Name: Aseptische Laboratoriumtechniek: Volume Transfers met serologische Pipetten en Micropipettors (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Leer aseptische laboratoriumtechnieken voor volumeoverdracht met serologische pipetten en micropipetten. Deze methoden minimaliseren contaminatie en garanderen precisie bij microbiologische experimenten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Met dank aan Cori Sanders op Iroc Ontwerpen voor het bereiden van illustraties en aan Kris Reddi aan de UCLA voor het opzetten van monster culturen voor cijfers. De financiering voor dit project werd verzorgd door HHMI (HHMI Grant nr. 52006944).

<ol><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarker%2C+K+%22At+the+Bench%3A+A+Laboratory+Navigator%22">At the Bench: A Laboratory Navigator</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. New York. (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+And+Biomedical+Laboratories+%28BMBL%29%22">Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</a>. , 5th Ed, US Department of Health and Human Services (DHHS), Centers for Disease Control and Prevention (CDC) and National Institutes of Health (NIH), U.S. Government Printing Office. Washington DC. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm</a> (2009).</li>
<li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D(2008).</li>
<li>Coté, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique+for+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3(2001).</li>
<li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22RAP+Publication%22%5BJournal%5D)">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li>
<li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pipetting%3A+A+Practical+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li>
<li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJordan%2C+T+%22RESEARCH%3A+National+Genomics+Research+Initiative+Phage+Resource+Laboratory+Manual%22">RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</a>. , Howard Hughes Medical Institute. (2008).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning+-+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning - A Laboratory Manual</a>. , 3rd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 978-087969576 (2001).</li>
<li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeidman%2C+LA+%22Basic+Laboratory+Methods+for+Biotechnology%3A+Textbook+and+Laboratory+Reference%22">Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference</a>. , Prentice Hall, Inc. Upper Saddle River, New Jersey. (2000).</li>
<li>Pipettes, Calibration & Repair Service - Pipette.com [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx">http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx</a> (2012).</li>
<li>On-Line Resources for Biology: Table of Contents [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html">http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html</a> (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22PIPETMAN+P+User%27s+Guide%22">PIPETMAN P User's Guide</a>. , Gilson Inc. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf">http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf</a> (2012).</li>
<li>Sterile Technique - Laboratory Wiki [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique">http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique</a> (2012).</li>
<li>Air displacement pipette - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette">http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette</a> (2012).</li>
<li>Disinfectant - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant">http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant</a> (2012).</li>
</ol>

Ik heb niets te onthullen.

Aseptische verwijst naar een reeks van routine procedures gedaan steriele oplossingen en culturen voorkomen dat besmette van ongewenste micro-organismen in het laboratorium. Dergelijke technieken zijn essentieel voor experimenten groeiende cellen vereist. Hoewel een werkomgeving die volledig steriel kan niet worden bereikt, procedures, zoals desinfecteren laboratorium oppervlakken, het creëren van een steriel veld met een bunsenbrander, beperking van de blootstelling van de niet-afgetopte culturen en media aan de lucht, het steriliseren van materialen, zoals flessen, tubes en glazen pipetten, en het vermijden van contact van steriele instrumenten met niet-steriele oppervlakken vermindert de kans op vervuiling van oplossingen en culturen in een experiment. Het doel is dat deze voorzorgsmaatregelen procedures om een ​​tweede natuur geworden, dit komt met training en de praktijk tijdens het werken in een laboratorium. Deel transfers met steriele oplossingen en culturen met behulp van instrumenten zoals serologische pipetten en microfoonropipettors een van vele soorten gebruikelijke technieken uitgevoerd in een laboratorium. Verschillende experimentele toepassingen roepen voor instrumenten die geschikt zijn om verschillende, maar precies en nauwkeurig, volumes. Serologische pipetten worden gebruikt in microbiologische laboratoria op celculturen die media voorbereidingen met betrekking tot milliliter volumes voor te bereiden, terwijl micropipettors zijn essentieel voor de moleculaire biologie experimenten die alleen microliter hoeveelheden van oplossingen nodig hebben. Wanneer aseptische techniek wordt beoefend met deze instrumenten, is besmetting tot een minimum beperkt tijdens het volume transfers, ongeacht hoeveelheid vloeistof of het type experiment. Hoewel niet in dit protocol een andere middelen gebruikt om vervuiling te voorkomen is om te werken in een laminaire stroming kap (figuur 10). Dit apparaat is essentieel voor weefselkweek en experimenten met micro-organismen als BLS-2 of hoger. Een laminaire stroming kap bevat een HEPA (hoog rendementParticulate Air) filter dat verontreinigingen in de lucht verwijdert uit de lucht stroomt in de motorkap, terwijl het voorkomen ongefilterde lucht uit de kamer van doordringt de werkruimte. Van de nota kan een bunsenbrander niet worden gebruikt in een laminaire stroming kap omdat de warmte van de vlam verstoord luchtstroom van essentieel belang om de functionaliteit van de kap. Het is vaak handig om de kwaliteit van uw aseptische techniek te controleren bij het uitvoeren van experimenten. Om oplossingen te bevestigen en cultuur media niet die tijdens het experimentele manipulaties krijgen, altijd voor te bereiden een negatieve controle. Als bijvoorbeeld bereiden buizen bouillon gedurende groei van bacterieculturen niet enten een buis waardoor alleen steriel media. Incubeer het medium langs de geënte buizen te inspecteren dan niet-geënte controle buis op tekenen van verontreiniging, zoals troebelheid van de groei van ongewenste cellen onbedoeld geïntroduceerd in de buis. Indien de controle buis verontreinigd de experimentele buiss kunnen worden ook vervuild en het experiment te herhalen. Deze voorzorgsmaatregelen moeten worden gedaan met elk experiment.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> LB-bouillon </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Recept ook in referentie 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE buffer: </td></tr><tr><td> EDTA dinatriumzoutdihydraat </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> Ontsmettingsmiddel </td></tr><tr><td> Ethanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Voor gebruik als desinfectiemiddel, bereid 70% (v / v) met gedestilleerd water </td></tr></tbody></table>

aseptische laboratoriumtechniek: volume transfers met serologische pipetten en micropipettors

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Micro-organismen zijn overal - in de lucht, de bodem, en het menselijk lichaam en op levenloze oppervlakken, zoals het laboratorium banken en toetsenborden van computers. De alomtegenwoordigheid van microben zorgt voor een uitgebreid aanbod van potentiële contaminanten in een laboratorium. Van experimentele succes te garanderen, moet het aantal verontreinigingen op apparatuur en werkbladen worden geminimaliseerd. Vaak voor bij vele experimenten in de microbiologie zijn technieken waarbij de meting en de overdracht van culturen met bacteriële cellen of virale deeltjes. Om dit te doen zonder contact met niet-steriele oppervlakken of besmettende steriele media vereist (1) de voorbereiding van een steriele werkruimte, (2) precies en nauwkeurig instellen van het lezen van instrumenten voor aseptische overdracht van vloeistoffen, en (3) goed manipuleren van instrumenten, culturen flacons, flessen en buizen in een steriel veld. Het leren van deze procedures vraagt ​​om opleiding en praktijk. In eerste instantie moeten acties traag, weloverwogen, en gecontroleerd met als doel voor aseptische technique een tweede natuur geworden bij het werken op de bank. Hier presenteren we de stappen voor het meten van volumes met behulp van serologische pipetten en micropipettors binnen een steriel veld gecreëerd door een bunsenbrander. Volumes van microliter (il) tot milliliter (ml) afhankelijk van de gebruikte instrument. Vloeistoffen vaak overgedragen omvatten steriele bouillon of chemische oplossingen, alsmede bacteriële culturen en faag voorraden. Door het volgen van deze procedures, moeten studenten in staat zijn om: <ul><li> Het werk binnen het steriele veld gecreëerd door de bunsenbrander vlam. </li><li> Gebruik serologische pipetten zonder afbreuk te doen instrument steriliteit. </li><li> Zuig vloeistoffen met serologische pipetten, juist het lezen van geijkte volumes door het gelijktrekken van de meniscus gevormd door de vloeistof aan het afstuderen markeringen op de pipet. </li><li> Houd cultuur flessen, flacons, tubes en hun respectieve caps steriele vloeistof tijdens transfers. </li><li> Identificeer verschillende toepassingen voor kunststof ten opzichte van glas serologische pipEttes. </li><li> Staat nauwkeurigheid beperkingen voor micropipettors. </li><li> Precies en nauwkeurig in te stellen volumes op micropipettors. </li><li> Weet hoe goed de eerste en tweede stop op een micropipettor te gebruiken om te zuigen en over te dragen juiste volumes. </li></ul>

Bij het werken in een laboratorium is het noodzakelijk te minimaliseren bronnen van verontreiniging. Aseptische techniek heeft betrekking op procedures die de overdracht van culturen en reagentia toe terwijl het vermijden van contact met niet-steriele oppervlakken. Serologische pipetten en micropipettors worden gebruikt om de precieze hoeveelheden te meten zonder afbreuk te doen aan de steriliteit van de oplossingen die gebruikt worden in experimenten.

Aseptische Laboratoriumtechniek: Volume Transfers met serologische Pipetten en Micropipettors

Micro-organismen zijn overal aanwezig - in de lucht, de bodem en het menselijk lichaam, maar ook op levenloze oppervlakken zoals laboratoriumtafels en computertoetsenborden. De ...

Deze demonstratie presenteert aseptische laboratoriumtechnieken voor volumetrische overdrachten met serologische pipetten en micropipetten op de laboratoriumbank. Werk binnen het steriele veld dat wordt gecreëerd door de vlam van een bunsenbrander. Selecteer het passende instrument voor volumetrische overdracht voor de specifieke toepassing.Gebruik deze vervolgens op de juiste wijze zonder de steriliteit in gevaar te brengen, terwijl u de cultuurreagentia en materialen steriel houdt en vloeistoffen met precisie samen opzuigt. Deze procedures zijn essentieel om bronnen van contaminatie te minimaliseren en precisie te bieden voor basale experimenten. In het begin is het uitdagend om instrumenten nauwkeurig in te stellen en af te lezen, en om bewegingen met de instrumenten en laboratoriummaterialen te coördineren zonder de steriliteit van de overgebrachte vloeistoffen in gevaar te brengen.Het toepassen van een aseptische techniek in het laboratorium is essentieel voor het experimentele succes bij het werken met levende specimens; neem daarom de tijd om deze procedures te leren, zodat ze in uw natuur komen. Tijdens het werken aan de bench zal dr. Chris Reddy, mijn laboratoriumcoördinator, de protocollen demonstreren. Was altijd grondig de handen met antiseptische zeep en warm water voordat u met laboratoriumprocedures begint. Maak eerst de handen nat onder warm stromend water.Breng vervolgens zeep aan en verdeel deze grondig en krachtig. Wrijf de handen door wrijving te creëren op alle oppervlakken, inclusief de duimen, de ruggen van de vingers, de handruggen en onder de vingernagels. Spoel daarna grondig af om zeepresten te verwijderen en droog de handen met papieren handdoeken uit een dispenser.Sluit ten slotte de kraan af met een schoon papieren handdoekje en maak het werkgebied op de laboratoriumbank leeg. Haal vervolgens een vochtig desinfecterend doekje uit de houder en neem het gehele oppervlak af. Laat het desinfectiemiddel verdampen met behulp van een ontstekingslamp.De bunsenbrander. Stel de vlam zo in dat er een blauwe kegel in het midden ontstaat. Plaats alle voor de procedure benodigde materialen nabij het steriele veld van de laboratoriumbank.Zorg er daarnaast voor dat alle materialen correct zijn gelabeld. Er zijn veel soorten serologische pipetten beschikbaar, van kunststof of glas, wegwerp of herbruikbaar, met of zonder stop. De verschillende maten zijn gekalibreerd met stoppen die fungeren als barrière om overvullen van de pipet te voorkomen.Let op dat serologische pipetten ook op twee manieren zijn gekalibreerd. TD-pipetten, herkenbaar aan de dubbele ringen aan de bovenzijde, zijn zo gekalibreerd dat het volume in de tip niet wordt afgeleverd. Dit wordt hier niet getoond, maar TC-pipetten moeten worden uitgeblazen omdat ze zijn gekalibreerd om het volledige volume af te leveren. Gebruik bij de aseptische techniek met een individueel verpakte steriele plastic serologische pipet het afgesloten uiteinde om het papier voorzichtig af te pellen.Verwijder niet de gehele huls. Bescherm alleen de punt van de pipethendel — enkel het bovenste gedeelte van de pipet boven de maatstrepen — en bevestig een pipethulp, zoals een pipetbol of een pipetpistool, aan het bovenste uiteinde van de serologische pipet. Houd de pipethulp in één hand en verwijder met de andere hand de papieren huls van de plastic pipet.Maak voor glazen serologische pipetten die in metalen bussen zijn bewaard de bovenkant van de bus los en verwijder de dop; vlam de open uiteinden van zowel de dop als de bus. Plaats de dop vervolgens op zijn zijkant op de gedesinfecteerde werkbank. Houd de bus horizontaal en schud deze zodat de bovenkanten van één of twee pipetten zichtbaar worden.Laat ongeveer een inch uitsteken. Leg de canister op zijn zijkant en verwijder één pipet zonder de andere pipetten aan te raken. Zorg dat de onderste punt van de pipet geen contact maakt met handen of niet-steriele oppervlakken.Bevestig vervolgens de pipethulp. Verhit daarna het onderste derde deel van een glazen pipet gedurende één tot drie seconden in de vlam van de bunsenbrander door de blauwe kegel te passeren. Verwijder nu de dop van de fles met steriel medium.Houd de fles tussen de ringvinger en de palm van één hand, terwijl u met de duim, wijsvinger en middelvinger van dezelfde hand de pipethulp bedient; houd met de andere hand de fles in een hoek van 45 graden en ga met de rand van de fles door de vlam van de bunsenbrander. Plaats de steriele pipetpunt in het medium. Aspireer vervolgens met de pipethulp om de flow aan de hand van de schaalverdeling te controleren.Houd het volume dat in de pipet wordt opgezogen nauwkeurig in de gaten om het volume precies af te lezen. Houd de pipet verticaal en bekijk de meniscus van de vloeistof recht voor u op ooghoogte. Haal vervolgens opnieuw de rand van de fles door de vlam van de bunsenbrander.Sluit het vervolgens af met een dop. Zet de fles met medium apart. Neem daarna een steriele buis en werk aseptisch.Verwijder de dop zoals eerder beschreven. Creëer een steriel veld door de rand van de buis te vlammen. Dispenseer het medium vanuit de pipet in de buis, waarbij de monsterstroom wordt gecontroleerd om spatten te voorkomen.Vlam de rand. Plaats vervolgens de dop opnieuw en zet de buis opzij. Verwijder nu de pipetteervulpomp, gooi plastic pipetten in een daarvoor bestemde container voor scherpe voorwerpen en dompel glazen pipetten onder in een 10% bleekoplossing.Een micropipet maakt het nauwkeurig meten en dispenseren van minimale volumes mogelijk met instrumenten van verschillende formaten voor specifieke volumebereiken. Gebruik voorgesteriliseerde buisjes en plastic tips. Gebruik daarnaast een voorgevochtigde desinfecterende doek om de micropipetten af te nemen. Let op.De Volter toont drie getallen die geïnterpreteerd moeten worden op basis van het type micropipet, waarbij de nauwkeurigheid wordt weerspiegeld in de kleinste schaalverdeling. Merk bijvoorbeeld op dat de P 20 wordt gebruikt voor volumes tussen 2,0 en 20,0 microliters. Het bovenste getal in het zwart staat voor tientallen microliters.Het tweede zwarte getal geeft het volume in microliters aan. Het rode getal markeert tienden van een microliter, waardoor elk schaalstreepje gelijk staat aan een increment van 0,02 microliters. Draai eerst aan de instelknop om het volume van de dispenser in te stellen zoals aangegeven op de numerieke volumemeter.Draai bij het verlagen van de volumestelling van de micropipet het duimwiel langzaam naar beneden tot aan de maatstreep. Draai bij het verhogen van de volumestelling het wiel naar boven tot u met een derde slag voorbij de gewenste maatstreep bent. Draai vervolgens het duimwiel langzaam naar beneden om het beoogde volume te bereiken.Gebruik te allen tijde steriele plastic wegwerptips. Bevestig een tip stevig op het uiteinde van de cilinder van de micropipet. Druk naar beneden en draai lichtjes om een luchtdichte afsluiting te garanderen.Houd de micropipet in een verticale positie. Let op dat de micropipet drie posities heeft: de ruststand, de eerste aanslag en de tweede aanslag.Druk de knop van de zuiger vanuit de rustpositie in tot de eerste aanslag om een hoeveelheid lucht te verplaatsen die gelijk is aan het ingestelde volume. Dompel nu de tip in de vloeistof terwijl de knop tot de eerste aanslag wordt ingedrukt. Laat de knop langzaam los om de vloeistof in de tip op te zuigen.Wanneer de drukknop de rustpositie bereikt, dient men voldoende tijd te laten om de vloeistof in de tip op te zuigen. Verwijder vervolgens de tip uit de vloeistof. Controleer visueel hoeveel vloeistof er in de tip is opgenomen en zorg ervoor dat er geen luchtbellen aanwezig zijn.Plaats de tip in een hoek van 10 tot 45 graden tegen de wand van de buis waarin de vloeistof wordt overgebracht. Druk vervolgens langzaam de knop van de zuiger in tot de eerste stop, om de vloeistof uit te stoten.Druk na een moment de plunjer in tot de tweede stop om eventueel resterend vloeistof te verdrijven. Verwijder vervolgens de tip uit de vloeistof en laat de plunjer terugkeren naar de rustpositie. Gooi de tips ten slotte weg in de daarvoor bestemde container voor scherpe voorwerpen door op de uitwerpklnop van de micropipet te drukken.Zet eerst de bunsenbrander uit. Ruim alle benodigdheden en reagentia op en maak de buitenkant van het LabWare schoon met een desinfecterend doekje voordat u deze naar de opslagplaats verplaatst. Plaats vervolgens besmet glaswerk en gevaarlijke afvalmaterialen in de juiste afvalbak.Veeg vervolgens het gehele werkgebied nogmaals af en laat het desinfectiemiddel verdampen. Was tot slot de handen grondig met antiseptische zeep en warm water. Zonder aseptische techniek kunnen culturen besmet raken, wat vertraging in de experimenten kan veroorzaken.Het aseptisch overbrengen van vloeistoffen met serologische pipetten is essentieel bij het vermeerderen van zuivere bacteriële culturen, zoals deze preparatie van 25 milliliter E. coli. Daarnaast maken serologische pipetten de aseptische overdracht van vloeistoffen naar steriele reageerbuizen mogelijk. Dit voorbeeld demonstreert een zuivere versus een gecontamineerde cultuur van E. coli bij de punt-naar-punt levering van medium in de buizen.Soms zijn nauwkeurige volumes vereist. In dit geval is er duidelijk sprake van een onnauwkeurige overdracht van media. Dit voorbeeld toont een incorrect overgedragen volume buffer.In plaats van 12,5 µL te dispenseren, dispenseerde de student 125 µL. Hoewel de getallen op de volumeregelaar identiek waren ingesteld, was de verkeerde micropipet voor de taak gekozen. Na het bekijken van deze video moet u over de nodige basiskennis beschikken om een aseptische techniek toe te passen bij routinematige laboratoriumprocedures, zoals het overbrengen van oplossingen en culturen met serologische pipetten en micropipetten zonder de steriliteit in gevaar te brengen.Het doel is dat voorzorgsmaatregelen, zoals het vlammen van glaswerk, pipetpunten, kweekbuizen en kolven, evenals het werken binnen de grenzen van een steriel veld op de laboratoriumbank, bij elk experiment tot gewoonte worden. Daarnaast is het essentieel dat volumes nauwkeurig en precies worden gemeten en gedoseerd bij het uitvoeren van experimenten. Het leren correct gebruiken van deze instrumenten voor volumetransfer zal de betrouwbaarheid van de experimentele resultaten verbeteren.

aseptic-laboratory-techniques-volume-transfers-with-serological

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Bij het werken met media en reagentia die worden gebruikt om cultuur micro-organismen, moet een aseptische techniek worden toegepast om ervoor te zorgen besmetting tot een minimum beperkt. Verschillende platen methoden worden routinematig gebruikt voor het isoleren, propageren of sommen bacteriën en faag, die opgenomen procedures die de steriliteit van experimentele materialen handhaven.

Aseptische Laboratoriumtechniek: Plating Methoden

Listeria monocytogenes is een modelorganisme voor het bestuderen van immuunreacties en de genetische gevoeligheid voor bacteriën intracellulaire bij muizen. Deze methode stelt je in staat om bacteriële lading te meten en single-cell suspensies van de lever en de milt van de muizen voor het genereren van FACS-analyse van veranderingen in het immuunsysteem van cellen als gevolg van Listeria-infectie te bepalen.

Het meten van bacteriën en immuunresponsen bij muizen geïnfecteerd met Listeria monocytogenes</em

De overdracht van eiwitaggregaten, of proteopathische zaden, van cel tot cel kan ten grondslag liggen aan de progressie van pathologie in neurodegeneratieve ziekten. Hier wordt een nieuwe FRET-flowcytometrische assay beschreven die een specifieke en gevoelige detectie van zaaiactiviteit uit recombinante of biologische monsters mogelijk maakt.

Gevoelige detectie van Proteopathic Zaaien activiteit met FRET flowcytometrie

Dit protocol beschrijft het enten van C57BL / 6J muizen met de EGD stam van Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) en interferon-γ (IFN-γ) responsen door natuurlijke killer (NK) cellen, natuurlijke killercellen (NKT) cellen te meten, en adaptieve T-lymfocyten na de infectie. Dit protocol beschrijft ook hoe om te overleven onderzoek bij muizen na infectie met een aangepaste LD 50 dosis van de ziekteverwekker.

Experimentele infectie met<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Als een model voor de studie Host Interferon-γ Responses

Het doel van dit protocol is het identificeren van lymfatische endothelial cel populaties binnen de lever beschreven markeringen gebruiken. Wij gebruiken collagenase IV en DNase en een zachte hakken van weefsel, gecombineerd met stroom cytometry, ter identificatie van een aparte populatie van lymfatische endotheliale cellen.

Spijsvertering van de lymfkliertest lever voor een analyse van de cytometrische stroom van lymfatische endotheliale cellen

We tonen het gebruik van niet-aaneengesloten dichtheid verlopen te onderscheiden bacteriële populaties op basis van capsule productie. Deze methode wordt gebruikt capsule bedrag tussen culturen vergelijken, mutanten met een specifieke capsule fenotype te isoleren, of capsule regelgevers te identificeren. Hier beschreven is de optimalisatie en de werking van de bepaling.

Scheiden van bacteriën per Capsule bedrag met behulp van een discontinue dichtheid verloop

In vitro kweek is een directe detectiemethode voor de aanwezigheid van levende bacteriën. Dit protocol beschrijft methoden voor de kweek van diverse Borrelia spirocheten, waaronder die van het Borrelia burgdorferi sensu lato-complex, recidiverende koorts Borrelia-soorten en Borrelia miyamotoi.  Deze soorten zijn kieskeurig en langzaam groeiend, maar kunnen worden gekweekt.

Teeltmethoden van Spirocheten uit Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex en Relapsing Fever Borrelia

Het huidige protocol beschrijft de verspreiding van het Zika-virus (ZIKV) in niercellen van Vero Afrikaanse groene apen en de kwantificering van ZIKV met behulp van celgebaseerde colorimetrische immunodetectiemethoden in formaten met 24 wells en 96 wells (hoge doorvoer).

Virusvoortplanting en celgebaseerde colorimetrische kwantificering

Microbiële gemeenschappen in de natuur en laboratorium - Interview

Deze video laat zien hoe u een programmeerbare trekker te gebruiken om patch pipetten en scherpe elektroden te maken voor elektrofysiologie. Dezelfde procedure kan gebruikt worden om een ​​verscheidenheid van glazen instrumenten, waaronder injectienaalden te maken.

Het maken van Patch-pipetten en Sharp elektroden met een programmeerbare Puller

Leer aseptische laboratoriumtechnieken voor volumeoverdracht met serologische pipetten en micropipetten. Deze methoden minimaliseren contaminatie en garanderen precisie bij microbiologische experimenten.

Aseptische Laboratoriumtechniek: Volume Transfers met serologische Pipetten en Micropipettors

Meer video's verkennen