Name: Spinal Cord Elektrofysiologie II: Extracellulaire Suction Elektrode Fabrication (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-20T23:59:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Leer de fabricage van extracellulaire zuigelectroden voor elektrofysiologische metingen aan neonatale knaagdier-ruggenmergen in vitro. Deze methode gebruikt een alcoholbrander om PE 90 plastic buizen te smelten en te vormen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Samuel L. Pfaff is een professor in de Gene Expression laboratoria in het Salk Instituut voor Biologische Studies en een onderzoeker in de Howard Hughes Medical Institute. Dit werk werd ondersteund door de Christopher Reeve Foundation en Dana. Joe Belcovson, Kent Schnoeker en Mike Sullivan in Multimedia Resources aan het Salk Institute hulp geboden met fotografie en bewerken.

Elektrofysiologische registraties van geïsoleerde ruggenmerg kan onthullen genetische en ontwikkelingsstoornissen veranderingen in neurale circuits 1. We hebben eerder aangetoond een methode om te ontleden neonatale muis ruggenmerg 2. Hier presenteren wij een methode om de zuigkracht elektroden nuttig zijn in het opnemen van fictieve motoriek in geïsoleerde ruggenmerg 3 voor te bereiden. De tip van een plastic buis elektrode kan worden gevestigd op een zeer fijne tip met de hand met een lage temperatuur alcohol lamp 3-5. De kunststof buizen (PE90, Clay Adams Intramedic TM) wordt gehouden over de vlam om de slang te verzachten tot een soepel formulier. Als de slang begint te smelten en wordt meer doorschijnend is verwijderd van de warmtebron en de uiteinden voorzichtig uit elkaar getrokken. De timing van het verwijderen van de buis van de vlam is het belangrijk om te verzekeren het plastic niet instorten of splitsen terwijl ze getrokken. De dunne gedeelte van de buis wordt gesneden met een scheermesje op basis van de gewenste interne diameter, zoals gedicteerd door de leeftijd van het monster of de segmentale niveau van het snoer. Voor het gemak van het plaatsen van een o-ring op de slang, is een 45 ° snede gemaakt aan het dikke uiteinde van de slang met een scheermesje. Een ferrule en o-ring zijn geïnstalleerd op het dikke einde van de elektrode tip hechten aan de loop van de elektrode. Mogelijk te maken voor specifiek formaat elektroden en voorkomen dat de problemen van de hand-pulling elektrode tips, elektroden kan worden geconstrueerd met behulp van kleine slang ingebracht in een dikkere buis (PE90). De lengte van de slang zijn specifiek voor de behoeften van de opname instellen en zijn variabel. We presenteren de metingen die in onze experimenten 1-3,5. Een 1 cm lengte van de PTFE fijne buis (Zeus, kleine onderdelen) en een lengte van 10cm PE90 leidingen worden gesneden met een scheermesje. De uiteinden van de kleine slangen moeten worden onderzocht om zeker te zijn ze niet gebroken of gesloten. Zij kunnen worden geopend met behulp van een insect pin (Fine Science Tools). Een druppel lijm (JB Weld) is geplaatst op het middelpunt van de PTFE-buis. De PTFE-buis en lijm zijn getrokken in de PE90 leidingen met behulp van de mond zuigkracht op de PE90 slang. Een 45 ° snede is gemaakt op het dikke uiteinde van de slang en een ring en o-ring zijn verbonden, zoals de vorige. Het beentje en BNC connector zijn losgeschroefd van een commerciële zuigkracht elektrode. De BNC-connector is gedrenkt in xyleen gedurende een uur aan de lakzegel te verwijderen. De connector wordt vervolgens gespoeld met water en gedroogd. Een lagere schuine kant-poort moet worden gemaakt aan de kant van het vat. Een metalen staaf wordt verwarmd met behulp van een bunsenbrander en drukte in de bestaande gat aan de zijkant van het vat bij een lage hoek. Een 15cm lengte van 0,010 inch zilverdraad (AM Systems) is gesneden en geweekt in bleekwater voor vijftien minuten. Dit wordt gedaan om een zilverchloride coating die helpt bij het ​​signaal geleiding 6 te creëren. De draad wordt gespoeld met water, gedroogd en vervolgens gesoldeerd op de BNC connector. De BNC-connector en zilveren draad worden ingebracht in de zuig-elektrode vat met genoeg ruimte voor de BNC-connector te blijven aan de zijkant van het vat. Zuig-buis wordt in de zijpoort 2-3cm. Siliconenkit wordt geïnjecteerd in het vat ongeveer 2-3cm. De BNC-connector is voorzien van schroefdraad in de loop van de elektrode het indrukken van de kit naar voren. De tip van de elektrode is nu schroefdraad in de voorkant van de elektrode. Krimpkous kan ook worden toegevoegd aan de zuigleiding te versterken vanaf de zijkant haven. Elektroden zijn gemonteerd op micromanipulators die zijn verbonden aan magnetische stands, en geplaatst in de buurt van de opname schotel. BNC coax-kabels zijn bevestigd aan een headstage die is aangesloten op een versterker. De versterker is aangesloten op een adapter (Polyview), dat is een analoge naar digitale kaart (National Instruments) aangesloten op een PC computer met data-acquisitie software (Polyview). Bij het opnemen van elektrofysiologische gegevens, is het noodzakelijk om alle storingen van buitenaf te elimineren. De opname schotel, versterker, en het hoofd podium worden geplaatst op een tafel de lucht in een kooi van Faraday om elektrische en mechanische storingen respectievelijk te voorkomen,. Representatieve resultaten: <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Een in de handel verkrijgbaar zuigkracht elektrode kan worden gewijzigd door het toevoegen van een zwaardere meter zilverdraad en een plastic tip die met de hand getekend op een alcohol-lamp, of gebouwd met commercieel verkrijgbare plastic buizen van specifieke maten. Daarnaast wordt de paraffine kit vervangen door meer duurzame silicone kit kit. <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Een schema van de zuig-elektrode in relatie tot de lucht tabel (voor mechanische isolatie), kooi van Faraday (elektrische isolatiaan), versterker en computer. Opgemerkt moet worden dat er een grond gerelateerd aan de opname schotel en een tweede middel dat is gerelateerd aan de lucht tafel en kooi van Faraday.

<ol><li>Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+rhythmic+locomotor+burst+patterns+using+a+continuous+wavelet+transform%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform.</a> Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).</li>
<li>Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spinal cord electrophysiology.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Gallarda, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+axial+motor+and+sensory+pathways+via+heterotypic+trans-axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling.</a> Science. 320, 233-236 (2008).</li>
<li>Landmesser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+motor+projection+patterns+in+the+chick+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The development of motor projection patterns in the chick hind limb.</a> J Physiol. 284, 391-414 (1978).</li>
<li>Myers, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+input+is+required+during+embryonic+development+to+mediate+proper+assembly+of+spinal+locomotor+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits.</a> Neuron. 46, 37-49 (2005).</li>
<li>Chanin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+chloride+by+use+of+the+silver-silver+chloride+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode.</a> Science. 119, 323-324 (1954).</li>
<li>Goulding, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circuits+controlling+vertebrate+locomotion%3A+moving+in+a+new+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).</li>
</ol>

Ontwikkeling van het zenuwstelsel kan worden bestudeerd met behulp van geïsoleerde knaagdieren ruggenmerg. In aanwezigheid van neurotransmitters, kunnen fictieve voortbeweging worden gegenereerd uit het ruggenmerg in de vorm van een patroon elektrische activiteit 1,3. Deze ritmische uitbarstingen worden geproduceerd op 0,2 tot 0,5 Hz en zijn patroon in de links-rechts en de flexor-extensor afwisselingen. Op verschillende ontwikkelingsstadia, de robuustheid en de patronen van deze activiteit varieert 1.</...

<table><tbody><tr><td>PTFE Sub Lite Wall Tubing (Kleine buis)</td><td>Zeus</td><td>36AWG</td><td>0.005&amp;#8221;ID x 0.003&amp;#8221; wand (Kleine onderdelen) Ook beschikbaar in 0.003&amp;#8221; tot 0.006&amp;#8221;</td></tr><tr><td>Grote buis (0.86mm (0.34&amp;#8221;))</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>0.86mm (0.34&amp;#8221;) B.D. 1.27mm (.050&amp;#8221;)</td></tr><tr><td>Elektrodehuls</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td></td></tr><tr><td>Lijm</td><td>JB Weld</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lijm: Siliconenkit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soldeer en soldeerbout</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bleekmiddel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xyleen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zilverdraad: 0.010&amp;#8221;</td><td>A-M Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insectenspeldjes: Austerlitz 0.1mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Magnetische statief</td><td>Narishige International</td><td>GJ-8</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Narishige International</td><td>MN 151</td><td></td></tr><tr><td>Miniboard (Headstage)</td><td>Grass Technologies</td><td>F-15EB/B1</td><td></td></tr><tr><td>Polyview Adaptor Unit</td><td>Grass Technologies</td><td>PVA 8</td><td></td></tr><tr><td>Bipolair draagbaar Physiodata-versterker systeem</td><td>Grass Technologies</td><td>15LT</td><td></td></tr><tr><td>ANALOOG-DIGITAAL KAART</td><td>National Instruments</td><td>6035E</td><td></td></tr><tr><td>Luchttafel; Vibraplane</td><td>Kinetic Systems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

spinal cord elektrofysiologie ii: extracellulaire suction elektrode fabrication

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Ontwikkeling van neurale schakelingen en bewegingsapparaat kunnen worden bestudeerd met behulp van pasgeborenen knaagdier ruggenmerg centrale patroon generator (CPG) gedrag. Demonstreren we een methode om de zuigkracht elektroden die worden gebruikt om CPG activiteiten te onderzoeken, of fictieve motoriek fabriceren, in ontleed knaagdieren ruggenmerg. Het knaagdier ruggenmerg worden geplaatst in kunstmatige cerebrospinale vloeistof en het ventrale wortels zijn getrokken in de aanzuig-elektrode. De elektrode wordt geconstrueerd door het wijzigen van een commercieel beschikbare zuig-elektrode. Een zwaardere zilveren draad wordt gebruikt in plaats van de standaard draad die door de handel verkrijgbare elektrode. Het glas tip op de commerciële elektrode is vervangen door een plastic tip voor verhoogde duurzaamheid. Wij bereiden de hand getekend elektroden en elektrodes gemaakt van specifieke maten van de buizen, waardoor de consistentie en reproduceerbaarheid. Gegevens worden verzameld met behulp van een versterker en neurogram acquisitie software. Opnames worden uitgevoerd op een lucht-tafel in een kooi van Faraday om mechanische en elektrische storingen respectievelijk te voorkomen,.

Een demonstratie van de fabricage en het gebruik van een extracellulair zuigkracht elektrode gebruikt om de elektrofysiologische opnamen van neonatale knaagdieren ruggenmerg te meten<em&gt; In vitro</em

Spinal Cord Elektrofysiologie II: Extracellulaire Suction Elektrode Fabrication

De ontwikkeling van neurale circuits en locomotie kan worden bestudeerd aan de hand van het gedrag van de centrale patroongenerator (CPG) in het ruggenmerg van neonatale knaagdieren. Wij demonstreren ...

Hallo. Mijn naam is Resh Gary Dory en ik ben onderzoeksassistent in het faf Lab van het Salk Institute for Biological Studies. Vandaag laat ik u zien hoe u extracellulaire zuigelektroden kunt vervaardigen met behulp van twee methoden. Deze elektroden kunnen worden gebruikt voor electrofysiologische registraties van ruggenmergen in vitro.Gebruik een alcohollamp als warmtebron om de PE 90 plastic buis tot de gewenste breedte te smelten. Houd de buis boven de brandende vlam en verwijder deze zodra deze begint te smelten; trek de uiteinden voorzichtig uit elkaar en zorg dat het midden niet breekt. Dit proces wordt opnieuw getoond.Verwijder de slang zodra deze zacht wordt en smelt en trek de uiteinden voorzichtig uit elkaar. Snijd de slang met een scherp scheermes op een punt dat overeenkomt met de geschatte breedte van het monster dat aan het dikke uiteinde van de slang gemeten moet worden. Maak een snede onder een hoek van 45 graden.Een klemring en een O-ring moeten nu op het dikke uiteinde worden geplaatst. Steek dit uiteinde van de buis door de zeshoekige opening van de klemring. Steek vervolgens het uiteinde van de buis in de rubberen O-ring.Deze opstelling wordt in de voorkant van de elektrode geschroefd. Snijd een stuk Zeus-dunwandige slang van één centimeter af met een scherp scheermes en controleer of de uiteinden schoon zijn gesneden en de boring open is. Snijd een stuk PE 90-slang van 10 centimeter af met een scherp scheermes. Breng met behulp van mondzuiging een druppel JB Weld aan op het middenpunt van de dunwandige slang.Trek de kleine buis en de lasverbinding in de boring van de grote buis en laat deze opstelling een nacht uitharden. Hoewel dit niet wordt getoond, moet er een snede van 45 graden worden gemaakt aan het dikke uiteinde van deze buis, en moet er een ferrule en een o-ring op dit uiteinde worden geïnstalleerd, op dezelfde wijze als eerder beschreven.Demonteer een standaard zuigelektrode door de ferrule aan de voorzijde van de elektrode en de BNC-connector aan de achterzijde losschroeven. Er moet nu een zijpoort onder een hoek worden gemaakt in de wand van de elektrodehuls. Verhit een stuk metaal met behulp van een bunsenbrander.Druk het verhitte metaal onder een lage hoek in het bestaande gat aan de zijkant van de cilinder. Verwijder de zilverdraad uit de BNC-connector door aan de draad te trekken op het punt waar deze de connector raakt. Week de BNC-connector een uur lang in xyleen om de was te verwijderen.Zodra de was is verwijderd, spoelt u de connector af met water en droogt u deze met papieren handdoeken. Snijd een stuk zilverdraad van 15 centimeter af. Week de draad 15 minuten in bleekmiddel.Spoel vervolgens na en droog af met papieren handdoeken. Soldeer de zilverdraad aan de BNC-connector. Steek de zilverdraad in het achterste uiteinde van de huls van de zuigelektrode en laat voldoende ruimte over zodat de BNC-connector aan de zijkant kan blijven zitten.Steek de zuigslang ongeveer drie centimeter in de zijpoort. Spuit siliconenkitt in de achteropening van de zuigelektrode, terwijl u voorkomt dat het via de zijpoort uitloopt door deze met uw vinger af te dekken. Spuit ongeveer twee tot drie centimeter kitt in de huls van de elektrode.Indien dit mislukt, draai de BNC-connector stevig vast, waardoor het afdichtingsmiddel naar voren wordt geduwd. Laat het afdichtingsmiddel een nacht uitharden. Schroef de huls van de buis, vervaardigd via ofwel de methode met de getrokken tip of de methode met de afgesneden tip, op de voorkant van de elektrode-uitlijner.De buis die helpt om de zilverdraad door de elektrode te geleiden, is nu voltooid. De registratieopstelling is in een kooi van Faraday geplaatst om externe interferentie te verminderen. Onze opstelling is daarnaast op een luchttafel geplaatst om mechanische interferentie te elimineren.De elektroden zijn gemonteerd op magnetische statief-micromanipulatoren en geplaatst nabij de opnameschaal. De BNC-coaxkabels zijn verbonden met een headstage die is aangesloten op een versterker. De versterker is verbonden met een poly view-adapter, die op zijn beurt is aangesloten op de computer.Deze opstelling wordt van dichtbij getoond. De BNC-coaxiale kabels zijn verbonden met een headstage. De headstage is verbonden met de versterker.De output van de versterker verlaat de kooi van Faraday en wordt aangesloten op een poly view-adapter. De poly view-adapter is verbonden met de computer waarop de juiste opnamesoftware is geïnstalleerd. De gehele opstelling moet correct geaard zijn.Er wordt een externe aarding gerealiseerd door de kooi van Faraday en de luchttafel met een aarding te verbinden. Een interne aarding wordt tot stand gebracht door het dissectieschaaltje met de headstage te verbinden. Het is daarnaast noodzakelijk om de deuren van de kooi aan het hoofdlichaam te aarden.Met de juiste opstelling kunnen nu gegevens worden verzameld. Bedankt voor het bekijken van deze video; we hopen dat deze u helpt bij uw toekomstige experimenten.

spinal-cord-electrophysiology-ii-extracellular-suction-electrode

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een demonstratie van de isolatie van neonatale muis ruggenmerg voor elektrofysiologische studies.

Spinal Cord Elektrofysiologie

Een techniek is beschreven voor het implanteren van...

Elektrode Fabrication en Implantatie in Aplysia californica Voor Multi-channel Neurale en gespierd Recordings in Intact, Vrij Behaving Dieren

This video presents electrophysiological recordings from organotypic co-cultures of spinal cord slices, captured using a multi-electrode array or MEA device. These recordings assess neuronal regeneration between the slices. The synchronized electrical activity observed confirms successful neural regeneration.

Electrophysiological Recordings For Assessing Neuronal Regenerations in Co-cultured Spinal Cord Slices

This video demonstrates the fabrication of a flat nerve-wrapping electrode. It showcases the integration of shielding metal and precise polymer layering for an effective recording surface. The process involves attaching, curing, trimming, and cutting polymer layers for optimal nerve contact and accurate signal recording.

Fabrication of Flat-Interface Nerve Electrodes for Recording Neural Activity

This video demonstrates the method of implanting an on-head electrode system in an anesthetized rat for real-time seizure detection. The procedure includes placing stimulation and recording electrodes, securing them with dental cement, and connecting them to a head-mounted amplifier.

Implanting an On-Head Electrode System in a Rat Model for Real-Time Seizure Detection

In dieren met grote geïdentificeerde neuronen...

Extracellulair Het identificeren van Motor Neuronen voor een Muscle Motor Pool in<em&gt; Aplysia californica</em

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van het fabricageproces van een high-density contact flat-interface zenuw elektrode (FINE). Deze elektrode is geoptimaliseerd voor het opnemen en stimulerende neurale activiteit selectief in perifere zenuwen.

Fabrication van High-Density Contact, Flatscreen-Interface Nerve Elektroden voor het opnemen en Stimulatie Applications

Dit gedetailleerde protocol beschrijft transcraniale stimulatie de plaatsing van de elektroden op het bot temporale te onderzoeken van de effecten op korte en lange termijn van de elektrische stimulatie transcranial in ratten vrij te verplaatsen.

Chronische Transcraniële elektrische stimulatie en Intracortical opname in ratten

Hier gepresenteerd is een protocol voor de productie van een implanteerbaar systeem voor in vivo chronologische registratie van opgeroepen en spontane elektromyografische potentialen. Het systeem wordt toegepast op het onderzoek naar reinnervation van laryngeale spieren na zenuwletsel.

Een implanteerbaar systeem voor chronische in vivo elektromyografie

Dit protocol beschrijft een methode met behulp van een patch-clamp om de elektrische reacties van motorneuronen op ruggenmergstimulatie (SCS) met een hoge spatiotemporele resolutie te bestuderen, wat onderzoekers kan helpen hun vaardigheden te verbeteren bij het scheiden van het ruggenmerg en het tegelijkertijd handhaven van de levensvatbaarheid van de cel.

De ex vivo bereiding van een doorsnede van het ruggenmerg voor de opname van de patchklem in motorneuronen met hele cellen tijdens stimulatie van het ruggenmerg

Ons doel was om een bijgewerkte, gemakkelijk te volgen gids te bieden voor de fabricage en het testen van epimysiale elektromyografie-elektroden. Daartoe geven we instructies voor de inkoop van materialen en een gedetailleerde doorloop van het fabricage- en testproces.

Ontwikkeling van een goedkope epimysiale elektromyografie-elektrode: een vereenvoudigde workflow voor fabricage en testen

Leer de fabricage van extracellulaire zuigelectroden voor elektrofysiologische metingen aan neonatale knaagdier-ruggenmergen in vitro. Deze methode gebruikt een alcoholbrander om PE 90 plastic buizen te smelten en te vormen.

Spinal Cord Elektrofysiologie II: Extracellulaire Suction Elektrode Fabrication

Meer video's verkennen