fundamentele gebeurtenis in postnatale neurogenese. We beschrijven een protocol voor efficiëntie-etikettering van neuroblasts door in vivo postnatale elektroporatie en de daaropvolgende visualisatie van hun migratie met behulp van time-lapse imaging van acute hersenen plakjes. Wij beschikken over een beschrijving van de kwantitatieve analyse van neuroblast dynamiek door video-tracking.

In vivo Postnatale Elektroporatie en time-lapse imaging van neuroblast Migratie in Muis Acute Brain Slices

Dit protocol geeft instructies voor directe observatie van radiaal migrerende corticale neuronen. Bij utero- elektroporatie, organotypische snijcultuur en tijdverlopen confocal beeldvorming worden gecombineerd om de effecten van overexpressie of downregulatie van genen die geïnteresseerd zijn in migrerende neuronen direct en dynamisch te bestuderen en hun differentiatie tijdens de ontwikkeling te analyseren.

Time-lapse Confocal Imaging van Migreren Neuronen in Organotypische Slice Cultuur van Embryonale Muishersenen Met behulp van<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporatie

Hier bieden we een goedkope en betrouwbare methode voor het genereren van electroporated brein organotypic segment culturen van muis embryo's geschikt voor confocale microscopie en live-imaging technieken.

Ex Utero Electroporation en Organotypic Slice culturen van muis embryonale hersenen voor Live-Imaging van GABAergic interneuronen migreren

Dit protocol demonstreert een eenvoudige en robuuste methode om in situ axongroei en groeikegeldynamiek te bestuderen. Het beschrijft hoe ex vivo fysiologisch relevante acute hersenplakken kunnen worden bereid en biedt een gebruiksvriendelijke analysepijplijn.

In situ Visualisatie van Axon-groei en groeikegeldynamiek in acute ex vivo embryonale hersenplakculturen

Tijdens de ontwikkeling van de hersenschors ontstaan neuronen en gliacellen in de ventriculaire zone die het ventrikel bekleedt en migreren ze naar het hersenoppervlak. Bij dit proces zijn veel genen betrokken. Dit protocol introduceert de techniek voor de time-lapse beeldvorming van migrerende neuronen en glia-voorlopercellen.

Time-lapse beeldvorming van migrerende neuronen en glia-voorlopercellen in embryonale hersenplakjes van muizen

Leer een organotypische slice-assay voor hoogresolutie time-lapse imaging van neuronale migratie in het postnatale brein van muizen. Deze methode maakt visualisatie van neuroblastmigratie in de rostrale migratiestroom mogelijk.

Een organotypische Slice Assay voor High-Resolution Time-Lapse Imaging van neuronale migratie in de postnatale Brain

Meer video's verkennen