Name: Uitgangspunten voor zuivering met behulp van superkritische vloeistof chromatografie - ADVERTENTIE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Leer de principes van preparatieve superkritische vloeistofchromatografie (SFC) voor analytische scheidingen. Dit artikel toont hoe debiet, oplosmiddel en kolomselectiviteit de isolatie van verbindingen beïnvloeden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Monstervoorbereiding <ul class="none"><li> Compound mengsel 1: Cumarine, Ibuprofen, en carbamazepine, 20 mg / ml elk op methanol </li><li> Compound Mengsel 2: Ibuprofen en carbamazepine, 20 mg / ml elk op methanol </li><li> Compound Mengsel 3: Ibuprofen en carbamazepine, 20 mg / ml elk in DMSO (dimethyl sulfoxide) </li><li> Compound Mengsel 4: 10 mg / ml Fenoprofen, 15 mg / ml Ketoprofen, 20 mg / ml flavone, 20 mg / ml Ibuprofen, en 20 mg / ml Cumarine in methanol </li></ul> 2. Experimentele condities <ol><li> Analytische chromatografie werd uitgevoerd op een Waters methode Station SFC-systeem. Column: Viridis SFC 2-Ethylpyridine kolom 5 micrometer, 4,6 x 150 mm, Part Number 186004937. </li><li> Preparatieve chromatografie werd uitgevoerd op een Waters Prep 100 SFC UV-Directed System. De kolommen: <ul><li> Viridis SFC 2-Ethylpyridine OBD kolom, 5 micrometer, 19 x 150 mm, Part Number 186004945 </li><li> Viridis SFC Silica OBD-kolom, 5 micrometer, 19 x 150 mm, Part Number 186004918 </li><li> Viridis SFC 2-Ethylpyridine OBD kolom, 5 micrometer, 19 x 100 mm, Part Number 186004944 </li></ul></li><li> Andere methode Parameters: <ul><li> Column Temperatuur: 40 ° C </li><li> Cosolvent: Methanol </li><li> Het geïnjecteerde volume, debiet en verlopen: Gerapporteerde in cijfers </li></ul></li></ol> 3. Representatieve resultaten Flow Rate Het debiet gebruikt in de voorbereidende LC scheidingen wordt beperkt door een aantal factoren, waaronder de lengte en diameter van de kolom, de deeltjesgrootte, en het systeem tegendruk. Een lage viscositeit kooldioxide, het belangrijkste onderdeel van de mobiele fase in SFC, maakt het gebruik van hogere debieten dan die over het algemeen gebruikt in de vloeistofchromatografie. De tegendruk in verband met de kolom lengte is ook lager, waardoor het gebruik van meer kolommen de resolutie te verhogen. Hogere debieten de doorvoer verhogen door het verminderen van de hoeveelheid tijd om een ​​scheiding af te ronden. Zoals weergegeven in figuur 1, de chromatografische profiel is hetzelfde bij verschillende debieten voorzien dat de helling van het verloop, uitgedrukt in percentage verandering per kolom het volume constant blijft .. Dit wordt bereikt door het verminderen van de uitvoering in dezelfde verhouding als het debiet wordt verhoogd. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figuur 1"> Voorbeeld Ontbinding en laden Solvent Isoleren van stoffen uit mengsels vereist dat het monster volledig oplosbaar voor injectie. Methanol, de meest voorkomende co-oplosmiddel in SFC, niet alle monsters oplosbaar bij de hoge concentraties meestal nodig voor typische preparatieve scheidingen. Grote hoeveelheden van oplosmiddelen, zoals methanol kunnen beperken de massa capaciteit van de kolom als gevolg van sterke solvent effecten die de chromatografie kunnen verstoren. Modifier stroom injectie, de standaard configuratie van alle gepatenteerde Waters prep SFC-systemen, is ontworpen om dit oplosmiddel effect te verminderen. Dimethylsulfoxide (DMSO) wordt regelmatig gebruikt in de zuivering laboratoria voor verschillende types van verbindingen lossen. Figuren 2 en 3 laten zien hoe DMSO injecties in SFC kan resulteren in een hogere belasting en een betere resolutie voor achiraal toepassingen in vergelijking met monsters geïnjecteerd in methanol. Let op: voor chirale applicaties, voorzichtigheid dient te worden beschouwd als DMSO ernstig kan een traditionele coating chirale stationaire fase schade. Als DMSO moeten worden verplicht voor het monster oplosbaarheid, moet een geïmmobiliseerd chirale kolom worden geselecteerd. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figuur 2"> <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figuur 3"> Selectiviteit In SFC, worden meerdere kolommen routinematig getest om te bepalen welke levert de beste resolutie en de maximale vorm voor componenten in een mengsel. Goede resolutie tussen de verbindingen leidt tot isolaties van target verbindingen met een hoge zuiverheid. In het onderstaande voorbeeld, de 2-ethylpyridine kolom ziet u een uitstekende scheiding van alle vijf verbindingen in het monster mengsel. Hetzelfde monster mengsel geanalyseerd op een silica kolom toont slechts drie componenten pieken want het heeft een andere selectiviteit. Cumarine en ibuprofen coelute op ongeveer 0,8 minuut en flavone en fenoprofen coelute iets later. Flavone en ibuprofen ook veranderen elutievolgorde op het silica kolom. Ketoprofen is goed gescheiden van alle andere toppen op beide kolommen. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figuur 4"> Schalen Ruwe sample mengsels worden meestal geanalyseerd met een verloop dat screening gaat uit van een laag percentage organisch oplosmiddel en eindigt bij een hoger percentage organisch oplosmiddel in een relatief korte tijd. Als de verbindingen van belang zijn goed opgelost, kan de gradiënt direct worden geschaald voor zuivering. Wanneer alle verbindingen elueren voor ee voltooiing van de gradiënt en zijn volledig opgelost, een eenvoudige vermindering van de lengte van het verloop is acceptabel. De snelle debiet gebruikt in SFC in combinatie met aangepaste hellingen aanzienlijk verkorten de totale tijd die nodig is voor het zuiveren van doelverbindingen. Scaling scheidingen vereist bijpassende kolom chemie en de deeltjesgrootte en de juiste schaal injectie volumes en hellingen. Waters preparatieve SFC kolommen zijn gevuld met OBD-technologie, waardoor een uitstekende bed stabiliteit en vergelijkbare prestaties te Waters analytische SFC kolommen. OBD preparatieve kolommen zijn verpakt dichtheden die nauw overeenkomen met het equivalent analytische kolom bed. Deze innovatieve procedure levert preparatieve kolommen met een uitstekende stabiliteit, reproduceerbaarheid en efficiëntie. Een laad-studie is uitgevoerd op de kleine schaal om te bepalen hoeveel massa van het monster kan worden geladen op de kolom. Het doel is om de belasting te maximaliseren zonder afbreuk te doen aan de resolutie. Verbeterde piek resolutie leidt tot hogere belastingen en een betere zuiverheid voor geïsoleerde verbindingen. Hogere kolom laden vermindert het aantal runs nodig is voor het verkrijgen van voldoende materiaal voor verdere experimenten. De chromatografie van de laad-studie is weergegeven in figuur 5. De conservatieve 35 pi injectie volume geeft een goede resolutie tussen alle van de verbindingen in het mengsel en wordt vervolgens geschaald voor de voorbereidende werken op de grote kolom. Een totaal volume van 600 ul werd geïnjecteerd op de 19 x 150 mm preparatieve SFC kolom. Figuur 6 vergelijkt de chromatografie met behulp van de kleine schaal gewijzigde helling bij maximale belasting met de grootschalige chromatografie gebruikt voor de isolatie. De selectiviteit is identiek, een kritische factor bij het gebruik van analytische chromatografie als scouting tool voor isolatie en purification.The verschillen in retentietijd en resolutie tussen de analytische en preparatieve chromatogrammen kan worden toegeschreven aan factoren, zoals het systeem het volume en injectie-modus. In het bijzonder, is de gepatenteerde modifier stroom injectie-modus * ingezet voor alle wateren voorbereidende SFC-systemen, het minimaliseren van het oplosmiddel effect en dus het verbeteren van de doorvoer en efficiëntie. * US Patent # 6576125 <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig5.jpg" alt="Figuur 5" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figuur 5"> <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig6.jpg" alt="Figuur 6" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figuur 6">

<ul><li> De basisprincipes van vloeistofchromatografie kan worden toegepast op superkritische vloeistof chromatografie (SFC). </li><li> Superkritische vloeistof chromatografie kan worden uitgevoerd met een verhoogd debiet maken van isolaties sneller en steeds meer doorzet. </li><li> Monsters met een beperkte oplosbaarheid kan worden opgelost in dimethylsulfoxide en gezuiverd met behulp van SFC. Het gebruik van DMSO voor sample ontbinding maakt het zuiveringsproces gemakkelijker door het verminderen van de onzekerheid in verband met het monster oplosbaarheid. </li><li> Resolutie en het laden van de monsters opgelost in DMSO kan worden verbeterd in vergelijking met dezelfde monsters opgelost in methanol. Beter sample resolutie leidt tot producten met een hogere zuiverheid. Hogere belasting verbetert de efficiëntie van het zuiveringsproces. </li><li> Column selectiviteit invloed op de scheiding van het mengsel componenten. Screening verschillende kolommen met een snelle gradiënten leidt tot een beslissing over welke preparatieve kolom te gebruiken voor het isoleren van de verbindingen in het monster. </li><li> De mogelijkheid op te schalen tussen de analytische en preparatieve OBD kolommen leidt tot identieke scheidingen op zowel kleine als grote schaal, op voorwaarde dat de geïnjecteerde volume, de helling, en de gradiënt tijd correct worden geschaald en de chemie en de deeltjesgrootte constant blijven. Column schaalbaarheid verwijdert onzekerheid in piek identificatie, waardoor het gemakkelijker een hogere zuiveringsproces efficiency. </li></ul>

<table><tbody><tr><td>Method Station SFC System</td><td>Waters</td><td>Meer informatie beschikbaar op www.waters.com</td><td>Analytisch SFC-systeem</td></tr><tr><td>SFC-UV Prep 100</td><td>Waters</td><td>Meer informatie beschikbaar op www.waters.com</td><td>Preparatief SFC-systeem</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC 2-Ethylpyridine, 4,6 x 150 mm, 5 &mu;m kolom</td><td>Waters</td><td>186004937</td><td>Analytische SFC-chromatografiekolom</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC 2-Ethylpyridine OBD&#8482;, 19 x 150 mm, 5 &mu;m kolom</td><td>Waters</td><td>186004945</td><td>Preparatieve SFC-chromatografiekolom</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC Silica OBD&#8482;, 19 x 150 mm, 5 &mu;m kolom</td><td>Waters</td><td>186004918</td><td>Preparatieve SFC-chromatografiekolom</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC 2-Ethylpyridine OBD&#8482;, 19 x 100 mm, 5 &mu;m kolom</td><td>Waters</td><td>186004944</td><td>Preparatieve SFC-chromatografiekolom</td></tr></tbody></table>

uitgangspunten voor zuivering met behulp van superkritische vloeistof chromatografie - advertentie

Basic Principles for Purification Using Supercritical Fluid Chromatography - ADVERTISEMENT

Hoewel de superkritische vloeistof chromatografie (SFC) is geen nieuwe techniek, is het voorbereidende SFC steeds meer populair met de vooruitgang in apparatuur, software en chemie. Uitgangspunten voor het isoleren van verbindingen met SFC zijn vergelijkbaar met de fundamentele regels voor grootschalige preparatieve vloeistofchromatografie. In deze studie, illustreren we het effect van debiet, monster oplossen oplosmiddel, en kolom selectiviteit op de isolatie van de verbindingen uit een mengsel. Kolommen die zijn gevuld met Optimum Bed Density (OBD)-technologie 1 en met bijpassende chemie zorgen voor een gemakkelijke en voorspelbare schaalbaarheid van de kleine schaal om grotere preparatieve scheidingen.

Uitgangspunten voor de scheiding van stoffen uit mengsels met behulp van superkritische vloeistof chromatografie (SFC) is vergelijkbaar met de fundamenten van preparatieve vloeistofchromatografie.

Uitgangspunten voor zuivering met behulp van superkritische vloeistof chromatografie - ADVERTENTIE

Although supercritical fluid chromatography (SFC) is not a new technique, preparative SFC is becoming increasingly more popular with advances in ...

basic-principles-for-purification-using-supercritical-fluid

Without Section

Samenstelling van de polaire lipiden extracten en de vetzuursamenstelling van de individuele glycerolipids worden bepaald in een eenvoudige en robuuste lipide profilering experiment. Voor dit doel worden glycerolipids geïsoleerd door dunnelaagchromatografie en onderworpen aan transmethylation van hun acylgroepen. Fatty acyl methylesters worden gekwantificeerd door middel van gas-vloeistofchromatografie.

Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling door Thin Layer Chromatography (TLC) Samen met de gas-vloeistofchromatografie (GLC)

Een methode wordt beschreven om biochemische markers van neonatale hypoxie-ischemie te meten. De aanpak maakt gebruik van hoge druk vloeistofchromatografie (HPLC) en gaschromatografie-massaspectrometrie (GC / MS).

Biochemische Meting van Neonatale Hypoxie

Een automatische methode om geschikte hydrofobe interactie chromatografie (HIC) media te gebruiken in het proces van eiwitzuivering gepresenteerd. De werkwijze maakt gebruik van een medium-druk vloeistof chromatografie systeem met automatische buffer mengen dynamische monsterlus injectie opeenvolgende kolomselektiemiddelen, multi-golflengte analyse en split fractie eluaat collectie.

Geautomatiseerde hydrofobe interactiechromatografie Kolomselectieopties voor gebruik in Protein Purification

We beschrijven hier een protocol voor de zuivering van zeer actieve Hsp104, een hexamere AAA + eiwit van gist, die koppels ATP hydrolyse aan eiwit desaggregatie. Deze regeling maakt gebruik van een His6-gelabeld bouwen voor affiniteitszuivering...

Zuivering van Hsp104, een eiwit Disaggregase

Dit protocol zal de extractie en analyse van vrije en geësterde bioactieve vetzuren uit cellen demonstreren. Vetzuren worden nauwkeurig gekwantificeerd met behulp van stabiele isotoopverdunning, chirale vloeistofchromatografie, electronenvangst-atmosferische chemische ionisatie-meervoudige reactiebewaking massaspectrometrie (SID-LC-ECAPCI-MRM/MS).

Cellulaire vetextractie voor gerichte stabiele isotopen Verdunning vloeistofchromatografie-massaspectrometrie Analyse

Een snelle methode voor vluchtige verbinding analyse fruit beschreven. De vluchtige stoffen in de kopruimte van een homogenaat van het monster snel gescheiden en gedetecteerd met ultrasnelle gaschromatografie (GC) gekoppeld met een akoestische oppervlaktegolf (IST) sensor. Een procedure voor data verwerking en analyse wordt ook besproken.

Fruit Vluchtige analyse met behulp van een elektronische neus

Een basisprotocol voor het scheiden van DNA-fragmenten met agarose gel elektroforese beschreven.

Agarosegelelektroforese voor de scheiding van DNA fragmenten

Olfactorische signalen bemiddelen veel verschillende gedragingen in insecten, en zijn vaak complexe mengsels bestaat uit tientallen tot honderden vluchtige verbindingen. Met gaschromatografie met meerkanaals opname in het insect antennelid lobe beschrijven we een werkwijze voor de identificatie van bioactieve verbindingen.

Identificatie van Olfactorische Vluchtige stoffen met behulp van gaschromatografie-en meergezins-Recordings (GCMR) in de Insect antennaal Lobe

Non-gerichte metabolietprofilering door ultra-prestatie vloeistofchromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie (UPLC-MS) is een krachtige techniek om metabolisme te onderzoeken. Dit artikel schetst een typische werkstroom die wordt gebruikt voor non-gerichte metabolietprofilering van serum, inclusief monsterorganisatie en -voorbereiding, dataverwerving, data-analyse, kwaliteitscontrole en metabolietidentificatie.

Large Scale Niet-gerichte metaboloom profilering van Serum door Ultra Performance Liquid Chromatography-massaspectrometrie (UPLC-MS)

Ongerichte metabolomics biedt een hypothese genererende momentopname van een metabool profiel. Dit protocol zal de extractie en analyse van metabolieten uit cellen, serum of weefsel tonen. Een reeks van metabolieten worden onderzocht met behulp van vloeistof-vloeistof fase-extractie, microflow UltraPerformance vloeistofchromatografie / hoge-resolutie massaspectrometrie (UPLC-HRMS) gekoppeld aan differentiële analyse software.

Ongerichte Metabolomics uit biologische grondstoffen gebruiken UltraPerformance Liquid Chromatography-hoge resolutie massaspectrometrie (UPLC-HRMS)

Leer de principes van preparatieve superkritische vloeistofchromatografie (SFC) voor analytische scheidingen. Dit artikel toont hoe debiet, oplosmiddel en kolomselectiviteit de isolatie van verbindingen beïnvloeden.

Uitgangspunten voor zuivering met behulp van superkritische vloeistof chromatografie - ADVERTENTIE

Meer video's verkennen