Name: Elektrofysiologie van Scorpion Peg Sensilla (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Leer elektrofysiologische tip-recordings van individuele scorpioen peg sensilla met een op maat gemaakte oliekamer. Deze methode isoleert chemische stimulatie en helpt onderzoekers de chemosensorische fysiologie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We bedanken de LIFE-fonds, de Universiteit van Oklahoma Undergraduate Research Program kansen, en de afdeling Zoölogie voor de financiering van dit werk. We danken ook dr. Mariëlle Hoefnagels voor redactionele hulp.

1. Pre-registratie, Live Animal Voorbereiding <ol><li> Haal de schorpioen uit zijn huis pot en plaats deze in een pre-gekoeld glas container, naast, plaats de pot met de schorpioen in een bevriezing omgeving (-5 ° C) voor een minimum van twee minuten. Deze tijd kan variëren afhankelijk van de leeftijd, grootte, soort, enz. van de specifieke schorpioen onder studie. Maar in het algemeen, is het bevriezen omgeving fase is afgerond zodra het dier is onbeweeglijk. </li><li> Na twee minuten, verwijder de geïmmobiliseerde schorpioen uit het koude glas container, en plaats het ventrale zijde naar boven op een microscoopglaasje. Zet de stinger, staart, benen en pedipalpen met vormbaar klei (op basis van olie, Van Aken Plastalina). </li><li> Maak een platform waarop de schorpioen pectinen te zetten. Pas het platform lengte en breedte volgens de grootte van de Pecten. Meestal worden onze platformen opgebouwd uit microscoop te dekken glas en zijn ongeveer 10 (L) X 18 (W) mm. </li><li> Hechten dubbelzijdige tape om de Pecten platform, het bijknippen van de tape (indien nodig) te passen. </li><li> Om een ​​pectinal kamer, zet drie van de vier van het platform zijkanten in de pre-gesmolten was (we gebruiken 100% bijenwas chips) tot een diepte van 3-4 mm. We smelten de was door het plaatsen van de chips in een glazen petrischaal, gelegen op een hete plaat. Zodra de wax op de randen van de pectinal kamer is afgekoeld tot kamertemperatuur, zou dit tot muren van wax ongeveer 1 mm hoog. </li><li> Op het dier, zoekt u de punt van pectinal inbrengen, en plaats de niet-gewaxt rand van het platform (tape side-up) juist achter aan. Daarna, het stabiliseren van de platform (zodat het niet zal bewegen later) door zachtjes te drukken op de rechter en linker omtreksranden tegen de klei wordt gebruikt om de dieren de benen te beperken. </li><li> Gebruik fijne punt tang zorgvuldig plaats het pecten of pectinen in de kamer. In het bijzonder, met behulp van pincet, houdt u de pecten langs de pectinal ruggengraat, en voorzichtig breng het pecten uit onder de kap glas en zakken op de lijm vloer van het platform. Stel een Pecten-to-tape binding door voorzichtig druk uit te oefenen op de pectinal wervelkolom. </li><li> Nu gelden gesmolten was (we gebruiken een voorverwarmde metalen spatel) bij het VN-gewaxt rand van het platform. Het doel is tweeledig, aan de Pecten veilige en volledig te omsluiten de kamer voor de toekomstige minerale olie introductie. Wees voorzichtig bij het toepassen van de was boven pecten van het dier, omdat het mogelijk is om schade aan de Pecten met was, dat is te warm. </li><li> De Pecten kamer bouw is voltooid. Vervolgens oprichting van een indifferente elektrode verbinding met hemolymfe van het dier door het invoegen van een zilveren draad tussen twee staart segmenten. </li></ol> 2. Gelijktijdig opnemen en extracellulaire chemische stimulatie <ol><li> We bereiden het dier 24 uur voorafgaand aan het uitvoeren van extracellulaire, tip-opnames, waarin onder andere redenen (dat wil zeggen dieren aanpassing aan vaste positie), maakt het mogelijk de tijd om op maat te maken stimulerende pipetten van een specifieke (sensillum-afhankelijk) tip-diameter. We maken gebruik van een micropipet trekker voor het bereiken van dergelijke specificaties. Idealiter, de diameter van de pipetten is ≈ 2 micrometer groter is dan de sensillar porie diameter. We dienovereenkomstig aan te passen onze micropipet specificaties voor elk dier. </li><li> 1 uur voorafgaand aan de opname, voegen we 5 pi van minerale olie aan de pectinal kamer, onderdompelen van het pecten onder olie. Vervolgens hebben we de positie van de dieren onder een krachtige microscoop, die al lange tijd werkafstand doelstellingen en epi-verlichting. </li><li> Chemisch stimuleren peg sensilla, introduceren we waterige tastants (dat wil zeggen citroenzuur en zout) door de olie medium. Eerst maken we gebruik van een micropipet vulmiddel voor de stimulerende injecteren in de stimulerende pipet. Let op: alle stimulerende oplossingen moeten een elektrolyt voor de elektrische geleiding bevatten. </li><li> Vervolgens na het positioneren van de stimulerende pipet op een micromanipulator (in de opname rig), plaatst u de opname elektrode in de stompe, open einde van de stimulerende pipet. Het is belangrijk om ervoor te zorgen contact tussen de metalen elektrode en elektrolytische stimulerende oplossing. </li><li> Als de voorbereiding is elektrisch geaard zijn (via de indifferente elektrode), doen dalen de pipet door de olie-medium en op een sensillar porie. De duur van de chemische stimulatie per pectinal sensillum kan variëren van zo veel als dertig minuten om zo weinig als een seconde. In het algemeen kunnen we genieten van meerdere pinnen (&gt; 30) per pipet. In het geval dat de stimulerende pipet verstopt raakt met de minuut puin, gewoon wisselen de verstopte pipet voor een nieuwe, ongebruikte pipet. </li></ol> 3. Het opstellen van een dier voor meerdere dagen van Experimentation <ol><li> Als het dier kan worden gebruikt over een langere periode, raden wij aan hergebruik van de pectinal kamer en het vervangen van de daling van minerale olie voor elke opname sessie. Na een bepaalde dag van de opname sessie is voltooid, verwijdert u het dier uit de opname set-up en het uitvoeren van een minerale olie wassen. </li><li> Specidelen die specifiek, nog een druppel (5 pl) van minerale olie naar de kamer, en verwijder alle olie. Dit helpt het minimaliseren van de aanwezigheid van resten van stimulerende, die kunnen hebben gelekt van de pipet tijdens de opname sessie. </li><li> Voordat de volgende sessie, voeg een druppel olie zoals eerder beschreven. </li></ol> 4. Representatieve resultaten: Afhankelijk van de opname apparatuur die wordt gebruikt (bijvoorbeeld de bijzondere versterker, het digitaliseren van hardware, enz.), een vertegenwoordiger resultaat is een extracellulaire met een S: N-verhouding van minimaal 3:1. Succesvolle bouw van de minerale olie kamer is noodzakelijk voor het isoleren van chemische stimulatie aan individuele sensilla, omdat het een medium voor het leveren van polaire (op basis van water) chemische tastants 8. Als er te weinig olie of helemaal geen, zal het stimulerende oplossing verspreid van de opgenomen sensillum naar de aangrenzende sensilla, die waarschijnlijk een langdurige, ongecontroleerde aanval van chemische stimulatie 8 veroorzaken.

<ol><li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+a+Primary+Chemoreceptor+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Physiology of a Primary Chemoreceptor unit.</a> Science. 12, 417-418 (1955).</li>
<li>Newland, P. L. Taste processing in the insect nervous system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNewland%2C+PL+%22Methods+in+Insect+Sensory+Neuroscience%22">Methods in Insect Sensory Neuroscience</a>. Christensen, T. A. , CRC Press. Boca Raton. 289-318 (2005).</li>
<li>Foelix, R. F., Müller-Vorholt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fine+structure+of+scorpion+sensory+organs+II.+Pecten+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Br.+Arachnol.+Soc%22%5BJournal%5D)">The fine structure of scorpion sensory organs II. Pecten sensilla.</a> Bull. Br. Arachnol. Soc. 6, 68-74 (1983).</li>
<li>Carthy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+structure+and+function+of+the+sensory+pegs+on+the+scorpion+pecten%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">Fine structure and function of the sensory pegs on the scorpion pecten.</a> Experientia. 22, 89-91 (1966).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+properties+of+chemosensory+peg+sensilla+on+the+pectines+of+scorpions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Response properties of chemosensory peg sensilla on the pectines of scorpions.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 291-300 (1997).</li>
<li>Wolf, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pectine+organs+of+the+scorpion%2C+Vaejovis+spinigerus%3A+Structure+and+%28glomerular%29+central+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The pectine organs of the scorpion, Vaejovis spinigerus: Structure and (glomerular) central projections.</a> Arthropod Struct. Dev. 37, 67-80 (2008).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+of+synaptic+interactions+within+chemosensory+sensilla+of+scorpion+pectines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence of synaptic interactions within chemosensory sensilla of scorpion pectines.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 301-307 (1997).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+examining+scorpion+peg+sensilla%3A+the+mineral+oil+flood+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Arachnol%22%5BJournal%5D)">A new approach to examining scorpion peg sensilla: the mineral oil flood technique.</a> J. Arachnol. 37, 379-382 (2009).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+tip-recording+method+to+test+scorpion+pecten+chemoresponses+to+water-soluble+stimulants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new tip-recording method to test scorpion pecten chemoresponses to water-soluble stimulants.</a> J. Neurosci Methods. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Haupt, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antennal+sucrose+perception+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L.%29%3A+behaviour+and+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Antennal sucrose perception in the honey bee (Apis mellifera L.): behaviour and electrophysiology.</a> J. Comp. Physiol. A. 190, 735-745 (2004).</li>
<li>Bland, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensilla+on+the+antennae%2C+mouthparts%2C+and+body+of+the+larva+of+the+alfalfa+weevil%2C+hypera+postica+%28gyllenhal%29+%28Coleoptera+%3A+Curculionidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Insect+Morphol.+Embryol%22%5BJournal%5D)">Sensilla on the antennae, mouthparts, and body of the larva of the alfalfa weevil, hypera postica (gyllenhal) (Coleoptera : Curculionidae).</a> Int. J. Insect Morphol. Embryol. 12, 261-272 (1983).</li>
<li>Cate, H. S., Derby, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooded+Sensilla+Homologues%3A+Structural+Variations+of+a+Widely+Distributed+Bimodal+Chemomechanosensillum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Hooded Sensilla Homologues: Structural Variations of a Widely Distributed Bimodal Chemomechanosensillum.</a> J. Comp. Neurol. 444, 345-357 (2002).</li>
</ol>

We hebben eerder gepubliceerde deze methoden in twee tijdschriften, Knowlton en Gaffin (2009) en Knowlton en Gaffin (in press).

Het protocol hiervoor wordt beschreven hoe u een woestijn grasland schorpioen (Paruroctonus utahensis) voor te bereiden op elektrofysiologische studie. In het bijzonder laten we zien hoe je een kamer voor gecontroleerde extracellulaire tip-opnames van pectinal chemosensory neuronen onder de olie op te bouwen. Omdat olie en water niet mengen niet, is het mogelijk te isoleren chemische stimulatie (met water op basis van stimulerende middelen) om een ​​sensilla. Benadrukt moet worden dat P. utahensis, is een relatief klein dier (≈ 2,5 tot 5 cm) en het toepassen van dit protocol om grotere dieren kunnen vereisen veel aanpassingen van grootte, zoals de grootte van het platform van het dier, kamermuziek, en de hoeveelheid olie toegepast. We raden aan het uitvoeren van pilot-studies aan de minimum hoeveelheid olie nodig is voor gecontroleerde afgifte van water-gebaseerde chemische stimulerende middelen te testen. Verder vonden we geen effect van olie op de baseline neurale activiteit binnen pectinal sensilla 8. Dit moet worden bevestigd voor andere model systemen ook, voorafgaand aan het beoordelen van chemoresponsiveness. Deze methode kan worden gebruikt in combinatie met een andere methode om te testen op chemoresponse interactie-effecten tussen sensilla in de sensorische veld. Bijvoorbeeld, is het mogelijk om tip-record (onder olie) uit een sensillum als we base-record (via een wolfraam elektrode) uit een naburig sensillum 9. Zo&#39;n opname configuratie kan worden gebruikt om te beoordelen al dan niet chemisch te stimuleren een sensillum invloed op de neurale activiteit van de basis opgenomen sensillum. Tot op heden heeft niemand dit getest voor schorpioen pectinal sensilla, en het blijft een open vraag voor andere chemosensory systemen. Om samen te vatten, denken we dat de tip-opname methode onder olie bevordert de omvang van elektrofysiologische onderzoek naar de neurale basis van geleedpotigen het proeven. In dit manuscript, bieden we een protocol voor het bereiden van dieren voor deze methode, en we hopen dat het zorgt voor een stevige basis voor verdere studie van perifere sensorische zenuwstelsels.

<table><tbody><tr><td>Lift-N-Press tab</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>16082</td><td>Dubbelzijdige kleefstrip</td></tr><tr><td>MicroFil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MF34G</td><td>Micropipetvuller</td></tr><tr><td>Standaard glazen capillairen</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>1B100F-6</td><td>Glazen pipetten</td></tr><tr><td>Micr&amp;#8211;elektrodehouder</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MEH3SBW10</td><td></td></tr></tbody></table>

elektrofysiologie van scorpion peg sensilla

Electrophysiology of Scorpion Peg Sensilla

Beschrijven we een wijziging van een bestaande tip-opnametechniek 1,2 voor elektrofysiologische onderzoeken van korte, peg-achtige zintuiglijke sensilla 3,4. Op het midden van de ventrale oppervlak van alle schorpioenen zijn twee aanhangsels genoemd pectines, die dichte velden van zijn mechanisch-en chemosensory peg sensilla 5,6. Een methode voor het beoordelen van chemoresponsiveness van deze sensilla maakt gebruik van een wolfraam elektrode voor extracellulair het opnemen van neurale activiteit in een sensillum als een vluchtig odorant is ingevoerd om het zintuiglijke veld 5,7. De beperkingen van deze methode zijn langzame verzamelen van gegevens en ongecontroleerd stimulerende kennismaking met, en de uitslag uit het peg veld. Om deze beperkingen, ontwikkelden we een nieuwe tip-opname techniek die niet-polaire minerale olie gebruikt als een medium om op basis van water tastants te leveren aan de individuele pin sensilla 8,9. We hebben met succes deze methode toegepast op sensillar chemoresponses verkrijgen om citroenzuur, ethanol, en zout. Hier beschrijven we de experimentele protocol voor een dergelijke studie 9. We denken dat deze nieuwe methode kan nuttig zijn voor het bestuderen van de respons-eigenschappen van andere geleedpotigen chemosensory systemen, waaronder die van insecten 10, 11 en schaaldieren 12.

Dit artikel beschrijft een elektrofysiologische methode voor het isoleren van chemische stimulatie aan individuele sensilla via extracellulaire, tip-opnames onder minerale olie.

Elektrofysiologie van Scorpion Peg Sensilla

Wij beschrijven een modificatie van een bestaande tip-registratietechniek1,2 voor het elektrofysiologisch onderzoeken van korte, penvormige sensorische sensilla3,4. Op de ...

Het algemene doel van deze procedure is het bestuderen van de chemosensorische fysiologie van individuele pegilla op een pectin van een schorpioen. Dit wordt bereikt door eerst een geanestheseerde schorpioen met de ventrale zijde naar boven op een objectglas te immobiliseren. Voor de opstelling met boetseerklei is het noodzakelijk om de pectines onder te dompelen in een speciaal vervaardigde, met olie gevulde kamer en elektroden te maken die zijn gevuld met een chemische stimulant.Chemosensorische responsen worden geregistreerd bij individuele illa op de pectin, die uiteindelijk vergelijkbare responsprofielen vertonen bij waterige chemische stimulantia. We hebben opnames gemaakt vanaf de basis van de illa terwijl vluchtige stimulantia over de poriën werden geblazen. Het belangrijkste voordeel van de tip-registratietechniek is dat het mogelijk maakt om de stimulatie te isoleren tot één pigmentum zonder de activiteit van de buren te beïnvloeden.Deze methode kan ons helpen om kernvragen in het veld van de chemosensorische biologie te beantwoorden; bijvoorbeeld, waarom gebruiken dieren zoveel herhaalde silla's bij chemische detectie en perceptie? Schorpioenen lijken misschien niet de veiligste dieren om te bestuderen, maar niet alle soorten zijn gevaarlijk of moeilijk hanteerbaar. De woestijngraslandschorpioenen zijn bijvoorbeeld slechts vier tot vijf centimeter lang, zijn eenvoudig in het laboratorium te houden en steken zelden als ze correct worden gehanteerd.Bij een steek activeert het gif kunstmatig uw sensorische neuronen, waarvan sommige pijninformatie doorgeven. De sensatie neemt gewoonlijk na ongeveer 15 minuten af. Schorpioenen zijn robuuste proefdieren en kunnen meerdere dagen experimenteren verdragen, waarna ze vaak worden teruggeplaatst in hun verblijven.Wanneer het experiment om de schorpioen te immobiliseren is voltooid, plaatst u deze in een vooraf gekoelde glazen container. Plaats vervolgens de pot met de schorpioen gedurende minimaal twee minuten in een vriezende omgeving en haal deze uit de vriezer zodra het dier roerloos is. Plaats de geïmmobiliseerde schorpioen nu met de ventrale zijde naar boven op een objectglas.Zet de poten van de staart en de pedi palpen vast met vormbare klei. De pectines van de schorpioen zijn gepaarde kamachtige structuren nabij de geslachtsorganen en zijn uniek voor deze dieren. Er moet een kamer worden gemaakt om een enkele pectin te bevatten zonder deze uit het dier te verwijderen.Maak eerst een platform voor de pectine met een glazen dekglas dat is gesneden op ongeveer vijf millimeter bij 18 millimeter. Dit is gewoonlijk voldoende. Breng vervolgens dubbelzijdige plakband aan op het platform en trim de tape indien nodig zodat deze precies past.Ten derde, smelt sommige 100% bijenwaschips in een glazen schaal met behulp van een warmteplaat. Dompel nu drie van de vier randen van het platform in de gesmolten bijenwas tot een diepte van drie tot vier millimeter. De afgekoelde was dient als wand om een kamer te vormen.Plaats nu de ongebonden rand van het platform net posterior aan het punt van de pectale insertie op het dier. Stabiliseer het platform door de rechter- en linkerrand voorzichtig tegen de klei te drukken waarmee de poten van het dier zijn vastgezet, met behulp van fijne pincetten. Houd een van de pectines voorzichtig langs de pectale stekel vast, breng deze voorzichtig onder het dekglas vandaan en laat hem op de kleeflaag van de platformbodem zakken.Bevestig de pecten door voorzichtig druk uit te oefenen op de pectenstekel. Voltooi de kamer door met een voorverwarmde metalen spatel gesmolten was aan te brengen op de open rand van het platform. Het dier is nu bijna klaar voor het uitvoeren van elektrofysiologische metingen.Nu is het een gemakkelijk moment om een onverschillige elektrodeverbinding te maken. Voeg een zilverdraad tussen twee staartsegmenten in de hemolymfe van de schorpioen in. Druk een deel van de draad die uit het dier steekt in de klei om deze te fixeren en laat voldoende lengte over om de versterker te bereiken.Zet de preparatie nu gedurende ten minste een uur opzij voordat u opnames maakt, zodat de preparatie kan stabiliseren voor de registraties. Gebruik een micropipetpuller om pipetten te maken met een binnendiameter die ongeveer twee micron groter is dan de diameter van de sensoropening, welke per dier verschilt. Vul één uur voor de opname de pectinekamer met vijf microliters minerale olie.Plaats het dier vervolgens onder de krachtige microscoop met objectieven met een grote werkafstand en epi-belichting om de peg illa chemisch te stimuleren. Vul de stimuluspipet met waterige smaken gemengd in een elektrolytische oplossing. Gebruik een micropipetvuller en bevestig vervolgens de gevulde stimuluspipet aan een micromanipulator.Plaats nu de registratie-elektrode in het open uiteinde van de stimulerende pipet. Het is belangrijk om contact te verzekeren tussen de metalen elektrode en de elektrolytische stimulerende oplossing. Sluit de aansluitingen van de registratie- en indiferente elektroden aan op een differentiële versterker.De versterker is verbonden met een oscilloscoop om de elektrische activiteit te visualiseren en met een luidspreker om elektrische veranderingen hoorbaar te detecteren. De opstelling is nu klaar voor het maken van opnames. Laat de pipet met behulp van de micromanipulator voorzichtig op een sensorporie zakken.Wanneer er elektrisch contact wordt gemaakt tussen het elektrolyt van de pipet en de vloeistof in de peg sens, zal een verschuiving naar hogere frequenties hoorbaar zijn. Op dit moment kunnen ook de kenmerkende knappende geluiden van neurale actiepotentialen worden gehoord. De duur van de chemische stimulatie per perpetual sens kan variëren van maximaal 30 minuten tot minimaal één seconde.Over het algemeen kan één pipet meer dan 30 pins bemonsteren. Vervang verstopte pipetten door schone pipetten. Pipetten zijn eenvoudig voor te bereiden en verstoppingen komen vaak voor, dus houd altijd extra pipetten bij de hand.Het is mogelijk om gedurende enkele uren bij één enkel dier opnames te maken in één sessie voordat de minerale olie vervangen moet worden. Eén enkel dier kan gedurende meerdere opnamesessies over verschillende opeenvolgende dagen op zijn plaats in de opnameopstelling worden gehouden. Gebruik voor volgende sessies de pectorale kamer opnieuw, maar vervang de minerale olie.Verwijder simpelweg alle oude olie met een pipet en voeg een verse druppel toe. Dit helpt de aanwezigheid van resterende stimulantia te minimaliseren, die mogelijk uit de stimulantpipet zijn gelekt tijdens de opnamesessie. Hier zijn representatieve tip-opnames van verschillende stimulantia.Deze registratie vertoont een relatief consistente respons op 0,01 molair kaliumchloride. Deze peg geeft een respons op 0,1 molair citroenzuur die veel intenser begint en vervolgens binnen een fractie van een seconde in intensiteit afneemt, gevolgd door een afname in frequentie. Bij een typische respons op 30% ethanol vertoont de registratie uitbarstingen met meerdere pieken tussen korte intervallen van inactiviteit wanneer tip-registraties van verschillende sensorresponsen op hetzelfde stimulerend middel, zoals 0,1 molair citroenzuur, worden vergeleken.De reacties zijn zeer vergelijkbaar. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden de pipet te vullen met een stimulant op waterbasis, die niet mengt met het oliemedium en het mogelijk maakt om chemisch één lum tegelijk te stimuleren. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u individuele CIN op een schorpioen-pecten gecontroleerd kunt stimuleren met minerale olie als medium.

electrophysiology-of-scorpion-peg-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Elektrofysiologische reacties van olfactorische sensorische neuronen aan geurstoffen kan worden gemeten bij insecten met behulp van enkele sensillum opnames. In deze video artikel zullen we laten zien hoe je een sensillum opnamen in de antennes van de azijn fly uit te voeren...

Single Sensillum Opnamen in de Insecten Drosophila melanogaster En Anopheles gambiae</em

Insect olfactorische systemen bieden unieke mogelijkheden voor het opnemen van geurstof-geïnduceerde responsen in de vorm van electroantennograms (EAG) en enkele sensillum opnames (SSR), die de antwoorden worden samengevat van alle geurstof receptor neuronen (ORNs) gelegen op de antenne en van die ondergebracht in afzonderlijke sensilla, respectievelijk.

Elektrofysiologische metingen van een Moth olfactorisch systeem

We beschrijven de ontleding van het zenuwstelsel van het mariene...

Isolatie van sensorische neuronen van<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Voor Patch Clamp Recordings van Glutamaterge Currents

Dit artikel beschrijft de kakkerlak buikzenuwkoord dissectie en extracellulaire opnames van de Cercal zenuw en voegwoorden. Opgeroepen reacties worden opgewekt door elektrische stimulatie van de Cercal zenuw of direct mechanische stimulatie van de cerci.

Neurale Opnemen vanaf een Intact Cockroach zenuwstelsel

Dit artikel beschrijft drie zenuwstelsel bereidingen met behulp van bloedzuigers: intracellulaire opname van neuronen in ventrale ganglia, het kweken neuronen van ventrale ganglia, en het opnemen van een patch van geïnnerveerde huid sensorische gebieden in kaart.

Intracellulaire opname, Sensory Velden bij, en het kweken geïdentificeerde neuronen in de Leech, Hirudo medicinalis</i

Dit protocol beschrijft extracellulaire van de actiepotentiaal reacties afgevuurd door labellar smaak neuronen in Drosophila.

Elektrofysiologische Opnemen vanaf<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Proef sensilla

Bedwantsen vertrouwen op olfactorische receptorneuronen die zich in hun antenne olfactorische sensilla bevinden om semiochemicaliën in de omgeving te detecteren. Met behulp van een enkele sensillum-opname demonstreren we een methode om de reactie van bedwantsen op semiochemicaliën te evalueren en het coderingsproces dat hierbij betrokken is, te onderzoeken.

Met behulp van Single sensillum Opnemen op Olfactorische Neuron Reacties van bedwantsen te semiochemicaliën Detect

Dit witboek beschrijft een gedetailleerde en zeer effectieve protocol voor één sensillum opnamen van de sensilla basiconica op de ook voor insecten monddelen.

Enkele Sensillum opnames voor Locust Palp Sensilla Basiconica

Om ultrastructuur van insectensensilla te observeren, werd in de studie het protocol voor de voorbereiding van de insectenensilla, scanning en transmissieelektronenmicroscopie (SEM en TEM) in de studie gepresenteerd. Tween 20 werd toegevoegd aan de fixatie om monstervervorming in SEM te voorkomen. Fluorescentiemicroscopie was nuttig voor het verbeteren van de snijnauwkeurigheid in TEM.

Monster voorbereiding methode van scannen en transmissie elektronenmicroscoop voor de aanhangsels van woodboring Kever

Een zelden gebruikte methode van elektrofysiologische registratie, basisregistratie, maakt analyse mogelijk van kenmerken van smaakcodering die niet kunnen worden onderzocht met conventionele registratiemethoden. Basisregistratie maakt ook de analyse mogelijk van smaakreacties op hydrofobe stimuli die niet kunnen worden bestudeerd met behulp van traditionele elektrofysiologische methoden.

Basisopname: een techniek voor het analyseren van reacties van smaakneuronen in Drosophila

Deze studie presenteert een chirurgische manipulatie om de T-DRG bloot te leggen bij verdoofde muizen voor in vivo calciumbeeldvorming, samen met synchrone ECG-opnames. Deze methode is een geavanceerd hulpmiddel voor het bestuderen van perifere elektrische zenuwstimulatie en thoracale viscerale orgaaninputs, evenals hun interacties op het primaire sensorische niveau.

In vivo thoracale dorsale wortelganglia (DRG) calciumbeeldvorming en ECG-registratie voor het bestuderen van perifere zenuwstimulatie

Leer elektrofysiologische tip-recordings van individuele scorpioen peg sensilla met een op maat gemaakte oliekamer. Deze methode isoleert chemische stimulatie en helpt onderzoekers de chemosensorische fysiologie te bestuderen.

Elektrofysiologie van Scorpion Peg Sensilla

Meer video's verkennen