Name: Een 1,5 uur Procedure voor de identificatie van Enterococcus Soorten Rechtstreeks van bloedkweken (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-10T20:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: Leer een snelle PNA FISH-methode voor het identificeren van Enterococcus-soorten uit bloedkweken. Deze techniek versnelt de diagnose van sepsis en ondersteunt tijdige therapeutische beslissingen in klinische microbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Studies werden gesponsord door AdvanDx.

1. Specimen Collection en de voorbereiding <ol><li> Verzamel veneuze bloed van patiënten verdacht van sepsis en in twee BACTEC (BD, Sparks, MD) bloedkweek flessen, een aërobe en anaërobe een, samen bestaande uit een bloed-cultuur in te stellen. </li><li> Plaats flessen in de BACTEC 9240 instrument bij 35 ° C. </li><li> Incubeer tot het instrument is geactiveerd in alarm als gevolg van de groei van organismen in het bloed cultuur fles. </li><li> Verwijder fles uit de bloedkweek instrument. </li></ol> 2. Voorbereiding van de reagentia vóór de kleuring <ol><li> Bereid de wasoplossing door het toevoegen van 4 ml van 60x Wash Solution, gevolgd door 240 ml vers gedeïoniseerd of gedestilleerd water rechtstreeks naar de Staining Dish. </li><li> Zet de schotel in de kleuren van 55 ° C waterbad om op te warmen. </li><li> Bewaar de resterende concentreren bij 2-8 ° C. </li><li> Haal de Mounting Medium uit de koelkast en warm tot kamertemperatuur. </li></ol> 3. Gram Kleuring <ol><li> Zwenk de bloedkweek fles. </li><li> Met behulp van een naald en spuit of een subcultuur apparaat, verwijder het bloed (ongeveer 5 ml) uit de fles en plaats in een steriele schroef buisje. </li><li> Met behulp van een steriele pipet, plaats een grote druppel bloed op een glas microscoopglaasje. </li><li> Drogen aan de lucht van de dia en vast te stellen in methanol gedurende 10 seconden. </li><li> Laat schuif aan de lucht drogen. </li><li> Voer een Gram vlek op het bloed film aan de morfologie van het organisme groeien in het bloed cultuur fles vast te stellen. </li><li> Met behulp van een olie-immersie lens, bekijken glijbaan. Gram-positieve kokken in paren en korte ketens waargenomen op de Gramkleuring is het meest overeen met Enterococcus species. </li><li> Dit Gramkleuring resultaat rijdt dan is de keuze van de juiste PNA FISH probe kit om te gebruiken voor bacteriële identificatie. Dit bloed cultuur worden gekleurd met behulp van de E. faecalis / OE PNA FISH vlek. </li></ol> 4. PNA FISH Stain <ol><li> Meng de buis met het bloed langzaam door de wervelende voorafgaand aan uitstrijkje voorbereiding. </li><li> Plaats een druppel van Fixation Solution op het goed van een PNA FISH microscoopglaasje. </li><li> Breng 10 ui of een kleine druppel uit de buis met de positieve bloedkweek op de Fixation Solution en meng voorzichtig te emulgeren. </li><li> Bevestig de uitstrijkjes door ze te verwarmen gedurende 20 minuten. bij 55 ° C op een verwarmingsplaat. </li></ol> 5. Quality Control Materiaal Een positieve en een negatieve kwaliteitscontrole glijbaan moet worden getest met iedere batch van dia's voor kleuring. <ol><li> Gebruik E. faecalis / OE Controle Slides gekocht AdvanDx voor dit doel of vlekken van vloeistoffen culturen van referentie stammen van E. voor te bereiden faecalis en E. faecium als positieve controle, hetzij op afzonderlijke dia's of gemengd op een dia en Staphylococcus spp of Streptococcus spp als negatieve controle materiaal. </li></ol> De QC-resultaten moeten in staat zijn om toezicht te houden op het testen van omstandigheden, met name die die hybridisatie strengheid en celwand penetratie, omdat PNA methodiek is ontwikkeld om de celwand penetratie te optimaliseren 6. Hybridisatie <ol><li> Voeg een druppel van E. faecalis / OE PNA naar de put op de microscoop dia met het uitstrijkje. </li><li> Toe te voegen dekglaasje aan. Luchtbellen te voorkomen. </li><li> Incubeer gedurende 30 ± 5 minuten. bij 55 ± 1 ° C bij verhitting plaat </li><li> Na incubatie plaats de dia's in slide carrier </li></ol> 7. Strenge Wash <ol><li> Dompel schuif vervoerder in de voorverwarmde Wash Solution bij 55 ° C en verwijder voorzichtig de dekglaasje aan. Vaak is de dekglaasje glijdt door voorzichtig schudden van de dia in de Wash Solution. Af en toe moet het dekglaasje voorzichtig worden geduwd met een pincet. </li><li> Incubeer in het wasoplossing gedurende 30 ± 5 minuten. bij 55 ± 1 ° C. </li><li> Verwijder de dia's van de wasoplossing </li><li> Laat de schuif aan de lucht drogen </li></ol> 8. Montage <ol><li> Voeg een druppel Mounting Medium aan elke dia </li><li> Toe te voegen dekglaasje aan. Luchtbellen te voorkomen. </li><li> Onderzoek de dia op een fluorescentie microscoop binnen 2 uur. </li><li> Niet blootstellen de dia's aan zonlicht of andere sterke lichtbronnen direct, omdat dit kan leiden tot fluorescentie quenching. </li></ol> 9. Interpretatie van de resultaten De fluorescentie microscoop gebruikt voor slide onderzoek moet worden uitgerust met de AdvanDx Dual Band Filter en een 60x of 100x olie doelstelling. De QC-slides moet eerst worden onderzocht om te bevestigen dat hybridisatie deed voorkomen. E. faecalis moeten verschijnen zo helder groen fluorescent kokken in meerdere velden van uitzicht en de E. faecium zal verschijnen als heldere rode kokken. Niet-enterokokken controle dia moet verschijnen nonfluorescent. Na het bevestigen van het systeem bij de controles, kan de patiënt dia's worden onderzocht. In het begin van het bloed film zal verschijnen roodachtige, maar de heldere rode en groene kokken zal heel duidelijk. <img src="/files/ftp_upload/2616/2616fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Representatieve voorbeelden van groene-positieve E. faecalis (links), rode positieve E. faecium (midden), en negatieve (rechts) testresultaten. 10. Representatieve resultaten Drie instellingen werden opgenomen in een multi-center klinische studie ter evaluatie van deze PNA FISH vlek en het vergelijken van een 2,5 uur protocol bij de verkorte 1,5 uur protocol dat net is beoordeeld. Een totaal van 152 routine Gram-positieve kokken in paren en ketens (GPC) positieve bloedkweek flessen werden opgenomen in de studies. Er was 100% (152/152) overeenkomst tussen de resultaten van de gewijzigde en de oorspronkelijke test procedure voor E. faecalis / OE PNA FISH: 41/41 E. faecalis; 33/33 andere enterokokken en 78/78 andere GPC (tabel 1). Deze vlekken methode had verfijnde sensitiviteit en specificiteit tijdens deze klinische studie (tabel 2). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Routine Methoden </td><td> E. faecalis / OE PNA FISH Standaard Procedure </td><td> E. faecalis / OE PNA FISH korte procedure </td></tr><tr><td> E. faecalis </td><td> 41 </td><td> 41 (Groen Positief) </td><td> 41 (Groen Positief) </td></tr><tr><td> E. faecium </td><td> 27 </td><td> 27 (Red Positief) </td><td> 27 (Red Positief) </td></tr><tr><td> E. casseliflavus </td><td> 2 </td><td> 2 (Red Positief) </td><td> 2 (Red Positief) </td></tr><tr><td> E. gallinarum </td><td> 2 </td><td> 2 (Red Positief) </td><td> 2 (Red Positief) </td></tr><tr><td> Andere Enterococcus spp. </td><td> 2 </td><td> 2 (Red Positief) </td><td> 2 (Red Positief) </td></tr><tr><td> S. pneumoniae </td><td> 17 </td><td> 17 (negatieve) </td><td> 17 (negatieve) </td></tr><tr><td> S. viridans </td><td> 33 </td><td> 33 (negatieve) </td><td> 33 (negatieve) </td></tr><tr><td> S. mitis </td><td> 1 </td><td> Een (negatieve) </td><td> Een (negatieve) </td></tr><tr><td> S. pyogenes </td><td> 3 </td><td> 3 (negatieve) </td><td> 3 (negatieve) </td></tr><tr><td> S. bovis </td><td> 2 </td><td> 2 (negatieve) </td><td> 2 (negatieve) </td></tr><tr><td> S. salivarius </td><td> 1 </td><td> Een (negatieve) </td><td> Een (negatieve) </td></tr><tr><td> S. sanguinis </td><td> 2 </td><td> 2 (negatieve) </td><td> 2 (negatieve) </td></tr><tr><td> S. agalagtae </td><td> 7 </td><td> 7 (negatieve) </td><td> 7 (negatieve) </td></tr><tr><td> Andere Streptococcus spp. </td><td> 7 </td><td> 7 (negatieve) </td><td> 7 (negatieve) </td></tr><tr><td> Abiotrophia spp. </td><td> 3 </td><td> 3 (negatieve) </td><td> 3 (negatieve) </td></tr><tr><td> Peptostrepococcus spp. </td><td> 2 </td><td> 2 (negatieve) </td><td> 2 (negatieve) </td></tr><tr><td> Totaal </td><td> 152 </td><td> 152/152 100% akkoord </td><td> 152/152 100% akkoord </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Vermelding van bacteriën getest met zowel de standaard (2.5hr) en snel (1,5 uur) protocol. <table border="1"><tbody><tr><td> Gevoeligheid E.faecalis </td><td> Gevoeligheid Andere Enterococcus spp. </td><td> Specificiteit </td></tr><tr><td> 100% (41/41) 95% CI (93,0 tot 100) </td><td> 100% (33/33) 33/33 95% CI (91.3-100) </td><td> 100% (78/78) 95% CI (96.2-100) </td></tr></tbody></table> Tabel 2. Sensitiviteit en specificiteit van de 1,5 uur PNA FISH protocol.

<ol><li>Rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures by dual color fluorescence in situ hybridization using PNA probes. Oliveira, K., Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Haase, G., Weber-Heynemann, J., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Stender, H. 42rd Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2002, San Diego, , (2002).</li>
<li>Multicenter evaluation of E. faecalis PNA FISH for rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures. Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Oliveira, K., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Johansen, J. T., Procop, G. W., Wilson, D., Padilla, E., Gonzalez, V., Stender, H. 103rd Annual Meeting of American Society, 2003, Washington DC, , (2003).</li>
<li>Direct identification of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Candida albicans from blood cultures using fluorescence in situ hybridization with nucleic acid probes. Rausei, V., Youssef, E., Morgan, M. 104th Annual Meeting of American Society for Microbiology, 2005, New Orleans, LA, , (2005).</li>
<li>Validation of S. aureus PNA FISH, E. faecalis PNA FISH & C. albicans PNA FISH for Rapid Identification of Positive Blood Culture Bottles. Novak-Weekley, S. M., LaForga, M., Carey, L., Frazier, L. 106th Annual Meeting of American Society for Microbiology, 2006, Orlando, FL, , (2006).</li>
<li>Rapid Identification of Enterococcus Species in Positive Blood Cultures with Therapeutic Implications. Johnson, J. K., Roberts, A. A., Forrest, G. N., Lincalis, D. P., Venezia, R. A. 106th Annual Meeting of American Society for Microbiology, 2006, Orlando, FL, , (2006).</li>
</ol>

De productie van deze video-artikel werd gesponsord door AdvanDx. Benjamin Crystal is een medewerker van AdvanDx, die maakt de gereedschappen en gebruikte reagentia in dit artikel.

De E. faecalis / OE PNA FISH-test voor Enterococcus kunnen identificeren 2-3 dagen eerder dan standaard kweekmethoden. De verkorte procedure voor de test (1,5 hourr) zorgt voor een snelle identificatie die kan worden gebruikt voor een betere aanpak voor antimicrobiële therapie en prognose van de patiënt. Een studie om dit te ondersteunen werd uitgevoerd door Forrest, et al.. (6). Meer dan twee opeenvolgende jaren vanaf 2005 het microbiologisch laboratorium geïdentificeerd Gram-positieve kokken in paren en ketens steeds meer in het bloed cultuur flessen door middel van conventionele microbiologische methoden en in 2006 het toevoegen van de E. faecalis / OE PNA FISH. Naast een behandeling algoritme ontwikkeld door de instellingen antimicrobiële team (AMT) effectief met de PNA FISH gegevens die zijn gegenereerd door het laboratorium in de tijdige wijze. Beoordeeld primaire uitkomstmaat was de tijd van bloed cultuur tot de invoering van doeltreffende antimicrobiële therapie te trekken voor en na de PNA FISH werd ingesteld in de laboratoria workflow. Ernst van de ziekte, de patiënt locatie en empirische antimicrobiële therapie werden gemeten. Een totaal van 224 patiënten met het ziekenhuis verworven enterokokkeninfecties bacteriëmie werden beoordeeld met 129 in de pre-interventie periode en 95 in de PNA FISH periode. PNA FISH geïdentificeerd E. faecalis 3 dagen eerder dan de conventionele culturen (1,1 versus 4,1 dagen, p &lt;0,001). PNA FISH geïdentificeerd E. faecium een ​​mediaan 2,3 dagen eerder (1,1 versus 3,4 dagen, p &lt;0,001) en werd geassocieerd met een statistisch significante vermindering in de tijd aan de start van effectieve therapie (1,3 versus 3,1 dagen, p &lt;0,001) en verminderde 30 dagen sterfte (26% vs 45%, p = 0,04). Deze groep concludeerde dat de E. faecalis / OE PNA FISH-test in combinatie met een AMT behandeling algoritme resulteerde in eerdere initiatie van de nodige empirische antimicrobiële therapie voor patiënten met het ziekenhuis verworven E. faecium bacteriëmie. <ol><li> Reagentia moeten niet worden gebruikt na de vervaldata vermeld op de etiketten en reagentia moeten niet worden gewijzigd in any way. Zij moeten blijven in de koelkast wanneer niet in gebruik of ze zou kunnen verliezen potentie. </li><li> Bloedkweek flessen moeten vóór de bemonstering worden gemengd. </li><li> Het is belangrijk om niet toe dat de druppelflesje tip om een ​​bloeduitstrijkje raken omdat dit kan kruisbesmetting van materiaal tussen dia&#39;s veroorzaken, of leiden tot besmetting van het reagens. </li><li> Zorg ervoor dat het waterbad en de verwarming blok worden gehandhaafd op een constante 55 ° C. </li><li> Geen gebruik maken van filters met uitzondering van de Dual Band filter of kleuren worden niet duidelijk onderscheiden. </li><li> Gebruik geen microscoopglaasjes anders dan de Microscope Slides of hybridisatie zal niet optreden. </li><li> Het is belangrijk dat de microscoop naar behoren functioneert. Zorg ervoor dat de microscoop lamp is binnen de goedgekeurde aantal uren voor gebruik. </li></ol><ul><li> Enkele zeldzame voorkomende Enterococcus species zijn niet gedetecteerd door de PNA probe hybridiseren aan andere Enterococcus soorten, zoals E. asinii, E.dispar, E. haemoperoxidus, E. cecorum, E. columbae, E. saccharolyticus, E. solitarius en E . zwavel. </li><li> E. moraviensis wordt geïdentificeerd als E. faecalis als gevolg van volgorde overeenkomsten. </li><li> Sommige stammen van Streptococcus anginosus produceren een vals positieve groene fluorescentie als gevolg van volgorde overeenkomsten. </li><li> VersaTREK bloedkweek flessen werden niet geëvalueerd tijdens de klinische studies. De prestaties van E. te detecteren faecalis en andere Enterococcus spp. met VersaTREK bloedkweek flesjes is onbekend. </li><li> Vals-positieve groene autofluorescentie kan zich voordoen als een standaard FITC-filter wordt gebruikt in plaats van de Dual Band Filter. </li><li> Vals-negatieve resultaten kunnen zelden optreden als gevolg van groei of gemengde wegens een fout in assay techniek. </li><li> Het type en de conditie van de gebruikte instrumentarium zal invloed hebben op de visuele weergave van de verkregen beeld. De fluorescentie kan varydue van het type microscoop gebruikt, de lichtbron en het niveau van rRNA in de cellen </li><li> Isolatie op vaste media is nodig om gemengd groei differentiëren met andere organismen en positieve bloedkweken waardoor een negatief resultaat te identificeren. </li><li> Het product is niet gevalideerd met monsters andere dan bloed culturen. </li></ul>

Reagentia E. faecalis / OE PNA FISH bestaat uit de volgende kit onderdelen: <ul><li> Fixatie Oplossing Fixatie Oplossing 3 ml fosfaat-gebufferde zoutoplossing met wasmiddel. </li><li> E. faecalis / OE PNA E. faecalis / OE PNA 1,5 mL PNA probes in hybridisatie. oplossing. Bevat 30% formamide. </li><li> 60x Wash Solution 60x Wash Solution 50 ml Tris-gebufferde zoutoplossing met afwasmiddel </li><li> Montage Mounting Medium Medium 3 mL fotobleken remmer in Glycerol </li><li> Kwaliteitscontrole dia&#39;s </li><li> <a href="http://www.advandx.com">AdvanDX</a> </li></ul>

een 1,5 uur procedure voor de identificatie van enterococcus soorten rechtstreeks van bloedkweken

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

Enterokokken zijn een veel voorkomende oorzaak van bacteriëmie met E. faecalis zijnde de belangrijkste soorten, gevolgd door E. faecium. Omdat de resistentie tegen ampicilline en vancomycine in E. faecalis is ongewoon nog steeds vergeleken met weerstand in E. faecium, de ontwikkeling van snelle tests waardoor differentiatie tussen enterokokkeninfecties soorten is belangrijk voor de juiste therapie en resistentie surveillance. De E. faecalis OE PNA FISH-test (AdvanDx, Woburn, MA) maakt gebruik van soortspecifieke peptide nucleïnezuur (PNA) sondes in een fluorescentie in situ hybridisatie formaat en biedt een tijd om de resultaten van 1,5 uur en de mogelijkheden van het verstrekken van belangrijke informatie voor de soortspecifieke behandeling. Multicenter studies werden uitgevoerd om de prestaties van de 1,5 uur E. beoordelen faecalis / OE PNA FISH procedure ten opzichte van de oorspronkelijke 2,5 uur test procedure en standaard bacteriologie methoden voor de identificatie van enterokokken rechtstreeks vanuit een positieve bloedkweek fles.

Een snelle protocol voor de directe identificatie van Enterococcus faecalis en Enterococcus andere soorten uit een positieve bloedkweek met behulp van een Peptide Nucleic Acid fluorescente in situ hybridisatie assay (PNA FISH).

Een 1,5 uur Procedure voor de identificatie van Enterococcus Soorten Rechtstreeks van bloedkweken

Enterokokken zijn een veelvoorkomende oorzaak van bacteriëmie, waarbij E. faecalis de predominante soort is, gevolgd door E. faecium. Vanwege resistentie tegen ampicilline en ...

Het algemene doel van deze procedure is het snel identificeren van enterokokkensoorten uit positieve bloedkweekflessen met behulp van peptide-nucleïnezuur-fluorescentie in situ hybridisatie. Zodra de bloedkweken zijn voorbereid en er een Gram-kleuring is uitgevoerd om de aanwezigheid van enterokokkenkweken te bevestigen, worden de monsters gefixeerd op PNA-FISH-microscoopglaasjes. De glaasjes worden vervolgens geïncubeerd met PNA-probes die specifiek zijn voor de organismen van belang.Zodra de probes zijn gehybridiseerd, wordt er een stringente wasbeurt uitgevoerd om overtollige, niet-gehybridiseerde probes te verwijderen. Er wordt montage medium aan de coupes toegevoegd, waarna deze met dekglas worden afgedekt. De aanwezige enterococcus-soorten in het monster kunnen worden geïdentificeerd met fluorescentiemicroscopie.Dit PNA Fish-identificatieprotocol is uniek omdat het een snelle en specifieke methode biedt voor de identificatie van enterococcus uit palsy. Bloedkweekmonsters van patiënten: Incubeer twee bloedkweekflessen, één aeroob en één anaeroob, met veneus bloed van een patiënt met vermoeden van sepsis in een geautomatiseerd bloedkweekapparaat bij 35 °C. Zodra het apparaat aangeeft dat er microbiële groei is gedetecteerd, neemt u de fles uit het apparaat en draait u de bloedkweekflessen voorzichtig rond om de bacteriën gelijkmatig te resuspenderen.Overbreng vervolgens met een steriele spuit en naald aseptisch ongeveer vijf milliliter bloed van elke fles naar een aparte schroefdopbuis. Zodra alle monsters zijn verdeeld, gebruik dan een steriele pipet om een druppel bloed van elke buis op een aparte glazen microscoopglasplaatje over te brengen. Laat het glasplaatje ongeveer 15 minuten aan de lucht drogen.Dompel het objectglas vervolgens in methanol om het monster te fixeren, zodra het glas volledig is opgedroogd. Nadat de objectglazen zijn gefixeerd, worden deze gewassen en volgt een standaard gramkleuring om de morfologie van de organismen in elke bloedkweek te bepalen. Onderzoek de gekleurde preparaten met een microscoop voorzien van een olie-immersieobjectief.Een enterococcus-soort zal verschijnen als grampositieve coccen, gewoonlijk gerangschikt in paren of korte ketens. Plaats één druppel fixatieoplossing in de put van een p en een fish microscoopglas. Meng de buis met de te testen bloedkweek voorzichtig.Breng vervolgens 10 µL van de cultuur over op de druppel fixeeroplossing en pipetteer dit op en neer om het monster te emulgeren. Plaats de objectglazen 20 minuten op een warmteplaat bij 55 °C om de uitstrijkjes in elke test te fixeren. Zorg ervoor dat positieve en negatieve controleglazen worden meegenomen voor de kwaliteitsbeoordeling van de assay.Indien er geen callus-controleslides kunnen worden aangeschaft van Van DX, kunnen deze worden bereid met behulp van referentieculturen. Zodra het uitstrijkje gereed is, brengt u één druppel EFI callus O-E-P-N-A aan op de well met het bloedcultuurmonster, alsook op de wells voor de positieve en negatieve controle. Om contaminatie van de probe-stamoplossing te voorkomen, dient u erop te letten dat de tip van het druppelflesje het bloeduitstrijkje niet raakt.Plaats een dekglas bovenop het monster, waarbij u er zorg voor draagt dat er geen luchtbellen ontstaan. Incubeer het preparaat vervolgens op een warmteblok bij 55 °C gedurende 30 minuten. Om het PNA na de incubatie te laten hybridiseren, plaatst u de preparaten in een preparaatenhouder.Dompel de geladen objectglaashouder onder in een kleurbak met voorverwarmde Wash Solution van 55 °C. Verwijder het overtollige PNA van het monster en schuif het dekglas voorzichtig eraf door het objectglas in de buffer te bewegen of door een pincet te gebruiken. Incubeer het objectglas 30 minuten in de wash solution bij 55 °C.Verwijder vervolgens het objectglas uit het kleuringsbakje en laat het aan de lucht drogen. Zodra het objectglas droog is, voegt u één druppel montage medium op kamertemperatuur toe aan het glas en plaatst u voorzichtig een dekglas op het monster. Onderzoek de objectglazen binnen twee uur na de bereiding met een fluorescentiemicroscoop met behulp van een duaalbandfilter.Met deze methode kunnen iffy, callous, links in het groen weergegeven, worden onderscheiden van eum in het rood. In het middelste paneel uiterst rechts is een negatief resultaat te zien. Drie zaken om te onthouden voor het behalen van succesvolle resultaten zijn dat de instrumenttemperaturen op de ingestelde temperaturen moeten worden gehouden.Het is noodzakelijk om de kleuringsprocedure zeer nauwkeurig te volgen, zoals beschreven in de bijsluiter. Ten slotte is een ervaren beoordelaar nodig die de slide grondig analyseert. Dit protocol is nuttig bij het maken van therapeutische beslissingen voor de behandeling van sepsis veroorzaakt door enterococcus.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

a-15-hour-procedure-for-identification-enterococcus-species-directly

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Het ontwerp van een eenvoudige een-dag workflow regeling voor bacteriële pathogenen diagnostiek maakt het mogelijk snelle herkenning van infecties in het bloed. Het opnemen van acht klinisch relevante bacteriële doelen en de resistentie tegen antibiotica profielen biedt de arts een eerste inzicht op dezelfde dag, wat kan leiden tot meer adequate therapie.

Eendaagse Workflow Regeling bacteriële pathogenen detectie en antimicrobiële resistentie testen van Blood Cultures

We hebben onlangs melding gemaakt van een nieuwe benadering voor het genereren van fluorogene DNAzyme probes die kan worden toegepast op het opzetten van een eenvoudige, "mix-and-lezen" TL-test voor bacteriële detectie. Deze speciale DNA probes katalyseren de splitsing van een chromofoor gemodificeerde DNA-RNA chimère substraat in aanwezigheid van ruwe extracellulaire mengsel (CEM) door een bepaald bacterie, waardoor vertaling bacteriële detectie in fluorescentiesignaal generatie. In dit...

Detectie van bacteriën met behulp van fluorogene DNAzymes

De toepassing van matrix-geassisteerde laser desorptie / ionisatie vluchttijd (MALDI-TOF) massaspectrometrie (MS) rechtstreeks bloed kweekbouillon versnelt de identificatie van bacteriën. De onderhavige methode is een snelle en betrouwbare methode voor de identificatie van Gram-negatieve bacteriën direct uit bloed kweekbouillon.

Snelle identificatie van Gram-negatieve bacteriën van Blood Culture Bouillon Met behulp van MALDI-TOF massaspectrometrie

Een snelle bacteriële pellet bereiding van een positieve bloedkweek kan worden gebruikt als een monster voor toepassingen zoals identificatie door MALDI-TOF, Gram-kleuring, antibiotica gevoeligheidstesten en PCR-gebaseerde test. De resultaten kunnen snel worden meegedeeld aan artsen om de uitkomst van patiënten die lijden aan infecties in het bloed te verbeteren.

Voorbereiding van een Bloed Cultuur Pellet voor snelle identificatie van bacteriën en antibiotica gevoeligheid testen

EUCAST heeft een protocol voor directe antimicrobiële gevoeligheidstests (AST) ontwikkeld voor geautomatiseerde bloedculturen. De afhankelijkheid van op massaspectrometrie gebaseerde microbiële identificatie kan echter worden vermeden door gebruik te maken van een direct protocol voor de bereiding van inoculum in een geautomatiseerd microbieel identificatiesysteem. Deze aanpak kan AST-rapporten opleveren binnen 24 uur na monsterafname.

Directe microbiële identificatie met behulp van een geautomatiseerd microbieel identificatiesysteem om de EUCAST RAST-methode zonder massaspectrometrie te vergemakkelijken

Tijdens het infectieproces, een belangrijke stap is de hechting van pathogenen met gastheercellen. In de meeste gevallen deze hechting stap gebeurt in de aanwezigheid van mechanische spanning opgewekt door stromende vloeistof. Beschrijven we een techniek die schuifspanning introduceert als een belangrijke parameter in de studie van bacteriële hechting.

Introductie van Shear Stress in de studie van bacteriële hechting

Hier beschrijven we een protocol voor het isoleren subsets van precursor B-cellen uit navelstrengbloed. Een voldoende hoeveelheid en kwaliteit van nucleïnezuren kunnen worden geëxtraheerd uit de cellen en gebruikt in daaropvolgende testen gebruik DNA of RNA.

Isolatie van Precursor B-cel subsets van navelstrengbloed

De leden van het Burkholderia geslacht zijn ziekteverwekkers van klinisch belang. We beschrijven een werkwijze voor het totaal bacterieel eiwit extractie met mechanische verbreking en 2-D gelelektroforese voor daaropvolgende proteoomanalyse.

Totaal Eiwitextractie en 2-D gelelektroforese Werkwijzen voor<em&gt; Burkholderia</em&gt; Soorten

Aaseters hebben potentieel om besmettelijke overdraagbare spongiforme encefalopathie prionen translokeren in hun uitwerpselen te ziektevrije gebieden. We detail methoden die worden gebruikt om te bepalen of de muis aangepast scrapie prionen infectieus blijven na passage al is het spijsverteringskanaal van de Amerikaanse kraaien (Corvus brachyrhynchos), een gemeenschappelijke consument van dode dieren.

Procedures voor het identificeren van Besmettelijke Prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort

Hier beschrijven we een efficiënte methode voor isolatie, identificatie en zuivering van muizen thymus epitheelcellen (TEC). Het protocol kan worden gebruikt voor studies van thymus functie voor normale T-cel ontwikkeling, thymus en T cel reconstitutie.

Isolatie, identificatie en zuivering van Muriene thymus epitheelcellen

Leer een snelle PNA FISH-methode voor het identificeren van Enterococcus-soorten uit bloedkweken. Deze techniek versnelt de diagnose van sepsis en ondersteunt tijdige therapeutische beslissingen in klinische microbiologie.

Een 1,5 uur Procedure voor de identificatie van Enterococcus Soorten Rechtstreeks van bloedkweken

Meer video's verkennen