Name: Het ontwikkelen van aangepaste Chinese hamster ovarium-host Cell Protein Testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel Technology (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T18:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Ontdek de ontwikkeling van aangepaste immunoassays op het ViBE-platform voor gevoelige en reproduceerbare resultaten met minimale handmatige tijd. Dit automatiseringsysteem optimaliseert bioprocesonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Microdeeltje Voorbereiding <ol><li> Label antilichamen met behulp van Biotine NHS Chemie </li><li> Bepaling van de Graad van biotinylatie </li><li> Conjugaat Streptavidine Kralen met gebiotinyleerd antilichaam <ol><li> Resuspendeer de kralen in de originele flacon door vortexen gedurende 1-2 minuten </li><li> Aliquot het gewenste volume van kralen in een microcentrifugebuis </li><li> Was de kralen 3 keer met PBST: <ol><li> Plaats de buis met de kralen op de magneet gedurende 2 minuten </li><li> Verwijder de bovenstaande vloeistof door aspiratie met de buis op de magneet. Wees voorzichtig dat u de kralen te verstoren </li><li> Haal de buis van de magneet en voeg 1 ml PBST </li><li> Vortex gedurende 20 seconden om de kralen resuspenderen </li><li> Centrifugeer gedurende 5 seconden ingedrukt om de parels uit de dop </li><li> Herhaal dit twee keer 2.3.1-2.3.5 meer </li></ol></li><li> Na de derde plaats was de buis op de magneet en zuig de PBST </li><li> Voeg gebiotinyleerd antilichaam aan de kralen en resuspenderen </li><li> Indien nodig brengt het volume van de gebiotinyleerde antilichaam tot 300 pi met PBS. Als het antilichaam volume is al meer dan 300 pi voeg geen PBS </li><li> Incubeer de kraal / antilichaam suspensie gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur op de vortex shaker of buis rotator </li><li> Was drie keer met PBST zoals in stap 3. </li><li> Blok kralen met gebiotinyleerd BSA <ol><li> Na de derde wasbeurt toe te voegen 10 ug / mg gebiotinyleerd BSA, past u het volume op 300 ul met PBS, indien nodig, en incubeer onder schudden gedurende 30 minuten </li></ol></li><li> Was drie keer met PBST zoals in stap 3 </li><li> Resuspendeer de kralen in 100 ul van PBS/0.05% BSA. Natriumazide kan worden toegevoegd voor de lange termijn opslag </li></ol></li><li> Met behulp van standaard NHS Fluoresceïne protocollen, fluoresceinate de detector antilichaam </li><li> Bepalen de mate van Fluorescination </li></ol> 2. HCP - Ontwikkeling <ol><li> Bereid te werken oplossingen: <ol><li> Fluoresceïne gelabeld antilichaam (Fl-Ab): De meeste CHO-HCP assays gebruiken Fl-Ab bij een uiteindelijke concentratie van 400 ng / mL. De FL-Ab wordt toegevoegd als ¼ van de laatste test volume, dus de concentratie van de werkende oplossing is 1,6 microgram / ml. Bereid deze oplossing door verdunnen flab voorraad met BioScale Bead / flab Diluent. </li><li> Kralen: De meeste CHO-HCP assays gebruiken kralen bij een uiteindelijke concentratie van 2x10 5 kralen / ml. De kraal reagens vormt ¼ van de uiteindelijke test volume, dus de concentratie van de werkende oplossing is 8x10 5 kralen / ml. Bereid deze oplossing door verdunnen kraal voorraad met BioScale Bead / flab Diluent. Vortex de kraal voorraad goed om ervoor te zorgen dat alle parels worden in suspensie voorafgaand aan het verwijderen van een aliquot deel. </li><li> Running Buffer: De samenstelling van het lopende buffer kan worden geoptimaliseerd voor de antilichamen gebruikt worden om de test te ontwikkelen, maar een aantal CHO-HCP testen zijn ontwikkeld met behulp van 10 mM HEPES buffer, 1% Tween, pH 7,5. BioScale heeft ontwikkeld, een additief voor de lopende buffer (meegeleverd met de development kit), die wordt toegevoegd aan de buffer tot een concentratie van 1% voor gebruik. </li></ol></li><li> Verdunnen kalibrators en monsters met BioScale Sample Diluent. </li></ol> 3. ViBE System Set Up <ol><li> Schakel de ViBE Workstation op </li><li> Sluit het systeem leveren en afval </li><li> Prime van het systeem </li><li> Plaats een ViBE cartridge </li><li> Route van de buizen </li><li> Bereid test template door het invullen van het blad met het label "Sample Setup". BioScale biedt de mogelijkheid om een ​​test template voor iedere ViBE Workstation test. Hierdoor kan de gebruiker te bewerken en specifieke notities op te slaan in de "Notes" vel van de sjabloon voor de verschillende assays het bijhouden van een volledig verslag van het experiment. </li><li> De eerste test template set up: Begin met het invullen van de tabel (linker bovenhoek) van de concentratie bereik van de normen in de test in de "Sample Setup" sheet. </li><li> Volgende, aanvullende informatie in de tabel in te voeren om het recht van de normen (Simple Column Lees Configuratie, Een reagens toevoegen en Two Reagent Add setups) naar de Vibe Workstation hoe lang monsters moet broeden instrueren, hoeveel volume reagens is over te dragen , hoe lang het monster accumulatie dient te zijn, en of de sensor conditionering en ontsmetting van de sondes en de cartridge nodig zijn, enz. </li><li> Vul de plaat lay-out. </li><li> Belasting monster / reagentia in platen. De ViBE zal de vereiste volumes voor het reagens plaat. Monstervolume kan variëren, maar in de helft van een totaal volume van de test 120 uL is een goed startpunt. </li><li> Van toepassing zijn plaat dekt. Laad de borden op werkstation dek. </li><li> Voer de test start up wizard, ga door wizard en start test. </li></ol> 4. Representatieve resultaten <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1: AMMP Sandwich Immunoassay Op een ViBE Workstation, een AMMP test meet antigeen concentratie. Het signaal wordt gemeten wanneer de kraal-antigeen-hapteen antilichaam bindt aan de sensor door de hapteen / anti-hapteen interactie. Regeneratie brengt de sensor terug naar het begin staat door het verwijderen van de immune complexen. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2: CHO-HCP AMMP Assay kalibratiecurve Figuur 2 hierboven is een voorbeeld van een CHO HCP AMMP Assay kalibratiecurve. Analyse kan worden uitgevoerd in monsters uit de hele zuivering beek met inbegrip van de reactor met hoge precisie en reproduceerbaarheid. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3: Proteïne A AMMP Assay kalibratiecurve Figuur 3 is een calibratie curve voor een resterende Proteïne A AMMP Test, uitgevoerd met een VIBE Resterende Proteïne A Assay Kit. Dezelfde kit kan gebruikt worden voor een snellere test met een 30 minuten incubatietijd, of voor meer gevoelige resultaten en een breder dynamisch bereik met een langere incubatieperiode zonder verlies van precisie of de nauwkeurigheid, die beide zijn meestal beter is dan vergelijkbare ELISA's in van gebruikers handen <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4: Product Titer AMMP Assay De ViBE Workstation kan ook worden gebruikt voor een product Titer test, de resultaten weergegeven in figuur 4. Anders uitgevoerd dan andere AMMP Testen, is deze test niet nodig steekproef andere behandeling dan eenvoudige verdunning, of kralen, en kwantificering is geverifieerd in "geen spin" monsters met meer dan 10 miljoen cellen over een breed scala van de levensvatbaarheid. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig5.jpg" alt="Figuur 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 5"> Figuur 5: AMMP Assay standaardcurve voor GST-Gadd34 biomarker analyse Weergegeven in figuur 5 is een standaard curve van het signaal verkregen door de ViBE BioAnalyzer (Panel A) of met behulp van recombinant-technologie AlphaScreen GST-Gadd34. Resultaten op de ViBE platform waren ongeveer een log gevoeliger met dezelfde antilichamen. AMMP maakt gebruik van de meting van de minder grotere deeltjes geniet nog steeds uit de oplossing fase vast te leggen en detectie complex vorming. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig6.jpg" alt="Figuur 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 6"> Figuur 6: AMMP Assay standaardcurve voor GST-Gadd34 in tumormonster In figuur 6, was de inductie van Gadd34 van CWR22 xenotransplantaties getest in de aanwezigheid of afwezigheid van een boronate proteasoom inhibitor zoals geanalyseerd door ofwel de ViBE BioAnalyzer (Panel A) of AlphaScreen (Panel B). De ViBE platform was in staat om gevoelige, reproduceerbare resultaten te produceren in de in vivo tumor xenotransplantaten terwijl het AlphaScreen signaal werd geblust met een verhoogde ug van eiwitten. Dit voorbeeld toont de kracht van AMMP technologie in de zeer complexe monsters. Vanwege de gevoelige detectie-chip en een hoog rendement van de magneet in de buurt van de chips, kan lage aantallen van magnetische microdeeltjes efficiënt en reproduceerbaar scharrelen voor de lage abundantie doel te midden van de complexiteit van de gelyseerde cellulaire (inclusief lysis reagentia) en bloed puin.

De auteurs van dit artikel zijn in dienst van Bioscale, Inc, dat sommige van de instrumenten en reagentia die in dit artikel oplevert.

De voorgaande voorbeelden laten zien zeer gevoelig kwantitatieve AMMP de resultaten in complexe monsters. Deze prestatie, bij aflevering met het gemak en de controle van het formatteren van reagentia in het systeem is mogelijk voor een verscheidenheid aan toepassingen. Deze aanvragen kan specifiek voor een doel, zoals in Gadd34 in tumor, of generiek voor een spectrum van de doelen, zoals in gastheercel eiwit detectie en kwantificatie in monsters dat de zuivering beek over te steken. De lage overhead ViBE platform in combinatie met zeer flexibele AMMP biedt een krachtig instrument voor het leveren van kritische analyses.

<table><tbody><tr><td>NHS-Chromogenic-biotine of NHS-Chromogenic Biotine Labeling kit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Indien NHS-Chromogenic-biotine als reagens wordt aangeschaft, zijn de volgende aanvullende materialen vereist</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Watermengbaar organisch oplosmiddel zoals dimethylsulfoxide (DMSO) of dimethylformamide (DMF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) of een andere aminevrije buffer (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ontzoutingskolommen of dialyse-units voor bufferuitwisseling</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spectrofotometer die metingen kan uitvoeren bij 354 en 280 nm &amp;#8211; voor het bepalen van eiwit- en biotineconcentraties</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated antilichaam (2-5 biotines/Ab)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Streptavidine magnetische beads</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>(10 mg/mL) ~10&lt;sup&gt;8&lt;/sup&gt; beads/mg</td></tr><tr><td>Magneet voor microcentrifugebuisjes</td><td>New England Biolabs</td><td>cat # S1510S</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated BSA voor blokkeren</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS 0,1% Tween 20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugehouder voor Vortex of buizenrotator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antilichaam of eiwit dat gelabeld moet worden</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Fluoresceïne of NHS-Fluoresceïne Labeling kit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Indien NHS-Fluoresceïne als reagens wordt aangeschaft, zijn de volgende aanvullende materialen vereist</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Watermengbaar organisch oplosmiddel zoals dimethylsulfoxide (DMSO) of dimethylformamide (DMF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM boraat, pH 8,5 of een andere aminevrije buffer (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ontzoutingskolommen of dialyse-units voor bufferuitwisseling</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Voor de bepaling van eiwit- en fluoresceïneconcentraties is een spectrofotometer nodig die metingen kan uitvoeren bij 493 en 280 nm.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verdunner</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>om beads en FlAb te verdunnen</td></tr><tr><td>Monsterverdunner</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>om monsters en kalibratoren te verdunnen</td></tr><tr><td>Running Buffer Additive</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

het ontwikkelen van aangepaste chinese hamster ovarium-host cell protein testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel technology

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Testen op maat voor de unieke eiwitten zijn vaak beperkt tot tijdrovende handmatige detectie en kwantificatie technieken zoals ELISA of Western blots te wijten aan de complexiteit van de ontwikkeling van alternatieve platforms. Gepatenteerde Acoustic BioScale&#39;s Membraan microdeeltje (AMMP) technologie maakt sandwich immunoassays te gemakkelijk worden ontwikkeld voor gebruik op de ViBE platform, een betere gevoeligheid, reproduceerbaarheid, en geautomatiseerde werking. Als voorbeeld, dit protocol beschrijft de procedure voor het ontwikkelen van een aangepaste Chinese hamster ovarium-Host Cell Protein (CHO-HCP) assay. De algemene beginselen hier geschetst kan worden gevolgd voor de ontwikkeling van een breed scala van immunoassays. Een AMMP test meet antigeen concentratie door het meten van veranderingen in de trillingsfrequentie wordt veroorzaakt door de binding van micropartikels om de sensor oppervlak te berekenen. Het bestaat uit vier belangrijke componenten: (1) een patroon dat een gefunctionaliseerd acht sensor chip bevat (2) antilichaam gelabeld magnetische microdeeltjes, (3) hapteen tagged antilichaam dat bindt aan het oppervlak van de gefunctionaliseerde chip (4) monsters die het antigeen van rente. BioScale De biosensor is een apparaat dat resonant acht afzonderlijke membranen met een aparte fluidisch paden bevat. De membranen verandering trillingsfrequentie in reactie op de massa zich ophoopt op het oppervlak en deze frequentie verandering is gebruikt om de hoeveelheid van de toegevoegde massa kwantificeren. Om het gebruik te vergemakkelijken in een breed scala van immunoassays de sensor is gefunctionaliseerd met een anti-hapteen antilichaam. Assay specifieke antilichamen worden gewijzigd door de covalente conjugatie van een hapteen tag een antilichaam en biotine naar de andere. Het biotine label wordt gebruikt om het antilichaam binden aan gekoppeld magnetische korrels die, in combinatie met de hapteen-gelabeld antilichaam, worden gebruikt om de analyt te vangen in een sandwich streptavidine. Het complex bindt aan de chip door de anti-hapten/hapten interactie. Aan het einde van elke test run de sensoren worden schoongemaakt met een verdund zuur waardoor de sequentiële analyse van de kolommen van een 96-well plaat. Hier presenteren we de methode voor het ontwikkelen van een aangepaste CHO-HCP AMMP test voor bioproces ontwikkeling. Het ontwikkelen van AMMP testen of het wijzigen van bestaande testen in AMMP testen kunnen zorgen voor betere prestaties (reproduceerbaarheid, gevoeligheid) in complexe monsters en minder operator tijd. Het protocol geeft de stappen voor de ontwikkeling en de discussie sectie reviews representatieve resultaten. Voor een meer gedetailleerde uitleg van test-optimalisatie en aanpassing parameters contact BioScale. Deze set bevat generieke bioprocess ontwikkeling assays zoals Resterende proteïne A, Product titer, en CHO-HCP.

Ontwikkeling van op maat assays op de ViBE platform voor meer gevoelige, reproduceerbare, geautomatiseerd resulteert in complexe matrices beschreven. De universele patroon laat testen eenvoudig worden aangepast voor gebruik met aangepaste assays. Deze veelzijdigheid maakt snelle ontwikkeling en validatie van nieuwe testen of geautomatiseerde versies van bestaande manuele testen, geïllustreerd in deze video.

Het ontwikkelen van aangepaste Chinese hamster ovarium-host Cell Protein Testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel Technology

Maatwerkassays voor unieke eiwitten zijn vaak beperkt tot tijdrovende handmatige detectie- en kwantificatietechnieken zoals ELISA of Western blots vanwege ...

Het algemene doel van deze procedure is het creëren van een aangepaste, robuuste immunoassay voor reproduceerbare resultaten met een beperkte hoeveelheid handmatige arbeid. Dit wordt bereikt door eerst de geschikte assay-componenten voor te bereiden. De tweede stap van de procedure is het optimaliseren van de assay op basis van assay-parameters.De derde stap van de procedure is het opzetten van de assay op het Vibe-platform door simpelweg de platen met monsters en reagentia te laden en de assay-procedure te definiëren. Met de Vibe-software is de laatste stap van de procedure het starten van de Vibe met de startwizard. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die gevoelige, reproduceerbare immunoassay-resultaten laten zien met aangepaste antilichamen en beperkte handmatige tijd door het gebruik van het Vibe-platform.Het belangrijkste voordeel van deze technologie ten opzichte van bestaande methoden, zoals die van Eli, is dat het Vibe Workstation 'walkaway'-operaties en meer reproduceerbare gegevens biedt volgens de standaardprotocollen. Gebruik NHS Chromogenic, biotin Bio atin, het capture-antilichaam om het gebiotineerde antilichaam aan strep to avid en magnetische beads te koppelen; begin met het vortexen van het flaconnetje met strep to avid en magnetische beads gedurende één tot twee minuten om deze opnieuw te suspenderen. Pipetteer het gewenste volume beads in een fuge-buisje en verwijder het supernatant met behulp van een magnetische separator. Was de beads drie keer met PBST en gebruik magnetische separatie om de beads te herstellen volgens het schriftelijke protocol.Nadat de PBST na de laatste wasstap is verwijderd, wordt de gebiotinyleerde antilichaamoplossing aan de beads toegevoegd en worden de beads door pipetteren opnieuw gesuspendeerd. Zorg ervoor dat het volume van het antilichaam ten minste 300 µL is. Indien dit minder is, dient dit met PBS te worden aangepast.Incubeer de suspensie gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur onder agitatie. Was de beads vervolgens met PBST zoals eerder beschreven. Voeg gebiotineerd BSA toe volgens dezelfde procedure als eerder uitgevoerd.Wanneer de bio-biotinylerede antilichamen worden gewassen en de beads worden geresuspendeerd in 100 µL 0,05% BSA in PBS voor langdurige bewaring, kan natriumazide worden toegevoegd volgens standaardprotocollen. Gebruik NHS-fluoresceïne om het detectie-antilichaam te fluorineren. Om te beginnen met de ontwikkeling van de assay voor host cell proteins van Chinese hamsterovariumcellen.Bereid eerst de werkoplossingen. Het HAPTEN-gelabelde antilichaam of HAB wordt bereid als een vier maal geconcentreerde werkoplossing van 1,6 micrograms per milliliter, verdund met bio scale bead HAB diluent; roteer de oplossing gedurende ten minste vijf minuten. Bereid vervolgens de bead-oplossing.Vortex de voorraad gal met beads grondig. Om ervoor te zorgen dat alle beads in suspensie zijn, neem een aliquot om een viermaal geconcentreerd werkmixture voor te bereiden van 8 × 10⁵ beads per ml, verdund met bio scale bead HAB diluent. Roteer de oplossing gedurende ten minste vijf minuten.Bereid vervolgens de loopbuffer. Verschillende CHO HCP-assays zijn ontwikkeld met gebruik van 10 millimolar HEPES-buffer met 1% Tween, pH 7,5.De buffer moet echter mogelijk worden geoptimaliseerd voor de antilichamen die worden gebruikt om uw assay te ontwikkelen. Het wordt aanbevolen om een assay-sjabloon voor te bereiden voor elke assay met vijf werkstations. Het assay-sjabloon bevat zeven tabbladen, met de labels instructies, monsteropstelling, notities, ruwe gegevensberekeningen, kalibratiediagram en resultaten.Om met de configuratie van het template te beginnen, selecteert u het setup-blad voor de monsters en vult u in de tabel het concentratiebereik van de standaarden in. Voer in de linkerbovenhoek van het blad aanvullende informatie in de tabel rechts van de standaarden in om het vibe-werkstation te instrueren over de benodigde incubatietijd van de monsters, het volume reagens dat moet worden overgebracht, de duur van de monsteraccumulatie, en of sensorconditionering en deconaminatie van de probes en de cartridge noodzakelijk zijn. Vul vervolgens de plaatindeling in, verdun de kalibratoren en monsters met bio scale monsterverdunner en laad de monsters in de platen.Laad de reagentia in de derde 96-well plaat. Verzegel de platen. Plaats de platen op de schudplaten van het werkstation en stel het systeem in met wasbuffer en regeneratieloosing.Zet het vibe-workstation aan en sluit de systeemtoevoer en afvoer aan. Begin met het primen van het systeem. Plaats de vibe-cartridge.Voer tot slot de Startup-wizard voor de assay uit. Volg de instructies op het scherm en begin. Het assaysignaal wordt gemeten met de A MMP-technologie. Wanneer het bead-antigeen HAPTEN-antilichaam via de hapteen-anti-hapteen-interactie aan de sensor bindt, brengt regeneratie de sensor terug naar de begintoestand door de immuuncomplexen te verwijderen. Getoond.Hier is een voorbeeld van een CHO H-C-P-A-M-M-P assay. Kalibratiecurve-analyse kan worden uitgevoerd op bioreactor-monsters met reproduceerbare resultaten. Deze kalibratiecurve is voor een residu-eiwit.A-A-M-M-P-assay uitgevoerd met een vibe residu-eiwit, een assaykit. Dezelfde kit kan worden gebruikt voor een snellere assay met een incubatieperiode van 30 minuten, of voor gevoeligere resultaten en een breder dynamisch bereik met een langere incubatieperiode. Het Vibe Workstation kan ook worden gebruikt voor een producttiter-assay die anders wordt uitgevoerd dan andere A-MMP-assays.Deze assay vereist geen monstervoorbehandeling of beads en de kwantificering is geverifieerd in monsters zonder centrifugatie die meer dan 10 miljoen cellen bevatten. Hier wordt een standaardcurve getoond van het signaal verkregen door de Vibe Bioanalyzer of Alpha Screen Technology met behulp van recombinant GST GAD 34 resultaten op het Vibe-platform. Hier zijn we een loggeen gevoeliger.De inductie van GAD 34 uit CWR 22-xenografts werd getest in de aanwezigheid of afwezigheid van een bèta-proteasoomremmer, geanalyseerd via de Vibe, bioanalyzer of Alpha screen. Het Vibe-platform kon gevoelige, reproduceerbare resultaten opleveren in de in vivo tumormodellen, terwijl het Alpha screen-signaal werd gedempt bij een toenemend aantal microgrammen eiwit na de ontwikkeling ervan. Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in het veld van oncologische geneesmiddelenontwikkeling om remming door geneesmiddelen in tumorstalen te onderzoeken, en heeft gezorgd voor efficiëntere processen in bioprocessing-toepassingen.

developing-custom-chinese-hamster-ovary-host-cell-protein-assays

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

This video demonstrates an assay for purifying monoclonal antibodies from cell culture fluid harvested from Chinese Hamster Ovarian cells. It employs a porous glass resin with immobilized protein A, which binds to the Fc region of the antibodies in the sample, effectively separating them from contaminants. The use of a low-pH elution buffer weakens the interaction, facilitating the retrieval of purified antibodies.

A Technique to Purify Monoclonal Antibodies Produced by Chinese Hamster Ovary Cells

Hier beschrijven we een chromatografische test in combinatie met de ion mobiliteit scheiding van peptide precursoren gevolgd door de hoge resolutie (~ 30.000) MS-detectie van peptide fragmenten voor de kwantificering van puntige peptide normen in een monoclonal antilichaam Digest.

Een HS-MRM Assay voor de kwantificering van de gastheercel eiwitten in Protein biofarmaceutica door vloeistofchromatografie Ion mobiliteit QTOF massaspectrometrie

Een gedetailleerd protocol voor de zuivering en daaropvolgende analyse van een monoklonaal antilichaam uit geoogste celkweek vloeistof (HCCF) van geautomatiseerde microbioreactoren is beschreven. Het gebruik van analyses om kritische kwaliteitskenmerken (CQAs) te bepalen en beperkt sample volume te maximaliseren om vitale informatie te extraheren wordt ook gepresenteerd.

Zuivering en analyse van een monoklonaal antilichaam van Chinese Hamster Ovariumcellen met behulp van een geautomatiseerd Microbioreactor systeem

Reproducibly het om getallen te tellen van mRNAs in individuele eicellen, enkel molecuul RNA fluorescentie in situ is hybridisatie (RNA-vis) geoptimaliseerd voor niet-aanhanger cellen. Eicellen werden verzameld, gekruist met het transcript specifieke sondes en gekwantificeerd aan de hand van een afbeelding kwantificering software.

Gebruik van één molecuul fluorescentie In Situ hybridisatie (SM-vis) om Quantify en lokaliseer mRNAs in lymfkliertest eicellen

Hier presenteren we een gedetailleerde procedure om een ontwerp van experiment uit te voeren in een geautomatiseerde micro-bioreactor gevolgd door celoogst en eiwitkwantificering met behulp van een Protein A-kolom.

Proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de Chinese Hamster Eierstok celteelt

Het recombinante antilichaameiwit dat tot expressie komt in pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO-cellen en monoklonale antilichamen geproduceerd met behulp van traditionele hybridoma-technologie kan het varkensaminopeptidase N (APN) -eiwit herkennen en eraan binden.

Productie van monoklonale antilichamen gericht tegen aminopeptidase N in het varkensdarmslijmvliesepitheel

Het protocol presenteert een methode voor het isoleren van hele cel eiwitlysaten van ontleedde muis embryo gezichtsprocessen of gekweekte muis embryonale palatale mesenchym cellen en het uitvoeren van daaropvolgende western blotting om gefosforyleerde eiwitniveaus te beoordelen.

Isolatie van hele celproteïnelysaten uit gezichtsprocessen van muizen en gekweekte palatale mesenchymcellen voor fosfoproteïne-analyse

Het glycosyleringspatroon van een antilichaam bepaalt de klinische prestaties, dus industriële en academische inspanningen om glycosylatie te beheersen blijven bestaan. Omdat typische glyco-engineeringcampagnes tijd- en arbeidsintensief zijn, zou het genereren van een snel protocol om de impact van glycosyleringsgenen te karakteriseren met behulp van transiënte uitschakeling nuttig zijn.

Snelle antilichaamglycosengineering in ovariumcellen van Chinese hamsters

Er wordt een protocol gepresenteerd voor het verrijken van gastheerceleiwitten (HCP's) uit geneesmiddelen (DP) en het detecteren van peptiden met behulp van proteoomverrijkingskorrels. De methode wordt gedemonstreerd met behulp van een in-house vervaardigde monoklonale antilichaam (mAb) geneesmiddelsubstantie (DS), die een goed gekarakteriseerd referentiemateriaal is voor het evalueren en vergelijken van verschillende methoden in termen van prestaties.

Gastheerceleiwitanalyse met behulp van verrijkingsparels in combinatie met beperkte spijsvertering

Hier presenteren we een protocol voor het genereren en functioneel verifiëren van hypoxiegevoelige chimere antigeenreceptor (CAR)-T-cellen. Dit protocol presenteert de op lentivirus gebaseerde generatie van hypoxie-gevoelige CAR-T-cellen en hun karakterisering, inclusief de validatie van hypoxie-afhankelijke CAR-expressie en selectieve cytotoxiciteit.

Generatie en functionele verificatie van hypoxie-gevoelige chimere antigeenreceptor-T-cellen

Exosomen hebben een aanzienlijk klinisch potentieel, maar hun praktische toepassing is beperkt vanwege de gemakkelijke in vivo klaring en slechte stabiliteit. Micronaalden bieden een oplossing door gelokaliseerde toediening mogelijk te maken door fysiologische barrières en conservering in droge toestand te doorboren, waardoor de beperkingen van exosoomtoediening worden aangepakt en hun klinische bruikbaarheid wordt uitgebreid.

Fabricage en karakterisering van micronaaldpleisters voor het laden en afleveren van exosomen

Ontdek de ontwikkeling van aangepaste immunoassays op het ViBE-platform voor gevoelige en reproduceerbare resultaten met minimale handmatige tijd. Dit automatiseringsysteem optimaliseert bioprocesonderzoek.

Het ontwikkelen van aangepaste Chinese hamster ovarium-host Cell Protein Testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel Technology (Video) | JoVE Journal

Het ontwikkelen van aangepaste Chinese hamster ovarium-host Cell Protein Testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel Technology

Meer video's verkennen