Name: In kaart brengen en de toepassing van Enhancer-trap Flippase Expression in larvale en volwassen Drosophila CNS (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Leer de FINGR-methode voor precisiecontrole van genexpressie in het zenuwstelsel van Drosophila. Deze techniek maakt klonale analyse en neurale circuitmapping mogelijk voor gedragsonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken een intern fonds van de Universiteit van Oklahoma (tot BZ) en een subsidie ​​van NSF (IOS-1025556, voor BZ en RAB) voor de ondersteuning van TRF, RAB, XP, AAO, MLW, CAS, en dit onderzoek. Een NIH-subsidie ​​(RO1 NS060878, tot BZ) gedeeltelijk ondersteund RAB. RAB erkent een NIH NRSA (T32 NS07292) training subsidie ​​aan Brandeis University, en een NIH-subsidie ​​(RO1 GM21473) uitgereikt aan Jeffrey Hall op Brandeis, ter ondersteuning van de vroege stadia van deze studie. Wij danken Jeffrey Hall voor zijn voortdurende aanmoedigingen voor dit project. Wij danken dr. Kristin Scott voor het verstrekken van ons met de kuip P&gt; Gal80&gt; stam.

1. Drosophila stammen <ol><li> GAL4 bestuurder: GMR-Gal4, die Gal4 uitdrukt in fotoreceptorcellen. </li><li> UAS lijnen UAS-MJD78Q (of UAS-polyQ), die neurale degeneratie veroorzaakt in Gal4-expressie cellen. UAS-GFP, dat GFP uitdrukt in Gal4-expressie cellen. </li><li> FLP lijnen ey-FLP, die FLP uitdrukt in fotoreceptoren en in subsets van hersengebieden. ET-FLPx2 lijnen, die zijn enhancer-trap regels met twee exemplaren van FLP (FLP-IRES-FLP). We hebben gegenereerd ~ 1000 ET-FLP lijnen (Bohm et al.., 2010), waarvan de expressie patronen moeten nog worden gekarakteriseerd. We beschrijven hier de karakterisering van het expressiepatroon van selecteren ET-FLPx2 in de larven en volwassen vlieg centrale zenuwstelsel (CZS). </li><li> FLP verslaggever yw, actine P&gt; CD2&gt; Gal4, UAS-GFP (Pignoni &amp; Zipursky, 1997), die rapporteert het expressiepatroon van ET-FLPx2 door actine P&gt; Gal4, UAS-GFP op FLP-gemedieerde recombinationele excisie van&gt; CD2. </li><li> Twee elkaar aanvullende Gal80-converting tools Tub P&gt; Gal80&gt; (Gordon &amp; Scott, 2009), de flip-out construct, die constitutief Gal80 uitdrukt in alle weefsels gedreven door een sterke tubuline promotor. Bij het FLP-gemedieerde recombinatie, is&gt; Gal80 gedraaid uit en Gal80 uitdrukking wordt beëindigd slechts in ET-FLPx2 expressie weefsels. Tub P&gt; stop&gt; Gal80 (Bohm et al.., 2010), de flip-in construct, die niet Gal80 uiten onder normale omstandigheden. Gal80 uitdrukking is ingeschakeld door de tubuline promotor alleen in ET-FLPx2 expressie weefsels waarin FLP klapt&gt; te stoppen en flips in Gal80. </li><li> Vliegen voor het testen van Forever activiteit in de samengestelde oog GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; stop&gt; Gal80 (Bohm et al., 2010.), Die heeft degenereren en depigmented ogen. In FLP-expressie fotoreceptorcellen, is polyQ uitdrukking uitgeschakeld na Gal80 flip-in. GMR-Gal4, UAS-polyQ; (. Bohm et al., 2010) bad P&gt; Gal80&gt;, dat de normale ogen heeft. In FLP-expressie fotoreceptorcellen, is polyQ uitdrukking ingeschakeld na Gal80 flip-out. </li></ol> 2. Reagentia Fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS, 1X), pH 7,4. 4% paraformaldehyde (PFA), verdund in PBS van 16% PFA, EM waardering (Cat # 15710, Electronic Microscopie Sciences, Hatfield, PA) PBT, 1XPBS met 0,1% Triton-X 100 (Sigma) Anti-Elav (mAb, 9F8A9; Developmental Studies Hybridoma Bank, de Universiteit van Iowa), vlekken alle neuronen in Drosophila. Anti-Repo (mAb 8D12; Developmental Studies Hybridoma Bank, de Universiteit van Iowa) vlekken gliale cellen in Drosophila. Alexa 594 kip tegen de muis secundair antilichaam (Invitrogen) 3. In kaart brengen van de expressie patroon van de enhancer-trap FLPx2 lijnen (* kritische stappen) <ol><li> Verzamel maagden vrouwtjes uit de yw, actine P&gt; CD2&gt; Gal4, UAS-GFP lijn en cross naar mannen van de individuele ET-FLPx2 lijnen. De voormalige dient als een GFP reporter voor weefsel expressie van ET-FLP. </li><li> * Prepareer zwervende 3 e instar F1 larven, behouden de CNS (dat wil zeggen, de hersenen en het ventrale zenuw koord, VNC) en het lichaam muur, fix voor een uur in 4% PFA op ijs, was 3X met ijskoude PBS, gevolgd door 3x wassen met PBT. Ontleding <ol><li> Verwijder de zwervende 3 e instar F1 larven en plaats ze in een schone Sylgard schaal (35 mm x 10 mm petrischaal gevuld met 2 gram Sylgard - gemengd volgens de instructies productie). <ol><li> Verwijder voedselresten met penseel </li></ol></li><li> Vul de schaal met ijs-koude 1XPBS en plaats op ijs om de larven verdoven </li><li> Houd de mond haken van een larve met een pincet en pak de cuticula de buurt van de uitbreiding van anterior luchtgat met een andere pincet en pel de cuticula naar de achterkant einde. Het centrale zenuwstelsel zal worden gehecht aan de mond te haken samen met de speekselklieren, darm, en imaginair schijven. </li><li> Verwijder het overtollig weefsel en imaginaire schijven rondom het centraal zenuwstelsel. </li><li> Overdracht van de CNS in een PBS-gevulde 3 goed pyrex schotel. <ol><li> Een gesiliconiseerde P200 pipetpunt kan gebruikt worden om te voorkomen dat het drogen van het weefsel. </li></ol></li><li> Fix voor 1 uur in 200 ul van 4% PFA op ijs. <ol><li> Zorg ervoor dat de CNS volledig wordt ondergedompeld in de PFA. <ol><li> Als de CNS drijvers, suggereert dit meestal dat het centrale zenuwstelsel niet goed gereinigd van het omringende weefsel. </li></ol></li></ol></li><li> Was 3X met ijskoude PBS, gevolgd door 3x wassen met PBT. </li></ol></li><li> * Ontleden de CNS van volwassen F1 vliegen. <ol><li> Verdoven de vliegen met CO 2 of plaats de vliegen die in een leeg flesje op ijs gedurende 10 minuten. </li><li> Plaats volwassen vliegen in een 95% EtOH gevulde glazen schaal op ijs gedurende 30 sec. </li><li> Breng de volwassen vliegen in een 1XPBS gevulde glazen schaal op ijs. <ol><li> Was 3X met ijskoude 1X PBS om de resterende EtOH te verwijderen </li></ol></li><li> Plaats een vlieg in een 35mm Sylgard schaal gevuld met ijskoud 1X PBS </li><li> Plaats de buikzijde naar boven en steek een klein insect pen (minutiens pins 0,1 mm) halverwege de buik. <ol><li> Met behulp van een tang houden de basis van de benen en verwijder de benen met een ander paar pincetten. </li></ol></li><li> Verwijder de kop cuticula <ol><li> Terwijl grijpen de proboscis met een pincet, een andere plaats onder het oog en schil de cuticula de richting van de dorsale middellijn van de vlieg hoofd. </li><li> Pak het andere oog en verwijder de resterende cuticula aan de andere kant. </li><li> Met behulp van scherpe pincet en / of aangescherpt wolfraam naald, verwijder tracheale weefsel rondom de hersenen <ol><li> Verkeerd reinigen van de trachea zal resulteren in een sterke auto-fluorescentie, belemmeren GFP expressie, en laat de hersenen te zweven tijdens de vaststelling </li></ol></li></ol></li><li> VNC Dissection <ol><li> Verwijder de thoracale cuticula <ol><li> Vanaf het achterste einde van de thorax, plaats twee tangen aan elke zijde van de 3 e preepisternum (dat wil zeggen, grijpen de basis van de achterpoten). </li><li> Voorzichtig los van de cuticula uit de buurt van de ventrale middellijn lijn, herhaal dit tot je bij de basis van de hals. </li><li> Duw de twee helften van de borstkas cuticula het blootstellen van de VNC </li></ol></li><li> Volgende Verwijder de buik van de thorax. Hoewel het gebruik van een tang om de borstkas te houden bij de tweede poot basis, gebruik dan een andere pincet om de buik bij de 1e buik sternite grijp en trek de buik uit te schakelen. </li><li> Om de VNC te verwijderen uit de omliggende thoracale weefsel. Houd de humerus gebied met een pincet en met een andere pincet zachte traan weg het grootste deel van de thoracale karkas. </li><li> Op dit punt moet er een ring van bindweefsel rondom de cervicale bind (nek) zijn. Met behulp van twee tangen uit elkaar scheuren van de ring. </li><li> Verwijder eventuele overtollige thoracale weefsel rondom de VNC </li></ol></li><li> Overdracht van de hersenen en VNC tot 9-goed pyrex schotel met 1X PBS op ijs <ol><li> Een gesiliconiseerde P200 pipetpunt kan gebruikt worden om te voorkomen dat het drogen van het weefsel </li></ol></li></ol></li><li> * Fix de volwassen CNS gedurende 1 uur in 4% PFA op ijs en was 3X met ijskoude PBS en 3x met PBT. </li><li> Incubeer de volwassen CZS voorbereiding of de larvale CZS en het lichaam muur bij 4 ° C gedurende de nacht met antilichamen om ofwel neuronen (anti-Elav, 01:10) of glia (anti-Repo. 1:10). Was de voorbereiding 5x met PBT. </li><li> Incubeer met volwassen of larvale voorbereiding met Alexa 594 kip tegen de muis secundair antilichaam (1:100) bij kamertemperatuur gedurende 2 uur, en was de voorbereiding met PBS. </li><li> Monteer de larven of volwassen CZS op een dia. Voor het behoud van de natuurlijke vorm van het centrale zenuwstelsel, gebruik dan een O-vormige plastic ring (Clear Versterking Label, Avery Dennison, Office Products, Brea, CA) op de dia als een mini-brug naar het dekglas te schorten. </li><li> Onderzoek de voorbereiding voor GFP en Elav (of Repo) expressie patronen onder een fluorescentiemicroscoop. </li></ol> 4. De toepassing van twee complementaire Gal80-converting tools in repressie Gal4 in fotoreceptoren <ol><li> Flippen Gal80 plaats via bad P&gt; Gal80&gt; (figuur 5A). <ol><li> Verzamel mannetjes van de GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; Gal80&gt; lijn. Merk op dat de samengestelde ogen normaal zijn in deze vliegen. </li><li> Mate met ey-FLP maagden. </li><li> Verzamel de F1 vliegen en onderzoekt het oog fenotype. </li></ol></li><li> Flippen Gal80 in via bad P&gt; stop&gt; Gal80 (Figuur 5B). <ol><li> Verzamel GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; stop&gt; Gal80 mannelijk vliegen en onderzoekt het oog fenotype. Let op de gedegenereerde en gedepigmenteerde ogen in deze vliegen in vergelijking met wild-type stammen (Canton-S) </li><li> Mate met ey-FLP maagden; </li><li> Verzamel de F1 vliegen en onderzoekt het oog fenotype. </li></ol></li><li> Selecteer ET-FLPx2 lijnen met expressie in fotoreceptorcellen </li></ol> Stappen 4.1 en 4.2 kunnen worden herhaald met ET-FLPx2 lijnen die uitdrukken Forever in een subset van fotoreceptorcellen. Als alternatief, ofwel de GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; stop&gt; Gal80 vliegt of de GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; Gal80&gt; vliegen kunnen worden gekruist om individuele ET-FLPx2 lijnen voor het screenen op lijnen die te uiten FLP in fotoreceptorcellen. Waardevolle ET-FLPx2 lijnen zijn die enige uitdrukkelijke Forever in een subset of enkel fotoreceptorcellen (Figuur 6). 5. Representatieve resultaten De expressie patroon van een specifiek ET-FLPx2 lijn kan gemakkelijk worden onderzocht en gedocumenteerd in de F1 larven of volwassen vliegen afgeleid van de kruising tussen yw, actine P&gt; CD2&gt; Gal4, UAS-GFP maagden en ET-FLPx2 mannen (figuur 1) . Typisch, drie tot vijf herhalingen van de F1-dieren worden ontleed en onderzocht om de reproduceerbaarheid van de FLP expressiepatroon (Bohm et al.., 2010) te bepalen. (figuur 3 &amp; 4). De resultaten weergegeven in Figuur 7 illustreert de effectiviteit van Gal80 flip-in en flip-out systemen in intersectionele repressie van Gal4 volgende FLP-gemedieerde recombinatie. De kuip P&gt; stop&gt; Gal80 bouwen lijkt niet aan een lekkende uitdrukking van Gal80 (op basis van de uniforme degeneratie en depigmentatie van de fotoreceptoren) hebben, en toch is het 100% effectief in flipping Gal80 in met de hulp van eyFLP te onderdrukken GMR- GAL4 en het herstel van het oog naar de normale optredens (fig. 7A). Integendeel, bad P&gt; Gal80&gt; volledig onderdrukt GMR-Gal4 vóór de invoering van de eyFLP. Volgende Gal80 flip-out,, GMR-Gal4 drives UAS-polyQ expressie leidt tot degenereren en depigmented ogen (Fig. 7B). In dit voorbeeld hebben we gebruik gemaakt van een pan-photorecetor Forever voor de fotoreceptor 'circuits' kaart, maar niet onderzoekt de gedragsmatige gevolgen. Met behulp van een soortgelijke aanpak met gedragsmatig relevante Gal4 lijnen, hebben we in kaart gebracht deel van de CCAP-Gal4 circuit reguleren vleugel expansie in volwassen vliegen (Bohm et al.., 2010). Wij zijn van mening dat de FINGR methode zal waardevol zijn in het helpen ons begrip van de neuronale basis van gedrag. <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. . Onderzoekt het expressiepatroon van een ET-FLPx2 line De FLP expressie patroon (blauwe ovalen) van een ET-FLPx2 lijn kan worden bepaald door kruising van een ET-FLPx2 man (linksboven) met een actine P&gt; CD2&gt; Gal4; UAS- GFP maagd (rechtsboven). Ubiquitous Actin P&gt; Gal4 uitdrukking in het ouderlijk vrouw wordt gehinderd door het invoegen van de FRT (grijze driehoeken) geflankeerd CD2 volgorde. In de F1 nakomelingen, Forever zal accijnzen de CD2 serie, waardoor Actin P&gt; Gal4 aan UAS-GFP expressie rijden. <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Expressiepatroon van een ET-FLPx2 lijn in het larvale en volwassen centrale zenuwstelsel. Deze beelden tonen het CNS (hersenen en ventrale zenuw koord, VNC) ontleed van de nakomelingen van de kruising yw, actine-P&gt; CD2&gt; Gal4, UAS-GFP ouders om de ET-FLPx2 173A lijn. Door recombineren de&gt; CD2&gt; cassette, FLP activeert actine P&gt; GAL4 expressie (de daaruit voortvloeiende uitdrukking van UAS-GFP). Vandaar dat de GFP patroon rapporten FLP-expressie brengende cellen. Paneel A toont de larvale FLP expressiepatroon terwijl paneel B geeft de volwassen expressiepatroon in de lijn 173A. <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Karakterisering van celtypen die flippase uiten in ET-FLPx2 Line # 688A. A, A samengestelde afbeelding van een vaste F1 3 e instar larve gekleurd met anti-REPO uit een kruising tussen ET-FLPx2 regel # 688A en een GFP Flippase meldlijn. BD, Een hoge vergroting (Zeiss Plan-Apochromat 63x olie) opvatting van de achterste einde van een VNC uit een 3 e instar larven. <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4. Karakterisering van celtypes in het lichaam van de paddestoel ET-FLPx2 Line # 150. AC, Een hoge-vergroting afbeelding (63x olie-immersie) van de paddestoel lichaam van een vaste F1 3e instar larve gekleurd met anti-repo. <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig5.jpg" alt="Figuur 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 5"> Figuur 5. Illustratie van Gal80 Flip-in en Flip-out Strategies. A. In de flip-out strategie, tubuline promotor-driven Gal80 (Tub P&gt; Gal80&gt;) is constitutief actief, wat resulteert in de onderdrukking van GMR-Gal4 en een wild-type eye fenotype (rode ogen). Deze repressie wordt verwijderd door de introductie van FLP (paars), die Gal80 out (midden, rood) flip en laat GMR-Gal4 naar UAS-polyQ uitdrukking rijden. Dit resulteert in fotoreceptorcel degeneratie (geïllustreerd door witte stippen in het oog). B. In het omgekeerde van de vorige strategie, is tubuline promoter-driven Gal80 uitdrukking onderbroken door FRT (grijze driehoek) geflankeerd "stop" stopcodon. Bij het ontbreken van Gal80, GMR-Gal4 bindt aan UAS-polyQ waardoor neuronale degeneratie in fotoreceptoren (geïllustreerd door witte stippen in het oog). Door het kruisen van de GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; stop&gt; GAL80 mannen met maagdelijke vrouwtjes die FLP te drukken in de fotoreceptorcellen, FLP (paars) zal recombinatie katalyseren op de FRT sites, weg te snijden van de "stop" codon (midden, rood), waardoor voor Gal80 expressie en onderdrukking van GMR-Gal4. Deze behoudt zich het neurodegeneratie in fotoreceptorcellen (geïllustreerd door het ontbreken van wHite stippen in het oog). <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig6.jpg" alt="Figuur 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 6"> Figuur 6. De toepassing van de methode in FINGR flipping Gal80 met behulp van ET-FLPx2 Line # 688A F1 nakomelingen van een kruising tussen ET-FLPx2 regel # 688A maagd voor GMR-Gal4, UAS-polyQ;. TubP&gt; GAL80 man. Het ontbreken van pigment in het midden van het oog ommatidia vertegenwoordigt FLP uitdrukking in regel # 688A. In dit gebied Gal80 onderdrukking van de GMR-Gal4 was opgelucht waardoor de Gal4 om UAS-polyQ rijden. <img src="/files/ftp_upload/2649/2649fig7.jpg" alt="Figuur 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 7"> Figuur 7. De toepassing van de methode in FINGR omkeren Gal80 in of uit om Gal4 snijden in fotoreceptoren. A. De kuip P&gt; stop&gt; Gal80 flip-in systeem beperkt GAL4 uitdrukking in een Forever-afhankelijke manier. In GMR-Gal4, UAS-polyQ; bad P&gt; stop&gt; GAL80 vliegt, fotoreceptorcellen zijn gedegenereerd en pigmentloze (links vliegen). Na de introductie van eyFLP, is Gal80 uitgedrukt in fotoreceptorcellen, wat resulteert in volle repressie van de GMR-Gal4, die op zijn beurt schakelt de uitdrukking polyQ en produceert vliegt met normale ogen (rechts vliegen). B. De kuip P&gt; Gal80&gt; flip -out systeem werkt in de tegenovergestelde manier als de kuip P&gt; stop&gt; Gal80 flip-in systeem. Tub P&gt; Gal80&gt; constitutief onderdrukt GAL4 en onderdrukt de uitdrukking van polyQ (links vliegen, met normale ogen). Na de introductie van eyFLP, is Gal80 gedraaid uit fotoreceptorcellen, het verlichten van de onderdrukking van de GMR-Gal4 en het draaien op de expressie polyQ. Dit leidt tot vliegt met degenereren en depigmented ogen (rechts vliegen).

<ol><li>Bohm, R. A., Welch, W. P., Goodnight, L. K., Cox, L. W., Henry, L. G., Gunter, T. C., Bao, H., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+mosaic+approach+for+neural+circuit+mapping+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A genetic mosaic approach for neural circuit mapping in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 16378-16383 (2010).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Bruno, B., Holbro, N., Reichert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycomb+group+genes+are+required+for+neural+stem+cell+survival+in+postembryonic+neurogenesis+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Polycomb group genes are required for neural stem cell survival in postembryonic neurogenesis of Drosophila.</a> Development. 134, 1091-1099 (2007).</li>
<li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GAL4+system+in+Drosophila%3A+a+fly+geneticist%27s+Swiss+army+knife%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife.</a> Genesis. , 34-341 (2002).</li>
<li>Gordon, M. D., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+control+in+a+Drosophila+taste+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Motor control in a Drosophila taste circuit.</a> Neuron. 61, 373-384 (2009).</li>
<li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+for+studies+of+gene+function+in+neuronal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 22, 451-461 (1999).</li>
<li>McGuire, S. E., Le, P. T., Osborn, A. J., Matsumoto, K., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+rescue+of+memory+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal rescue of memory dysfunction in Drosophila.</a> Science. 302, 1765-1768 (2003).</li>
<li>Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conditional+tissue+specific+transgene+expression+system+using+inducible+GAL4%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A conditional tissue specific transgene expression system using inducible GAL4.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98, 12596-12601 (2001).</li>
<li>Pignoni, F., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Drosophila+eye+development+by+decapentaplegic%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Induction of Drosophila eye development by decapentaplegic.</a> Development. 124, 271-278 (1997).</li>
<li>Roman, G., Endo, K., Zong, L., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P%5BSwitch%5D%2C+a+system+for+spatial+and+temporal+control+of+gene+expression+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 12602-12607 (2001).</li>
<li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li>
</ol>

Het Gal4/UAS systeem is op grote schaal en met succes gebruikt door Drosophilists voor diverse biologische studies (Brand &amp; Perrimon, 1993; Duffy, 2002). Tot op heden heeft de vlieg gemeenschap gegenereerde duizenden promoter-gedreven en enhancer-trap Gal4 lijnen. Een belangrijke kracht van de FINGR methode is dat het compatibel is met het Gal4/UAS-systeem, waardoor het mogelijk aanzienlijk uit te breiden van de kracht van Gal4 in Drosophila studies. Een belangrijke toepassing van de FINGR methode is te fine-tunen neurale circuits die ten grondslag liggen gedrag door Gal4/Gal80 kruispunt. Deze gedragingen kunnen omvatten, maar zijn niet beperkt tot, leren en geheugen, verkering, slaap en circadiane ritme. De FINGR methode kan ook gebruikt worden om de kritische neuronen die gevoelig zijn voor neurodegeneratie in het modelleren van de mens neurodegeneratieve ziekten zoals Alzheimer, amyotrofische lateraal sclerose (ALS), en de ziekte van Parkinson kaart. Evenzo kan brandpunten van neuronen of neurale circuits van cruciaal belang voor het bemiddelen cocaïne, alcohol en andere verslaving in kaart worden gebracht met behulp van de FINGR methode. Opgemerkt moet worden dat voorwaardelijke Gal4s (Osterwalder et al., 2001;.. Roman et al., 2001) kan worden gebruikt met de FINGR methode om tijdelijke controle van neurale circuits en gedrag te krijgen. Wijziging van de Gal80-omzetten van tools met behulp van een temperatuur-gevoelige Gal80 (Gal80 ts, McGuire et al.., 2003) kan produceren bad P&gt; stop&gt; Gal80 ts of bad P&gt; Gal80 ts&gt;, het toevoegen van meer tijdelijke flexibiliteit in het circuit manipulatie. Buiten het zenuwstelsel, de FINGR methode is ook van toepassing op het beperken van Gal4 expressie in subsets van cellen of het de vleugel of het been. De ET-FLPx2 lijnen zullen een waardevolle bron voor alle Drosophila biologen geïnteresseerd zijn in FRT / FLP-based klonale analyse (Xu &amp; Rubin, 1993), inclusief MARCM (Lee &amp; Luo, 1999). Ook wordt verwacht dat sommige ET-FLPx2 lijnen kunnen heatshock-FLP te vervangen voor de productie van reproduceerbare klonen en voor herhaalde morfologische en gedrags-analyses. Net als enhancer-trap Gal4 lijnen, de meeste ET-FLPx2 lijnen zijn waarschijnlijk specifiek worden uitgedrukt in de cellen van een belang. De meeste lijnen zullen uitdrukken FLP in de cellen van belang en in andere cellen of weefsels ook. Echter, zal het ontbreken van &#39;weefsel specificiteit&#39; van zowel Gal4 en ET-FLPx2 niet een grote zorg voor de FINGR methode zo lang als hun overlappende regio is wenselijk voor een bepaald experiment. FINGR is ontworpen om twee &#39;brede&#39; systemen om te zetten in een verfijnd is. De methoden geïllustreerd in deze protocollen zijn vrij standaard en moeten worden overgedaan. De belangrijkste waarschuwing stappen die de aandacht behoeven zijn de selectie en het gebruik van het fixeermiddel. Fixatieven andere dan de PFA moet worden vermeden omdat ze GFP signaal lessen. We hebben ook opgemerkt dat de dissectie schotel niet mag worden gebruikt voor de fixatie met PFA de mogelijkheid dat Forever uitdrukking niet betrouwbaar kan worden gerapporteerd door GFP te vermijden.

in kaart brengen en de toepassing van enhancer-trap flippase expression in larvale en volwassen drosophila cns

Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

De Gal4 / UAS binaire methode is krachtig voor gentherapie en neurale circuits manipulatie in Drosophila. Voor de meeste neurobiologische studies, echter, Gal4 uitdrukking is zelden weefsel-specifiek genoeg om voor een nauwkeurige correlatie van het circuit met gedragsproblemen uitlezingen. Om dit belangrijke hindernis, hebben we onlangs ontwikkelde de FINGR methode om een ​​meer restrictieve Gal4 uitdrukking in het weefsel van belang te bereiken. De FINGR methode bestaat uit drie onderdelen: 1) het traditionele Gal4/UAS systeem, 2) een set van FLP / FRT-gemedieerde Gal80 het omzetten van tools, en 3) enhancer-trap FLP (ET-FLP). GAL4 wordt gebruikt om de primaire neurale circuits van belang te definiëren. Paring de Gal4 met een UAS-effector, zoals de UAS-MJD78Q of UAS-Shi ts, regelt de neuronale activiteit, die op zijn beurt manifesteert zich door veranderingen in de vlieg gedrag. Met een extra UAS-reporter, zoals UAS-GFP, de neurale circuit betrokken zijn bij het specifieke gedrag kunnen gelijktijdig worden in kaart gebracht voor morfologische analyse. Voor Gal4 lijnen met een brede expressie, kan Gal4 expressie worden beperkt met behulp van twee complementaire Gal80-converting tools: tub P&gt; Gal80&gt; (&#39;flip out&#39;) en bad P&gt; stop&gt; Gal80 (&#39;flip in&#39;). Ten slotte kunnen de onderzoekers zet Gal80 aan of uit, respectievelijk, met de hulp van weefsel-specifieke ET-FLP. In de flip-in mode, Gal80 zal Gal4 uitdrukking waar Gal4 en ET-FLP kruisen onderdrukken. In de flip-out modus, zal Gal80 verlichten Gal4 repressie in cellen waarin Gal4 en FLP elkaar overlappen. Beide benaderingen kunnen de beperking van het aantal cellen in de Gal4 gedefinieerde circuits, maar in een omgekeerde patroon. De FINGR methode is compatibel met de uitgebreide collectie van Gal4 lijnen in het vliegen gemeenschap en zeer veelzijdig voor de traditionele klonale analyse en voor de neurale circuit in kaart brengen. In dit protocol, we zien het in kaart brengen van het FLP expressie patronen in een beperkt aantal ET-FLPx2 lijnen en de effectiviteit van de methode in FINGR fotoreceptorcellen. Het principe van de FINGR methode moet ook gelden voor andere genetische model organismen waarvan Gal4/UAS, Gal80, en FLP / FRT worden gebruikt.

Beschrijven we een Flippase-geïnduceerde intersectionele Gal80/Gal4 repressie (FINGR)-methode, waardoor weefsel-specifieke Forever om Gal80 expressiepatronen te bepalen. Waar Gal4 en FLP elkaar overlappen, is Gal4 uitdrukking ingeschakeld (Gal80 omgedraaid out) of uit (Gal80 gespiegeld in). De FINGR methode is veelzijdig voor klonale analyse en neurale circuit in kaart brengen.

In kaart brengen en de toepassing van Enhancer-trap Flippase Expression in larvale en volwassen Drosophila CNS

De Gal4/UAS-binaire methode is krachtig voor de manipulatie van genen en neurale circuits in Drosophila. Voor de meeste neurobiologische studies is Gal4 echter...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de expressie van GAL4 te verfijnen door gebruik te maken van weefselspecifieke lipase met GAL80-conversietools. Dit wordt bereikt door een collectie enhancer trap Philippe transgene vliegenlijnen te genereren en het expressiepatroon van lipase in het CZS in elke lijn te bepalen. Met behulp van een GFP-reporter kunnen immunochemie en GFP-rapportages glialen van neuronale expressie onderscheiden om GAL4-expressie te kruisen in lijnen van belang, ET-flip-lijnen, over de vliegen die een GAL80-conversietool in het nageslacht bevatten.Klonale analyse kan worden gebruikt om de verfijning van GAL4-expressie te analyseren, zoals in het oog. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden is dat enhancer-track-lijnen, samen met GAL80-converterende tools, kunnen worden gebruikt met een uitgebreide collectie GAL4-lijnen die al beschikbaar zijn binnen de vliegengemeenschap. Daarnaast kan dit concept worden uitgebreid naar andere GAL4-UAS-modellen in opkomende modelorganismen, zoals zebravisjes.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen bij het in kaart brengen van neurale circuits die ten grondslag liggen aan gedrag. Hoewel dit protocol het gebruik van flip base demonstreert in een subset van fotoreceptoren, kan de intersectionele methode worden toegepast op de analyse van andere weefsels, inclusief niet-neurale weefsels, naarmate er meer enhancer trap lipase-lijnen worden gekenmerkt.GAL4 US is een belangrijke techniek die op grote schaal wordt gebruikt door biologen die met vliegen werken. Een nadeel van de meeste GAL4-lijnen is dat de expressie te breed is om te worden gebruikt voor het in kaart brengen van hersengedrag met behulp van de FLP-methode. Het is niet mogelijk om de GAL4-expressie in de gewenste weefsels nauwkeurig af te stellen zonder een FLP-transgen te gebruiken om de expressie van GAL4-expressielijnen gedeeltelijk te beperken.Het is eerst nuttig om het expressiepatroon van het ET flip x twee-transgeen in larven in een laat ontwikkelingsstadium en in volwassenen te kennen om de expressie van flip a in het CZS te visualiseren. Zet een kruising op tussen mannetjes met het ET t flip X twee-transgeen van belang en maagdelijke vrouwtjes die een GFP-reporter voor et-flip-expressie dragen. Verzamel dwalende F1-larven in het derde stadium voor dissectie. Plaats deze in een schone S-guard schaal, verwijder eventueel vuil met een penseel en spoel de schaal eenmaal af met 1× PBS.Vul de schaal nu met ijskoud 1× PBS om de larven te anesthetiseren. Om het CZS van een larve te bereiken, houdt u de mondhaak vast met een pincet. Pak de cuticula nabij de uitstekende anterior sfeer vast en pel deze naar achteren. Het CZS blijft samen met enkele andere structuren aan de mondhaak bevestigd.Verwijder nu met een pincet alle overtollige structuren rondom het CZW terwijl u het CZW disseceert. Breng deze individueel over naar een Pyrex-schaal gevuld met PBS. Zodra alle CZW's zijn gedisseceerd, fixeer uncomplicated deze door ze volledig onder te dompelen in 200 µL 4% PFA op ijs.Als een CZS drijft, is het niet volledig gereinigd van al het omringende weefsel. Mocht dit gebeuren, gebruik dan een pincet om het CZS opnieuw in het fixeerder te dompelen na fixatie gedurende 15 minuten, was het weefsel 3 keer met ijskoud PBS en was het weefsel vervolgens nog drie keer in ijskoud PBT. Het weefsel is nu klaar om te worden afgebeeld, te worden gelabeld met antilichamen of om later te worden bewaard in PBT bij vier graden Celsius.Kleuring van dezelfde kruising die is gebruikt om larven te maken; verzamel F1-adulten vóór de dissectie. Dompel vijf tot 10 vliegen gedurende 30 seconden onder in gekoelde 95% ethanol om de waslaag op het oppervlak van de cuticula te verwijderen. Om de ethanol te verwijderen, was de adulten drie keer met ijskoud 1x PBS en breng na de derde wasbeurt één van hen over naar een sil guard-schaaltje van 35 millimeter gevuld met ijskoud 1x PBS om de adult voor te bereiden voor dissectie.Plaats het dier met de ventrale zijde naar boven en steek een minion-pin in het midden van het abdomen. Begin de dissectie door de poten met een pincet te verwijderen. Verwijder vervolgens de cuticula van de kop door de kop bij de steunen vast te zetten en tegelijkertijd de cuticula van onder het oog naar de bovenkant van de kop af te pellen.Verwijder voorzichtig met scherpe pincetten het omliggende vetweefsel van de hersenen, aangezien vetweefsel een sterke autofluorescentie vertoont en ervoor zorgt dat de hersenen gaan drijven tijdens het fixeren. De hersenen vormen slechts een deel van het volwassen CZS. Het andere deel is het ventrale zenuwkoord of VNC in de thorax, dat ook gedissekeerd moet worden.Verwijder eerst de thoracale cuticula door de vlieg bij de basis van het achterpootje vast te zetten en de thoracale cuticula voorzichtig af te trekken tot aan de basis van de nek. Ten tweede: spreid voorzichtig de twee helften van de thoracale cuticula om het VNC bloot te leggen. Ten derde: verwijder het abdomen van de thorax door dit bij de basis van het tweede pootje vast te zetten en het abdomen weg te trekken vanaf nabij het eerste abdominale segment.Ten vierde wordt de VNC gereinigd door deze bij het humeraal gebied vast te zetten en het weefsel rondom de VNC voorzichtig weg te scheuren. Scheur de ring van bindweefsel rondom het cervicale bindweefsel open en ga verder met het verwijderen van overtollig weefsel terwijl u de hersenen verzamelt. Breng de hersenen en de VNC als paren over naar een Pyrex-schaal van negen wellen, gevuld met gekoelde 1× PBS en op ijs bewaard.Om de weefsels van de volwassenen te fixeren, worden deze gedurende 15 minuten op ijs ondergedompeld in 4% PFA. Volg dit bad met drie wasbeurten met ijskoude PBS en drie wasbeurten met PBT. Het weefsel is nu klaar om te worden afgebeeld of gelabeld met antilichamen om de expressie van het transgen nauwkeurig te analyseren.Het is nuttig om het CZS te labelen met neuronale of gliale markers om een referentiekader te bieden; begin met het incuberen van het weefsel gedurende een nacht bij vier graden Celsius met antilichamen tegen respectievelijk neuronen of glia. Was de preparatie de volgende dag vijf keer met PBT en incubeer dit gedurende twee uur bij kamertemperatuur met het fluorescerende secundaire antilichaam. Wikkel de plaat in folie om fotobleken van het antilichaam na afloop van de incubatie te voorkomen.Was het preparaat met PBS en monteer het preparaat volledig op een objectglas. Gebruik een OSHA-plastic ring om te voorkomen dat het weefsel door het dekglas wordt geplet. Het zenuwstelsel is nu klaar om onder een fluorescentiemicroscoop te worden onderzocht op GFP- en LL-expressiepatronen.Meestal worden drie tot vijf replica's onderzocht om de reproduceerbaarheid van het expressiepatroon van flip te bepalen. Het expressiepatroon van flip in de flip-lijn kan samen met andere transgenen worden gebruikt om de wijze waarop de GAL four-repressor GAL 80 tot expressie komt te veranderen. Het wijzigen van de expressie van de GAL 80-repressor is een effectieve methode om aanpassingen door te voeren.Bij GAL4-expressie is een methode om de expressie van GAL80 uit te schakelen (flip-out) met een transgen; GAL80-expressie inactiveert GAL4, dat anders oogdegeneratie in het gehele oog zou stimuleren. De ET-flip-lijn hash 6 88 A wordt hier gebruikt om de effectiviteit van de GAL80-conversietool in een subset van fotoreceptoren in het F1-nageslacht te evalueren, waarbij het oogfenotype wordt vergeleken met het oogfenotype van de ouderlijke stammen. Elke verschijning van oogmisvorming of depigmentatie bevestigt dat het flip-expressiepatroon aanwezig is in de fotoreceptoren en dat de GAL80-flip-out succesvol was.Een complementaire, niet-redundante strategie is om de expressie van GAL 80 om te keren met behulp van dezelfde flip-lijn van belang. Deze strategie is zeer vergelijkbaar met de andere, maar nu worden de ID-pigmentatie en degeneratie in de F1-nakomelingen onderdrukt. In flip X twee.Expressie van fotoreceptoren Zodra de techniek onder de knie is, kan de dissectie van het CZS in ongeveer vijf minuten voor volwassenen en één minuut voor larven worden uitgevoerd, mits dit correct gebeurt. Tijdens deze procedure is het belangrijk om scherpe pincetten te gebruiken om de trachea en het weefsel rondom zowel volwassenen als Libre C en Ss te verwijderen. Het is belangrijk om een schaal zonder fixatief voor de dissectie te gebruiken. De heat shock flip-methode wordt momenteel gebruikt om willekeurige klonen te genereren.In tegenstelling hiermee maakt enhancer trap flip het mogelijk om reproduceerbare klonen te genereren, waardoor morfologische en gedragsmatige analyse wordt vergemakkelijkt. Een ander voordeel van de finger-methode is dat men de GAL4-expressiepatronen verder kan beperken door gebruik te maken van aanvullende enhancer trap flip-lijnen en andere GAL-lijnen. Een nadeel van de tubuline-stop GAL80-configuratie is dat bepaalde combinaties van GAL4- en UAS-effectoren, zoals GAL4 en UAS-Kir, niet compatibel zijn omdat ze de vliegen doden.Dit probleem kan eenvoudig worden overwonnen door gebruik te maken van een conditionele UAS-effector, zoals UAS Shiri Ts, waardoor een gedrag bij restrictieve temperaturen kan worden onderzocht. Zoals verwacht zullen niet alle enhancer trap lipase-lijnen voldoende hoge niveaus van lipase tot expressie brengen om nuttig te zijn. Desalniettemin biedt de hier beschreven vingertechniek een nieuwe benadering voor drosophila-onderzoekers om mozaïekanalyse te verfijnen voor zowel ontwikkelingscircuits als gedrag.

mapping-application-enhancer-trap-flippase-expression-larval-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Hier beschrijven we een protocol om de migratie van gliacellen te onderzoeken in de zich ontwikkelende Drosophila oog met behulp van levende microscopische analyse gecombineerd met GFP gelabelde gliacellen.

Live-Imaging van gliale cel migratie in de Drosophila Eye verbeelding Disc

De temporele en ruimtelijke resolutie van de genetische manipulaties bepaalt het spectrum van biologische fenomenen die ze kunnen verstoren. Hier gebruiken we tijdelijk en ruimtelijk...

Targeting bulbus olfactorius Neuronen gebruik van Gecombineerd In Vivo Elektroporatie en Gal4-Based Enhancer Trap zebravis Lines

Het vertalen van Ribosoom Afiniteitszuivering (TRAP) kan de celtype-specifieke translatie van mRNA vastleggen. Hier rapporteren we het eerste TRAP-protocol dat zich richt op de isolatie van mRNA in zeldzame celpopulaties van Drosophila-embryo's.

TRAP-rc, vertalen Ribosoom Affiniteitszuivering van Rare Cell Populaties van<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo

Dit protocol laat zien hoe fluorescent gemerkt, genetisch bepaald klonale tumoren in de Drosophila oog / antennaal verbeelding schijven (EAD) te genereren. Het beschrijft hoe de EAD en de hersenen ontleden van de derde instar larven en hoe ze te verwerken te visualiseren en te kwantificeren genexpressie veranderingen en tumor invasiviteit.

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: visualisatie en kwantificering van genexpressie en Tumor Invasiviteit met behulp van genetische Mozaïeken

Dit protocol beschrijft de dissectie en immunokleuring van volwassen Drosophila melanogaster brain weefsels. Dit protocol benadrukt in het bijzonder het gebruik van Drosophila paddestoel lichaam en fotoreceptor neuronen als voorbeeld neuronale subsets kunt weergeven die nauwkeurig kunnen worden gebruikt voor het ontdekken van de algemene beginselen die ten grondslag liggen aan vele aspecten van neuronale ontwikkeling.

Dissectie en immunefluorescentie kleuring van Mushroom lichaam en fotoreceptor neuronen in de hersenen van de volwassen Drosophila melanogaster

Cellen weergeven van verschillende morphologies en stellen een verscheidenheid van interacties met hun buren. Dit protocol wordt beschreven hoe te onthullen van de morfologie van afzonderlijke cellen en cel-cel interactie onderzoeken met behulp van de gevestigde Gal4/UAS expressie systeem.

Toepassing van MultiColor FlpOut techniek om hoge resolutie eencellige Morphologies en cel interacties van Glia in Drosophila te studeren

We beschrijven een methode voor het retrograde traceren van de Drosophila embryonale motorneuronen met behulp van lipofiele fluorescerende kleurstoffen.

Retrograde tracing van Drosophila embryonale motor neuronen met behulp van lipofiele fluorescerende kleurstoffen

In het vroege Drosophila-embryo zijn veel organellen beweeglijk. In principe kunnen ze live worden afgebeeld via specifieke fluorescerende sondes, maar de eierschaal voorkomt directe toepassing op het embryo. Dit protocol beschrijft hoe dergelijke sondes via micro-injectie kunnen worden geïntroduceerd en vervolgens bulk organelbeweging kan worden geanalyseerd via deeltjesbeeld velocimetrie.

Visualisatie van cytoskeletafhankelijke handel in lipidenbevattende organellen in drosophila-embryo's

Tijdens de ontwikkeling van de hersenschors ontstaan neuronen en gliacellen in de ventriculaire zone die het ventrikel bekleedt en migreren ze naar het hersenoppervlak. Bij dit proces zijn veel genen betrokken. Dit protocol introduceert de techniek voor de time-lapse beeldvorming van migrerende neuronen en glia-voorlopercellen.

Time-lapse beeldvorming van migrerende neuronen en glia-voorlopercellen in embryonale hersenplakjes van muizen

Expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie (EASI-FISH) is een robuuste techniek die expansiemicroscopie combineert met fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) om de expressie van meerdere genen in dik weefsel te detecteren. Dit protocol schetst recente vorderingen in de methode en de aanpassing ervan voor het labelen van het intacte Drosophila centrale zenuwstelsel..

Multiplex detectie van genexpressie in de intacte Drosophila hersenen met behulp van expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie

Dit protocol beschrijft de stappen die nodig zijn om hybridisatiekettingreactie fluorescerende in situ hybridisatie (HCR-FISH) uit te voeren in oogtische lobben van Drosophila melanogaster-larven . Procedures voor probe-ontwerp, hybridisatie, amplificatie en weefselmontage worden gedetailleerd om de visualisatie van de zich ontwikkelende optische kwab te vergemakkelijken.

Hybridisatiekettingreactie FISH in de zich ontwikkelende Drosophila optische lob

Leer de FINGR-methode voor precisiecontrole van genexpressie in het zenuwstelsel van Drosophila. Deze techniek maakt klonale analyse en neurale circuitmapping mogelijk voor gedragsonderzoek.

In kaart brengen en de toepassing van Enhancer-trap Flippase Expression in larvale en volwassen Drosophila CNS

Meer video's verkennen