Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion
13 februari 2011
We zien in de video een methode voor het produceren van een midden cerebrale slagader occlusie bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. We laten ook zien hoe de omvang van herseninfarct beoordelen door 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) kleuring.
Hallo, mijn naam is Terrence Jam. Mijn naam is Hai Joe. Vandaag laten we u zien hoe u een muismodel van midden-al arteriële occlusie kunt uitvoeren.
Dus laten we beginnen. Dit experiment begint met de voorbereiding van de hechtdraad. Begin door de hechtdraad in stukken van 20 millimeter te snijden.
Rond vervolgens de punt af door de hechtdraad naar een cauterizer te brengen. Daarna, meet de punt van de hechtdraad. Nu zijn we klaar om de operatie te beginnen met de muis op zijn rug geplaatst.
Maak een incisie langs de middenlijn. Gebruik een pincet om de ECA bloot te leggen. De externe halsslagader langs de ECA heeft veel takken.
Een van deze takken is de STA, de superieure schildklierarterie. De STA moet worden gecoaguleerd met bipolaire pincetten. Vervolgens moet de STA worden doorgesneden om de ECA beter te isoleren.
Vervolgens wordt de ECA gecoaguleerd en zo groot mogelijk verwijderd van de CCA. Op dit punt wilt u mogelijk de ECA isoleren voor betere toegang. Bind vervolgens los twee hechtdraden om de ECA een paar millimeter uit elkaar.
Plaats de klem op de vertakking van de CCA naar ECA en ICA. Knip vervolgens het uiteinde van de ECA-stronk af. Verplaats vervolgens de ECA om uit te lijnen met de ICA.
Dit stelt de hechtdraad in staat om continu van de ECA naar de ICA te gaan. Meet de totale lengte van de hechtdraad voordat u deze inbrengt. Breng de hechtdraad in de opening aan die is gemaakt door de ECA-stronk te knippen.
Terwijl de hechtdraad het distale knooppunt passeert, maak het knooppunt vast door het strakker te trekken. Verwijder vervolgens de klem en breng de hechtdraad verder in de ECA. Terwijl de hechtdraad het proximale knooppunt passeert, maak het knooppunt vast door het strakker te trekken.
Nadat beide knooppunten zijn vastgemaakt, brengt u de hechtdraad voorzichtig langs de slagader totdat negen tot 10 millimeter van de hechtdraad is gepasseerd. Het bifurcatiepunt, dit kan worden gedaan door de lengte van de hechtdraad tot aan het bifurcatiepunt af te trekken van de totale lengte van de hechtdraad. Terwijl de hechtdraad de oorsprong van de MCA bereikt.
De MCA is afgesloten. Na 24 uur, worden de massa's opgeofferd en wordt de hersenen geïsoleerd. Voor TTC-kleuring wordt de geïsoleerde hersenen in een mal geplaatst en gesneden met een scheermesje.
Vervolgens wordt de hersenen in 2% TTC geplaatst gedurende 20 minuten op kamertemperatuur. Ten slotte wordt de hersenen overnacht en neutraal gefixeerd. Gebufferde formine.
Hechtdraadvoorbereiding is een delicaat proces. Hier zijn enkele nuttige tips. Plaats de hechtdraad en cauterizer zoals hieronder.
Breng vervolgens, terwijl de cauterizer stationair blijft, de hechtdraad langzaam dichterbij. Meet vervolgens de hechtdraad om er zeker van te zijn dat deze de juiste grootte heeft. De grootte van de hechtdraad die we in dit experiment gebruiken, is ongeveer 0,21 tot 0,22 millimeter.
Om de operatie te beginnen, plaats de muis op zijn rug en induceer anesthesie met 30% zuurstof en 70% stikstof. Maak een incisie langs de middenlijn en breng vervolgens retractoren aan om de toegang tot het gebied te openen. Het zou er zo uit moeten zien.
Separeer het weefsel voorzichtig met de pincetten. Gebruik vervolgens de pincetten om de ECA te ontbloten en te isoleren. Tijdens het isoleren van de ECA moet de STA worden gecoaguleerd en doorgesneden. Dit maakt het mogelijk om een langer stuk ECA te isoleren.
Vervolgens moet de ECA worden gecoaguleerd met behulp van bipolaire pincetten. Na coagulering moet de ECA worden doorgesneden. Geïsoleerd vervolgens de ECA en bind twee losse hechtdraden om de ECA een paar millimeter uit elkaar. Het resultaat zou er zo uit moeten zien.
Plaats nu de klem op de vertakking van CCA naar ICA en ECA. Zorg ervoor dat de klem de bloedstroom naar de ECA volledig blokkeert. Knip vervolgens het uiteinde van de ECA-stronk af.
Meet de hechtdraad voordat deze wordt ingebracht nadat er een opening is gemaakt in de ECA. Breng de hechtdraad en de opening voorbij het distale knooppunt. Nadat de hechtdraad het distale knooppunt is gepasseerd, trekt u het knooppunt strakker.
Verwijder vervolgens de klem. Nadat u hebt geverifieerd dat het distale knooppunt veilig is, brengt u de hechtdraad verder langs de ECA voorbij het proximale knooppunt. Trek vervolgens het proximale knooppunt strakker.
Breng nu voorzichtig de hechtdraad langs de ECA in de ICA. Blijf de hechtdraad langs de ICA inbrengen totdat negen tot 10 millimeter van de hechtdraad voorbij het bifurcatiepunt is. Dit kan worden gedaan door de lengte van de hechtdraad tot aan het bifurcatiepunt af te trekken van de totale lengte van de hechtdraad.
Trim vervolgens de hechtdraad zodat deze het omliggende weefsel niet beschadigt. Naai vervolgens de incisie dicht en laat de muis herstellen. Bereid 24 uur na de operatie voor op TTC-kleuring.
Begin met het opofferen van de muis met cervicale dislocatie. Geïsoleerd vervolgens de hersenen van de schedel en geplaatst in een mal. Snijd vervolgens met een scheermesje, kleuren de hersenen in 2% TTC gedurende 20 minuten op kamertemperatuur.
Fixeer vervolgens een nacht en 10% neutraal gebufferde for melin. Dus dat is het. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.
Overzicht
Deze video demonstreert een methode voor het produceren van een middenhersenslagaderocclusie (MCAO) bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. Het illustreert ook hoe de omvang van herseninfarct kan worden geëvalueerd door middel van 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloride (TTC) kleuring.
Belangrijkste studieonderdelen
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschap
- Experimentele chirurgie
- Beroertemodellen
Achtergrond
- Middenhersenslagaderocclusie is een veelgebruikt model voor het bestuderen van beroerte.
- TTC kleuring is een methode die wordt gebruikt om herseninfarct te beoordelen.
- Begrip van MCAO-technieken is cruciaal voor neurowetenschappelijk onderzoek.
- Deze methode maakt de evaluatie van therapeutische interventies bij beroerte mogelijk.
Doel van het onderzoek
- Om de chirurgische techniek voor MCAO bij muizen te demonstreren.
- Om een protocol te bieden voor het beoordelen van herseninfarct.
- Om de reproduceerbaarheid in beroerte-onderzoek te verbeteren.
Gebruikte methoden
- Voorbereiding van de suture voor occlusie.
- Chirurgische isolatie van de externe halsslagader (ECA).
- Inbrengen van de suture om de middenhersenslagader (MCA) te occluderen.
- Evaluatie van infarct met TTC kleuring na de operatie.
Belangrijkste resultaten
- De techniek occludeerde met succes de MCA bij volwassen muizen.
- TTC kleuring markeerde effectief gebieden van herseninfarct.
- Het protocol kan worden gerepliceerd voor verdere studies over beroerte.
- Gedetailleerde stappen zorgen voor duidelijkheid voor onderzoekers die de procedure uitvoeren.
Conclusies
- Het MCAO-model is een waardevol hulpmiddel voor beroerte-onderzoek.
- Juiste techniek en evaluatiemethoden zijn essentieel voor nauwkeurige resultaten.
- Deze video dient als een uitgebreide gids voor onderzoekers.
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
The mouse model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) provides a robust, reproducible platform for evaluating ischemic stroke mechanisms and potential therapeutic interventions in preclinical research. This model enables quantitative assessment of infarct size and supports translational continuity from early discovery through preclinical validation. Its widespread adoption in neuroscience R&D reflects its value for mechanistic de-risking and predictive confidence in cerebrovascular target validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of cerebrovascular injury pathways relevant to ischemic stroke.
- Supports functional validation of neuroprotective targets in a disease-relevant system.
- Facilitates mechanistic de-risking by modeling both permanent and transient ischemic events.
- Provides quantitative endpoints for hypothesis-driven target triage.
Screening & Assay Development
- Establishes a validated in vivo system for evaluating candidate compounds' efficacy in reducing infarct size.
- Standardizes assessment through TTC staining, enabling reproducible and quantitative readouts.
- Prepares a scalable workflow for screening neuroprotective agents in a controlled ischemic context.
- Enables reliable comparison of intervention effects across experimental cohorts.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with human stroke pathology by targeting the MCA territory, enhancing translational relevance.
- Supports biomarker discovery and validation through quantifiable infarct measurements.
- Facilitates risk-adjusted advancement of neuroprotective strategies into later-stage studies.
- Provides continuity from mechanistic discovery to preclinical efficacy evaluation.
Pipeline & Workflow Integration
This MCAO model bridges early discovery, lead identification, and preclinical validation for cerebrovascular targets and interventions.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and pathway clarification in ischemic stroke models.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative infarct size measurements for compound evaluation.
- Analytics: Provides standardized TTC staining outputs for cross-condition statistical analysis.
- Translational Research: Maintains disease relevance and supports biomarker alignment for preclinical studies.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable platform for diverse neurovascular research and therapeutic screening.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in stroke research.
- Operational Value: Promotes standardization, reproducibility, and scalability in preclinical workflows.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and enhances capital efficiency by providing robust efficacy data.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of neuroprotective candidates.
Implementation Considerations
- Requires surgical expertise in vascular occlusion and animal handling.
- Needs access to precise instrumentation for suture preparation and brain slicing.
- Demands cross-team standardization of TTC staining and infarct quantification protocols.
- Adaptable to both permanent and transient occlusion models for broader research utility.
- Potential limitations include variability in infarct size and technical complexity of the procedure.
