Name: Het gebruik van een Opknoping gewicht System voor geïsoleerde renale arterie occlusie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: Leer een ophanggewichtsysteem voor geïsoleerde nierarterie-occlusie bij muizen om acute nierbeschadiging te bestuderen. Deze methode meet nierfunctie via FITC-inulineklaring.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De huidige studies werden ondersteund door de Verenigde Staten National Institutes of Health subsidie ​​R01-HL092188, R01-DK083385 en R01HL098294, en de Stichting voor Anesthesie Onderwijs en Onderzoek (FAER) subsidies voor de HKE, een FAER verlenen aan JYD en een DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) onderzoek Fellowship (GR2121/1-1) tot AG.

Algemene opmerkingen. Alle operaties moeten worden uitgevoerd onder een rechtop dissectiemicroscoop (Leica) en met behulp van een chirurgische coagulator. De muizen in de experimentele groepen moeten worden afgestemd op leeftijd en het gewicht om de vergelijkbaarheid van de resultaten te garanderen. Temperatuur, bloeddruk, anesthesie en vochttoediening moet stabiel en gecontroleerd worden tijdens het experiment. 1. Anesthesie en chirurgie <ol><li> Renale ischemie experimenten kunnen worden uitgevoerd met gelijktijdig toepassen van ischemie en reperfusie aan beide nieren, of na een nefrectomie in combinatie met ischemie behandeling van de resterende nier. Als bilaterale ischemie behandeling van beide nieren is geassocieerd met een verhoogde technische problemen, een meer complexe experimentele setting en langer chirurgie, voeren wij een recht nefrectomie gevolgd door een ischemie behandeling van de resterende linker nier door gebruik te maken van een opknoping gewicht systeem. We gebruikte dit opknoping gewicht systeem ook voor de kransslagader occlusie in het hart. Echter, de procedure is anders omdat de nierslagader kan worden geïsoleerd van het omliggende weefsel terwijl de kransslagader ligt in de hartspier. </li><li> Muizen (8-14 weken oud, zowel mannen als vrouwen) worden verdoofd met pentobarbital bij een dosis van 70mg/kg. Wij zullen zorgen voor verdoving met circa. 10 mg / kg / h natriumpentobarbital. Overdosering kan aanzienlijk lagere bloeddruk en kan dus veranderen de resultaten. In onze eerste onderzoeken we ook ketamine en xylazine. Echter, deze verbindingen leidden tot een sterke bradycardie (150 / min). Naast de waargenomen bradycardie zijn er ook aanwijzingen dat beide verbindingen worden betrokken bij de beschermende mechanismen tijdens voorwaarden van ischemie. Vluchtige anesthetica kan ook niet vanwege hun vermogen gebruikt worden om ook leiden tot nier-bescherming en lage bloeddruk. Daarom is onze uiteindelijke keuze voor de anesthesie was pentobarbital. Daarnaast worden ketamine en xylazine voornamelijk uitgescheiden door de nieren. Nefrectomie en ischemie kan verlengen ketamine anesthesie. </li><li> Zodra de pijn reflexen zijn afwezig (getest door knijpen de tenen met een pincet) muizen zullen worden geplaatst op een temperatuur-gecontroleerde verwarming tafel (RT, Effenberg, München, Duitsland op lichaamstemperatuur te handhaven op 37,0 ° C) in een linker laterale decubitus positie. </li><li> Bevestig de onderste en bovenste ledematen naar de tafel met behulp van tape. </li><li> Voor niet-survival operaties, zoals aangegeven in de video-demonstratie, dekking van de incisie gebied met minerale olie om inademing van de muis haar te voorkomen door het snijden van de huid en verhinderen zo het risico van muis haar allergieën. In het geval van overleving experimenten de juiste aseptische technieken, waaronder het knippen van het haar, desinfectie van de huid met jodoforen (bijv. Betadine), steriele behandeling van geautoclaveerd instrumenten en het gebruik van maskers een steriele handschoenen voor de chirurg zijn verplicht. Minerale olie wordt niet gebruikt in overleving operaties. Om te overleven operaties steriele NaCl wordt gebruikt </li><li> Rechterflank snede zal worden uitgevoerd met een schaar en een coagulatie-elektrode (Erbe, ICC50, Duitsland) om het bloeden van de spieren en de huid schepen te voorkomen. In tegenstelling tot toegang tot de nieren via de middellijn laparotomie, werkt deze techniek niet nodig de toegang tot de buikholte. </li><li> De renale pedicle waaronder nierarteriestenose en renale ader wordt afgebonden met een 4 / 0 zijden hechtdraad en de rechter nier zal worden weggesneden met een schaar zonder zich te bemoeien met de bijnier schepen. </li><li> De chirurgische wond is gesloten met een continue hechtdraad (twee steken) van de spierwand en de huid met een 4 / 0 hechtdraad. </li><li> Dieren worden vervolgens geplaatst in een recht laterale decubitus positie en een linkerflank snede zal worden uitgevoerd. </li><li> De linker nier is zorgvuldig verwijderd uit het bindweefsel, het vermijden van de bijnier en vaartuigen. </li><li> Vervolgens wordt de nier gedraaid met de ventrale zijde naar beneden in een Lucite beker. De Lucite cup moet worden gesteriliseerd om te overleven operaties. De pool van de nier wordt zorgvuldig geduwd in de beker door Lucite houden het omliggende weefsel met een pincet. Daarna wordt de paal wordt zorgvuldig geduwd in de Lucite beker met een pincet. De nier zal worden gehouden nat en warm met een nat wattenstaafje doordrenkt met water bij 37,0 ° C. </li><li> Na blootstelling van de linker nier en plaatsing in een Lucite cup houder van de nier is ventraal terughoudend om de spanning op de nier schepen. Een voldoende straatverbod is belangrijk voor een succesvolle plaatsing van de hechting onder de nierslagader. Daarna wordt de nier houder is vastgesteld en de nierslagader kan gemakkelijk worden geïdentificeerd als het draait op de top van de nier-ader. </li><li> De nierslagader wordt doorsneden van aangrenzende weefsels, dicht bij de take-off van de abdominale aorta met fijne pincet. De slagader wordt doorsneden van de onderliggende ader met een gebogen pincet op de top. </li><li> Een 8 / 0 zijden hechtdraad (Ethicon, Norderstedt, Duitsland) is onder de nierslagader door gebruik te makeneen pincet als een toonaangevende gids. Deze techniek maakt het mogelijk onderbreking van alleen de arteriële bloedtoevoer naar de nieren zonder compressie van de renale ader, in vergelijking met klemmen van de renale pedikel. </li><li> De hechting is geplaatst over een klein paal (kan een veiligheidsspeld bereid zijn) en een gewicht van ca.. 1g is aan elk uiteinde (eppendorfbuisje). Het gewicht kan worden aangepast aan de nier grootte door het afsluiten of het toevoegen van water in de eppendorf buizen. Toch moet de slagader naar boven iets worden getrokken, zodat er geen bloed loopt door de slagader, maar zonder grote languit op de slagader. Grote stretch stress op de slagader kan leiden tot schade aan de vaatwand met verdikking van de vaatwand en een verminderde reperfusie. </li><li> Terwijl de gewichten worden niet ondersteund, is de nierslagader onmiddellijk afgesloten. In tegenstelling, als de gewichten worden ondersteund, wordt de bloedstroom direct hersteld naar het orgel. Succesvolle occlusie wordt bevestigd door een verandering van kleur van rood naar wit. </li><li> Verschillende ischemie tijden kan worden uitgevoerd, zoals vereist door het experiment. Een complete reperfusie zal plaatsvinden, afhankelijk van de lengte van de ischemie tijd. Ischemie tijden tot 45 minuten laten vergoeding in aanmerking komen nierschade. In onze experimentele opstellingen gebruiken we 20 tot 30 minuten van ischemie met een medium schade aan de nieren, die ons in staat stelt om te zien verbetering en vermindering van de schade aan de nieren, afhankelijk van de muis stam en de behandeling. </li><li> Na volledige reperfusie van de nier kan worden vervangen uit de Lucite beker. Daarom is de nier houder is nog niet opgeloste en de spanning op de nieren wordt vrijgegeven. De craniale pool is voorzichtig verwijderd uit de beker met een zacht pincet en de caudale pool volgt onmiddellijk. </li><li> De fixatie (tapes) van de muis kan worden vrijgegeven en de muis kan worden geplaatst in een liggende positie voor bijvoorbeeld FITC-gelabeld inuline klaring. </li><li> In subsets van experimenten, kan de bloeddruk en de hartslag worden opgenomen gedurende de chirurgische ingreep. Bloeddrukmetingen worden voortdurend verkregen via een halsslagader katheter. In het kort, is de halsslagader blootstelling via stompe dissectie van de paratracheale spieren. Na verdere blootstelling en zorgvuldig vermijden van weefsel trauma (het bijzonder van de nervus vagus), wordt een katheter ingebracht in het vat met twee hechtingen en een kleine klem. De bloeddruk wordt gemeten met een Statham element (WK 280, WKK, Kaltbrunn, Zwitserland). </li><li> Voor de FITC-gelabelde inuline klaring een katheter moet worden geplaatst in de linker halsader voor intraveneuze infusie van natriumchloride en FITC-gelabelde inuline. Verder is een blaas katheter moet worden ingebracht voor de urine op te vangen in een tijd afhankelijke manier zoals hieronder beschreven in detail. </li></ol> 2. Meting van nierschade <ol><li> In het algemeen: De volgende uitkomstmaten worden aanbevolen om de nieren schade vast te stellen volgende verminderde ischemie: Voer FITC-gelabelde inuline afstand tot de glomerulaire filtratiesnelheid (GFR) te beoordelen. Als alternatief creatinineklaring en serum creatinine via metabole kooi onderzoek 24 uur na de schade aan de nieren vast te stellen. Voer nier H &amp; E kleuring en een myeloperoxidase (MPO) ELISA tot nierschade en ontsteking 24 uur na renale ischemie te bepalen. </li><li> Metabole kooi onderzoeken: <ol><li> Na ischemie van de linker nier wordt weer omgezet in de retroperitoneale positie en de wond is gesloten zoals hierboven beschreven. </li><li> Aan het einde van de operatie muizen ontvangen 0,3 ml fysiologische zoutoplossing IP en te herstellen gedurende 2 uur onder een warmtelamp. </li><li> Daarna muizen zal worden geplaatst in metabole kooien (Tecniplast Deutschland, Hohenpeissenberg, Duitsland) voor de bepaling van de nierfunctie functionele parameters voor de twee maal van 24 uur. </li><li> Het water inname van elke muis moet worden bepaald door weging van de lege fles en gevuld met water voordat het aan de muis en dan 24 uur later door weging van de volle fles opnieuw. De muis gewicht moet ook worden bepaald. </li><li> Na 24 uur ongeveer 75μl bloed zijn afkomstig uit de veneuze plexus achter het oog via een capillair onder de korte isoflorane verdoving. </li><li> De nierfunctie wordt bepaald door het meten van plasma-en urine creatinine 24 uur na renale ischemie met behulp van een commercieel verkrijgbare colorimtric werkwijze volgens de fabrikant 's-protocol (LT-SYS, Labor + Technik, Berlijn, Duitsland). Plasma-en urine concentraties van Na +, K + worden bepaald met een vlam-emissie fotometer (ELEX 6361, Eppendorf AG, Hamburg, Duitsland). Renale excretie en hemodynamische waarden worden berekend met behulp van standaard formules 15-17. </li></ol></li><li> Inuline klaring: FITC-inuline klaring experimenten zullen worden uitgevoerd volgens renale ischemie. <ol><li> De linker halsader is gecanuleerde voor continue infusion. Na het ontleden van de ader van de aangrenzende weefsel met een schaar de voorbereiding (Dumont, WPI) plaats twee hechtingen (4 / 0) rond de ader. Plaats een klem op de ader voor de proximale hechting om de bloedstroom te stoppen. Daarna sluit het distale knoop en leg een gewicht op een van de distale hechtdraad uiteinden om spanning spanning op de ader. Dit is zeer belangrijk om de katheter in de ader. Gebruik een micro-schaar op een kleine opening in de ader afgesneden. Houd de opening met een fijn pincet (Dumont, WPI) en plaats de katheter in de ader. Ter bevordering van de katheter neem de klem af. Zorg ervoor dat er geen spanning op de katheter, zodat u kunt plaatsen naar beneden, zonder vast te houden. Daarna sluit de tweede proximale hechting op de ader en de katheter. </li><li> Een katheter wordt geplaatst in de urineblaas voor getimede urine collectie. Daarom knip je een korte incisie in de huid over de blaas. Verwijder voorzichtig de blaas door de huid gat. Bevestig de blaas met een natte doek. Plaats een voorbereide hechting over de blaas (4 / 0). </li><li> Knip een kort stuk van een katheter (1,5 cm) en de warmte op einde aan een ring te krijgen rond de katheter, die het gemakkelijker maakt om het probleem te verhelpen in de blaas. </li><li> Maak een gat in de blaas bij zijn zeer top. Maak de snede tussen de schepen om het bloeden te voorkomen. Steek het grote uiteinde van de katheter in de blaas en sluit de naad over de katheter en de blaas. </li><li> Alle muizen krijgen een bolus van 0,85% natriumchloride-oplossing in een bedrag gelijk aan 20% van het lichaamsgewicht. Continue infusie wordt gehandhaafd op een snelheid van 800ul/h/25g lichaamsgewicht en FITC-inuline wordt toegevoegd aan het infuus voor de evaluatie van de hele nier glomerulaire filtratiesnelheid (GFR). Na stabilisatie van de dieren voor 20 min, 20 min zijn getimede urine collecties uitgevoerd (vier maal) voor de bepaling van de urinestroom en de FITC-inuline. Bloed is verkregen in het midden van elke periode voor meting van de FITC-inuline. </li><li> Bij het starten van de collectie periodes gedurende 20 minuten gebruik maken van een timer. Verzamel de urine door het plaatsen van het einde van de blaas katheter in een kleine eppendorfbuisje. Meet de buis gewicht voor en na de urine op te vangen, zodat u kunt de urine bedrag te bepalen. Bloedmonsters af te nemen via retroorbital bloed collectie vormen de veneuze plexus via capillaire buizen in het midden van elke collectie periode. </li></ol></li><li> Bloed en de nieren kan worden verzameld na elke procedure voor verdere analyse bijvoorbeeld MPO ELISA, cytokine EISA, histologie. </li></ol> 3. Representatieve resultaten: <img src="/files/ftp_upload/2549/2549fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1 Model van een opknoping gewicht voor renale ischemie:. Een opknoping gewicht systeem is opgezet om renale ischemie van de linker nier veroorzaken. Daarom is een 8,0 nylon hechtdraad werd geplaatst onder de nierslagader en aan het einde van elke hechting een klein gewicht (1g) was verbonden. Deze experimentele ontwerp kan omkeerbaar occlusie van de nierslagader door toepassing van en het vrijgeven van het gewicht lading.

<ol><li>Abuelo, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normotensive+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Normotensive ischemic acute renal failure.</a> N Engl J Med. 357, 797-805 (2007).</li>
<li>Thadhani, R., Pascual, M., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure.</a> N Engl J Med. 334, 448-460 (1996).</li>
<li>Lameire, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Clin%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of acute renal failure.</a> Crit Care Clin. 21, 197-210 (2005).</li>
<li>Gelman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+aortic+cross-clamping+and+unclamping%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of aortic cross-clamping and unclamping.</a> Anesthesiology. 82, 1026-1060 (1995).</li>
<li>Yalavarthy, R., Edelstein, C. L., Teitelbaum, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure+and+chronic+kidney+disease+following+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Hemodial+Int%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure and chronic kidney disease following liver transplantation.</a> Hemodial Int. 11, Suppl 3. S7-S12 (2007).</li>
<li>Schrier, R. W., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure and sepsis.</a> N Engl J Med. 351, 159-169 (2004).</li>
<li>Grenz, A., Osswald, H., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Reno-Vascular+A2B+Adenosine+Receptor+Protects+the+Kidney+from+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Reno-Vascular A2B Adenosine Receptor Protects the Kidney from Ischemia.</a> PLoS Medicine. 5, e137-e137 (2008).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Hermes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+E-NTPDase1+%28CD39%29+to+renal+protection+from+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Contribution of E-NTPDase1 (CD39) to renal protection from ischemia-reperfusion injury.</a> FASEB J. 21, 2863-2873 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+ecto-5%27-nucleotidase+%28CD73%29+in+renal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Protective role of ecto-5'-nucleotidase (CD73) in renal ischemia.</a> J Am Soc Nephrol. 18, 833-845 (2007).</li>
<li>Akcay, A., Nguyen, Q., Edelstein, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediators+of+inflammation+in+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Mediators of inflammation in acute kidney injury.</a> Mediators Inflamm. , 137072-137072 (2009).</li>
<li>Faubel, S., Ljubanovic, D., Poole, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+CD4+T-cell+depletion+is+not+sufficient+to+prevent+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Peripheral CD4 T-cell depletion is not sufficient to prevent ischemic acute renal failure.</a> Transplantation. 80, 643-649 (2005).</li>
<li>Wei, Q., Bhatt, K., He, H. Z., Mi, Q. S., Haase, V. H., Dong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+deletion+of+Dicer+from+proximal+tubules+protects+against+renal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Targeted deletion of Dicer from proximal tubules protects against renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 21, 756-761 (2010).</li>
<li>Joo, J. D., Kim, M., Horst, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+delayed+renal+protection+against+renal+ischemia+and+reperfusion+injury+with+A1+adenosine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and delayed renal protection against renal ischemia and reperfusion injury with A1 adenosine receptors.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 293, F1847-F1857 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Eckle, T., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+isolated+renal+artery+occlusion+during+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for isolated renal artery occlusion during ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 292, F475-F485 (2007).</li>
<li>Qi, Z., Whitt, I., Mehta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+determination+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice+using+FITC-inulin+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 286, 590-596 (2004).</li>
<li>Lorenz, J. N., Gruenstein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+nonradioactive+method+for+evaluating+single-nephron+filtration+rate+using+FITC-inulin%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin.</a> Am J Physiol. 276, 172-177 (1999).</li>
<li>Lorenz, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+evaluating+cardiovascular%2C+renal%2C+and+pulmonary+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 282, 1565-1582 (2002).</li>
</ol>

Kortom, de huidige studie beschrijft een nieuwe techniek voor het uitvoeren van renale ischemie in een muismodel met behulp van een opknoping gewicht voor renale arterie occlusie. In feite is deze studie toont zeer reproduceerbare letsel, dus het minimaliseren van de variabiliteit in verband met klemming van de renale pedikel.

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Natriumpentobarbital </td><td> Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd </td><td> VPL 9372 </td><td> 4mg/mL in een zoutoplossing </td></tr><tr><td> Suture, zijde 4,0 </td><td> Harvard Apparatuur </td><td> 517698 </td><td></td></tr><tr><td> Suture, Prolene 8.0 </td><td> Ethicon, USA </td><td> M8739 </td><td> herbruikbare </td></tr><tr><td> dissectiemicroscoop </td><td> Leica </td><td> n / a </td><td> overwegen ruime werkafstand </td></tr><tr><td> Verwarming Tabel </td><td> Rt, Effenberger, Duitsland </td><td> n / a </td><td> enige en enkele provider </td></tr><tr><td> Chirurgische instrumenten </td><td> WPI, Dumont </td><td></td><td> een fijne microvessel schaar </td></tr></tbody></table>

het gebruik van een opknoping gewicht system voor geïsoleerde renale arterie occlusie

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

Bij gehospitaliseerde patiënten, zijn meer dan 50% van de gevallen van acute nierschade (AKI), veroorzaakt door renale ischemie 1-3. Een recente studie van de gehospitaliseerde patiënten blijkt dat slechts een lichte verhoging van de serum creatinine niveaus (0,3 tot 0,4 mg / dl) is geassocieerd met een 70% groter risico op overlijden dan bij personen zonder een toename 1. Langs deze lijnen, chirurgische ingrepen waarbij cross-klemming van de aorta en renale vaten worden geassocieerd met een nierinsufficiëntie percentages tot 30% 4. Ook AKI na een hartoperatie komt voor bij meer dan 10% van de patiënten onder normale omstandigheden en wordt geassocieerd met een dramatische toename in sterfte. AKI komen ook vaak voor complicaties na levertransplantatie. Minstens 8-17% van de patiënten uiteindelijk die nierfunctievervangende therapie 5. Bovendien is een vertraagde transplantaatfunctie te wijten aan tubulus cel letsel tijdens een niertransplantatie hebben ondergaan vaak gerelateerd aan ischemie-geassocieerde AKI 6. Bovendien, AKI komt voor bij ongeveer 20% van de patiënten die lijden aan sepsis 6. Het optreden van de AKI wordt geassocieerd met dramatische toename van morbiditeit en mortaliteit 1. Therapeutische benaderingen zijn zeer beperkt en de meerderheid van interventionele proeven in AKI hebben gefaald bij de mens. Daarom zijn extra therapeutische modaliteiten om schade aan de nieren te voorkomen dat ischemie dringend nodig 3, 7-9. Licht te werpen op de mechanismen van nierschade als gevolg van ischemie en mogelijke therapeutische strategieën murine modellen zijn intensief vereist 7-13. Muismodellen bieden de mogelijkheid om gebruik te maken van verschillende genetische modellen, waaronder gen-gerichte muizen en weefsel specifiek gen-gerichte muizen (cre-Flox systeem). Echter, muizen renale ischemie is technisch uitdagende en experimentele details grote invloed resultaten. We voerden een systematische evaluatie van een nieuw model voor geïsoleerde renale arterie occlusie in muizen, die specifiek vermijdt het gebruik van klemmen of hechten de renale pedikel 14. Dit model vereist een nefrectomie van de rechter nier, omdat ischemie kan alleen worden uitgevoerd in een nier als gevolg van de experimentele setting. In feite, met behulp van een opknoping gewicht systeem, de nierslagader is alleen geïnstrumenteerd een keer gedurende de chirurgische ingreep. Bovendien zijn er geen veneuze of obstructie van de urethra optreedt met deze techniek. We konden aantonen time-dosis-afhankelijk en zeer reproduceerbare schade aan de nieren met ischemie door het meten van serum creatinine. Bovendien, bij het vergelijken van dit nieuwe model met conventionele klemming van de hele pedikel, nier-bescherming door preconditionering ischemische is dieper en betrouwbaarder. Daarom zijn nieuwe techniek kan nuttig zijn voor andere onderzoekers die werkzaam zijn in het gebied van acute nierschade.

Een precieze muis model voor acute nierschade (AKI) als gevolg van ischemie is een belangrijk instrument om acute nierschade te onderzoeken en eventueel vinden therapeutische instrumenten om schade aan de nieren te behandelen. De opknoping gewicht systeem biedt een tool voor onmiddellijke en betrouwbare renale arterie occlusie en reperfusie zonder dat renale congestie.

Het gebruik van een Opknoping gewicht System voor geïsoleerde renale arterie occlusie

Bij gehospitaliseerde patiënten wordt meer dan 50% van de gevallen van acuut nierfalen (AKI) veroorzaakt door renale ischemie 1-3. Een recente studie naar gehospitaliseerde patiënten ...

Het algemene doel van deze procedure is het opwekken van ischemie bij muizen om acute nierinsufficiëntie te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst de rechter nier bloot te leggen en vervolgens te verwijderen. De tweede stap is het voorbereiden van de nier en deze in een Lucite-beker plaatsen.Vervolgens wordt een systeem met hangende gewichten toegepast op de geïsoleerde nierarterie om ischemie op te wekken. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die verminderde of ernstige nierschade na ischemie laten zien door de nierfunctie te meten via FITC-inulineklaring. Dit systeem met hangende gewichten voor het opwekken van renale ischemie kan helpen bij het beantwoorden van cruciale vragen op het gebied van acute en chronische nierschade door ischemie.De procedure wordt gedemonstreerd door Alexander Barla, een medicijnstudent van de University of Pennsylvania, die dit jaar in ons laboratorium onderzoek doet naar nierschade, en Douglas Ard, een research assistant die ook in onze groep werkt. Hoewel renale ischemie gelijktijdig in beide nieren kan worden uitgevoerd, wordt hier een eenvoudigere methode gedemonstreerd waarbij de rechternier wordt verwijderd, gevolgd door ischemische behandeling van de resterende linkernier.Begin met het plaatsen van een geanestheseerd dier in een linker zijligging op een verwarmde tafel. Bevestig de bovenste en onderste extremiteiten met tape aan de tafel. Reinig de huid en bedek het incisiegebied met minerale olie om inademing van muizenhaar te voorkomen en blootstelling aan allergenen te verminderen.Maak een incisie over de rechterflank in de huid en snijd de spierwand door met een coagulatie-elektrode om bloedingen te voorkomen. Ligeer de niersteel, inclusief de nierslagader en nierader, met een zijden hechtdraad. Gebruik een schaar om de rechternier uit te snijden, waarbij u er op moet letten dat de bijniervaten niet worden beschadigd.Gebruik hechtingen om de spierwand en vervolgens de huid te sluiten. Zodra de eerste wond is gesloten, wordt het dier in rechterzijligging geplaatst. Maak een incisie over de linkerflank en visualiseer de linker nier.Scheid de linker nier voorzichtig van het bindweefsel, waarbij de bijnierschors en de bloedvaten worden ontzien. De volgende stap is om de nier op haar ventrale zijde in een Lucite-bekertje te plaatsen. Om dit te doen, houdt u het omliggende weefsel met een pincet vast terwijl u de onderste pool van de nier voorzichtig in het bekertje duwt.Gebruik vervolgens een pincet om de bovenpool van de nier in de cup te duwen. Gebruik wattenstaafjes gedrenkt in saline bij 37 °C om de nier gedurende de hele procedure nat en warm te houden. Zodra de nier in de cup is, wordt de nierhouder ventraal vastgezet.Om de spanning op de niervaten te behouden, fixeert u de nierhouder zodanig dat de arteria renalis eenvoudig boven de vena renalis kan worden geïdentificeerd. Isoleer de arteria renalis van aangrenzende weefsels en vaten met een fijne pincet. Scheid de arterie voorzichtig van de daaronder gelegen vene.Plaats vervolgens met een pincet een zijden hechtdraad van 7-0 onder de nierslagader. Bevestig ter begeleiding aan elk uiteinde een gewicht van ongeveer één gram en plaats de uiteinden van de hechtdraden over een klein staafje. Wanneer de gewichten vrij hangen, moet de nierslagader worden afgesloten.Een succesvolle occlusie wordt bevestigd door een kleurverandering van rood naar bleek. De duur van de ischemie is afhankelijk van de studie. In dit geval bedraagt de ischemische periode 30 minuten; na de ischemie worden de gewichten verwijderd en wordt een reperfusietijd van 30 tot 60 minuten gehanteerd.Ontspan na reperfusie de spanning van de nierhouder en verplaats de nier voorzichtig uit de beker terug in het dier. Om de omvang van de nierschade te bepalen, kan één uur na renale ischemie de FITC-inulineklaring worden gemeten om de glomerulaire filtratiesnelheid te beoordelen. De eerste stap is het canuleren van de linker jugularisvene voor continue infusie van natriumchloride en FITC-gelabelde inuline. Maak na het voorbereiden van het dier zoals eerder beschreven een incisie langs de nek.Isoleer de donkerblauwe ader van het omliggende weefsel. Bind 2 4 0 hechtingen rond de ader met ongeveer één centimeter tussenruimte. Plaats een klem op de ader vóór de proximale hechting om de bloedstroom te stoppen.Sluit vervolgens de distale knoop en plaats een gewicht aan het distale uiteinde van de hechtdraad om spanning op de vene te behouden; gebruik microschaarknippen om een kleine opening in de vene te maken. Houd de opening vast met een fijne pincet terwijl de katheter wordt ingebracht, en verwijder de klem om de katheter verder naar voren te schuiven. Zodra deze op zijn plaats zit, wordt de tweede proximale hechting over de vene en de katheter gesloten om de blaaskatheter te plaatsen voor tijdgebonden urinecollectie.Snijd eerst de huid over de blaas door. Trek vervolgens de blaas voorzichtig door dit gat naar buiten. Zodra de blaas is geïsoleerd, kan deze worden vastgezet met nat weefsel en kan er een stuk hechtdraad overheen worden geplaatst.Knip een kort stukje katheter van 1,5 centimeter af en verhit een van de uiteinden om de rand glad te maken en de inbreng te vergemakkelijken. Plaats een hechting rond de blaas en maak vervolgens een gaatje tussen de vaten aan de bovenzijde van de blaas om bloedingen te voorkomen. Voer het gladde uiteinde van de katheter in en knoop de hechting vast over zowel de katheter als de blaas.Nu de katheters zijn geplaatst, wordt een continue infusiesnelheid van 800 microliters per uur per 25 gram lichaamsgewicht gehandhaafd. FITC-inuline wordt aan de infusie toegevoegd voor de evaluatie van de glomerulaire filtratiesnelheid van de gehele nier. Laat het dier 20 minuten stabiliseren voordat er monsters worden verzameld. Verzamel de urine over vier intervallen van 20 minuten door het uiteinde van de blaaskatheter in een klein eppendorfbuisje te plaatsen.Noteer het gewicht van de buis voor en na de opvang. Om de hoeveelheid urine te bepalen, wordt er in het midden van elke tijdsperiode een bloedmonster genomen via collectie uit de retro-orbitale veneuze plexus voor de meting van FITC-inuline; als alternatief voor het meten van de inulineklaring via directe canulatie kunnen de creatinineklaring en het serumcreatinine worden gemeten met behulp van een metabole kooi. Na herstel van het nierletsel worden de muizen in metabole kooien geplaatst voor de bepaling van de nierfunctie.Parameters voor 24 uur: weeg elke waterfles voordat deze in de kooi wordt geplaatst. Dit gewicht zal later worden gebruikt om de hoeveelheid geconsumeerd water tijdens de studie te bepalen. Weeg de waterflessen en trek dit gewicht af van het startgewicht om de geconsumeerde hoeveelheid te bepalen. De nierfunctie kan worden beoordeeld door de plasmaniveaus en urineniveaus van creatinine, natrium en kalium op verschillende tijdstippen na ischemie te meten.Na deze procedure kunnen cytokineniveaus worden gemeten om de mate van ontsteking na acute nierischemie vast te stellen.

use-of-a-hanging-weight-system-for-isolated-renal-artery-occlusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een muismodel voor myocardiale ischemie en ischemische preconditionering is een belangrijk instrument studie cardioprotectief...

Het gebruik van een Opknoping Weight System voor Coronary Artery Occlusion in Muizen

We hebben een nieuw muizenmodel van een opknoping gewicht systeem voor het portal triade occlusie. Deze techniek kan nuttig zijn voor toekomstige onderzoeken ischemie muizen lever modellen.

Gebruik van een hangende gewicht System voor lever ischemie in Muizen

This video demonstrates a procedure for renal artery sympathetic denervation in an angiotensin II-induced hypertensive mouse model, using phenol to disrupt sympathetic nerve function and reduce blood pressure.

Sympathetic Denervation of Renal Arteries in an Angiotensin II-Induced Hypertension Mouse Model

Een tweetraps methode om chronische nierziekte (CKD) in de Lewis rat vast door operatief verwijderen 5/6th van renale massa wordt beschreven. Combinatie van de chirurgische procedure, NOS-remming en een hoge zoutconcentratie dieet leidt tot een model lijkt op menselijke CKD, waardoor studie van causale mechanismen en de ontwikkeling van nieuwe behandelingen.

5/6th Nephrectomy in combinatie met High Salt Dieet en stikstofoxide synthase Remming aan chronische nierziekte induceren in de Lewis rat

Enzymatische micro-elektrode biosensoren maken real-time metingen van extracellulaire celsignalering in biologisch relevante concentraties mogelijk.  De volgende protocollen breiden de toepassingen van biosensoren uit naar de ex vivo en in vivo detectie van ATP en H2O2 in de nier.

Het gebruik van enzymatische biosensoren te kwantificeren endogene ATP of H<sub&gt; 2</sub&gt; O<sub&gt; 2</sub&gt; In de nier

De muis die geperfuseerde nier (MIPK) is een techniek voor het houden van een muizennier onder ex vivo omstandigheden geperfuseerd en functioneel voor 1 uur. De buffers en operatietechniek worden beschreven.

De geïsoleerde Mouse perfusie Kidney Techniek

Een gemodificeerd 2 nier 1 clip (2K1C) Goldblatt muismodel werd ontwikkeld met behulp van polyurethaan tubing om nierslagaderstenose te initiëren, waardoor een toename van renine-expressie en nierbeschadiging werd geïnduceerd. Hier beschrijven we een gedetailleerde procedure voor het voorbereiden en plaatsen van de manchet op de nierslagader om een reproduceerbaar en consistent 2K1C-muismodel te genereren.

Een gemodificeerd twee nieren Een Clip Muis Model van Renine Regulatie in nierslagader Stenose

Deze studie presenteert een zeer reproduceerbaar groot diermodel van nierischemie-reperfusieletsel bij varkens met behulp van tijdelijke percutane bilaterale ballonkatheter occlusie van de nierslagaders gedurende 60 minuten en reperfusie gedurende 24 uur.

Een groot diermodel voor acuut nierletsel door tijdelijke bilaterale nierslagader occlusie

Deze studie stelde een protocol op dat zich richt op de technische verfijning van een muismodel van bilaterale renale ischemie-reperfusie voor onderzoek naar acuut nierletsel.

Technische verfijning van een bilateraal renale ischemie-reperfusie muismodel voor onderzoek naar acuut nierletsel

Dit artikel bevat gedetailleerde instructies om onderzoekers in staat te stellen omkeerbare unilaterale ureterobstructie bij muizen uit te voeren met behulp van een gestandaardiseerd model dat analyse mogelijk maakt van de structurele en functionele resultaten op lange termijn na de omkering van langdurige ureterobstructie.

Een muismodel om de structurele en functionele resultaten op lange termijn te evalueren na de omkering van langdurige unilaterale ureterobstructie

Dit artikel presenteert een stapsgewijs protocol voor de isolatie en functionele evaluatie van menselijke renale arteriële takken, waardoor preklinische studies voor farmaceutische ontwikkeling worden vergemakkelijkt.

Microdissectie op meerdere niveaus en functioneel-structurele profilering van menselijke renale arteriële takken

Leer een ophanggewichtsysteem voor geïsoleerde nierarterie-occlusie bij muizen om acute nierbeschadiging te bestuderen. Deze methode meet nierfunctie via FITC-inulineklaring.

Het gebruik van een Opknoping gewicht System voor geïsoleerde renale arterie occlusie

Meer video's verkennen