Name: Een orthotope Model van Murine Blaaskanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-06T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Leer een orthotopisch model van blaaskanker opzetten bij vrouwelijke muizen met behulp van katheterisatie en lokale cauterisatie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar tumorontwikkeling en therapeutische interventies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de National Science Foundation LOOPBAAN award (cbet-0846395) en de Vakgroep Vergelijkende Geneeskunde, Tulane University.

1. Dieren <ol><li> Vrouwelijke C57BL/6J muizen (Mus musculus) zijn geverifieerd vrij van besmettelijke ectoparasieten, worminfecties endoparasieten, en antilichamen tegen 17 muriene virussen door de verkoper voor de verzending. Muizen zijn ondergebracht in de AAALAC-geaccrediteerde dier faciliteit van Tulane University in overeenstemming met de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren. 1 </li><li> In het bijzonder, muizen zijn gehuisvest groep (4-5 muizen / kooi) in individueel geventileerde polycarbonaat cageswith microisolation filter toppen op hardhout beddengoed. Ze zijn ad libitum verstrekt gepelleteerd knaagdier voedsel en drinkwater. </li><li> Muizen zijn toegestaan ​​7 dagen om te acclimatiseren voor de start van de studie. </li></ol> 2. Cellen <ol><li> De muizen overgangsperiode cell carcinoma cellijn MB49 wordt gebruikt om de blaastumoren te produceren. </li><li> Cellen worden gekweekt in medium Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle&#39;s aangevuld met 10% foetaal runderserum, 100 eenheden / ml penicilline en 100 eenheden / ml streptomycine. </li><li> Culturen zijn gehandhaafd op 37 ° C en 5% CO 2 met media wisselt om de twee tot drie dagen. </li></ol> 3. Animal orthotope Tumor Model De instillatie van de blaas tumor model hier beschreven is een aanpassing van de procedure beschreven door Gunther et al. 2. <ol><li> Anesthesie wordt geïnduceerd met 2% isofluraan (MWI / VetOne, Meridian, ID, Cat # 501017) in zuurstof en gehandhaafd op 0.75-1.25%. (Meerdere dieren kunnen gelijktijdig worden behandeld, dat zou een verhoging van de isofluraan levels vereisen.) Om het hoornvlies uitdrogen te voorkomen, zijn ogen gesmeerd met een kunsttranen oogzalf. Lichaamswarmte wordt onderhouden met een verwarmd kussentje onder een papieren gordijn. </li><li> De vacht van de onderrug is geknipt om contact te bevorderen met de metalen geaarde plaat, en het geschoren gebied is bedekt met electroconduction gel. </li><li> Elke muis is dan individueel geplaatst in dorsale recumbancy op een metalen geaarde plaat, en de blaas wordt gecatheteriseerd transurethrally met behulp van een gesmeerde 24-gauge, 3 / 4 inch, over-the-naald IV katheter met de stilet verwijderd. </li><li> De blaas wordt afgevoerd van de urine, en een platina draad wordt ingebracht via de katheter in de blaas verlaten blootgesteld draad aan elk uiteinde van de katheter - ongeveer 2 mm op de lumenale uiteinde van de katheter. De draad is gemaakt van platina omdat de weerstand van het materiaal tegen oxidatie. </li><li> Een 2,5 W stroom wordt vervolgens toegepast op de blaas ongeveer 0,5 seconden door het aanraken van de buitenkant deel van de draad met een elektrocauterisatie toestel in coagulatie. </li><li> De draad wordt dan verplaatst naar een tweede locatie in de blaas en een andere 2,5 toegepast W te laden. </li><li> De draad is verwijderd en 100 ul van MB49-cellen bij een concentratie van 1x10 6 cellen / ml wordt door de katheter bijgebracht in de blaas via een 1 ml spuit. </li><li> De spuiten zijn overgelaten aan de katheters aan efflux van de celsuspensies te voorkomen, en de katheter muizen worden bijgehouden onder narcose voor 90 minuten om de cellen te hechten aan de branden sites. </li><li> 100 tot 200 ul van steriele fysiologische zoutoplossing wordt toegediend door IP injectie om elke muis voorafgaand aan nuttige toepassing. </li><li> Aan het einde van de incubatietijd van de katheters zijn verwijderd en de dieren mogen terug op het verwarmde pad totdat rechtzetten reflexen terug te keren, op welk punt de muizen worden teruggestuurd naar hun huis kooien. </li></ol> 4. Ultrageluid <ol><li> Tumoren kunnen groeien gedurende 3-5 dagen voordat de muizen ondergaan echografisch onderzoek van de urineblaas tot groei van de tumor te controleren. </li><li> Voor de eerste echo-onderzoek, dieren worden verdoofd zoals hierboven beschreven. Muizen worden geplaatst in dorsale recumbancy en buikhuid wordt bereid door het knippen van de vacht. </li><li> Een 24 meter IV katheter wordt transurethrally ingebracht in de urineblaas. Op dit punt, kan de blaas worden afgetapt en de urine verzameld voor verdere analyse. </li><li> 100 ui van de steriele fysiologische zoutoplossing wordt bijgebracht in de blaas door de katheter de blaas beter zicht op echografie. </li><li> Echografie geleiding gel wordt aangebracht op de buik, en echografie wordt uitgevoerd om de blaaswand en het lumen te beoordelen. </li></ol> 5. Representatieve resultaten: Tumorweefsel zal beginnen 3-5 dagen verschijnen na de inoculatie. In onze ervaring, in een groep van 12 muizen, 50% of meer routinematig hebben een aantoonbaar weefselmassa in de blaas (0,5 tot 1,0 ul, met behulp van V = π / 6 · L · W · H) per dag vijf. Bij het gebruik van MB 49 cellen, zal tumoren blijven groeien en euthanasie nodig zal zijn door de dagen 24, indien de muizen niet behandeld. Euthanasie wordt aanbevolen als muizen worden lusteloos of cachectische, display gegolfde vacht, hunching, en niet-responsieve gedrag, of wanneer ze verliezen 20% van hun oorspronkelijke lichaamsgewicht. &lt;/ P&gt; De tumoren groeien snel en hebben necrotische centra na het bereiken van een massa van 200 mg of meer, 3 zogenaamd omdat de cellen in de zich ontwikkelende tumor vermenigvuldigen sneller dan wat kan worden onderhouden door de angiogene bloedtoevoer. Men kan ook indirect controleren progressie van de tumor via het niveau van de hematurea, die vermoedelijk is aan snelle angiogenese verbonden binnen het ontwikkelen van tumoren. Er werd consequent op gewezen dat de urine van onbehandelde tumor-dragende muizen bloed opgenomen door 14 dagen. De concentratie van de rode bloedcellen bleek na verloop van tijd toename van deze muizen, en de volumes van de urine verzameld verminderd. Tumoren van meer dan 50 mg kan ook worden gepalpeerd met relatief gemak, meestal met 14 dagen na inoculatie.

<ol><li>Institute of Laboratory Animal Resources. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).</li>
<li>Gunther, J. H., Jurczok, A., Wulf, T., Brandau, S., Deinert, I., Jocham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Zhang, X., Atala, A., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression-targeted+gene+therapy+for+the+treatment+of+transitional+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Expression-targeted gene therapy for the treatment of transitional cell carcinoma.</a> Cancer Gene Ther. 15, 543-552 (2008).</li>
</ol>

Experimenten op dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door de institutionele zorg en het gebruik Comite van Tulane University in te stellen.

Deze minimaal invasieve methode voor de vaststelling orthotope blaas tumoren in vrouwelijke muizen kan ook worden toegepast voor celtypes andere dan de MB49, hoewel verschillende resultaten moeten worden verwacht. Als er minder agressieve tumorcellen worden gebruikt, zal het verhogen van de wattage licht (met behulp van 0,5 W stappen naar de nieuwe optimale stand) leveren een oppervlakte van meer vatbaar zijn voor tumorcellen gehechtheid, en langere blaas incubatietijden voor de bijgebracht cellen zullen een grotere hoe...

<table><tbody><tr><td>C57Bl/6J muizen</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>3-5 weken oud</td></tr><tr><td>Polycarbonaat kooien en geventileerd rek</td><td>Lab Products</td><td>Super Mouse 750</td><td>327mm x&lt;br/&gt;190mm x&lt;br/&gt;143mm</td></tr><tr><td>Houtvijzel strooisel</td><td>Harlan Laboratories</td><td>Laboratory &amp;#8211;grade SaniChips</td><td></td></tr><tr><td>Knaagdierdieet</td><td>Harlan Laboratories</td><td>Rodent Diet 2019</td><td></td></tr><tr><td>IV-katheter</td><td>MWI Veterinary Supply</td><td>009231</td><td>24 G x &amp;#190; in. </td></tr><tr><td>Elektrocauterisatie-unit</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>Aaron 900</td><td></td></tr><tr><td>Echografie-unit</td><td>Sonosite</td><td>180 Plus (Vet)</td><td></td></tr><tr><td>MB49 cellijn</td><td>Wake Forest University Baptist Medical Center</td><td>N.v.t.</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>21063-029</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal runderserum</td><td>Gemini Bio Products</td><td>100106 500A57B</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr></tbody></table>

een orthotope model van murine blaaskanker

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In deze eenvoudige procedure, zijn blaastumoren gevestigd in vrouwelijke C57 muizen door het gebruik van de catheterisatie, lokale cauterisatie, en de daaropvolgende celadhesie. Na hun blazen zijn transurethrally gecatheteriseerd en afgevoerd, zijn dieren weer gecatheteriseerd het inbrengen van een platina draad in blazen toestaan ​​zonder beschadiging van de plasbuis of blaas. De catheters zijn gemaakt van Teflon om te dienen als een isolator voor de draad, die elektrische stroom voert in de blaas om een ​​brandwond creëren. Een elektrocauterisatie eenheid wordt gebruikt voor het afleveren 2,5 W aan het blootgestelde uiteinde van de draad, wegbranden extracellulaire lagen en het verstrekken van bevestiging sites voor carcinoom cellen die in suspensie geleverd aan de blaas door middel van een latere catheterisatie. Cellen blijven in de blaas gedurende 90 minuten, waarna de katheters zijn verwijderd en de blaas op natuurlijke wijze af te voeren. De ontwikkeling van de tumor wordt bewaakt via een echografie. Specifieke aandacht wordt besteed aan de catheterisatie techniek in de bijbehorende video.

Blaastumoren zijn gevestigd in vrouwelijke muizen in een minimaal invasieve wijze via catheterisatie, lokale cauterisatie, en de daaropvolgende aanhechting van carcinoom cellen om de branden sites.

Een orthotope Model van Murine Blaaskanker

In deze eenvoudige procedure wordenBlaasstumoren geïnduceerd bij vrouwelijke C57-muizen door middel van catheterisatie, lokale cauterisatie en ...

Dit is professor WT Godbe en samen met dr. Georgina Dobe willen we een methode presenteren voor het opzetten van een orthotoop model van blaascarcinoom bij muizen. Laten we beginnen met de stappen die we ondernemen om onze dieren voorbereiden op deze procedure. De muizen die we vandaag laten zien zijn vrouwelijke C 57 blacks, aangeschaft bij the Jackson Laboratories.Wij hebben voor vrouwtjes gekozen vanwege het gemak bij de catheterisatie. Deze muizen zijn tussen de drie en vijf weken oud en wegen doorgaans tussen de 16 en 20 gram; de muizen worden anesthetiseerd met een ventilator die is ingesteld om isofluraan van 2% in zuurstof toe te dienen met een stroomsnelheid van 0,8 tot 1 liter per minuut. De ademhalingsfrequentie wordt constant gemonitord om uitdroging van het hoornvlies te voorkomen.Tijdens deze procedure, die meer dan anderhalf uur in beslag neemt, worden de ogen gesmeerd met een oogzalf van kunsttranen die direct over de ogen wordt aangebracht en vervolgens in de ogen wordt gewreven. De vacht op de lage rug wordt geschoren om het contact met de metalen aardingsplaat te bevorderen, die wordt gebruikt tijdens de electrocauterisatieprocedure waarmee een brandwond in de bl

an-orthotopic-model-of-murine-bladder-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Muis blaaswand injectie is een nuttige benadering voor orthotopically studie blaas stamcellen en kanker biologie. Deze delicate microchirurgische methode kan worden beheerst met een zorgvuldige techniek en praktijk.

Muis blaaswand Injection

De oprichting van een orthotope blaas tumor model om anti-tumor effecten van intravesicaal geleverd Sarna en monitoring groei van de tumor door middel van ultrageluid en bioluminescente beeldvorming te evalueren.

Een orthotope Blaas Tumor Model en de evaluatie van Intravesicale Sarna behandeling

In this video, we describe the orthotopic transplantation of cultured bladder tumor organoids into the murine bladder to study the role of the organ environment on developing tumors.

Bladder Tumor Organoid Model: A Method for Orthotopic Transplantation of Bladder Organoids into Recipient Murine Bladder

In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Implantatie van kankercellen in het orgaan van oorsprong kan dienen als een nuttige preklinisch model om nieuwe therapieën te evalueren. MB49 blaascarcinoom cellen kunnen worden gekweekt in de blaas na intravesicale instillatie. Dit protocol toont katheterisatie van de blaas muis behoeve van tumor implantatie en adenovirale levering.

Een orthotope Blaaskanker Model voor Gene Delivery Studies

Een N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine-geïnduceerde blaaskanker model werd ontwikkeld in humane mucine 1 (MUC1) transgene muizen voor de beproeving van de MUC1-gerichte immunotherapie. Na toediening van een MUC1-gericht peptide vaccin was een cytotoxische T-lymfocyt respons tegen MUC1 bevestigd door metingen van serum cytokinen en T-cel-specifieke activiteit.

Inductie van Invasieve Transitional Cell blaascarcinoom in Immune Intact Human MUC1 transgene muizen: Een model voor Immunotherapie Ontwikkeling

De gevestigde techniek om primaire invasieve orthotoop blaaskanker xenotransplantaten te enten vereist laparotomie en mobilisatie van de blaas. Deze procedure toebrengt significante morbiditeit op de muizen, technisch uitdagend en tijdrovend. Daarom hebben wij een hoge precisie, percutane benadering gebruik te maken van echografie begeleiding.

Minimaal Invasieve Oprichting van Muriene Orthotope Blaas Xenografts

Dit protocol beschrijft de generatie van muizen orthotope blaastumoren bij vrouwelijke C57BL / 6J muizen en de monitoring van tumorgroei.

Een muizen orthotope Blaas Tumor Model en Tumor Detection System

Dit protocol beschrijft de generatie van door patiënten afgeleide orthotopic xenotransplantaatmodellen is-modellen door intra-vesisch bijbrengen van hoogwaardige urotheelcelcarcinoom cellen of intra-rectale injectie van colorectale kankercellen in niet-zwaarlijvige diabetische/ernstige gecombineerde immunodeficiëntie (NOD/SCID) muizen voor primaire tumorgroei en spontane metastasen onder invloed van lymfeklier stromale cellen, die de progressie van humane gemetastaseerde ziekten nabootst.

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Dit protocol biedt gedetailleerde experimentele stappen om een driedimensionale in vitro cultuur van blaastumororganoïden afgeleid van kankerverwekkende murineblaaskanker vast te stellen. Cultuurmethoden zoals passaging, genetische manipulatie en orthotopische transplantatie van tumororganoïden worden beschreven.

Cultuur, manipulatie en orthotopische transplantatie van mouse bladder tumor organoïden

Leer een orthotopisch model van blaaskanker opzetten bij vrouwelijke muizen met behulp van katheterisatie en lokale cauterisatie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar tumorontwikkeling en therapeutische interventies.

Een orthotope Model van Murine Blaaskanker

Meer video's verkennen