Name: Een β-glucuronidase (GUS) Op basis Dood van de Cel Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Leer een snelle GUS-gebaseerde celdoodassay in Nicotiana benthamiana voor het analyseren van gen-geïnduceerde celdood. Deze methode biedt visuele en kwantitatieve resultaten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Nicotiana benthamiana planten worden gekweekt in een temperatuur-gecontroleerde groei kamer bij 25 ° C. Volledig uitgebreid gezonde bladeren van 3-6 week oude planten worden gebruikt. Tip: Betere resultaten worden verkregen met behulp van nieuw opkomende bladeren 1. Agrobacterium voorbijgaande infiltratie protocol: Dag 1 <ol><li> Streak LB / Rifampicine (25 ug / ml) / kanamycine (100 ug / ml) agarplaten met glycerol voorraden van Agrobacterium tumefaciens (stam LBA4404) met de geschikte vectoren met het gen (s) te worden getest op celdood en de vector met GUS de cassette onder een constitutieve promotor. Altijd een lege vector controle als een negatieve controle. </li><li> Incubeer bij 28 ° C gedurende 2 dagen. </li></ol> Dag 3 <ol><li> Inoculeren 2 ml LB met Rifampicine (25 ug / ml) en kanamycine (100 ug / ml) met een enkele kolonie van elkaar LB / Rifampicine / Kanamycine plaat eerder strepen. </li><li> Incubeer elke cultuur door schudden bij 28 ° C voor 24 uur bij 200 rpm tot maximale groei dichtheid is bereikt. </li></ol> Tip: Klontvormende wordt soms waargenomen, in welk geval culturen moeten grondig worden geresuspendeerd (dat wil zeggen en neer te pipetteren) voordat u verder gaat. Dag 4 <ol><li> Na de incubatie, streeft het totale volume tot 10 ml met verse LB (met de juiste antibiotica) en acetosyringone (eindconcentratie 25 uM). </li><li> Incubeer elke cultuur door schudden bij 28 ° C voor een ander 16 uur. </li></ol> Dag 5 <ol><li> De volgende dag twee keer te wassen elke cultuur door het toevoegen van 10 ml (niet toe te voegen acetosyringone) infiltratie medium (10 mM MgSO 4 0.7 H 2 O, 9 mM MES, pH 5.6) en gecentrifugeerd bij 4000 xg gedurende 10 min bij kamertemperatuur. </li><li> Na de laatste centrifuge stap, opnieuw in suspensie elke cultuur in 5 ml infiltratie medium dat acetosyringone (100 uM). </li><li> Meet de OD 600 nm, metingen tussen 0,1 en 0,9 aanvaardbaar zijn. Tip: OD 600 nm van zo laag als 0.1 zijn gebruikt zonder een probleem is echter, kunnen hogere ODS produceren meer consistente resultaten. </li><li> Incubeer de drie culturen voor meer uur naar de Agrobacterium culturen voor infectie te bereiden. </li><li> Meng culturen die het gen (s) te worden geanalyseerd en de negatieve controle (Agrobacterium met de lege vector) in een 1:1 verhouding met de cultuur die het GUS cassette. </li><li> Infiltreren in de abaxiale (onder) kant van nieuw opkomende bladeren met behulp van een 1 ml naald-less spuit (afb. 1). Tip: Infiltreer zowel de negatieve controle mengsel (lege vector + GUS cassette) en het mengsel dat het gen te worden getest (gen x + GUS cassette) aan de tegenoverliggende bladeren van dezelfde plant. Gebruik drievoud planten voor elke behandeling. </li><li> 3 dagen na de infiltratie accijnzen bladeren en test geïnfiltreerd voor GUS eiwit expressie. </li></ol> 2. Histochemische GUS-test Dag 8 <ol><li> Vacuüm infiltreren van de X-Gluc substraat medium in het weggesneden bladeren. </li><li> Incubeer in het donker bij kamertemperatuur 's nachts, of totdat duidelijk blauwe vlekken verschijnt. </li></ol> Dag 9 <ol><li> Spoel in gedestilleerd water. </li><li> Incubeer in 70% ethanol tot chlorofyl wordt verwijderd, dan weer over te dragen aan gedestilleerd water. Visueel beoordelen GUS expressie niveaus. </li></ol> 3. Fluorometrische MUG-test: Dag 8 <ol><li> Isoleer totaal eiwit door het malen geïnfiltreerd bladschijfjes in een vijzel met behulp van vloeibare stikstof. Voeg 100 uL van GUS extractiebuffer (50 mM Napi pH 7,0, 10 mM EDTA, 0,1% Triton X-100, 0,1% N-lauroylsarcosine natriumzout, β-mercapto-ethanol (0,7 ul / ml), terwijl het monster op het ijs. </li><li> Centrifugeer suspensie bij 14.000 g gedurende 5 minuten bij 4 ° C en neem supernatant als totaal oplosbaar eiwit. </li><li> Meet de concentratie door middel van een nanodrop volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Stel de eiwitconcentratie tot 100 pg totaal oplosbaar eiwit voor elk monster met behulp van GUS extractiebuffer. </li><li> Voeg MUG substraat (4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide trihydraat) bereid in GUS extractiebuffer tot een uiteindelijke concentratie van 2 mm. Een totaal volume van 100 ul per monster (eiwit + MUG-substraat) moet voldoende zijn. </li><li> Incubeer de reacties gedurende 1 uur bij 37 ° C. </li><li> Stop reacties door het toevoegen van 800 pi van GUS stop buffer (0,2 M Na 2 CO 3). </li><li> Meten fluorescentie behulp van een plaat lezer op een golflengte van 365 nm en emissie golflengte van 455 nm en vergelijk waarden om een ​​MU standaard curve. Rapport niveaus van GUS activiteit als nmol MU / ug totaal oplosbaar eiwit / min. </li></ol> 4. Voorraden en oplossingen: <ol><li> Acetosyringone (1 M) voorraad (FW = 196,2 g) </li><li> Kanamycine (100 mg / ml) voorraad - voor te bereiden in dH 2 0 - filter steriliseren </li><li> Rifampicine (25 mg / ml) voorraad - voor te bereiden in DMSO </li><li> Luria-Bertani (LB) vloeibare groei media: (1L) 1% (w / v) Bacto-trypton, 10 g 0,5% (w / v) Bacto-gistextract, 5 g 170 mM natriumchloride 10 g pH - 7 </li><li> Acetosyringone (25 uM) = 25 ui van een 1 M voorraad in een eindvolume van 1 ml </li><li> Infiltratie Medium: (1L) 10 mM MgSO 4 0,7 dH 2 0 (FW = 246,48 g), 2,4648 g 9 mM MES (FW = 213,25 g), 1,91925 g pH - 5,6 </li><li> Acetosyringone (100 uM) = 100 ul van een 1 M voorraad in een eindvolume van 1 ml </li><li> GUS extractiebuffer 50 mM Napi pH 7,0, 10 mM EDTA, 0,1% Triton X-100, 0,1% N-lauroylsarcosine natriumzout, β-mercapto-ethanol (0,7 ul / ml) </li><li> 2x Fosfaat buffer 0,2 M NaH 2 PO 4 en 0,2 M Na 2 HPO 4 pH 7 </li><li> X-Gluc substraatoplossing Los 1 mg van 5-broom-4-chloor-3-indolyl bd-glucuronide (X-Gluc) in 0,1 ml methanol. Voeg 1 ml 2x fosfaatbuffer, 20 ui 0,1 M kaliumferricyanide, 10μl Triton X-100 10% en 850 ul van gedestilleerd water. </li></ol> 5. Representatieve resultaten: Naar aanleiding van dit protocol, is het verlies van GUS-expressie verwacht bij celdood optreedt. We hebben tegelijkertijd uitgesproken het reporter-gen, β-glucuronidase (GUS), met een lid van de cyto-beschermende Arabidopsis Bcl-2 Associated athanoGene (BAG) familie. We co-geïnfiltreerd N. benthamiana bladeren met een 35S gedreven BAG expressiecassette en de GUS vector pCAMBIA 2301 met behulp van Agrobacterium-stam LBA4404. Zoals weergegeven in figuur 2, is een zichtbare toename van de GUS-kleuring waargenomen na deze infiltratie. Omgekeerd, wanneer de bekende pro-apoptotische lid van de Bcl-2 familie BAX werd gebruikt, was een duidelijke vermindering van de GUS-kleuring waargenomen (afb. 2). In beide gevallen, GUS expressie was zichtbaar anders vergeleken met de controlegroep. Echter, wanneer het verschil in uitdrukking is minder evident, kan fluorometrische MUG testen worden uitgevoerd om GUS expressie quanitate. <img src="/files/ftp_upload/2680/2680fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Voorbeeld van een Agrobacterium mengsel infiltratie van de abaxiale kant van N. benthamiana laat met behulp van een naald 1 ml-spuit minder. <img src="/files/ftp_upload/2680/2680fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Een GUS vector werd co-uitgedrukt in N. benthamiana bladeren met de anti-dood-gen, en een bekende inductor van celdood. GUS niveaus werden vergeleken met een lege vector control (GUS controle).

<ol><li>Jefferson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GUS+fusions%3A+%2C+%CE%B2-glucuronidase+as+a+sensitive+and+versatile+gene+fusion+marker+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">GUS fusions: , β-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants.</a> EMBO J. 6, 3901-3901 (1987).</li>
<li>Nishihara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+%CE%B2-Glucuronidase+Gene+in+Pollen+of+Lily+%28Lilium+longiflorum%29%2C+Tobacco+%28Nicotiana+tabacum%29%2C+Nicotiana+rustica%2C+and+Peony+%28Paeonia+lactiflora%29+by+Particle+Bombardment%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression of the β-Glucuronidase Gene in Pollen of Lily (Lilium longiflorum), Tobacco (Nicotiana tabacum), Nicotiana rustica, and Peony (Paeonia lactiflora) by Particle Bombardment.</a> Plant Physiol. 102, 357-357 (1993).</li>
<li>Hodal, L. Plant Science. 87, 115-115 (1992).</li>
<li>Kabbage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BAG+proteins%3A+a+ubiquitous+family+of+chaperone+regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol.+Life+Sci.+%22%5BJournal%5D)">The BAG proteins: a ubiquitous family of chaperone regulators.</a> Cell Mol. Life Sci. . 65, 1390-1390 (2008).</li>
<li>Kang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AtBAG6%2C+a+novel+calmodulin-binding+protein%2C+induces+programmed+cell+death+in+yeast+and+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">AtBAG6, a novel calmodulin-binding protein, induces programmed cell death in yeast and plants.</a> Cell Death Differ. 13 (1), 84-84 (2006).</li>
<li>Yan, J. Plant Science. 165 (1), 1-1 (2006).</li>
<li>Takayama, S., Reed, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+chaperone+targeting+and+regulation+by+BAG+family+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular chaperone targeting and regulation by BAG family proteins.</a> Nat Cell Biol. 3 (10), 237-237 (2001).</li>
<li>Takayama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+functional+analysis+of+BAG-1%3A+a+novel+Bcl-2-binding+protein+with+anti-cell+death+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cloning and functional analysis of BAG-1: a novel Bcl-2-binding protein with anti-cell death activity.</a> Cell. 80 (2), 279-279 (1995).</li>
<li>Vitha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+%CE%B2-glucuronidase+assay+in+transgenic+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Plant%22%5BJournal%5D)">Quantitative β-glucuronidase assay in transgenic plants.</a> Biol. Plant. 35, 151-151 (1993).</li>
<li>Otha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+Expression+in+Tobacco+of+a+%CE%B2-Glucuronidase+%28GUS%29+Reporter+Gene+Containing+an+Intron+Within+the+Coding+Sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Construction and Expression in Tobacco of a β-Glucuronidase (GUS) Reporter Gene Containing an Intron Within the Coding Sequence.</a> Plant Cell Physiol. 31, 805-805 (1990).</li>
</ol>

<p class="jove_content"&gt; Het is vaak moeilijk om celdood detectie technieken te gebruiken in planten die gangbaar zijn in zoogdieren systemen. In combinatie met een GUS verslaggever systeem, presenteren we een plantaardig, gevoelige methode voor de detectie en analyse van celdood spelers. Deze methode maakt gebruik van het simpele feit dat levende cellen nodig zijn voor GUS expressie te komen. Om ervoor te zorgen zinvolle resultaten en herhaalbaarheid, is het essentieel dat de culturen herbergen de GUS cassette en het gen te worden getest zi...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Commentaar (optioneel) </th></tr><tr><td> Rifampicine </td><td> VWR </td><td> IC19549001 </td><td> 25mg/ml voorraad in DMSO </td></tr><tr><td> 4&#39;-hydroxy-3 &#39;, 5&#39;-dimethoxyacetofenon (Acetosyringone) </td><td> VWR </td><td> TCD2666 </td><td> 0,981 g / mL in DMSO (1M voorraad) </td></tr><tr><td> 2 - (4-morfolino) ethaansulfonzuur-monohydraat (MES) </td><td> VWR </td><td> EM-6110 </td><td> 1,92 g / L in water voor het maken van een L van infiltratie media </td></tr><tr><td> Bacto-trypton </td><td> Visser </td><td> BP1421-2 </td><td> 10 g / L in het water voor het maken van een L van LB-medium </td></tr><tr><td> Bacto-gistextract </td><td> VWR </td><td> EM1.03753.0500 </td><td> 5g / L in het water voor het maken van een L van LB-medium </td></tr><tr><td> Natriumchloride </td><td> VWR </td><td> EM-7710 </td><td> 10 g / L in het water voor het maken van een L van LB-medium </td></tr><tr><td> Natrium monobasisch monohydraat </td><td> VWR </td><td> MK-7868-12 </td><td> 2.5G / L in het water voor het maken van 50mm van buffer Napi </td></tr><tr><td> Natriumfosfaat heptahydraat </td><td> VWR </td><td> EMD-SX0715-1 </td><td> 5g / L in het water voor het maken van 50mm van buffer Napi </td></tr><tr><td> Magnesiumsulfaat heptahydraat </td><td> VWR </td><td> EM-MX0070-1 </td><td> 2,5 g / L in water voor het maken van een L van infiltratie media </td></tr><tr><td> N-Lauroylsarcosine </td><td> VWR </td><td> TCL0151-500G </td><td> 0,1% v / v in GUS buffer </td></tr><tr><td> 5-Bromo-4-chloor-3-indoxyl-beta-D-glucuronide cyclohexylammonium zout (X-Gluc) </td><td> Goud Biotechnologie </td><td> G1281C </td><td> 1mg/100uL in methanol 100% </td></tr><tr><td> 4-methylumbelliferyl-μ-D-glucuronide hydraat (MUG) </td><td> Sigma </td><td> M5664 </td><td> 2 mM in 100 uL van GUS extractiebuffer </td></tr><tr><td> Kaliumferrocyanide trihydraat </td><td> VWR </td><td> EM-PX1460-1 </td><td> 100mm voorraad voor X-Gluc substraatoplossing </td></tr><tr><td> β-methylumbelliferon (MU) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M1381 </td><td> Voor MU standaard curve gebruiken GUS extractiebuffer </td></tr><tr><td> Natriumcarbonaat </td><td> VWR </td><td> EM-SX0395-11 </td><td> 0,2 M in het water voor het maken van GUS stop buffer </td></tr></tbody></table>

een β-glucuronidase (gus) op basis dood van de cel assay

A &#946;-glucuronidase (GUS) Based Cell Death Assay

We hebben een nieuwe tijdelijke plant expressie systeem dat tegelijkertijd drukt de reporter-gen, β-glucuronidase (GUS), met een vermeende positieve of negatieve regulatoren van celdood. In dit systeem, N. benthamiana bladeren zijn co-geïnfiltreerd met een 35S gedreven expressiecassette met het gen te analyseren, en het GUS vector pCAMBIA 2301 met behulp van Agrobacterium-stam LBA4404 als een voertuig. Omdat de levende cellen nodig zijn voor GUS expressie te komen, is het verlies van GUS-activiteit te verwachten wanneer deze marker-gen is co-uiting met positieve regulatoren van celdood. Even, verhoogde GUS activiteit wordt waargenomen wanneer anti-apoptotische genen worden gebruikt in vergelijking met de vector te controleren. Zoals hieronder wordt weergegeven, hebben we met succes gebruikt dit systeem in ons lab om zowel pro-en anti-dood-spelers te analyseren. Deze omvatten de plant anti-apoptotische Bcl-2 Associated athanoGene (BAG) familie, maar ook, bekende zoogdieren induceren van celdood, zoals BAX. Daarnaast hebben we gebruikt dit systeem om de dood functie van specifieke afknottingen in eiwitten, die aanwijzingen kunnen geven over de mogelijke post-translationele modificatie / activering van deze eiwitten te analyseren. Hier presenteren wij een snelle en gevoelige planten gebaseerde methode, als een eerste stap in het onderzoek naar de dood functie van specifieke genen.

Geprogrammeerde celdood assays gebruikt in zoogdieren systemen zoals DNA laddering of TUNEL testen, zijn vaak moeilijk te reproduceren in planten. In combinatie met een GUS verslaggever systeem, stellen wij voor een snelle, plant op basis van voorbijgaande test om de mogelijke dood eigenschappen van specifieke genen te analyseren.

Een β-glucuronidase (GUS) Op basis Dood van de Cel Assay

We hebben een nieuw systeem voor transiënte expressie in planten ontwikkeld dat gelijktijdig het reportergen, $\beta$-glucuronidase (GUS), tot expressie brengt samen met vermeende ...

Het algemene doel van deze procedure is om een Gus-reportersysteem te gebruiken om de potentiële dodelijke eigenschappen van specifieke genen te analyseren. Genen van belang worden gekloond in een Gus-cassette en gekweekt in de geschikte agrobacterium-vectoren onder een 35 s-promotor. Deze vectoren worden vervolgens getransformeerd in Agrobacterium-stam LBA 44 0 4 en gemengd met een cultuur die een Gus-expressiecassette bevat om bladeren van Nick Oceana Hamana te infiltreren.Gus-activiteit kan visueel worden beoordeeld via histochemische kleuring, of kwantitatief via een fluorimetrische assay. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals DNA-laddering of de tunnel-assay, die veel worden gebruikt in zoogdiersystemen maar moeilijk te reproduceren zijn in planten, is dat dit een gevoelige, snelle transitie-assay op basis van planten is die gebruikmaakt van het eenvoudige feit dat levende cellen vereist zijn voor de expressie van gas. De procedure zal vandaag worden gedemonstreerd door Hua RAOs.Een postdoctorale onderzoeker in ons laboratorium voor infiltratie heeft volledig ontplooide, gezonde bladeren nodig van drie tot zes weken oude Nicotia

a-glucuronidase-gus-based-cell-death-assay

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Cel-gemedieerde lymphocytotoxicity (CML) testen kunnen worden gebruikt voor het autoreactieve reacties en onderzoek naar mechanismen van celdood in vitro test. Echter, met behulp van live-cell confocale microscopische beeldvorming technieken met fluorescente kleurstoffen, het type en de kinetiek van celdood en gebruik gemaakt van de paden worden bestudeerd in meer detail.

Methoden om Beta Cell Death gemedieerd beoordelen door cytotoxische T lymfocyten

In this video, we describe a simple and robust method to determine the cytotoxic potential of a trypanocidal drug against a parasite, Trypanosoma cruzi, expressing the β-galactosidase enzyme. β-galactosidase serves as a cell lysis indicator, and its activity can be used to assess the effects of the drug.

&beta;-Galactosidase Assay to Evaluate Drug-Induced Cytotoxicity in Parasites

This video demonstrates the lactate dehydrogenase assay to detect inflammasome-mediated macrophage death. The macrophages are exposed to lipopolysaccharide for priming, followed by exposure to nigericin to cause inflammasome-induced cell death, which is determined by the lactate dehydrogenase assay.

A Lactate Dehydrogenase Release Assay To Detect Macrophage Death Following Nigericin Exposure

In dit artikel presenteren we een microfluïdische chip voor single cell analyse. Het maakt de kwantificering van intracellulaire eiwitten, enzymen, cofactoren, en tweede boodschappers via fluorescentie assays of immunoassays.

Een Microfluïdische Chip voor de Versatile chemische analyse van enkele cellen

Multiplex testen kunnen nuttige informatie verschaffen voor basis cellulaire mechanismen en elimineren van verspilling van reagentia en onnodige herhaalde experimenten. We beschrijven hier een multiplex caspase-3/7 activiteit test, met fluorescerende-en-luminescente gebaseerde methoden, levensvatbaarheid van de cellen bepaald in een in vitro model hypothalamus na oxidatieve uitdaging palmitinezuur.

Gebruik van een caspase Multiplexing Test van apoptose bepalen in een Hypothalamus Cell Model

We beschrijven een eenvoudige, kwantitatieve colorimetrische test die specifiek de proteolytische activiteit van humane, muis- of ratten-Granzyme B (GzmB) meet. Dit protocol kan eenvoudig worden aangepast voor het bepalen van de protease-activiteit van andere granuulserineproteasen door de hydrolyse van andere synthetische peptide-substraten met een geschikte herkenningssequentie.

Een colorimetrische test waarmee specifiek Granzyme B proteolytische activiteit: Hydrolyse van Boc-Ala-Ala-Asp-S-Bzl

Er is een vraag om preklinische testen voor een nieuwe klasse van "Wees" drugs genoemd farmacologische chaperones reproduceerbaar, snel en efficiënt. Voor patiënten die in aanmerking komen, alsmede nieuwe farmacologische chaperone drugs ontwikkelden we een eenvoudige, sterk gestandaardiseerde en veelzijdig cel cultuur gebaseerde bepaling naar het scherm.

In Vitro Enzym meting aan Test farmacologische Chaperone responsiviteit in Fabry en de ziekte van Pompe

Cellulaire senescentie is de belangrijkste factor in de ontwikkeling van chronische leeftijdsgebonden pathologieën. Identificatie van therapeutische middelen die gericht zijn op senescentie cellen tonen belofte voor het verlengen van gezonde veroudering. Hier presenteren we een nieuwe assay voor de identificatie van senotherapeutica op basis van meting van senescentie geassocieerde β-galactosidase activiteit in enkelvoudige cellen.

Op SA-β-galactosidase gebaseerde screeningstest voor de identificatie van Senotherapeutische geneesmiddelen

Een niet-gelabelde, niet-radio-isotopische methode om uracil-DNA glycosylase activiteit te testen werd ontwikkeld met behulp van MALDI-TOF massaspectrometrie voor directe apurine / apyrimidinische site-bevattende productanalyse. De test bleek vrij eenvoudig, specifiek, snel en gemakkelijk te gebruiken voor DNA-glycosylasemeting.

Uracil-DNA Glycosylase Assay door Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Kwantificering van zowel geoxideerde als gereduceerde vormen van glutathion (respectievelijk GSSG en GSH) is bereikt door het gebruik van orthoftalaldehyde (OPA). OPA wordt sterk fluorescerend zodra het is geconjugeerd met GSH, maar kan GSSG niet conjugeren totdat het is verminderd. Hier beschrijven we een multiparametrische test om beide te kwantificeren met behulp van eiwitkwantificering voor normalisatie.

Snelle kwantificering van geoxideerde en gereduceerde vormen van glutathion met behulp van orthoftalaldehyde in gekweekte zoogdiercellen in vitro

Leer een snelle GUS-gebaseerde celdoodassay in Nicotiana benthamiana voor het analyseren van gen-geïnduceerde celdood. Deze methode biedt visuele en kwantitatieve resultaten.

Een β-glucuronidase (GUS) Op basis Dood van de Cel Assay

Meer video's verkennen