Name: Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Leer microchirurgische technieken voor tijdelijke en permanente kransslagaderligatie en intramyocardiale injectie in muizenharten. Deze methode helpt onderzoekers ischemie/reperfusieletsel bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ik zou graag aan de afdeling Research en Graduate Studies erkennen voor het verstrekken van fondsen aan mijn onderzoek en de Vakgroep Vergelijkende Geneeskunde steun voor hun waakzaamheid en hulp. Ik zou ook graag de afdeling Fysiologie voor hun steun en begeleiding, alsook de studenten en technici in mijn lab te erkennen voor hun hulp. Tot slot wil ik mijn post-doctorale mentor, Dr Charles E. Murry, bedanken voor de opleiding te worden in die tijd leerde ik de muis microchirurgie.

<ol><li> Steriele chirurgische instrumenten (tabel 1) en 3 "katoen getipt applicators zijn geplaatst op een steriele underpad. De kraal sterilisator (Germinator 500) is ingeschakeld. </li><li> Muizen (leeftijd:&gt; 6 weken; wt:&gt; 18 g) worden verdoofd met een ip injectie van 20μl / g BW van tribroomethanol (250mg/kg; duur - ongeveer 40 minuten). </li><li> Wanneer de muizen niet reageren op teen-knijpen, een steriel glijmiddel (Tears Hernieuwde) wordt toegepast op de ogen om ze te beschermen tegen uitdroging en de linkerzijde van de borst is bedekt met ontharingscrème (bijv. Nair) om vacht te verwijderen uit de huid. </li><li> De ontharingsmiddelen is weggespoeld met warm stromend water en betadine / alcohol zwabberen wordt gebruikt om de chirurgische gebied te desinfecteren. </li><li> De muis wordt geplaatst op een warme deltaphase isotherme pad, die is bevestigd aan een plexiglas tafel. Elk onderdeel is geïmmobiliseerd met behulp van tape en een dikke draad is horizontaal geplaatst onder de top tanden aan de bovenkaak zijn plaats te houden. </li><li> De tafel is verticaal geplaatst en een optische vezel licht is direct scheen op de nek regio voor transoesofagale verlichting. Dit vereist een nauwkeurige plaatsing zodanig dat de opening van de keel wordt gezien als een goed verlicht opening, waardoor de luchtpijp te worden gevisualiseerd op het inbrengen van de PE-buizen te vergemakkelijken. </li><li> De slang wordt dan aangesloten op de ventilator (aangesloten op een 95% O 2 / 5% CO 2) tot constante positieve druk ventilatie (TOPO ventilator te beheren; tarief 125 ademhalingen / min; piek inspiratoire druk 10-12 cmH 2 O; * opmerking : instellingen variëren met stam en geslacht 1-3). Zodra ventilatie wordt bevestigd door synchrone bewegingen op de borst, wordt de verbinding bevestigd aan de pad met tape om te voorkomen dat extubatie tijdens de operatie. </li><li> Met behulp van getande een tang om de huid trekken en weg van de borst, een # 10 steriele scalpel bevestigd aan een # 3 scalpel handvat wordt gebruikt om een ​​1.5cm incisie in de huid parallel aan het borstbeen te maken. </li><li> Gebogen Vanna microscissors worden gebruikt om de pectoralis spieren gesneden en een klein gaatje in de intercostale spieren te maken. </li><li> Straight, zijn stomp microscissors gebruikt voor het snijden door middel van drie ribben. </li><li> Een 9mm pediatrische oogheelkundige speculum wordt gebruikt om de ribbenkast trekken. </li><li> Met behulp van de gebogen tang, trekt het hartzakje weg van het hart en het gebruik van de getande tang voorzichtig scheur het open. </li><li> Met behulp van de Castroviejo naaldhouder, een 6mm taps toelopende punt 3 / 8 naald onderwerpen die de 8-0 polyethyleen hechting onder de left anterior descending kransslagader (langs de lange as van het hart) loodrecht daarop. <ol><li> Voor een tijdelijke ligatuur die kan worden verwijderd voor de timing van reperfusie, is een steriele 0,5-1cm stuk PE90 geplaatst op het hart parallel aan de kransslagader. De hechting, die voor het eerst is lus onder de kransslagader, is dan verbonden met de slang. Op het moment dat wordt vrijgegeven, is de ligatuur los. Dit kan herhaald worden als gewenst en de tijd van de occlusie / reocclusie kan worden gewijzigd 4. Afhankelijk van de lengte van het protocol en het type van de gebruikte anesthesie, kan aanvulling nodig zijn. </li><li> Voor een permanente occlusie, is de ligatuur geregen onder de kransslagader gewoon gebonden. Blancheren en dyskinesie zijn duidelijk zichtbaar en het lange eind van de hechting wordt gesneden 5-10. </li><li> Voor intramyocardial injectie (s), een steriele Hamilton injectiespuit met een 30 gauge steriele naald schuine wordt geïntroduceerd in de basis van het hart boven het gebied van schade op de rechterkant van de ligatuur. De naald wordt vervolgens gevorderd in het gebied van letsel en licht, zodat de schuine kant te zien is ongeveer op de grens zone ingetrokken. Een deel van de oplossing in de spuit (2-3μl) wordt ingespoten in het hart en de naald op zijn plaats gehouden. De spuit is ingetrokken nog een 1-3mm en de rest van de oplossing wordt geïnjecteerd. De spuit is op zijn plaats gehouden totdat de blaar die wordt gevormd door de oplossing verdwijnt. De naald wordt vervolgens verwijderd. Als er een bloeden, is een wattenstaafje voorzichtig geperst op de naald inbrengen site tot het bloeden stopt 5-7. </li></ol></li><li> Zodra de myocardiale manipulaties zijn voltooid, worden de rib oprolmechanismen verwijderd en van de borstholte wordt afgesloten met 2-3 matras hechtingen met 6-0 surgipro hechtdraad. </li><li> Twee-drie matras hechtingen worden dan verwezen naar de pectoralis spieren dicht, 1-3 druppels van 0,25% marcaine 1:10 in steriele zoutoplossing (0.1ml/25g muis) wordt toegepast op de spieren en daarna 2-3 matras hechtingen worden gemaakt om sluit de huid. </li><li> De muis is verwijderd uit de ventilator. Eenmaal ritmische, snelle, oppervlakkige ademhaling wordt gecontroleerd, kan de muis worden geëxtubeerd. </li><li> 0,5 ml warm steriele zoutoplossing wordt geïnjecteerd in de dorsale subcutane ruimte en de muis wordt geplaatst op een warming pad in een kooi tot hij herwint mobiliteit (1 uur minimum). </li><li> Om te overleven experimenten, zijn muizen terug geplaatst in hun kooien en keerde terug naar de vivarium tot het moment van het offer. Tijdens de eerste twee dagen, bevochtigd eten isgeplaatst op de kooi vloer tot het voeden te vergemakkelijken (zodat ze niet hoeven te bereiken up die kan pijn veroorzaken) en buprenorfine worden toegediend om de 6-12u. Post-operatieve zorg omvat ook de dagelijkse monitoring gedurende de eerste week om te controleren of voldoende mobiliteit, verzorging, en eetgewoonten. </li><li> De chirurgische instrumenten zijn schoongemaakt met ethanol en ingevoegd in de kraal sterilisator voor de volgende operatie. </li><li> Op het moment van het offeren, muizen zijn verdoofd met natrium pentobarbital (65mg/ml; 55-65 mg / kg). Wanneer een voldoende vlak van anesthesie is bereikt, wordt de borstholte geopend. </li><li> Terwijl het hart nog klopt, een injectiespuit met een 23 gauge naald met koud kaliumchloride (KCl, 30 mm) of 2,3-butaandion monoxime (BDM, 10mm) wordt gebruikt om het doorprikken van de achterste basale gebied van het ventrikel en de oplossing is langzaam geïnjecteerd in de kamer totdat het hart is gearresteerd in diastole. </li><li> Zodra het hart is verwijderd, is een spuit met PBS gebruikt om retrogradely perfuseren het hart om alle bloed dat nog te verwijderen spoelen. Voor acute studies, aan het einde van de reperfusie periode, is de LAD opnieuw geligeerd aan het oorspronkelijke punt van de occlusie. Een oplossing met 1% Evan's blue is geïnjecteerd in de aorta. Zodra het hart wordt gewonnen, wordt het transversaal gesneden in drie delen van gelijke dikte, geïncubeerd in 1% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride, en belicht voor morfometrische analyses 11. Voor chronische onderzoeken, is het hart vervolgens ondergedompeld in fixatief, vervolgens verwerkt en embedded volgens routine procedures. Dia's kunnen dan histologisch worden gekleurd en afgebeeld voor de morfometrische analyses (met behulp van Scion, NIH Image J, of Image Pro Plus) 9,10,12. </li></ol> Representatieve resultaten: Wanneer correct gedaan, de overlevingskansen bij muizen (mannelijk: leeftijd 8-10 weken, 22-28g, vrouw: leeftijd 10-12 weken, 20-26g) zijn: meer dan 90% in acute ischemie / reperfusie en ischemische preconditionering experimenten, over 85% in permanente slagader ligatie studies, en ongeveer 80% voor intramyocardial injecties. Sinds het begin van letsel is beter waarneembaar door metabole veranderingen in plaats van structurele, infarctgrootte vastberadenheid in ischemie / reperfusie en ischemische preconditionering experimenten wordt uitgevoerd door het inbrengen van 1% blauwe kleurstof Evan's in de aorta, die het hart, dat niet wordt geleverd door de LAD zal perfuseren ( Figuur 1A). Zodra het hart is verwijderd en dwars doormidden gesneden, wordt het weefsel geïncubeerd in 1% oplossing van 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride naar grootte van het infarct (Figuur 1B) te meten. De gebieden zijn gemeten met behulp van Scion of NIH imaging software die kan worden gekalibreerd met behulp van een micrometer afgebeeld op dezelfde vergroting. Deze nummers worden gebruikt om de oppervlakte te berekenen op risico / de linker hartkamer en de grootte van het infarct /-gebied in gevaar 11. Strain verschillen kunnen resulteren in variaties in lichaamsgewicht en hart grootte en zo zorg moeten worden genomen om deze maatregelen te normaliseren ter harte gewicht, het lichaamsgewicht, of scheenbeen lengte voor vergelijkingsdoeleinden. Permanente slagader ligatie resulteert in een bruto structurele veranderingen, zoals necrose, wandverdunning, en kamer dilatatie. Vergelijking van de effecten van de behandeling en / of tijd op infarctgrootte en necrose ten opzichte van de linker ventrikel, kamermuziek gebied, septum wand-en linker ventrikel vrije wand dikte in de permanente occlusie model (figuur 2A) kan ook worden gemeten met behulp van Scion of NIH imaging software. Collageen kleuring met picrosirius rood / groen snel (Figuur 2B) kan worden gebruikt om insterstitial fibrose, die correleert met de functionele indices van de muur verstijving 80-10 te meten. Het beeld in Figuur 3 toont de verdeling van 6ul oplossing (Evan's blauw) geïnjecteerd in het grensgebied van het hart volgende permanente slagader afbinden. Merk op dat het gaat in de richting van het letsel en in de richting van de basis en ook transmurally. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. A. Evan 's Blue geïnjecteerd in de aorta voorafgaand aan de excisie. Deze afbeelding toont de geperfuseerde regio's van het hart (gekleurde) en het afgesloten gebied (ongekleurde). Evan B.' s Blauw en TTC vlekken na acute ischemie / reperfusie schade. Dit is een representatief beeld (20x) met de blauwe kleurstof die de verdeling unoccluded regio's, alsmede TTC kleuring van metabolisch levensvatbaar weefsel (rood) gekleurd. Necrotische gebieden niet vlekken en zo blijven ze bleek (beschreven). <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. A. Hematoxyline en eosine kleuring. Dit is een representatief beeld (20x) van H &amp; E kleuring van een muis hart dwars doorsnijden het infarct regio op 4 dagen na het MI (20x). De * geeft weefselnecrose, pijlen wijzen naar granulatieweefsel, RV = rechter ventrikel en LV = linker hartkamer. B. Picrosirius rood en snel groene vlek. Dit is eenrepresentatief beeld (20x) van picrosirius rood / groen snel kleuring van een dwarsdoorsnede van de muis het hart na 4 weken na een hartinfarct. Het cytoplasma vlekken groene en collageen vezels zijn rood. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Blauwe kleurstof Evan's vlek distributie volgende 6ul intramyocardial injectie. Dit is een representatief beeld toont de wereldwijde en transmurale distributie van blauwe kleurstof Evan's in heel het hart volgende 6ul intramyocardial injectie aan de grens zone direct na een coronaire ligatie (12x).

Dit dier protocol werd goedgekeurd door en is in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door de Institutional Animal Care en gebruik Comite op East Carolina University in te stellen.

Hart-en vaatziekten nog steeds een epidemiologisch en fiscaal groot probleem voor de volksgezondheid. Veel fundamenteel onderzoek is nog steeds nodig om de mechanismen die letsel en remodeling te gaan en hoe met eventuele therapie kunnen moduleren deze processen als ze worden ontwikkeld voor klinisch gebruik te begrijpen. Knaagdieren worden het meest gebruikt en het brede scala van genetisch gemodificeerde muizen ter beschikking stelt deze soort een aantrekkelijker model. Hoewel er verschillen zijn tussen muizen en andere soorten, zijn er veel voordelen aan een muismodel. Het gebruik van een eenvoudige ontleding scope of vergrootglas en goed verlichte omstandigheden kan de vasculatuur gemakkelijk te kunnen zien (voor gedetailleerde anatomie van de bloedvaten, zie Salto-Tellez et al.., 2004 13). Om het risico van postoperatieve sterfte, is het zeer belangrijk om te voorkomen dat verbreken van grote schepen, omdat het totale bloedvolume van een 25g muis is minder dan 2 ml 14. In het geval dat overmatig bloeden optreedt, kan de toepassing van lichte druk of lokaliseren cauterisatie gebruikt worden om het bloeden te stoppen. Deze procedure kan ook worden gewijzigd in een verscheidenheid van manieren. Kan bijvoorbeeld muizen worden verdoofd met behulp van isofluraan, ketamine / xylazine of natriumpentobarbital en de juiste selectie wordt bepaald door de duur van het protocol 15-18. De teen-pinch reflex is de meest gebruikte index van de diepte van de anesthesie. Verder, om de waarschijnlijkheid voor de lange termijn te overleven te verbeteren, sommige onderzoekers gebruik van anti-aritmica zoals lidocaïne om de incidentie van dodelijke aritmieën 19,20 echter, moet rekening worden gehouden dat dit recent is aangetoond dat het antiapoptotic eigenschappen te hebben in een acute vermindering van model 21. Ook voor post-operatieve pijn te verminderen, kunnen pijnstillers zoals buprenorfine toegediend worden voor de eerste 48 uur na de operatie 3,16,17,22,23. Te onderhouden lichaamstemperatuur tijdens een operatie (in het bijzonder voor langere protocollen), is een rectale sonde in serie met een verwarmingselement vaak gebruikt in plaats van de isotherme pad. Voor ischemie / reperfusie en / of ischemische pre-of postconditioning: de duur van de occlusie (s) en reperfusie (s) kan worden gewijzigd; voor permanente occlusie, de grootte van het infarct kan worden gewijzigd door het aanpassen van de locatie van de ligature; en voor intramyocardial injecties (bijv. cellen, eiwitten), kan er 1-3 injectie locaties en het volume per injectie kan oplopen tot 15 ui 24. Als cellen worden geïnjecteerd, de graadmeter voor de naald gebruikt (meestal 26-30) 5,25,26 moet worden gekozen op basis van de grootte van de cellen, zodat de inwendige diameter van de naald is groot genoeg om te voorkomen dat Sheering. Om te voorkomen dat verwart als gevolg van ontstekingsprocessen veroorzaakt door de operatie hebben sommige onderzoekers gemeld met behulp van een strik, dat is gemanipuleerd ex vivo om af te sluiten en de harten in een gesloten kist muis reperfuse op enig moment na de operatie 27-29. Meer recent, Gao et al.. Dertig hebben aangetoond dat tijdelijke en permanente occlusie kan worden uitgevoerd zonder de noodzaak voor ventilatie en een paar laboratoria zijn begonnen met echografie te gebruiken om een gesloten kist intramyocardial injecties 25,31 uit te voeren. Sinds de eerste studie tonen de haalbaarheid van ligeren van de kransslagader bij muizen werd gepubliceerd door Johns en Olson in 1954 32, hebben vele anderen die dit model en aangepast aan de verschillende aspecten van het myocard letsel en remodeling 3,33-45 studie. De aard van muizen in termen van grootte, reproductieve capaciteit, en relatief minder kosten voor aanschaf en het onderhoud maken deze soort een aantrekkelijk instrument voor een breed scala aan fysiologische en pathofysiologische studies. Als de miniaturisering van de technologie voor imaging in vivo vooruitgang 46-49, maar ook als middel om uit te voeren en op grote schaal genomica en proteomica, drug discovery, de doeltreffendheid van cel-gebaseerde en / of eiwit therapieën als biomaterialen 50-64 jaar, gecombineerd analyseren met de steeds brede waaier van genetische manipulaties wordt geboden door alomtegenwoordig of weefsel specifieke transgene of mutant / knock-out muizen, zal het muizenmodel van myocardinfarct zonder twijfel nog steeds een instrument van onschatbare waarde bij het evalueren van acute cardiale letsels en lange termijn remodelleren worden. Daarom is er onmiskenbare waarde in het zijn in staat om deze experimenten uit te voeren betrouwbaar en reproduceerbaar.

<table><tbody><tr><td>Lange Vanna-scharen</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-159</td><td></td></tr><tr><td>Micro-dissectiescharen</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-161</td><td></td></tr><tr><td>Pincet &amp;#8211; recht, 1x2 tanden</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-205</td><td></td></tr><tr><td>Scalpelhouder #3</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-64</td><td>steriel mesje #10</td></tr><tr><td>Pincet &amp;#8211; halfgekromd gekarteld</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-19</td><td></td></tr><tr><td>Weefselschaar</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-410</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo naaldhouder</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-1828</td><td></td></tr><tr><td>Cook oogspeculum</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-63</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II 8-0</td><td>Suture Express</td><td>VP-900-X</td><td></td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Suture Express</td><td>8776</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 kraalsterilisator</td><td>Cellpoint Scientific</td><td>65369-1</td><td></td></tr><tr><td>Deltaphase isothermijn mat</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton spuit - 25&amp;mu;l</td><td>Hamilton Co</td><td>80430</td><td></td></tr><tr><td>30 gauge schuine naald</td><td>Hamilton Co</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Ventilator</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr></tbody></table>

kransslagader ligatie en intramyocardial injectie in een muizenmodel van infarction

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Muismodellen zijn een waardevol instrument voor het bestuderen van acute letsels en chronische remodellering van het myocard in vivo. Met de komst van genetische modificaties van het gehele organisme of het myocard en een reeks biologische en/of synthetische materialen, is er een groot potentieel om elke combinatie hiervan te gebruiken om de omvang van acuut ischemisch letsel te beperken en het ontstaan van hartfalen als gevolg van myocardiale remodellering te vertragen.
Hier presenteren we de methoden en materialen die worden gebruikt om deze microchirurgie betrouwbaar uit te voeren en de aanpassingen die nodig zijn voor studies naar tijdelijke (met reperfusie) of permanente occlusie van de kransslagader, alsmede voor intramyocardiale injecties. De effecten op het hart die tijdens de procedure en bij het beëindigen van het experiment kunnen worden waargenomen, zullen, in combinatie met histologische evaluatie, de effectiviteit bevestigen.
Kort samengevat omvat de chirurgische voorbereiding het anesthetiseren van de muizen, het verwijderen van de vacht op de borst en vervolgens het desinfecteren van het operatiegebied. Intratracheale intubatie wordt gerealiseerd via transoesofageale illuminatie met behulp van een glasvezellicht. De slang wordt vervolgens op een ventilator aangesloten. Een incisie op de borst legt de pectorale spieren bloot, die worden doorgesneden om de ribben zichtbaar te maken. Voor ischemie/reperfusie-studies wordt een stukje PE-slang van 1 cm over het hart geplaatst om de ligatuur aan te binden, zodat de occlusie/reperfusie kan worden aangepast. Voor intramyocardiale injecties wordt een Hamilton-spuit met een steriele schuine naald van 30 gauge gebruikt. Wanneer de myocardiale manipulaties voltooid zijn, worden de ribbenkast, de pectorale spieren en de huid opeenvolgend gesloten. Analgesie via een line-block wordt bereikt met 0,25% marcaine in steriele saline, wat wordt aangebracht op de spierlaag vóór het sluiten van de huid. De muizen krijgen een subcutane injectie saline en worden in een verwarmingskamer geplaatst tot ze in rugligging op de borst rusten. Ze worden vervolgens teruggebracht naar het vivarium en gehuisvest onder standaardcondities tot het moment van weefselverzameling. Op het moment van opoffering worden de muizen geanestheseerd, het hart in diastole gearresteerd met KCl of BDM, gespoeld met saline en ondergedompeld in fixatiemiddel. Vervolgens worden de routinestappen voor processing, embedding, sectie en histologische kleuring uitgevoerd.
Niet-chirurgische intubatie van een muis en de beschreven microsurgische manipulaties maken dit tot een technisch uitdagend model om te leren en om reproduceerbaarheid te bereiken. Deze procedures, in combinatie met de moeilijkheid om consistente manipulaties van de ligatuur uit te voeren voor tijdgebaseerde occlusie(s) en reperfusie of intramyocardiale injecties, kunnen ook de overlevingskans beïnvloeden, waardoor optimalisatie en consistentie van cruciaal belang zijn.

Tal van genetische manipulaties en / of intramyocardial injecties van genen, eiwitten, cellen en / of biomaterialen wordt toegevoegd aan de dimensie van de tijd in studies van de acute ischemie / reperfusie schade en chronische remodeling bij muizen. Deze video illustreert de microchirurgische procedures voor ischemie / reperfusie, permanent coronaire ligatie, en intramyocardial injectie studies.

Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction

Muismodellen zijn een waardevolle tool voor het bestuderen van acute beschadiging en chronische remodeling van het myocard in vivo. Met de komst van genetische modificaties aan ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de microsurgische methoden te demonstreren voor het uitvoeren van tijdelijke of permanente ligatie van de kransslagader, evenals intramyocardiale injectie in het hart van de muis. Dit wordt bereikt door eerst het operatiegebied voor te bereiden en te desinfecteren. De muis wordt vervolgens geïntubeerd met PE 90-buisjes om positieve drukventilatie te bieden tijdens de thoracotomie.Zodra de kransslagader is geïsoleerd, kan deze tijdelijk of permanent worden afgesloten. Daarnaast kan er een stof in het hart worden geïnjecteerd. Er worden resultaten verkregen die de mate van hartaatschade aantonen op basis van histologische en morfometrische eindpunten, weefsel- en serumeiwitmarkers, alsook functionele indices.Mijn naam is TKA Rag en ik ben verbonden aan de afdeling Fysiologie van de Brody School of Medicine aan de East Carolina University. Het doel van deze video is om de microsurgische procedures te demonstreren die worden gebruikt voor tijdelijke en permanente ligatie van de kransslagader, evenals intramyocardiale injectie in een muizenhart. Begin met het plaatsen van steriele chirurgische instrumenten en wattenstaafjes van drie inch op een steriele onderlegger.Zet vervolgens een kralensterilisator aan, zodat deze klaar is om instrumenten tussen individuele operaties door te steriliseren. Om het dier voor de operatie voor te bereiden, brengt u een steriel glijmiddel aan in de ogen van een geanestheseerde muis. Verwijder daarna de vacht van de linkerzijde van de borst met een depilatoire crème, zoals nare.Veeg de ontharingscrème grondig af om chemische brandwonden of dermatitis te voorkomen. Plaats de muis op een isotherme mat in de delta-fase die op een plexiglazen tafel is bevestigd. Immobiliseer elke ledemaat met tape en positioneer een dikke draad onder de bovenste tanden om de bovenkaak op zijn plaats te houden.Reinig de operatielocatie drie keer in totaal met Betadine en vervolgens met alcohol. Gebruik een glasvezellamp om de halsregio te verlichten om de trachea beter zichtbaar te maken tijdens het inbrengen van de PE-buisjes. Zodra de regio verlicht is, brengt u de buisjes voorzichtig via de mond in.Sluit de slang aan op een ventilator om beademing met positieve druk toe te dienen. Zodra de beademing is bevestigd door synchrone borstbewegingen, wordt de verbinding met tape aan het kussen vastgezet om deze op zijn plaats te houden. Gebruik tijdens de operatie getande pincetten om de huid omhoog en weg van de borstkas te trekken en maak een incisie van 1,5 centimeter in de huid parallel aan het sternum.Gebruik vervolgens gebogen Vana-microscharen om de pectoralisspieren door te snijden en om een klein gaatje in de intercostaalspier te maken. Nadat de spier is teruggetrokken, worden rechte botte microscharen gebruikt om door drie ribben te knippen. Gebruik een speculum om de borstkas open te houden.Open voorzichtig het pericardium om het hart zichtbaar te maken met behulp van een TRO Viejo naaldhouder en een stompe naald met draad; plaats een polyethyleen hechtdraad onder de linker anterior descending coronaire arterie voor een tijdelijke ligatuur die kan worden verwijderd. Snijd voor getimede reperfusie een stukje PE 90 van 0,5 tot 1 centimeter af en plaats dit op het hart. Knoop de hechtdraad, die onder de coronaire arterie is gelust, parallel aan de coronaire arterie aan de slang vast. Maak de ligatuur na een vooraf bepaalde tijdsperiode los om reperfusie mogelijk te maken of om een permanente occlusie uit te voeren.De ligatuur die onder de kransslagader is geplaatst, wordt vastgeknoopt. Bleking en dyskinesie zouden zichtbaar moeten zijn. Knip het lange uiteinde van de hechtdraad af voor intramyocardiale injecties en steek een steriele naald van 30 gauge in de basis van het hart, boven het letselgebied rechts van de ligatuur.Voer de naald door naar het letselgebied en trek deze iets terug, zodat de schuine opening van de naald ongeveer bij de randzone zichtbaar is. Injecteer een kleine hoeveelheid van de oplossing en houd de naald op zijn plaats. Trek de spuit nog eens één tot drie millimeter terug en injecteer de rest van de oplossing.Houd de spuit op zijn plaats tot het bloed dat door de oplossing is gevormd is verdwenen. Verwijder de naald zodra dit is gebeurd. Als er sprake is van bloedingen, druk dan voorzichtig met een wattenstaafje op de plek tot het bloeden stopt.Zodra de myocardiale manipulaties zijn voltooid, worden de ribspreiders verwijderd en wordt de thoraxholte gesloten met twee tot drie matraspuntsteken. Sluit vervolgens de pectoralisspieren met twee tot drie matraspuntsteken. Breng één tot drie druppels 0,25% markering in steriele zoutoplossing aan op de spier en gebruik nog eens twee tot drie matraspuntsteken om de huid te sluiten.Haal de muis van de ventilator en zorg voor ritmische, snelle, oppervlakkige ademhaling. Injecteer 0,5 milliliters warme steriele zoutoplossing in de dorsale subcutane ruimte en plaats de muis in een kooi met een warmtemat tot de mobiliteit is herwonnen. Voor overlevingsexperimenten worden de muizen teruggeplaatst in hun thuiskooien en teruggebracht naar het vivarium tot het moment van opoffering.Veeg de chirurgische instrumenten schoon met ethanol en plaats ze in de kralensterilisator. Ter voorbereiding op de volgende operatie om monsters voor analyse te verzamelen, isoleert u het hart en doorprikt u de posterieure basale regio van de ventrikel met een naald met koud kaliumchloride of een tweevoudige 2,3-butaandion-oplossing. Injecteer de oplossing langzaam in de kamer totdat het hart in diastole is gestopt. Verwijder het hart en perfuseer met PBS om eventueel resterend bloed te verwijderen.Zodra de perfusie is voltooid, wordt het hart ondergedompeld in fixatief, waarna het hart volgens routineprocedures wordt verwerkt en ingebed. De acute schade veroorzaakt door tijdelijke ligatie kan via kleuring worden gevisualiseerd. In deze afbeelding is de blauwe kleurstof verdeeld over de occludeerde regio's van het hart en markeert TTC-kleuring metabolisch levensvatbaar weefsel.In rood kleuren necrotische gebieden niet en blijven daarom bleek. Imaging-software kan worden gebruikt om het risicogebied te berekenen als functie van het linker ventrikel en het infarctgebied als functie van het risicogebied. In dit voorbeeld is een beschadigd hart dwars door de infarctregio gesneden, vier dagen na mi, en gekleurd met hemat, hematine en eosine.De ster geeft weefselnecrose aan, terwijl de pijlen wijzen naar collageenkleuring van granulatieweefsel met prose. Sirius rood en fast green kunnen worden gebruikt om interstitiële fibrose te meten, wat correleert met functionele indices van wandverstijving. Deze afbeelding van een muizenhart vier weken na een myocardinfarct toont het cytoplasma in het groen en de collageenvezels in het rood.Deze reeks afbeeldingen representeert de distributie van zes microliters Evan's blue kleurstofoplossing die is geïnjecteerd in de grenszone van het hart na permanente ligatie van de arterie. Let op dat de kleurstof zich voortbeweegt in de richting van het letsel, evenals naar de basis, en ook transmuraal. Het visualiseren van de kransslagader en het betrouwbaar occluderen ervan is zeer uitdagend en vereist veel oefening om hierin bekwaam te worden.Het is zeer belangrijk om tijdens de procedure te onthouden de longen niet te doorboren en daarnaast te voorkomen dat het dier tijdens de chirurgische handelingen geëxtubeerd raakt.I.

coronary-artery-ligation-intramyocardial-injection-murine-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze video laat zien hoe u een snelle en betrouwbare model te gebruiken om pathobiological en pathofysiologische processen van myocardischemie te bestuderen.

LAD-Ligatie: een muizenmodel van myocardinfarct

De chirurgische procedure gebruikt om experimentele myocardinfarct bij de muis begint met linker thoractomie tussen de derde en vierde ribben om visualiseren het voorste oppervlak van het hart en linker long. De linker coronaire arterie geligeerd, wordt de borst gesloten en de muis mag spontaan herstellen.

Gewijzigd Techniek voor Coronary Artery Ligatie in Muizen

In this video, we describe a surgical procedure to generate a mouse model of myocardial infarction by permanently ligating the left anterior descending coronary artery.

Generating Murine Model of Myocardial Infarction: A Surgical Procedure for Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery in Mouse Model

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Een zeer reproduceerbaar model voor myocardinfarct bij muizen met minimale invasieve manipulaties wordt beschreven. Het model kan eenvoudig worden uitgevoerd, wat resulteert in een hoge reproduceerbaarheid en overlevingsgraad. Daarom zal het beschreven model het aantal benodigde dieren verminderen zoals gevraagd door het 3R-principe (Vervanging, Verfijning en Vermindering).

Minimaal invasieve chirurgische procedure voor het induceren van Myocardinfarct in Muizen

Hartfalen is de belangrijkste oorzaak van ziekenhuisopname en een belangrijke doodsoorzaak. Een model van permanente ligatie van de linker voorste afdalende kransslagader bij muizen wordt toegepast om ventriculaire remodellering en cardiale disfunctie na een myocardinfarct te onderzoeken. De techniek van invasieve hemodynamische metingen bij muizen wordt gepresenteerd.

Permanente Ligatie van de linker anterior Aflopend Kransslagader in Muizen: Een model van Post-myocardinfarct Remodelling en hartfalen

We bieden een betrouwbare methode voor ligatie van de linker voorwaartse dalende slagader (LAD) in een muismodel. Deze methode is relatief minder invasief dan andere methoden, waarbij endotracheale intubatie, een linkszijdige thoracotomie-aanpak en thoracentese betrokken zijn. Deze methode kan worden gebruikt als model voor zowel acuut als chronisch myocardinfarct (MI).

Murine Left Anterior Descending (LAD) coronaire Ligatie: een verbeterde en vereenvoudigd model voor myocardinfarct

Hierin beschrijven we een chirurgische ingreep die laat zien hoe u permanente ligatie van de linker-anterieure aflopende coronaire slagader bij muizen bereikt. Dit model is van groot belang om de pathofysiologie van myocardiaal infarct en de gelijktijdige biologische processen te onderzoeken.

Murine myocardinfarct model met behulp van permanente Ligatie van linker anterieure aflopende coronaire slagader

Dit artikel demonstreert een model om cardiale remodellering te bestuderen na myocard cryoletsel bij muizen.

Een Cryoblessure model om myocardinfarct in de muis te bestuderen

Hier wordt een chirurgische procedure gepresenteerd voor permanente ligatie van de linker kransslagader bij muizen. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologie en bijbehorende ontstekingsreactie na een hartinfarct te onderzoeken.

Ligatie van de linker kransslagader: een chirurgisch muizenmodel van myocardinfarct

Leer microchirurgische technieken voor tijdelijke en permanente kransslagaderligatie en intramyocardiale injectie in muizenharten. Deze methode helpt onderzoekers ischemie/reperfusieletsel bestuderen.

Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction

Meer video's verkennen