Name: Het tellen van menselijke neurale stamcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Leer hoe u menselijke neurale stamcellen telt met een hemocytometer en trypanblauw om levensvatbare en dode cellen te onderscheiden. Deze methode is essentieel voor weefselkweekexperimenten zoals immunochemie en transfectie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen dr. Philip H. Schwartz van de National Human Resource Neural Stamcel erkennen bij de Children&#39;s Hospital, Orange County Instituut voor het verstrekken van hNSPC culturen.

Passage menselijke neurale stamcellen Let op: Raadpleeg de <a href="/index/details.stp?ID=263">passage menselijke neurale stamcellen</a> artikel over hoe je los te maken en resuspendeer de cellen. https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 De voorbereiding van de celsuspensie voor tellen <ol><li> Plaats 25 pi van 0,4% trypan Blue oplossing en 20 pl van de cel media in een eppendorfbuisje. </li><li> Resuspendeer de cellen worden geteld door zachtjes te tikken op de buis met de cellen in een bekend volume van de media om een ​​homogene suspensie te creëren. Plaats 5 ul van cellen in de eppendorfbuisje uit de vorige stap. Deze stap verdunt de cel concentratie met een factor 10. </li><li> Plaats het deksel glas op de hemacytometer, en de belasting ongeveer 11-12 pi van de celsuspensie. <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_4/262_Figure-01.png" alt="262_Figure-01" width="511" height="139" /> </li></ol> Het tellen van cellen in de hemacytometer <ol><li> Let op de gehele rooster van de hemacytometer in een fase contrast microscoop. Focus op een kwadrant van het net (zoals het een in het rood). <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_5/262_Figure-02.png" alt="262_Figure-02" width="492" height="278" /> </li><li> Dode of stervende cellen zal verschijnen blauw omdat hun membraan is beschadigd en zijn niet in staat om de trypan blauwe kleurstof uit te sluiten. Levensvatbare cellen verschijnt niet blauw en wordt omringd door een &quot;halo&quot; van het licht in fase-contrast (zal worden &quot;phase-bright&quot;). </li><li> Tel het aantal levensvatbare cellen in een kwadrant (gebied 1 mm 2). U kunt de levensvatbaarheid van de cellen ook bepalen door het aantal levensvatbare cellen door het totaal aantal cellen. Tellen cellen in 3-4 willekeurige kwadranten en bepalen het gemiddelde aantal cellen per kwadrant. Omdat het volume van een kwadrant is bekend dat 10 -4 ml of 0,1 ul worden, kan de concentratie van de cellen wordt bepaald <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_6/262_Figure-03.png" alt="262_Figure-03" width="741" height="165" /> </li><li> U kunt gebruik maken van de volgende snelkoppeling naar de # cellen / ul te bepalen: <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_7/262_Figure-04.png" alt="262_Figure-04" width="368" height="69" /> Totaal aantal cellen in buis = # cellen / ul X ul in tube </li></ol>

<ol><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passaging+Human+Neural+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. 7, 
 
 <a target="_blank" href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> (2007).</li>
<li>Caprette, D. avidR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+Hemacytometer%5BTitle%5D)+AND+%22BioEd+Online%22%5BJournal%5D)">Using a Hemacytometer.</a> BioEd Online. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer&dpg=3">http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer&dpg=3</a> (2008).</li>
<li>Caprette, D. avidR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+Chamber+%28Hemacytometer%29%5BTitle%5D)+AND+%22BioEd+Online%22%5BJournal%5D)">Counting Chamber (Hemacytometer).</a> BioEd Online. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2
">http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2
</a> (2008).</li>
</ol>

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en snelle manier is om de cel concentratie te bepalen voor een verscheidenheid van experimenten met cellen. Met behulp van de snelkoppeling beschreven in 3d, kan men snel en nauwkeurig bepalen van de cel concentratie en het totale aantal cellen in een bepaald volume.

<table><tbody><tr><td>Fasecontrast-hemocytometer</td><td>Instrument</td><td>Hausser Scientific</td><td>02-671-54</td><td>Gedistribueerd door Fisher onder het aangegeven catalogusnummer</td></tr><tr><td>Trypaanblauwkleuring 0,4%</td><td>Reagens</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>Gedistribueerd door Invitrogen onder het aangegeven catalogusnummer</td></tr></tbody></table>

het tellen van menselijke neurale stamcellen

Counting Human Neural Stem Cells

Kennis van het precieze aantal levensvatbare cellen in een bepaald volume van een celsuspensie is vereist voor veel routine weefselkweek manipulaties, zoals plating cellen voor immunocytochemie of voor de cel transfecties. Dit protocol beschrijft een eenvoudige en snelle methode om onderscheid te maken tussen levende en dode cellen en kwantificeren van de cel concentratie en het totale aantal cellen met behulp van een hemacytometer. Deze procedure vereist in de eerste losmaken cellen van een groei oppervlak en resuspenderen ze in de media. Vervolgens worden de cellen verdund in een oplossing van trypan blauw (ideaal om een ​​concentratie die geeft 20 tot 50 cellen per kwadrant) en geplaatst in de hemacytometer. Ten slotte is het gemiddelde van de tellingen van levensvatbare cellen in een aantal willekeurig geselecteerde kwadranten, de verdeling van de gemiddelde door het volume van een 1 mm 2 kwadrant (0,1 pi) en te vermenigvuldigen met de verdunningsfactor geeft het aantal cellen per liter Vermenigvuldigen deze cel de concentratie van het totale volume in ui geeft het totaal aantal cellen. Dit protocol beschrijft het tellen van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), maar kan ook gebruikt worden voor vele andere celtypes.

Kennis van het exacte aantal levensvatbare cellen is nodig voor vele weefselkweek manipulaties. Dit protocol beschrijft hoe onderscheid te maken tussen levende en dode cellen en kwantificeren cellen met behulp van een hemacytometer. Hoewel het beschrijft het tellen van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), kan het worden gebruikt voor andere celtypen.

Het tellen van menselijke neurale stamcellen

Kennis van het exacte aantal levensvatbare cellen in een bepaald volume van een celsuspensie is vereist voor veel routinematige weefselkweekhandelingen, zoals ...

Nu ga ik laten zien hoe u menselijke neuro-precursorcellen telt. U telt uw cellen wanneer u deze wilt voorbereiden voor immunochemie of wanneer u een transfectie wilt uitvoeren met nuclear factor machine. Ik gebruik een fasecontrast-hemocytometer met een randrooster en we gebruiken ook een kleurstof genaamd trypaanblauw. Deze kleurstof is nuttig omdat deze een onderscheid kan maken tussen levende en dode cellen.Dode of stervende cellen nemen deze kleurstof op en kleuren blauw. Wanneer u de cellen in de hemocytometer bekijkt, blijken levende cellen deze kleurstof uit te sluiten en kleuren zij niet blauw. Op die manier kunt u de levensvatbaarheid van uw cellen bepalen om een oplossing van trypaanblauw in medium te bereiden.Ik voeg 20 µL van de trap en blauwe oplossing toe aan deze 0,5 ml epi-tube. Vervolgens voeg ik 25 µL medium toe. Op die manier heb ik nu 45 µL van een trapaanblauw- en mediumoplossing, zodat ik een 1:10 verdunning krijg wanneer ik 5 µL cel-suspensie toevoeg.Ik ga nu 5 µL celсусpensie toevoegen. Eerst zorg ik ervoor dat de cellen goed zijn geresuspendeerd door middel van finger vortexing. Ik wil nu controleren of deze oplossing goed is gemengd.Ik zal de tafel nu een

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Het introduceren van een gen van interesse in een cel is een krachtige methode voor het ophelderen van de functie in vivo. Dit protocol beschrijft een efficiënte methode voor het transfecteren een cultuur van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs) met de Nucleofector elektroporatie apparaat gemaakt door Amaxa.

Transfecteren menselijke neurale stamcellen met de Amaxa Nucleofector

De mogelijkheid om menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs) te manipuleren in vitro het mogelijk maakt om hun bruikbaarheid te onderzoeken als cel transplantatie voor therapeutische doeleinden en voor de menselijke ontwikkeling van het zenuwstelsel te verkennen. Dit protocol bevat een methode voor het kweken en de passage hNSPCs in de hoop van de toenemende reproduceerbaarheid van het menselijk stamcelonderzoek.

Passage menselijke neurale stamcellen

Immunocytochemie is een krachtige methode om de aanwezigheid, subcellulaire lokalisatie, en relatieve rijkdom van een antigeen van belang in gekweekte cellen te bepalen. Dit protocol biedt een makkelijk te volgen serie van stappen die in staat zal stellen een om antistoffen te behouden en het meeste uit je vlekken krijgen.

Immunocytochemie: menselijke neurale stamcellen

Deze video protocol laat zien hoe om te discrimineren en te goeder trouw neurale stamcellen te sommen in een gemengde populatie van neurale voorloper cellen met behulp van de neurale kolonievormende cell assay.

Neurale-Colony Forming Cell-test: Een test om Bona Fide neurale stamcellen van Neural Progenitor Cellen Discrimineer

Een eenvoudige en betrouwbare methode op isolatie en de cultuur van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale corticale weefsel wordt beschreven. Culturen zijn afgeleid van bekende menselijke neurologische aandoeningen kunnen worden gebruikt voor de karakterisering van pathologische cellulaire en moleculaire processen, maar ook als een platform om de farmacologische werkzaamheid beoordelen.

Generatie van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale Cortical weefsel

Neurale stamcellen geoogst uit de volwassen hersenen worden steeds gebruikt in toepassingen, variërend van het fundamenteel onderzoek van de ontwikkeling van het zenuwstelsel aan het verkennen van potentiële klinische toepassingen in de regeneratieve geneeskunde. Dit maakt strenge controle op de isolatie en kweekomstandigheden gebruikt om deze cellen cruciaal voor experimentele resultaten goed groeien.

Groeiende neurale stamcellen uit Conventionele en Niet-conventionele Regio&#39;s van de Adult knaagdierhersenen

Dit protocol beschrijft een nieuwe mechanische snij methode die de sferische expansie van neurale stamcellen en voorlopercellen aggregaten zonder dissociatie een enkele celsuspensie maakt. Handhaving van cel / cel contact maakt een snelle en stabiele groei voor meer dan 40 passages.

Een cGMP-toepassing Uitbreiding Methode voor Aggregaten van menselijke neurale stamcellen en stamcellen afgeleid uit pluripotente stamcellen of foetaal hersenweefsel

Een werkwijze werd ontwikkeld om direct voort humane neurale stamcellen van hematopoïetische progenitorcellen verrijkte uit perifere bloedcellen.

Direct Inductie van Human neurale stamcellen uit perifeer bloed hematopoïetische voorlopercellen

Met het doel om veranderingen in miRNA's in gedifferentieerde menselijke neurale stamcellen (hNSC's) te karakteriseren, beschrijven we hNSC-differentiatie op een driedimensionaal systeem, de evaluatie van veranderingen in microRNA-expressie door miRNA PCR-array en computationele analyse voor miRNA-doelwitvoorspelling en de validatie ervan door middel van een dual luciferase-assay.

Differentiatie van een menselijke neurale stamcellen Line op Three Dimensional Culturen, Analyse van MicroRNA en vermeende doelwit-genen

Het volwassen zoogdierspinaalmerg bevat neurale stam-/voorlopercellen (NSPC's) die kunnen worden geïsoleerd en uitgebreid in cultuur. Dit protocol beschrijft het oogsten, isoleren, kweken en passeren van NSPC's die zijn gegenereerd uit de periventriculaire regio van het volwassen ruggenmerg van de rat en van menselijke orgaantransplantatiedonoren.

Isolatie van neurale stamcellen / stamcellen uit de periventriculaire regio van de volwassen rat en Human Spinal Cord

Neurale stamcellen (NSC) verwijzen naar cellen die kunnen zichzelf vernieuwen en differentiëren in de drie neurale geslachten. We beschrijven hier een protocol NSC frequentie te bepalen in een bepaalde celpopulatie via neurosfeer vorming en differentiatie onder klonale omstandigheden.

Opsomming van neurale stamcellen Met behulp van klonen Testen

Leer hoe u menselijke neurale stamcellen telt met een hemocytometer en trypanblauw om levensvatbare en dode cellen te onderscheiden. Deze methode is essentieel voor weefselkweekexperimenten zoals immunochemie en transfectie.

Het tellen van menselijke neurale stamcellen

Meer video's verkennen