29 mei 2013
Protocollen worden aangeboden voor twee gevestigde motorische coördinatie taken, het versnellen rotarod en horizontale balk, ook twee tests ontwikkeld in Oxford onlangs, de statische staven en parallelle staven. Deze tests kunnen detecteren motorische stoornissen potentieel van interesse in hun eigen recht, maar ook als mogelijke variabelen in testen van andere gebieden van gedrag.
Het algemene doel van deze procedure is om de motorische coördinatie bij muizen te meten. Dit wordt bereikt door eerst te testen op de versnellende rotorstaaf. Vervolgens wordt de motorische coördinatie getest op de stangstaaf.
Het dier kan ook worden getest op statische staven. Ten slotte kan de prestatie op de parallelle staven worden gemeten. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die laten zien of de muis enige beperkingen in motorische coördinatie heeft.
Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn in deze techniek worstelen vanwege de moeilijkheid om de muis correct op het apparaat te plaatsen voor alle volgende tests. Breng de muizen vijf tot twintig minuten voor het testen naar de experimentele kamer om ervoor te zorgen dat ze volledig wakker zijn. De rotorstaaf hier werd gebouwd aan de Universiteit van Oxford.
De staaf heeft een diameter van drie centimeter met een reeks parallelle ribbels op het oppervlak, die de muizen helpen het effectiever te grijpen. Een flens aan elke kant voorkomt dat de muis de staaf verlaat. Ze zijn 30 centimeter in diameter en zes centimeter uit elkaar.
De staaf is 30 centimeter van de basis van het apparaat bevestigd. Een zachte, gewatteerde oppervlakte wordt aan de basis geplaatst om eventuele valpartijen te dempen voordat het proef begint. Bereid de rotorstaaf voor door een startsnelheid van vier rotaties per minuut in te stellen en een versnellingssnelheid van 20 rotaties per minuut.
Om te beginnen, houdt u de muis bij de staart vast en brengt u hem in een hoek van 45 graden onder het horizontale vlak naar de staaf. Laat het dier snel los als het bijna de staaf raakt. Als alternatief kan de muis op een stok worden neergelaten en kan de stok worden gebruikt om het dier naar de staaf over te brengen.
Begin met versnellen 10 seconden nadat de muis op de staaf is geplaatst en noteer de snelheid waarmee de muis eraf valt. Als de muis valt voor vijf seconden en dit waarschijnlijk te wijten is aan een slechte plaatsing door de onderzoeker, mag het resultaat niet worden geregistreerd en mag de proef opnieuw worden gestart als de muis valt voor 10 seconden. Noteer de tijd en geef het dier nog twee pogingen.
Voor dieren die langer dan 10 seconden blijven, noteer de snelheid waarmee het dier valt. Soms kan de muis stoppen met lopen en daardoor een beetje rond de staaf bewegen voordat hij uiteindelijk valt. Het is handig om de snelheid van dit voorval te noteren.
De prestatie wordt berekend als de gemiddelde snelheid tussen de proeven. Bijvoorbeeld, een muis die eenmaal valt voor 10 seconden en vervolgens blijft tot 12 rotaties per minuut. De tweede keer scoort vier plus 12 gedeeld door twee gelijk aan acht rotaties per minuut.
De horizontale stang meet de kracht en coördinatie van de valpoot en een stang van twee millimeter in diameter wordt het meest gebruikt. Staven met een grotere diameter kunnen meer verfijnde prestatiescores opleveren. Messingstaven van 38 centimeter lang worden door een houten steunkolom 49 centimeter boven het werkblad gehouden.
De staven worden onder spanning gehouden wanneer ze in de inkepingen van steunen worden geplaatst die iets naar elkaar toe zijn getrokken. Begin met testen met de twee millimeter stang. Houd de muis bij de staart vast en plaats hem op het werkblad voor het apparaat.
Schuif het snel naar achteren ongeveer 20 centimeter om zijn lichaam snel loodrecht op de stang uit te lijnen. Laat het dier opstaan en laat het de horizontale stang in het midden grijpen met alleen zijn vier poriën.
Laat de staart los terwijl u tegelijkertijd een stopklok start. Als de muis de stang niet grijpt en de plaatsing van de onderzoeker de oorzaak kan zijn. Noteer de val niet en hertest het dier na een korte rustpauze.
Als de muis valt voor vijf seconden en dit blijkbaar niet te wijten is aan een slechte plaatsing door de onderzoeker, herhaal tot drie keer in een poging om een score te krijgen die groter is dan vijf seconden. Noteer of de tijd dat de muis valt of de tijd totdat een van de vier poorten een kolom raakt met een maximale testtijd van 30 seconden, neem de beste score als de datu Recht om de horizontale stang te scoren. Als de massa tussen de één en vijf seconden valt, scoor een tussen zes seconden en 10 seconden.
Score twee tussen 11 seconden en 20 seconden. Score drie tussen 21 seconden en 30 seconden. Score vier valt na 30 seconden of blijft gewoon op de stang tot 30 seconden.
Score vijf, en de muis scoort ook vijf als deze een uiteinde raakt. Ondersteun met zijn vier poorten op elk moment tijdens het testen. Als er een score van vijf wordt behaald op de twee millimeter stang, kan het dier vervolgens na een korte rust worden getest op dikkere staven.
Het scoresysteem voor de vier- en zes millimeter staven is hetzelfde als voor de twee millimeter stang en de uiteindelijke score is de cumulatieve totaal. Dus, een muis die vijf scoort op de twee millimeter stang maar van de vier millimeter stang valt na 13 seconden. Scores vijf plus gelijk aan acht.
In deze test voor motorische coördinatie, houten dowels of staven van verschillende dikte, 35 28, 22 15 en negen millimeter in diameter, elk 60 centimeter lang bevestigd door een G-klem aan een laboratorium plank 60 centimeter van de vloer. Een markering wordt gemaakt 10 centimeter van het uiteinde bij de plank om de finishlijn aan te geven. Om te beginnen plaats de muis aan het verre uiteinde van de breedste staaf, weg van de plank, noteer de tijd die het dier nodig heeft om zichzelf naar de plank te oriënteren en die totale doorlooptijd.
Als de muis zich omdraait en onder de staaf klampt tijdens de oriëntatie, wijs het willekeurig toe aan de maximale score van 120 seconden. Het dier wordt niet getest op de andere staven en ontvangt ook een maximale doorloopwaarde. Als de muis valt of de maximale testtijd van 120 seconden bereikt na oriëntatie, test hem dan niet op smallere staven.
Een maximale score wordt ook toegek
Dit artikel presenteert protocollen voor het beoordelen van de motorische coördinatie bij muizen met behulp van diverse taken, waaronder de versnellende rotarod en de horizontale stangtest. Daarnaast worden er twee recent ontwikkelde tests geïntroduceerd, statische stangen en parallelle stangen, waarmee motorische beperkingen kunnen worden geïdentificeerd.
De beoordeling van de motorische coördinatie bij muizen is essentieel voor het beperken van risico's bij targetvalidatie in het onderzoek naar nieuwe neurowetenschappelijke geneesmiddelen; hiermee wordt gewaarborgd dat waargenomen gedragstypes daadwerkelijke cognitieve of emotionele veranderingen weerspiegelen in plaats van verstorende motorische tekortkomingen. Gestandaardiseerde motorische tests maken een voorspellende betrouwbaarheid in de vroege ontdekkingsfase mogelijk door de motorische functie als onafhankelijke variabele te isoleren, wat go/no-go-beslissingen in targetvalidatie-pipelines ondersteunt. Deze assays bieden translationele continuïteit van target-interactie tot fenotypische screening, waardoor het uitvalpercentage in een laat stadium door onvoorziene motorische bijwerkingen wordt verminderd.
De methode past binnen het ontdekkingscontinuüm van targetvalidatie via leadidentificatie tot preklinische screening, waarbij motorische coördinatie dient als een kritisch filter voor confounders voordat cognitieve of emotionele eindpunten worden beoordeeld.