Name: Orthotope Xenografting van de Mens Luciferase-label maligne perifere zenuwschede tumorcellen voor In vivo Het testen van de kandidaat-therapeutische middelen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-07T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Leer orthotopische xenografting van luciferase-gelabelde menselijke maligne perifere zenuwschede tumorcellen in de ischiadicus van immunodeficiënte muizen. Deze methode maakt bioluminescentiebeeldvorming mogelijk voor het monitoren van tumorontwikkeling en het testen van kandidaat-therapeutische middelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Nationaal Instituut voor Neurologische Ziekten en Stroke (R01 NS048353 naar SLC), het National Cancer Institute (R01 CA122804 naar SLC, R01 CA134773 Kevin A. Roth en SLC en CA13148-35 tot KRZ) en het Ministerie van defensie (X81XWH-09-1-0086 naar SLC). Fondsen ter ondersteuning van de werking van de UAB Comprehensive Cancer Center beeldvorming van kleine proefdieren Shared facility werden verstrekt door een NCI Core ondersteuning te verlenen (P30 CA13148-35, E. Partridge, PI). Wij danken de Alabama Neuroscience Blueprint Core Center (P30 NS57098) en de UAB Neuroscience Core Center (P30 NS47466) voor hun hulp. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en niet noodzakelijkerwijs het officiële standpunt van de National Institutes of Health of het ministerie van Defensie.

<ol><li>Rosenberg, M. P., Bortner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+transgenic+and+knockout+animal+models+should+be+used+%28for+drug+efficacy+studies+in+cancer%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Met.+Rev%22%5BJournal%5D)">Why transgenic and knockout animal models should be used (for drug efficacy studies in cancer).</a> Cancer Met. Rev. 17, 295-299 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Met.+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Met. Rev. 17, 279-284 (1999).</li>
<li>Carroll, S. L., Ratner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+does+the+Schwann+cell+lineage+form+tumors+in+NF1%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">How does the Schwann cell lineage form tumors in NF1?</a> Glia. 56, 1590-1605 (2008).</li>
<li>Woodruff, J. M., Kourea, H. P., Louis, D. N., Scheithauer, B. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWoodruff%2C+JM+%22Pathology+and+Genetics+of+Tumours+of+the+Nervous+System%22">Pathology and Genetics of Tumours of the Nervous System</a>. Kleihues, P., Cavenee, W. K. , IARC Press. Lyon. 172-174 (2000).</li>
<li>DeClue, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+receptor+expression+in+neurofibromatosis+type+1-related+tumors+and+NF1+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor receptor expression in neurofibromatosis type 1-related tumors and NF1 animal models.</a> J. Clin. Invest. 105, 1233-1241 (2000).</li>
<li>Byer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tamoxifen+inhibits+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+growth+via+an+estrogen+receptor-independent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Tamoxifen inhibits malignant peripheral nerve sheath tumor growth via an estrogen receptor-independent mechanism.</a> Neuro-Oncology. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Zinn, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR J. 49, 103-115 (2008).</li>
<li>Wu, J. C., Sundaresan, G., Iyer, M., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+optical+imaging+of+firefly+luciferase+reporter+gene+expression+in+skeletal+muscles+of+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Therapy%22%5BJournal%5D)">Noninvasive optical imaging of firefly luciferase reporter gene expression in skeletal muscles of living mice.</a> Mol. Therapy. 4, 297-306 (2001).</li>
<li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 292, 285-296 (2005).</li>
<li>Dahlberg, W. K., Little, J. B., Fletcher, J. A., Suit, H. D., Okunieff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosensitivity+in+vitro+of+human+soft+tissue+sarcoma+cell+lines+and+skin+fibroblasts+derived+from+the+same+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Biol%22%5BJournal%5D)">Radiosensitivity in vitro of human soft tissue sarcoma cell lines and skin fibroblasts derived from the same patients.</a> Int. J. Radiat. Biol. 63, 191-198 (1993).</li>
<li>Badache, A., DeVries, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrosarcoma-derived+Schwann+cells+overexpress+platelet-derived+growth+factor+%28PDGF%29+receptors+and+are+induced+to+proliferate+by+PDGF%5BTitle%5D)+AND+%22BB.+J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Neurofibrosarcoma-derived Schwann cells overexpress platelet-derived growth factor (PDGF) receptors and are induced to proliferate by PDGF.</a> BB. J. Cell. Physiol. 177, 334-342 (1998).</li>
<li>Muir, D., Neubauer, D., Lim, I. T., Yachnis, A. T., Wallace, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+properties+of+neurofibromin-deficient+neurofibroma+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic properties of neurofibromin-deficient neurofibroma Schwann cells.</a> Am. J. Pathol. 158, 501-513 (2001).</li>
</ol>

De gedetailleerde orthotope xenografting hier gepresenteerde methode is er een die we ontwikkeld met behulp van ST88-14 MPNST cellen, een lijn die veel gebruikt wordt in studies van deze NF1-geassocieerde perifere zenuw schede tumoren. Echter, deze methode is eenvoudig aan te passen voor preklinische studies met andere MPNST cellijnen. Zo hebben we ook uitgevoerd orthotope xenografting met STS-26T 10 cellen, een lijn afgeleid van een sporadisch voorkomende MPNST en T265-2c 11 cellen, die zijn afgeleid van een NF1-geassocieerde MPNST, met succes vergelijkbaar met die we waargenomen met ST88 -14 cellen. Dat gezegd hebbende, we zouden er rekening mee dat de exacte voorwaarden die we hier beschrijven voor orthotope xenografting van de ST88-14 cellen die niet rechtstreeks kan worden vastgesteld voor het enten van andere MPNST lijnen. In plaats daarvan moeten de belangrijkste parameters van de methodologie empirisch worden bepaald voor elke cellijn. Deze parameters zijn onder meer het aantal MPNST cellen in eerste instantie geënt, de termijn voor het kweken van de ontwikkeling en, in mindere mate, het volume waarin de tumorcellen worden geïnjecteerd. Om vast te stellen van deze parameters voor een nieuwe lijn, we enten groepen van muizen (5 muizen per groep) met 03 tot 05 oktober x 10 6 tumorcellen, het controleren van twee concentraties van cellen voor elke orde van grootte (dat wil zeggen, 10 3 cellen, 5 x 10 3 cellen, 10 cellen 4, 5 x 10 4 cellen, etc.). Grotere aantallen tumorcellen (&gt; 10 6) worden geïnjecteerd in een groter volume, we hebben ontdekt dat tot 5 ml kan worden geïnjecteerd zonder verlies van cellen van de geënte zenuw. We hebben ook gevonden dat niet meer dan 5 x 10 6 tumorcellen per 5 ml volume kan worden geïnjecteerd als dichter suspensies in toenemende mate gevoelig zijn voor shear die de tumorcellen doodt. We volgen deze muizen tot ten minste drie dieren binnen elke categorie hebben voelbare tumoren, waarna we eindigen die groep en histologisch onderzoek van de zenuwen te enten groei te bevestigen. Uiteraard is de tijd die nodig is om te bereiken dit punt zullen verschillen afhankelijk van het aantal van de geïnjecteerde cellen, in het algemeen, zijn we op zoek naar een concentratie van cellen die maximaal toelaatbare groei van de tumor zullen bereiken binnen 30-60 dagen. Meer snelle groei kan het moeilijk maken om voorafgaand realiseren van effectieve therapeutische concentraties de beëindiging van het experiment en / of het verzamelen van voldoende bioluminescentie beeldvorming datapunten te voorkomen in de loop van de experimenten. Een tijdsverloop langer dan 60 dagen maakt het aanpassen van experimentele parameters log en onnodig verlengt de duur van de geplande experimenten. Tot slot willen we ook rekening mee dat we deze orthotope xenografting gebruikte methodologie met ST88-14 cellen geënt in NIH III muizen om de therapeutische werkzaamheid van tamoxifen 6 aan te tonen. Een gedetailleerde beschrijving van de methodes die we regelmatig gebruiken om de effecten van kandidaat-therapeutische middelen op orthotope xenotransplantaten te beoordelen kan gevonden worden in dat manuscript. Het is ook aangetoond dat neurofibroom cellen met succes kan worden geënt in de perifere zenuwen 12, wat suggereert dat, met wijzigingen, zijn de procedures in dit protocol kan worden gebruikt om preklinische studies uit te voeren met de kandidaat-therapeutische middelen tegen neurofibromen.

<table><tbody><tr><td>Foxchase outbred SCID-muizen</td><td>Charles River Laboratories</td><td>#236</td><td></td></tr><tr><td>NIH III-muizen</td><td>Taconic</td><td>#NIHBNX</td><td></td></tr><tr><td>NOD-SCID&amp;#947;-muizen</td><td>Jackson Laboratory</td><td>#005557</td><td></td></tr><tr><td>Cell Stripper</td><td>Fisher Scientific</td><td>25-056-cl</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond chirurgische lijm</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton-spuit</td><td>Hamilton Co</td><td>#80030</td><td>10 &amp;#x03BC;L volume</td></tr><tr><td>Hamilton-spuitnaalden</td><td>Hamilton Co</td><td>#7803-05</td><td>33 Ga., 0.5 inch, PT4 (op maat gemaakt)</td></tr><tr><td>Oormerken</td><td>National Band and Ear Tag Co.</td><td>1005-1</td><td></td></tr><tr><td>Oogzalf</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotope xenografting van de mens luciferase-label maligne perifere zenuwschede tumorcellen voor in vivo het testen van de kandidaat-therapeutische middelen

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Hoewel in vitro-schermen zijn essentieel voor de initiële identificatie van kandidaat-therapeutische middelen, een zorgvuldige beoordeling van het vermogen van de drug te remmen groei van de tumor moet worden uitgevoerd in een geschikt diermodel. Het type van dierlijke model dat het beste is voor dit doel is een onderwerp van hevige discussie. Er zijn aanwijzingen geeft aan dat preklinische studies te onderzoeken medicijn effecten op de tumoren die ontstaan ​​in transgene muizen zijn meer voorspellend voor klinische uitkomst en zo een kandidaat-therapeutische middelen worden vaak getest in deze modellen. Helaas, transgene modellen zijn niet beschikbaar voor vele typen tumoren. Verder transgene modellen hebben vaak andere beperkingen, zoals bezorgdheid over hoe goed de muis tumor modellen zijn menselijke tegenhanger, onvolledige penetrantie van de tumor fenotype en een onvermogen om te voorspellen wanneer tumoren zullen ontwikkelen. Dus veel onderzoekers gebruik xenotransplantaatmodellen (menselijke tumorcellen geënt in immunodeficiënte muizen) voor de preklinische proeven indien nodig transgene tumor modellen zijn niet beschikbaar. Zelfs als transgene modellen beschikbaar zijn, zijn ze vaak een partnerschap aangegaan met xenotransplantaatmodellen dat laatste te vergemakkelijken een snelle bepaling van de therapeutische bereik. Verder is dit partnership maakt een vergelijking van de effectiviteit van het middel in transgene tumoren en echte menselijke tumorcellen. Historisch gezien is xenografting vaak uitgevoerd door het inspuiten van tumorcellen subcutaan (ectopische xenotransplantaten). Deze techniek is snel en reproduceerbaar is, relatief goedkoop en staat continue kwantificering van de groei van tumoren in de therapeutische periode 2. Echter, de subcutane ruimte is niet de normale micro-omgeving voor de meeste gezwellen en zo verkregen resultaten met ectopische xenografting kan misleidend zijn als gevolg van factoren, zoals een afwezigheid van orgaan-specifieke expressie van gastheer weefsel en tumor genen. Het is dus ten zeerste aanbevolen dat ectopische enten studies worden vervangen of aangevuld door studies waarin menselijke tumorcellen worden geënt in hun weefsel van herkomst (orthotope xenografting) 2. Helaas is de uitvoering van deze aanbeveling vaak gedwarsboomd door het feit dat orthotope xenografting methodieken nog niet zijn ontwikkeld voor vele typen tumoren. Maligne perifere zenuw schede tumoren (MPNSTs) zijn zeer agressief sarcomen die sporadisch of in samenwerking gebeuren met neurofibromatose type 1 3 en meest voordoen in de heupzenuw 4. Hier beschrijven we een technisch eenvoudige methode waarbij vuurvlieg luciferase-gemerkte menselijke cellen MPNST orthopically worden xenografted in de heupzenuw van immunodeficiënte muizen. Onze benadering van het beoordelen van het succes van de transplantatie procedure bij individuele dieren en de daarop volgende niet-vooringenomen randomisatie in de werkgroepen wordt ook besproken.

Een methode voor het betrouwbaar enten van luciferase-gemerkte menselijke maligne perifere zenuwschede tumorcellen in de heupzenuw van immunodeficiënte muizen wordt beschreven. Het gebruik van bioluminescentie imaging om een ​​goede invoering van de tumor enten en criteria voor willekeurige scheiding van dieren in studiegroepen aan te tonen worden ook besproken.

Orthotope Xenografting van de Mens Luciferase-label maligne perifere zenuwschede tumorcellen voor In vivo Het testen van de kandidaat-therapeutische middelen

Hoewel in vitro-screenings essentieel zijn voor de initiële identificatie van potentiële therapeutische middelen, is een grondige beoordeling van het vermogen van het geneesmiddel om ...

Het algemene doel van deze procedure is om vast te stellen of een kandidaat therapeutisch middel de groei van M-P-N-S-T-cellen die in de nervus ischiadicus van immuundeficiënte muizen zijn getransplanteerd, effectief remt. Dit wordt bereikt door eerst de tumorcellen uit een weefkolf te verwijderen, ze te wassen en ze opnieuw te suspenderen in de juiste concentratie. De tweede stap van de procedure is het chirurgisch blootleggen van de nervus ischiadicus om vervolgens 5 000 cellen in de zenuw te injecteren.De volgende stap is om het succes van de transplantatie te bepalen met behulp van in vivo, lichtgebaseerde beeldvorming, waarbij de CIN over de studiegroepen wordt gerandomiseerd, en om de therapie met het kandidaat therapeutische middel te starten. De laatste stap van de procedure is het oogsten van de tumoren 30 dagen na transplantatie en het analyseren van de effecten die het kandidaat therapeutische middel op de tumor had. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die aantonen of het therapeutische middel de tumorgroei heeft verminderd via methoden zoals het vergelijken van tumorgewichten, het bekijken van de relatieve proliferatiesnelheden via immunokleuring voor KI 67 en het beoordelen van de niveaus van tumorceldood in controle- en behandelde muizen met tunnel-assays.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals subcutane transplantatie, is dat het de normale micro-omgeving nabootst, wat de groei van M-P-N-S-T beter modelleert; deze techniek zal worden gedemonstreerd door Amy Turk, een laborant uit mijn laboratorium. Niet-naakte immuundeficiënte muizen worden de dag voor de transplantatie voorbereid. Gebruik een trimmer om het haar van een geanestheseerde muis te scheren, terwijl deze op een warmteplaat ligt om de lichaamstemperatuur te handhaven.Gebruik een chemisch ontharingsmiddel om resterend haar te verwijderen. Zodra al het haar is verwijderd, wordt de muis in een isolatiekooi zonder strooisel op een warmtemat geplaatst tot het dier volledig is hersteld. Centrifugeer de cellen op de dag van de transplantatie gedurende vijf minuten bij 3000 RPM.Verwijder het supernatant voorzichtig en resuspendeer de celpellet in DMEM 10 zonder puromycine tot een uiteindelijke concentratie van 5 × 10³ cellen per 3 µL. Bewaar de cellen op ijs totdat ze worden gebruikt. Plaats als eerste stap een geanestheseerd dier op een warmtemat en breng oogzalf aan in elk oog.Bevestig een oorlabel met een uniek identificatienummer aan het rechteroor van elke muis. Voor een gemakkelijke identificatie gedurende de studie wordt het dier op de buik geplaatst en worden de achterpoten gespreid. Dek de muis af met een steriel laken en maak een chirurgisch venster vrij op de plaats waar de transplantatie zal plaatsvinden.Breng Betadine aan op de chirurgische plaats met een wattenstaafje, beginnend in het midden van de flank en geleidelijk spiraalsgewijs naar buiten toe tot aan de randen van het chirurgische venster. Vervolgens wordt 70% ethanol op dezelfde wijze op de chirurgische plaats aangebracht. Opeenvolgende applicaties van Betadine gevolgd door ethanol worden nog twee keer herhaald.Haal de cellen uit het ijs en vortex ze voorzichtig of tik tegen de buis om de bezonken cellen opnieuw te suspenderen. Gebruik een pipet om 3,2 µL van de celsuspensie te verwijderen en breng dit aan op een stuk parafilm. Trek drie µL van de celsuspensie op in een Hamilton-spuit van 10 µL.Voorzien van een naald met maat 33. Bewaar de cellen en de spuit met de cellen op ijs tot het moment van gebruik. Gebruik een scalpelmessenhouder nummer 4, voorzien van een scalpellamesje nummer 22 om een incisie in de huid van de flank te maken, net onder en parallel aan het dijbeen.Open de huidincisie met de chirurgische klem om de onderliggende spier bloot te leggen. Gebruik een scherp gepunte schaar voor een botte dissectie door de fascia die over de lengte van het been loopt, en leg onder een microscoop de nervus ischiadicus bloot, die zich bevindt onder een witte lineaire structuur met de dikte van een dikke draad. Gebruik een gebogen pincet met scherpe punten om voorzichtig onder de zenuw te disseceren en deze los te maken van de onderliggende spier.Laat de pincet op zijn plaats om de zenuw zowel opgetild als geïsoleerd te houden. Voer de naald van de Hamilton-spuit voorzichtig in de zenuw in, waarbij geprobeerd wordt de injectiehoek zo parallel mogelijk aan de zenuw te houden, om te voorkomen dat de naald doorstoot naar de onderzijde. Zodra de naald correct in de zenuw is geplaatst, wordt de spanning van de pincet versoepeld en worden de cellen langzaam geïnjecteerd gedurende 45 tot 60 seconden. Een langzame injectie is essentieel om een terugstroom van tumorcellen en het daarmee gepaard gaande verlies ervan te voorkomen.Nadat alle cellen succesvol zijn geïnjecteerd, wordt de naald langzaam teruggetrokken om verlies van het geïnjecteerde materiaal te minimaliseren. Wanneer de injectie is voltooid, worden de chirurgische klem en de pincet verwijderd. Plaats vervolgens de zenuw voorzichtig terug op de oorspronkelijke locatie.Sluit de incisie met vet bond chirurgische lijm en houd de wond gedurende ongeveer 20 seconden met een pincet bij elkaar zodat de lijm kan drogen. Plaats het dier in een verwarmde kooi zonder strooisel totdat het volledig is hersteld. Houd de gezondheid van de muizen in de gaten.Muizen worden dagelijks uit de studie verwijderd als de tumormassa 10% van het normale lichaamsgewicht van het dier overschrijdt of als het gewichtsverlies 20% overschrijdt. Om het succes van de procedure te bepalen, wordt er één en drie dagen na het enten bioluminescentie-imaging uitgevoerd. Injecteer een muis met 2,5 milligram Lucifer en plaats het geanestheseerde dier op het verwarmde imagingplatform.Lichtemissie van door de tumor tot expressie gebrachte vuurvlieg-luciferase wordt gedetecteerd 10 minuten na injectie van het substraat. Gebruik software van Xeno Gen om de acquisitietijden van de beelden in te stellen op een bereik van één seconde tot 10 minuten. Maak vervolgens zwart-wit- en pseudokleurfoto's van de muizen.De schaal van bioluminescentie is over deze beelden gelegd om een maatstaf te geven voor de intensiteit van de lichtemissie. Om in aanmerking te komen voor opname in een cohort voor preklinische studies, moeten muizen een detecteerbaar bioluminescentiesignaal vertonen, zowel één als drie dagen na transplantatie, en moet de intensiteit van het signaal toenemen tussen dag één en drie. Hier wordt een typische progressieve toename van bioluminescentie getoond die werd waargenomen van één tot 18 dagen na transplantatie in een correct gevestigde orthotope xenograft in een naakte muis.Let op de gelijkenis van de gedetecteerde signalen binnen het interessegebied van verschillende muizen. Opnieuw beeldvormen 10 dagen en 18 dagen na transplantatie laat zien dat bioluminescente signalen op de transplantatieplaats bij individuele muizen progressief toenemen. Kwantificering van de bioluminescente signalen waargenomen één tot 24 dagen na transplantatie laat zien dat, hoewel deze signalen progressief toenemen, de tumorgroei in de latere stadia van de studieperiode aanzienlijk versnelt.Gezien de agressieve groei van M pns ts, doorbreken de gegraftte tumorcellen vaak de normale barrières van de zenuw en invaderen ze naburige weefsels. Deze fotomicrografie van de graftplaats demonstreert tumorgroei en focale invasie in de aangrenzende skeletspier. Zodra de techniek onder de knie is, kan deze bij een muis in 10 minuten worden uitgevoerd wanneer dit correct wordt gedaan.

orthotopic-xenografting-human-luciferase-tagged-malignant-peripheral

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Luciferase-gemodificeerd menselijk brein tumor xenotransplantaten kan intracranially worden vastgesteld athymische muizen, met de daaropvolgende controle van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie beeldvorming. In combinatie met survival analyse, bioluminescentie monitoring is een essentieel onderzoeksinstrument voor pre-klinisch testen van therapieën worden overwogen voor de behandeling van hersentumoren.

Tot vaststelling van Intracraniële hersentumor xenotransplantaten Met verdere analyse van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie Imaging

Hierin beschrijven we de methoden om te bouwen, visualiseren en kwantificeren van de bioluminescente reacties van zowel vuurvlieg en Renilla luciferase enzymen uitgedrukt in gemetastaseerde borstkanker cellen tijdens hun groei en...

In vivo Dual ondergrond Bioluminescent Imaging

We beschrijven een geïntegreerde methode voor de exacte, stereotactische implantatie van menselijke glioblastoma multiforme cellen in de hersenen van muizen en vervolgens naakt...

Stereotactische Intracraniale Implantatie en<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme

Beter begrip van alvleesklierkanker biologie is kritisch nodig om de ontwikkeling van betere therapeutische opties om pancreaskanker te behandelen mogelijk te maken. Om aan deze behoefte te pakken, zien we een orthotopic model van pancreaskanker die niet-invasieve monitoring van de progressie van kanker maakt gebruik...

Bioluminescent Orthotope Model van pancreaskanker Progression

GL261-glioomcellen bieden een bruikbaar immunocompetent diermodel van glioblastoom. De doelen van dit protocol zijn om de juiste technieken te demonstreren voor het monitoren van intracraniële tumorgroei met behulp van in vivo bioluminescentie-beeldvorming, en om de bruikbaarheid van luciferase-gemodificeerde GL261-cellen te verifiëren voor het bestuderen van tumorimmunologie en immunotherapeutische benaderingen voor de behandeling van glioblastoom.

Bioluminescentie beeldvorming van een Immunocompetente diermodel voor Glioblastoma

Bioluminescentie beeldvorming is een bekend hulpmiddel voor het lokaliseren van tumoren en metastasen, maar kwantificering van deze beelden zijn vaak complexe berekeningen en bijzondere instrumenten. We beschrijven de easy-to-use luminoscore methode, gebaseerd op een nauwkeurige overname voorwaarden, vereist geen berekeningen, en het mogelijk maken tumorlast en de respons op de behandeling te kunnen houden in muismodellen.

-Bioluminescentie Based Tumor kwantificatie methode voor de controle progressie van de tumor en de effecten van de behandeling in de muis lymfoom Models

Hier presenteren we een protocol voor het gebruik van echografie-geleide injectie van neuroblastoom (NB) en de Ewing sarcoom (ES) cellen (gevestigde cellijnen en patiënt afkomstige tumorcellen) op biologisch relevante sites maken van betrouwbare preklinische modellen voor kanker onderzoek.

Gebruik van echografie begeleide weefsel geleide cellulaire implantatie voor de oprichting van biologisch relevante uitgezaaide Tumor Xenografts

Hier gebruiken we bioluminescente, X-ray, en het positron-emissie tomografie/berekend tomography imaging te bestuderen hoe remmende mTOR activiteit beïnvloedt het beenmerg-geaccepteerd myeloma tumoren in een xenograft model. Dit zorgt voor fysiologisch relevante, niet-invasieve en multimodale analyses van het effect van de anti-myeloma van therapieën gericht op beenmerg-geaccepteerd myeloma tumoren in vivo.

Multimodale bioluminescente en positronisch-emissie tomografie/computationele Tomography Imaging van Multiple Myeloma beenmerg Xenografts in NOG muizen

Hier beschrijven we een methode voor het transduceren van menselijke T-cellen met luciferase om in vivo tracking van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde T-celhandel naar tumoren in studies te vergemakkelijken om de anti-tumor werkzaamheid en het mechanisme van T-cel-engaging bispecifieke antilichamen te evalueren.

Het volgen van bispecifieke antilichaam-geïnduceerde T-celhandel met behulp van luciferase-getransduceerde menselijke T-cellen

Een grote uitdaging bij het ontwikkelen van nieuwe therapieën voor longkanker is het modelleren van de micro-omgeving van de tumor naarmate de regionale ziekte evolueert naar gemetastaseerde ziekte. Hier beschrijven we een eenvoudige methode om een orthotopisch syngeen model van longkanker op te stellen dat het mogelijk maakt om in vivo de ziekte in de loop van de tijd te volgen.

Een minimaal invasieve methode voor het genereren van een syngeen orthotopisch muismodel van longkanker

Neurofibromatose type 1 (NF1) leidt tot goedaardige perifere zenuwschedetumoren (neurofibromen) die een specifieke zenuwmicro-omgeving nodig hebben voor groei. Er werd een geoptimaliseerd orthotopisch xenotransplantaatmodel ontwikkeld, waarbij gebruik werd gemaakt van intraneurale injectie van menselijke Schwann-cellen in NSG-muizen. Dit model recapituleert menselijke neurofibromen en biedt een waardevol platform om therapeutische strategieën te evalueren.

Een orthotope ischiaszenuwxenotransplantaat voor neurofibromatose type 1 neurofibromen

Leer orthotopische xenografting van luciferase-gelabelde menselijke maligne perifere zenuwschede tumorcellen in de ischiadicus van immunodeficiënte muizen. Deze methode maakt bioluminescentiebeeldvorming mogelijk voor het monitoren van tumorontwikkeling en het testen van kandidaat-therapeutische middelen.

Orthotope Xenografting van de Mens Luciferase-label maligne perifere zenuwschede tumorcellen voor In vivo Het testen van de kandidaat-therapeutische middelen (Video) | JoVE Journal

Orthotope Xenografting van de Mens Luciferase-label maligne perifere zenuwschede tumorcellen voor In vivo Het testen van de kandidaat-therapeutische middelen

Meer video's verkennen