Name: Transformatie van plasmide DNA in E. coli Met behulp van de heat shock-methode (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Leer de heat shock-methode voor transformatie van plasmide DNA in E. coli. Deze techniek bereidt bacteriën voor op genetische experimenten met zebrafish in ontwikkelingsbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

transformatie van plasmide dna in e. coli met behulp van de heat shock-methode

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

Transformatie van plasmide DNA in E. coli met behulp van de heat shock-methode is een basistechniek van de moleculaire biologie. Het bestaat uit het plaatsen van een buitenlandse plasmide of ligatieproduct in bacteriën. Deze video protocol beschrijft de traditionele methode van transformatie met behulp van commercieel verkrijgbare chemisch bevoegde bacteriën van Genlantis. Na een korte incubatie in ijs, is een mengsel van chemisch bevoegde bacteriën en DNA geplaatst bij 42 ° C gedurende 45 seconden (heat shock) en dan weer terug geplaatst in ijs. SOC media is toegevoegd en de getransformeerde cellen worden geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 30 min met agitatie. Worden verzekerd van het isoleren van kolonies onafhankelijk van transformatie-efficiëntie, zijn twee grootheden van de getransformeerde bacteriën verguld. Deze traditionele protocol met succes kan worden gebruikt om de meeste commercieel beschikbare bevoegde bacteriën te transformeren. De turbocells van Genlantis kan ook gebruikt worden in een nieuwe 3-minuten transformatie protocol, beschreven in de handleiding.

Transformatie van plasmide DNA in E. coli Met behulp van de heat shock-methode

Transformatie van plasmid-DNA in E. coli met behulp van de heatshock-methode is een basistechniek in de moleculaire biologie. Het bestaat uit het inbrengen van een vreemd ...

Hoi, ik ben Alex Hoge. Ik werk in het gym Hall Lab van de afdeling Fysiologie en Biofysica aan de University of California Irvine. Vandaag ga ik u laten zien hoe u elektrisch competente e coli kunt transformeren met de elektroporatiemethode.Vandaag gebruik ik deze techniek om coli te transformeren met mijn ligatieproduct, omdat ik een probe maak voor whole mount in situ hybridisatie in zebravissen. Oké, we gaan nu beginnen met de transformatie. Eerst moet u uw waterbad of droge bad op 42 °C hebben.De bacteriën die u zojuist uit de hoofdstock heeft gehaald, moeten in ijs bewaard worden. Vandaag gebruiken we elektrocompetente cellen uit stocks en ook uw DNA in ijs. Daarnaast heeft u een buisje SOC-medium op kamertemperatuur of 37 °C nodig en uw platen met LB-medium plus antibioticum.Ik ga nu het DNA toevoegen aan de bacteriën. Ik werk naast de vlam om contaminatie van de bacteriën te voorkomen. Vervolgens voeg ik de vloeistof met de bacteriën toe.Voeg 50 µL bacteriën toe en plaats de buisjes onmiddellijk terug in het ijs; u kunt licht tikken om de bacteriën en uw DNA te mengen en dit tot 15 minuten in het ijs laten staan. Er zijn nu 15 minuten verstreken en we zijn klaar voor de hitt

transformation-of-plasmid-dna-into-e-coli-using-the-heat-shock-method

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Plaatsgerichte mutagenese van hele plasmiden is een eenvoudige manier om iets verschillende varianten van een origineel plasmide te creëren. Hier laten we zien op een eenvoudige en kosteneffectieve manier om de base substituties te introduceren in een plasmide met behulp van standaard reagentia.

Homemade plaatsgerichte mutagenese van Whole Plasmids

Source: Stefan, A., et al., The Multifaceted Benefits of Protein Co-expression in Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the procedure for transforming Escherichia coli with a plasmid carrying an antibiotic resistance gene, including cell preparation, electroporation, recovery, and selection of transformants.

Preparation and Transformation of Bacteria Using High-Voltage Electroporation

Dit protocol demonstreert de chaperonne-activiteit van heat shock protein 70 (Hsp70). E. coli dnaK756-cellen dienen als model voor de test omdat ze een inheemse, functioneel gehandicapte Hsp70 herbergen, waardoor ze vatbaar zijn voor hittestress. De heterologe introductie van functioneel Hsp70 redt de groeideficiëntie van de cellen.

Op Escherichia coli gebaseerde complementatietest om de chaperonnefunctie van heat shock-eiwit te bestuderen 70

In vivo assemblage is een ligatie-onafhankelijke kloneringsmethode die berust op intrinsieke DNA-reparatie-enzymen in bacteriën om DNA-fragmenten te assembleren door homologe recombinatie. Dit protocol is zowel tijd- als kosteneffectief, aangezien er weinig reagentia nodig zijn en de kloonefficiëntie kan oplopen tot 99%.

Gebruik van in vivo assemblage voor zeer efficiënte plasmideconstructie

Dit artikel beschrijft een methodologie voor het tot overexpressie brengen van recombinant Nsp15, een toxische nuclease, in een C41(DE3) expressiesysteem, gevolgd door zuivering van het gelabelde eiwit met behulp van affiniteits- en grootte-uitsluitingschromatografie. Deze protocollen kunnen worden aangepast voor andere uitdagende giftige eiwitten.

Overexpressie en zuivering van een toxische nuclease van Escherichia coli

Zuiveren Plasmide DNA van bacteriële kolonies Met behulp van de Qiagen Miniprep Kit

Dit werk laat zien hoe een RNA / DNA hybride vorm op de chromosomale niveau en onthullen de overdracht van genetische informatie van RNA naar DNA genoom in gistcellen.

Genereren van RNA / DNA-Hybriden in Genomic DNA door omzetting door middel RNA-bevattende Oligonucleotiden

We presenteren een procedure waarbij twee-dimensionale agarose-gel analyse kan worden gebruikt om de structuur van de replicatie tussenproducten die optreden na UV-straling te identificeren.

Visualisatie van UV-geïnduceerde Replicatie Intermediates in E. coli Met behulp van twee-dimensionale Agarose gel-analyse

Dit protocol is een kosteneffectief alternatief voor een efficiënte parallelle verduidelijking en plasmide DNA zuivering...

Gestroomlijnde Zuivering van Plasmide DNA Van Prokaryote culturen

Hier laten we zien een eenvoudig protocol om een ​​willekeurige mutant bibliotheek te creëren voor een bepaalde doelsequentie. We laten zien hoe deze methode, die in vivo uitgevoerd in Escherichia coli, kan worden gecombineerd met functionele selecties van nieuwe enzymatische activiteiten evolueren.

Mutagenese en functionele selectie Protocollen voor Gerichte ontwikkeling van eiwitten in E. coli</em

Leer de heat shock-methode voor transformatie van plasmide DNA in E. coli. Deze techniek bereidt bacteriën voor op genetische experimenten met zebrafish in ontwikkelingsbiologisch onderzoek.

Transformatie van plasmide DNA in E. coli Met behulp van de heat shock-methode

Meer video's verkennen