Name: Oprichting en Voortplanting van Human Retinoblastoom Tumoren in het immuunsysteem van deficiënte muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Leer hoe je humane retinoblastoomtumoren kweekt in immuundeficiënte muizen via intraoculaire injectie. Deze methode maakt orthotopische tumorvorming mogelijk voor onderzoek naar tumoreigenschappen en behandelingsreacties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De financiering voor dit project wordt geleverd door de Clayton Stichting voor Onderzoek en het netvlies Research Foundation.

1. De voorbereiding van retinoblastoom tumorspheres <ol><li> Verkrijgen van retinoblastoom tumor monster onder een IRB-goedgekeurde protocol. </li><li> Bereid verse gedefinieerd stamcellen media (Neurobasal-A media, 1X B-27 supplement minus vitamine A, 1X niet-essentieel aminozuur oplossing, 1X L-glutamine, 20 ng / mL EGF, 10 ng / mL bFGF). </li><li> Mechanisch disaggregeren het tumorweefsel met een scalpel met behulp van een cross-cutting techniek in een steriele, weefselkweek behandelde 6-well plaat. Onmiddellijk toevoegen 100 pi van toegezegd-stamcellen media om het weefsel en voorzichtig verspreiden het gehakt weefsel met behulp van de scalpel. Voeg 5 ml van de gedefinieerde stamcellen media naar de put. </li><li> Incubeer bij 37 ° C, 5% CO 2 in een bevochtigde incubator en inspecteer dagelijks. Sommige tumorspheres moet voortkomen uit de verstoorde tumorweefsel vrijwel direct, met toenemende aantallen in de loop van 2-4 dagen. </li><li> Wekelijks, centrifuge tumorspheres op 300xg gedurende 5 minuten, opnieuw in suspensie in vers bereide gedefinieerd stamcel media, en de pipet op en neer 10 keer naar grotere, centraal necrotische bollen verstoren en maken nieuwe, gezonde bollen te vormen. </li></ol> 2. Voorbereiding van de tumorcellen voor injectie <ol><li> Als het injecteren van gekweekte tumorspheres, zacht pipet bollen in een 15-mL conische buis. Voorzichtig pipet op en neer met een serologische pipet 10-15 keer naar de sferen te verstoren. </li><li> Tel de cellen worden geïnjecteerd met behulp van een hemacytometer en hoeveelheid ten minste 50.000 cellen per injectie in een nieuwe buis. Bereid je voor op zo veel injecties als mogelijk op basis van het aantal cellen beschikbaar. </li><li> Centrifugeer bij 300xg gedurende 5 minuten. Voorzichtig het supernatans aspireren en resuspendeer in 5 ml PBS. Herhalen centrifugeren en aspiratie, en resuspendeer in 10 pi PBS per injectie. </li></ol> 3. Voorbereiding van de dieren <ol><li> Met behulp van een insulinespuit, toedienen een intraperitoneale injectie van knaagdier anesthesie cocktail (ketamine 37,6 mg / ml, xylazine 1,92 mg / ml, acepromazine 0,38 mg / ml) op een pi per gram lichaamsgewicht (GBW). 5 minuten wachten voor het dier te worden verdoofd. Controleer op hartslag en plaats het dier op een verwarmde pad. Te houden dieren op een verwarmd kussen ten alle tijden tot herstel. </li><li> Na sedatie, toedienen 1 druppel proparacaine HCl aan het rechter oog. Vervanging van dier op verwarmde pad en wacht 1 minuut. </li><li> Dien een druppel fenylefrine HCl aan het rechter oog. Vervang het dier op het verwarmde pad en wacht 5 minuten. Als de dilatatie van de leerling niet heeft plaatsgevonden, opnieuw beheren een druppel en wacht nog 5 minuten. </li><li> Monitor dieren tekenen van beweging of trillen, die zich kunnen voordoen bij&gt; 30 minuten na sedatie. Bij de eerste tekenen van beweging, beheren een pL / GBW van ketamine HCl (verdund tot 10 mg / ml in PBS) en wacht 5 minuten. </li></ol> 4. Injectie van tumorcellen <ol><li> Plaats de verdoofde dier onder de microscoop op zijn kant, met het rechter oog naar boven en met het hoofd rustend op gaas en gecentreerd om een ​​rode reflex van het rechter oog fundus (pupil verwijd moet worden op dit moment) te verkrijgen bij de waargenomen door de microscoop . </li><li> Het faillissement van de juiste wereld door voorzichtig naar beneden te duwen gelijktijdig met twee vingers op de oogleden en gestaag houdt deze positie voor de rest van de procedure. </li><li> Met behulp van een steriele 30-gauge naald bevestigd aan een Luer-lock spuit, de hele wereld doorboren zijwaarts door het bindvlies en sclera grenzend aan de corneale limbus op het gebied van de pars plana (figuur 1) en alleen via de vaatvlies in het glasvocht holte. Verwijder de naald uit de opening. </li><li> Steriliseer de Hamilton naald met een alcoholdoekje. Teken de celsuspensie in de Hamilton spuit en steek de naald in de opening totdat de naald wordt gevisualiseerd door de microscoop achter de lens in het glasvocht in de buurt van het netvlies. Met de hulp van een tweede persoon terwijl de naald steeds in deze positie, druk de zuiger langzaam. Verwijder de naald. Indien nodig, gebruik dan een wattenstaafje om vocht te absorberen uit de opening. </li><li> Voorzichtig de druk van de oogleden naar de muis oogleden te sluiten. </li><li> Dien een druppel hypromellose aan elk oog en terug te keren dier verwarmde pad voor herstel. </li></ol> 5. Controle van de geïnjecteerde muizen en het oogsten van tumoren <ol><li> Dagelijks, onderzoekt de geïnjecteerde oog voor leukocoria (wit papillair reflex) en / of perioculaire distensie die meestal duidelijk wordt 2-4 weken na de injectie. </li><li> Zodra groei van de tumor wordt ontdekt, euthanaseren van dieren volgens de institutionele richtlijnen. </li><li> Als het oog en de tumor worden gedekt door de oogleden, gebruik dan de scalpel om twee incisies loodrecht op de ooglidspleet te maken en de huid flappen lift. </li><li> Onder visualisatie met behulp van de stereoscopische microscoop, maak een omtrek incisie aan de limbus, het verwijderen van het hoornvlies en de lens, en zorgvuldig het grootste deel van de tumormassa ontleden van de andere weefsels met behulp van Tweezers. Plaats de tumor in steriele RPMI-1640 media. </li><li> Gebruik een pincet om de open wereld langzaam te trekken uit het stopcontact. Om ervoor te zorgen een aangesloten oogzenuw, zodat tumor invasie kan worden gevisualiseerd, trekt de hele wereld tot de zenuw wordt blootgesteld en het gebruik van een schaar om de zenuw snijden zo lang mogelijk. Plaats in 10% formaline voor gewone verwerking voor histologisch onderzoek. </li></ol> 6. Representatieve resultaten: Retinoblastoom tumorspheres zal beginnen te blijken uit de gedesaggregeerde weefsel bijna onmiddellijk als ze zijn bevrijd van de tumormassa. Binnen 2-4 dagen zal er meer tumorspheres beginnen te vormen en zal in omvang toenemen. De bollen hebben de neiging om regelmatig zijn en in een goed gedefinieerde, secundaire membraan rond de totale (figuur 2) vertonen. Het dier meestal presenteert met leukocoria binnen 4 weken na de injectie (figuur 3b), gevolgd door de uitbreiding van de aardbol en uitzetting van de omliggende weefsels 5-8 weken na de injectie als de tumor groeit (figuur 3c). <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Cross-doorsnede van de muis oog markering functies waarnaar in het protocol. <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Cultuur van menselijke retinoblastoom cellen in vitro afgebeeld op: a) 4x, en b) 10x objectiefvergroting. Retinoblastoom primaire tumor cellen produceren tumorspheres met een regelmatige sferoïde vorm en een heldere buitenste membraan. Schaal staven geven een) 500 micrometer, en b) 200 micrometer. <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3 Eye of Rag2 -. / - Muis met een) normale functies, b) leukocoria indicatie van een tumor massa in glasachtig holte, en c) een grote tumormassa het vullen van de hele wereld met de bijbehorende perioculaire buik, intraoculaire bloeding.

<ol><li>Chèvez-Barrios, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+and+Nonmetastatic+Models+of+Retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Metastatic and Nonmetastatic Models of Retinoblastoma.</a> Am. J. Pathol. 157, 1405-1412 (2000).</li>
<li>Suber, M. L., Hurwitz, M. Y., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+consequences+of+intraocular+administration+of+modified+adenoviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Immune consequences of intraocular administration of modified adenoviral vectors.</a> Hum. Gene Ther. 12, 833-838 (2001).</li>
<li>Mallam, J. N., Hurwitz, M. Y., Mahoney, T., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Gene+Transfer+into+Retinal+Cells+Using+Adenoviral+Vectors%3A+Dependence+on+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficient Gene Transfer into Retinal Cells Using Adenoviral Vectors: Dependence on Receptor Expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1680-1687 (2004).</li>
</ol>

Experimenten op dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door het Baylor College of Medicine IACUC comite.

De techniek hierin beschreven vergemakkelijkt de verspreiding retinoblastoom tumoren in hun intra-oculaire, intravitreale milieu. De intra-oculaire injectie techniek is in het verleden gebruikt om tumoren van retinoblastoom-afgeleide cellijnen 1, alsmede van virale vectoren voor de intra-oculaire gentherapie 2,3 leveren creëren. Deze techniek is nu met succes ingezet voor de menselijke retinoblastoma tumoren produceren door directe injectie van cellen uit de primaire tumor en de injectie van tumorspheres evenals seriële vermeerdering van xenograft tumoren. Zichtbaar bewijs van tumorvorming (meestal leukocoria) is meestal het eerst opgemerkt binnen 4 weken, waarna de intra-oculaire bloeding en uitzetting van de wereld en / of weefsels rond de baan te ontwikkelen binnen 5-8 weken. Een minderheid van de geïnjecteerde muizen verwonden de geïnjecteerde oog, wat leidt tot permanente sluiting van de oogleden. In deze gevallen uitzetting is het enige teken van tumorvorming. Oprichting van muizen xenograft tumoren is niet succesvol geweest met alle menselijke retinoblastoom tumoren, hoewel de verspreiding van gevestigde xenograft tumoren is zeer succesvol. Deze observatie suggereert dat bepaalde kenmerken van de primaire tumor, zoals de invasiviteit en de mate van differentiatie of een andere onbekende factor, kan het vermogen van deze tumoren te volharden in het muizen-oculaire omgeving beïnvloeden. De hoeveelheid weefsel dat kan worden verkregen uit een menselijke retinoblastoom tumor is vrij klein, en er zijn belangrijke beperkingen op het vermogen om menselijke cultuur retinoblastoom cellen in vitro, zoals beperkte levensduur, het verlies van vaste tumor histologie en veranderingen in het cellulair fenotype. Dit protocol geeft een relatief eenvoudige manier om de menselijke tumoren verspreiden en zorgen voor een muizenmodel van de menselijke ziekte. Dit maakt verder in vitro en in vivo experimenten van de biologie van retinoblastoom en langer het onderhoud van de tumor buitenkant van de patiënt.

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam </th><th> Vennootschap </th><th> Catalog # </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Fenylefrine HCl 2,5% </td><td> Bausch &amp; Lomb </td><td> 053-11 </td><td> Oogdruppels </td></tr><tr><td> 30-ga Naald </td><td> BD </td><td> 305128 </td><td> Regelmatig bevel </td></tr><tr><td> 10-mL Luer-Lock spuit </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 3/10-cc insulinespuit </td><td> BD </td><td> 328431 </td><td></td></tr><tr><td> Alcoholdoekjes </td><td> BD </td><td> 326895 </td><td></td></tr><tr><td> 6-well plaat, Tissue Culture behandeld </td><td> BD </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Proparacaine HCl 0,5% </td><td> Butler AHS </td><td> 017239 </td><td> Oogdruppels </td></tr><tr><td> Ketamine HCl 100mg/ml </td><td> Fort Dodge </td><td> 4402A </td><td></td></tr><tr><td> 10-pi Hamilton spuit </td><td> Hamilton Company </td><td> 7648-01 </td><td></td></tr><tr><td> 32-ga Hamilton Naald </td><td> Hamilton Company </td><td> 7803-04 </td><td> Custom lengte - 0,5 &quot; </td></tr><tr><td> Neurobasal-A Media </td><td> Invitrogen </td><td> 10888-022 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 Supplement Minus vitamine A, 50X </td><td> Invitrogen </td><td> 12587-010 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI-1640 Media </td><td> Mediatech </td><td> 10-040-CV </td><td></td></tr><tr><td> Niet-essentiële Amino Acid Solution, 100X </td><td> Mediatech </td><td> 25 tot 025-CI </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamine, 100X </td><td> Mediatech </td><td> 25 tot 005-CI </td><td></td></tr><tr><td> Wegwerp # 11 Scalpel </td><td> Miltex </td><td> 4-411 </td><td></td></tr><tr><td> Knaagdieren Anesthesie Combo </td><td> n / a </td><td> n / a </td><td> In-house apotheek formulering (ketamine 37,6 mg / ml, xylazine 1,92 mg / ml, acepromazine 0,38 mg / ml) </td></tr><tr><td> Recombinante humane epidermale groeifactor (EGF) </td><td> STEMCELL Technologies </td><td> 02633 </td><td> Reconstrueren bij 10 ug / ml stockoplossing </td></tr><tr><td> Recombinant humaan basische fibroblast groeifactor (bFGF) </td><td> STEMCELL Technologies </td><td> 02634 </td><td> Reconstrueren bij 10 ug / ml stockoplossing </td></tr><tr><td> OMS-75 Operation Microscoop </td><td> Topcon Medical Systems </td><td> OMS-75 </td><td> Dit model is niet meer leverbaar </td></tr><tr><td> 10% formaline </td><td> VWR </td><td> 95042-908 </td><td></td></tr></tbody></table>

oprichting en voortplanting van human retinoblastoom tumoren in het immuunsysteem van deficiënte muizen

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Het kweken van retinoblastoom tumorcellen in gedefinieerde stamcellen media leidt tot primaire tumorspheres die kunnen worden geteeld en in stand gehouden voor slechts een beperkte tijd. Deze gekweekte tumorspheres kunnen vertonen duidelijk verschillende cellulaire fenotypes in vergelijking met de oorspronkelijke tumoren. Bewijs dat gekweekte cellen de mogelijkheid van de vorming van nieuwe tumoren hebben, is belangrijk te weten dat gekweekte cellen-model zorgen voor de biologie van de oorspronkelijke tumor. Hier presenteren wij een protocol voor het uitdragen van de menselijke retinoblastoom tumoren in vivo Rag2 - / - immuun deficiënte muizen. Gekweekte menselijke retinoblastoom tumorspheres van de lage passage of cellen die verkregen uit vers geoogste menselijke retinoblastoom tumoren direct geïnjecteerd in het glasachtig lichaam holte van muizen ogen vormen tumoren binnen 2-4 weken. Deze tumoren kunnen worden geoogst en ofwel verdere gepasseerd in de ogen van muizen in vivo of gekweekt als tumorspheres in vitro. Propagatie is met succes uitgevoerd voor ten minste drie passages dus de oprichting van een voortdurende bron van menselijke retinoblastoom weefsel voor verdere experimenten. Wesley S. Bond en Lalita Wadhwa zijn co-first auteurs.

Een methode wordt beschreven voor de menselijke retinoblastoom tumoren verspreiden in muizen. Tumorcellen worden rechtstreeks geïnjecteerd in de ogen van het immuunsysteem van deficiënte muizen. Secundaire tumoren zijn met succes gebruik van beide cellen direct geoogst van menselijke tumoren en beschaafde tumorspheres.

Oprichting en Voortplanting van Human Retinoblastoom Tumoren in het immuunsysteem van deficiënte muizen

Het kweken van retinoblastoomtumorcellen in gedefinieerde stamcelmedia leidt tot primaire tumorsferen die slechts gedurende een beperkte tijd kunnen worden gegroeid en onderhouden ...

Het algemene doel van deze procedure is het vestigen van een orthotopisch retinoblastoomtumor in een immuundeficiënte muis, wat een handig model biedt voor verdere experimenten en de propagatie van de tumor mogelijk maakt. Dit wordt bereikt door eerst cellen uit een primaire tumor of xenograft-tumor te oogsten en tumorsferen in vitro te kweken. De tweede stap van de procedure is het injecteren van de gekweekte tumorcellen in de glasvochtruimte of de subretinale ruimte van het oog van een rag2-null immuundeficiënte muis.De derde stap van de procedure is het monitoren van de geïnjecteerde muizen op tekenen van tumorvorming, waaronder vergroting van de Leukocoria GLO en perioculaire distensie. De laatste stap van de procedure is het oogsten van de xenograft-tumor. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die orthotope tumorvorming in het muis-oog aantonen via histopathologisch onderzoek.Een visuele demonstratie van deze techniek is cruciaal vanwege de delicate aard van de intraoculaire injectie. Omliggende structuren kunnen gemakkelijk beschadigd raken als ze niet correct worden geïdentificeerd. Over het algemeen hebben personen die nieuw zijn aan deze methode moeite hiermee, omdat de plaatsing van de injectie in de glasvochtruimte precisie vereist om de tumorcellen op de juiste locatie af te leveren.Deze methode kan inzicht bieden in de biologie van retinoblastoomtumoren. Het kan ook worden toegepast op andere systemen, zoals de interoculaire toediening van vectoren voor genoverdracht. Bereid eerst vers gedefinieerd stamcelmedium voor in een steriele, voor weefselkweek behandelde schaal van 10 centimeter.Plaats het retinoblastoomtumorgeweefse en aspireer het overtollige transportmedium, waarbij voldoende medium wordt achtergelaten om uitdroging te voorkomen; desaggregeer het weefsel mechanisch met een scalpel met behulp van een kruislings snijtechniek, voeg onmiddellijk 100 µL gedefinieerd stamcelmedium toe aan het weefsel en verspreid het fijngehakte weefsel voorzichtig met de scalpel. Voeg vervolgens 10 mL gedefinieerd stamcelmedium toe aan de schaal. Incubeer de plaat bij 37 °C met 5% CO2 in een bevochtigde incubator en controleer dagelijks op troebelheid en pH-veranderingen.Sommige tumorsferen zouden bijna onmiddellijk uit het gedisrumpeerde tumorweefsel moeten ontstaan, waarbij de aantallen toenemen gedurende zeven tot 10 dagen totdat er voldoende nieuwe groei wordt waargenomen. Centrifugeer de tumorsferen daarna wekelijks bij 300 ×g gedurende vijf minuten. Resuspendeer ze in vers bereid gedefinieerd stamcelmedium en pipetteer dit 10 keer op en neer om grotere, centraal necrotische sferen te ontregelen en de vorming van nieuwe, gezonde sferen mogelijk te maken.Om gekweekte tumorsferen voor injectie voor te bereiden, worden de sferen voorzichtig overgebracht naar een conische buis van 15 milliliter. Pipetteer de sferen voorzichtig 10 tot 15 keer op en neer om ze te dissociëren. Tel de te injecteren cellen met een hemocytometer en gebruik trypan blauw om niet levensvatbare cellen uit te sluiten.Bereid zoveel injecties voor als nodig, afhankelijk van het aantal beschikbare cellen en de experimentele vereisten. Centrifugeer de buisjes vervolgens 5 minuten bij 300 ×g. Aspireer voorzichtig het supernatant en resuspendeer de cellen in vijf milliliter.Herhaal de centrifugatie- en aspiratiestappen met PBS nogmaals. Resuspendeer de cellen tot slot in 10 microliters steriele PBS per injectie. Om de dieren voor de procedure voor te bereiden, plaatst u een geanestheseerde muis op een warmtepad.Om de lichaamstemperatuur te handhaven, dient er één druppel propaan HCl in het rechteroog te worden toegediend, waarna men één minuut moet wachten. Dien vervolgens één druppel fenylefrine HCl toe in het rechteroog en wacht vijf minuten. Indien de pupil niet is gedilateerd, dient er nog een druppel te worden toegediend, waarna men opnieuw vijf minuten wacht.Plaats het geanestheseerde dier op zijn zij onder de microscoop en laat het hoofd rusten op gaas. Positioneer de rechterzijde naar boven en centreer het oog om een rode reflex van het rechteroog te verkrijgen. Om het fundus via de microscoop te observeren, wordt de rechterbol ondersteund door met twee vingers tegelijkertijd zachtjes op de oogleden te drukken.Houd deze positie stabiel gedurende de rest van de procedure. Gebruik een steriele naald van 30 gauge bevestigd aan een Luer-lock spuit. Puncteer de oogbol lateraal door het conjunctiva en de sclera nabij de cornea limbus in het gebied van de pars plana, en net door het choroidea in de vitreus holte.Verwijder de naald uit de opening. Steriliseer een Hamilton-naald met een alcoholdoekje. Trek de celsuspensie op in de Hamilton-spuit en voer de naald in via de opening totdat de naald via de microscoop zichtbaar is achter de lens in het glaslichaam, nabij het netvlies.Houd met behulp van een tweede persoon de naald stevig in deze positie terwijl de zuiger wordt ingedrukt, en verwijder de naald langzaam. Gebruik indien nodig een wattenstaafje om bloed of vloeistof uit de opening te absorberen. Laat de druk voorzichtig los om de oogleden van de muis te sluiten.Plaats het dier terug op een warmtemat voor het herstel. Onderzoek na de injectie dagelijks het oog op leukocorie. Dit wordt gewoonlijk twee tot vier weken na de injectie zichtbaar.Zodra tumorgroei is vastgesteld, wordt het dier geëuthanaseerd volgens de institutionele richtlijnen. Maak onder een stereomicroscoop een circumferentiële incisie bij de limbus, verwijder het hoornvlies en de lens, en dissekeer vervolgens voorzichtig het grootste deel van de tumormassa van de overige weefsels met behulp van pincetten. Plaats de tumor in steriel RPMI 1640.Gebruik een pincet om de geopende oogbol langzaam uit de oogkas te trekken totdat de oogzenuw zichtbaar is. Terwijl de oogbol voorzichtig uit de oogkas wordt getild, wordt een schaar gebruikt om de oogzenuw door te snijden, waarbij zoveel mogelijk zenuw aan de oogbol wordt gelaten om invasie van de tumor in de oogzenuw te kunnen beoordelen. Plaats het weefsel in 10% neutraal gebufferde formaline voor histologisch onderzoek.Hier is een voorbeeld van gekweekte tumorsferen. Na drie dagen zijn er slechts enkele tumorsferen zichtbaar tussen het gedisaggregeerde tumorweefsel. Na 10 dagen is het aantal tumorsferen echter toegenomen.De sferen vertonen een scherp begrensd buitenmembraan, zoals te zien is in de inzet rechtsboven enkele weken na injectie. De geïnjecteerde muis vertoont leukocorie; de witte pupilreflex wordt veroorzaakt door een tumor aan de achterzijde van het oog. In deze voorbeelden van h- en d-gekleurde oogsecties is links de xenograft-retinoblastoomtumor te zien die de glasvochtruimte vult, en rechts de afwezigheid van een dergelijke groei in het schijn-geïnjecteerde oog.Na het bekijken van deze video moet u een goed begrip hebben van hoe u gekweekte tumorcellen voorbereidt, hoe u correct een intraoculaire injectie in een muizenoog uitvoert en hoe u tumorprogressie monitort. Eenmaal beheerst, kan de injectietechniek in ongeveer 30 minuten per dier worden voltooid. Vergeet niet dat tumorcellen gevaarlijk kunnen zijn en dat er altijd voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen tijdens deze procedure, zoals het dragen van adequate PBM, inclusief laboratoriumjas en maskers. Menselijke kankercellen moeten altijd onder BSL-2-condities worden gehanteerd.

establishment-propagation-human-retinoblastoma-tumors-immune

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol beschrijft de isolatie en dissociatie van de muis medulloblastoom weefsel, en de daaropvolgende allografting van de tumorcellen in immuungecompromitteerde ontvangende muizen in om secundaire medulloblastoom te starten.

Intracraniële orthotope Allografting van Medulloblastoom cellen in Immunogecompromitteerde Muizen

Een formele demonstratie van het ontleden van een muis oog, wat resulteert in een hele berg van het retinale pigment epitheel.

Ontleding van een muis Oog voor een hele berg van de retinaal pigment epitheel

Het genereren en karakteriseren van tumorspecifieke T-cellen met gehumaniseerde muizen wordt hier beschreven. Human thymusweefsel en genetisch gemodificeerde humane hematopoietische stamcellen worden getransplanteerd in immunodeficiënte muizen. Dit resulteert in de bereiding van een op menselijke immuunsysteem waardoor in vivo onderzoek van anti-tumor immuunrespons.

Met behulp van de BLT Gehumaniseerd Muis als een Stem Cell gebaseerde Gene Therapy tumormodel

Hier presenteren we een protocol voor de voorbereiding en het stereotaxic beheer van allogene menselijke lymfocyten in immunodeficiëntie muizen uitvoering orthotopic menselijke primaire hersentumoren. Deze studie biedt een bewijs-van-concept voor zowel de haalbaarheid en antitumorale werkzaamheid van cellulaire immuuntherapie intrabrain-geleverd.

Stereotactische adoptief overdracht van cytotoxische immuuncellen in lymfkliertest modellen van Orthotopic mens Glioblastoma Multiforme Xenografts

Orthotopic humane lever gemetastaseerde ukalfs melanoom xenotransplantaatmodellen is Muismodellen werden gemaakt met behulp van chirurgische orthotopic implantatie technieken met patiënt-afgeleide tumor Brok en naald injectietechnieken met gekweekte menselijke ukalfs melanoom cellijnen.

Generatie van een lever Orthotopic humaan Ukalfs melanoom xenograft platform in Immunodeficiënte muizen

Hier beschreven zijn drie experimentele benaderingen voor het bestuderen van de dynamiek van HIV-infectie in gehumaniseerde muizen. De eerste maakt de studie van chronische infectie gebeurtenissen, terwijl de twee laatsten voor de studie van acute gebeurtenissen na primaire infectie of virale reactivatie.

Chronische, acute en Gereactiveerde HIV-infectie in gehumaniseerde Immunodeficiënte Muismodellen

We beschrijven een methode voor het genereren van humaan retinoblastoom (RB) door biallelische RB1-mutaties in menselijke embryonale stamcellen (hESC) te introduceren. RB-cellijnen kunnen ook met succes worden gekweekt met behulp van de geïsoleerde RB in een schaal.

Reconstrueer humaan retinoblastoom in vitro

Dit protocol schetst de generatie van muizen van het menselijk immuunsysteem (HIS) voor immuno-oncologische studies. Instructies en overwegingen bij het gebruik van dit model voor het testen van menselijke immunotherapeutica op menselijke tumoren die in dit model zijn geïmplanteerd, worden gepresenteerd met de nadruk op het karakteriseren van de reactie van het menselijk immuunsysteem op de tumor.

Testen van kankerimmunotherapeutica in een gehumaniseerd muismodel met menselijke tumoren

Het huidige protocol beschrijft de methode voor het opstellen van een patiënt-afgeleid xenotransplantaat (PDX) muismodel met behulp van humaan osteosarcoomweefsel.

Oprichting van een van de patiënt afgeleid xenotransplantaatmuismodel met humaan osteosarcoomweefsel

In de afgelopen jaren zijn nieuwe generatie endoscopen ontpopt als belangrijk diagnostisch onderzoek hulpmiddelen voor het evalueren van muizen colitis en colorectale tumoren. We presenteren hier een gedetailleerd protocol voor endoscopische beoordeling van ontsteking en colorectale tumoren in muizen, evenals een nieuw scoresysteem dat decimale identifiers gebruikt om de endoscopische ernst van colitis en colorectale tumoren documenteren.

Flexibele colonoscopie in Muizen aan de ernst van colitis en Colorectale Tumoren Evalueer behulp van een gevalideerde Endoscopische Scoring System

Leer hoe je humane retinoblastoomtumoren kweekt in immuundeficiënte muizen via intraoculaire injectie. Deze methode maakt orthotopische tumorvorming mogelijk voor onderzoek naar tumoreigenschappen en behandelingsreacties.

Oprichting en Voortplanting van Human Retinoblastoom Tumoren in het immuunsysteem van deficiënte muizen

Meer video's verkennen