Name: Detectie van neuritische plaques in de ziekte van Alzheimer Mouse Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Leer neuritische plaques detecteren in een muismodel voor de ziekte van Alzheimer met immunohistochemische en fluorescente kleuringstechnieken. Deze methoden bieden hoge specificiteit voor amyloïde plaques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de Canadese Institutes of Health Research (CIHR), de familie Townsend, en Jack Brown en familie de ziekte van Alzheimer Research Foundation (naar WAS). WS is de houder van de Canada Research Chair bij de ziekte van Alzheimer. PTTL wordt ondersteund door de Natural Sciences and Engineering Research Counsel en de Michael Smith Foundation for Health Research Scholarship.

1. Fixatie van de muis hersenen en cryosectioning <ol><li> Transgene muizen worden opgeofferd met behulp van koolstof-dioxide gas, gevolgd door onthoofding en haalde de hersenen. </li><li> De hersenen is in de lengterichting ontleed in het centrum. De helft van de hersenen zal knipperen bevroren op droog ijs voor de biochemische analyse. De andere zal worden ondergedompeld in 4% paraformaldehyde (PFA) gedurende ten minste 48 uur bij 4 ° C. </li><li> Na fixatie in 4% PFA voor ten minste 48 uur, is de hemi hersenen direct omgezet in 30% sucrose-oplossing en geplaatst bij 4 ° C. Op het punt, moet de hemi hersenen zweven in de sucrose-oplossing. Wanneer de hemi hersenen zonk naar de bodem, meestal die ongeveer 48 uur is het klaar om te worden ingebed in oktober voor cryosectioning. </li><li> Voordat cryosectioning, monteren een dun laagje van LGO op de knop en laat bevriezen bij -20 ° C. Verwijder de kleine hersenen van de rest van de hemi hersenen en plaatsen op de laag van bevroren oktober Direct betrekking hebben op de hemi hersenen met oktober en laat langzaam bevriezen bij -20 ° C. Zodra de LGO inbedding van de hersenen is geworden ondoorzichtig, het is klaar om te worden coupes. </li><li> Stel de dikte van elke sectie om 30 pm. Verzamel elk sneetje in een container met D'Olomos oplossing. </li></ol> 2. Immunohistochemie procedure voor seniele plaques (vrij zwevend secties) <ol><li> Behandel elke sectie in 88% mierenzuur gedurende 15 minuten. Na de mierenzuur behandeling, zal de sectie tijdelijk uit te ondoorzichtig en lijkt te verschrompelen. </li><li> Verwijder elke sectie in een bord en wassen met Tx-PBS (0,3% Triton X-100 in PBS) gedurende 5 minuten x 3 met zacht schudden. </li><li> Block Endogene Peroxide het blokkeren van 0,5% H 2 O 2 in de Tx-PBS, RT 30 minuten onder zacht schudden. </li><li> Was de sectie met Tx-PBS gedurende 10 min x 3 met zacht schudden. </li><li> Blok sectie met 5% niet-vette afgeroomde melk opgelost in Tx-PBS bij kamertemperatuur gedurende 1 uur onder zacht schudden. </li><li> Incubeer secties in het primaire antilichaam (Biotinylated 4G8, 1:500-1:2000, Signet) verdund in Tx-PBS met 5% melk bij 4 ° C gedurende de nacht onder zacht schudden. </li><li> Was de sectie met Tx-PBS gedurende 10 min x 3 met zacht schudden. </li><li> Bereid ABC oplossing na fabrikant protocol (Elite ABC, Vector Laboratories,). Incubeer secties in ABC mengsel gedurende 30 minuten onder zacht schudden. </li><li> Was de sectie met Tx-PBS gedurende 10 min x 3 met zacht schudden. </li><li> Bereid 3,3 '-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) (Vector Laboratories) volgende de fabrikant protocol. Incubeer secties in DAB mengsel gedurende 5-10 minuten. Op dit punt, zal u zich aan een bruinachtige kleur te ontwikkelen op elke sectie. </li><li> Was de sectie met Tx-PBS gedurende 10 min x 3 met zacht schudden. </li><li> Free-floating hersenen secties zijn gemonteerd op gelatine gecoate glaasjes, om te helpen met weefsel hechting. Secties worden vervolgens aan de lucht gedroogd, gevolgd door clearing met een reeks van xyleen en gemonteerd in Entellen. </li><li> Plaques zijn zichtbaar onder een lichtmicroscoop bij 40x vergroting en worden gekwantificeerd door het beoordelen van de gemiddelde plaque tellen per stuk voor elke muis. </li></ol> 3. Thioflavin S kleuringsprocedure voor de detectie van neuritische plaques <ol><li> De muis te offeren en hersenen extractie procedure zijn zoals aangegeven in de punten 1.1 tot 1,5. </li><li> Mount 4-5 hemi hersenen secties op een glasplaatje en volledig laten drogen alvorens de kleuring. </li><li> Was de dia's met 70% ethanol gedurende 1 minuut. </li><li> Was de dia's met 80% ethanol gedurende 1 minuut. </li><li> Broed dia's in oplossing gefiltreerd (0,2 um filter) thioflavin S (1% in 80% ethanol) voor 15 minuten. (Thioflavin S oplossing moet worden gefilterd voor elk gebruik). Let op: beschermen thioflavin S tegen licht en beschermen gekleurde dia's uit het licht. </li><li> Was de dia's met 80% ethanol gedurende 1 minuut. </li><li> Was de dia's met 70% ethanol 1 minuut. </li><li> Wassen met gedestilleerd water twee keer. </li><li> Mount dia's in waterige media montage en laat dia's in het donker drogen gedurende minstens 2 uur, gevolgd door een afdichting dekglaasje met duidelijke nagellak. Gekleurde coupes moeten worden opgeslagen in het donker bij 4 ° C. </li><li> De groene fluorescentie gekleurde plaques kan worden gevisualiseerd met fluorescerende microscropy. Analyseren van dia's binnen een week, omdat de kleuring zal vervagen met de tijd. </li></ol> 4. Representatieve resultaten In onze recente studie over de effectiviteit van het anti-epileptische geneesmiddel en stemmingsstabilisator valproïnezuur (VPA) om neuritische plaquevorming te remmen, gebruikten we de hierboven beschreven immunokleuring en thioflavin S kleuringen aan seniele plaques in AD model muizen (3) te identificeren. Figuur 1 geeft een typische 9 maanden oude APP23 transgene muis, gekleurd met anti-Aß met behulp van gebiotinyleerd 4G8 en gedetecteerd via de ABC-methode. Neuritische plaques zijn duidelijk gemarkeerd met het antilichaam en zijn aangegeven met de witte pijlen. Met behulp van thioflavin S kleuring, we ontdekt neuritische plaque depositie 2 maanden oud APP23xPS transgenic muizen (figuur 2). Gebonden Aß-bevattende thioflavin S neuritische plaques verschijnt groen onder fluorescentie microscopie (aangegeven met witte pijlen). We hebben laten zien dat met VPA behandeling, neuritische plaquevorming aanzienlijk wordt verminderd (3). In een andere studie bestudeerden we de moleculaire verbinding die ten grondslag liggen hypoxie en AD pathogenese. Nogmaals, met behulp van zowel 4G8 anti-Aß immunohistochemie kleuring en thioflavin S kleuring, vonden we dat hypoxie vergemakkelijkt de vorming van Aß met neuritische plaques (4). <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Immunohistochemische analyse van neuritische plaquevorming in AD transgene muizen. APP23 muizen op de leeftijd van 9 maanden werden opgeofferd en werden ontleed, vaste en coupes. Neuritische plaques in de hippocampus werden gedetecteerd met behulp van een anti-Aß antilichaam 4G8 en zijn ontwikkeld met behulp van de ABC-en DAB-methoden. De plaques werden gevisualiseerd door lichtmicroscopie met 40X. Witte pijlen wijzen naar Aß neuritische plaques. <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Thioflavin S kleuring van neuritische plaques in AD gemodelleerd muizen. APP23xPS45 dubbel transgene muizen na 8 weken oud werden gedood en werden ontleed, vaste en coupes. Seniele plagen in de hippocampus zijn werden bevestigd met behulp van fluorescerende kleuren thioflavin S en gevisualiseerd door microscopie bij 40x vergroting. Witte pijlen geven in lood neuritische thioflavin S plaques.

<ol><li>Glenner, G. G., Wong, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+initial+report+of+the+purification+and+characterization+of+a+novel+cerebrovascular+amyloid+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein.</a> Biochem Biophys Res Commun. 120, 885-890 (1984).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H., Zhou, W., Wang, K., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 18727-18732 (2006).</li>
</ol>

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Universiteit van British Columbia Dierverzorging en gebruik commissie en CIHR richtlijnen.

Immunohistochemie met behulp van de gebiotinyleerde gelabeld antilichaam 4G8 vlekken seniele plaques in AD gemodelleerd muizen met specificiteit. De kleuring uitkomst kunnen kwantificeren en vergelijken van plaque belasting tussen de verschillende behandelingsgroepen. Er zijn een aantal cruciale stappen die het resultaat kunnen beïnvloeden. Omdat de hemi hersenen zijn niet vóór doorbloed de extractie van de schedel moet erop worden gebruikt tijdens de extractie proces om schade te voorkomen aan de Hemi hersenen. Aangezien de hemi hersenen is passief doorbloed, raden wij incuberen in 4% PFA gedurende ten minste 48 uur bij 4 ° C vóór het onderdompelen in de 30% sucrose oplossing. Als alternatief zou transcardial perfusie voordat zij worden op het verkrijgen van de hersenen. Als de hersenen correct is bevestigd, moet het een rubberachtige textuur. In het geval dat de hersenen niet goed is bevestigd, zal de secties gemakkelijk scheur in de D&#39;Olomos oplossing of tijdens de kleuringen. De 4G8 monoklonaal antilichaam is reactief naar aminozuur residuen 17-24 van Aß en herkende de epitoop in de kernsequentie (VFFAE). Omdat 4G8 is afgeleid van muizensoorten, heeft het de neiging om een ​​hogere achtergrondkleuring. Zo hebben we ervoor gekozen om de secties in de aangegeven verdunning incubeer met overwegingen om tot een echt signaal terwijl het minimaliseren van achtergrondkleuring. In aanvulling op immunokleuring voor neuritische plaques opsporen met behulp van de 4G8 antilichaam, is een thioflavin S kleuringsmethode ook gebruikt om plaques te identificeren. Thioflavin S is een homogeen mengsel kleurstof die het gevolg is van methylatie van dehydrothiotoluidine met sulfonzuur. Thioflavin S niet-selectief bindt bèta-sheet inhoud van eiwitten, zoals die in amyloid oligomeren. Na binding, thioflavin ondergaat een karakteristieke blauwe verschuiving van de emissie-spectrum. Omgekeerd thioflavin S binding aan de monomere formulieren worden niet ontlokken een blauwe shift en kon niet worden gedetecteerd met fluorescerende microscoop. Thioflavin S vlekken biedt een snel alternatief voor het screenen op amyloid als de intensiteit van de fluorescentie maakt een goede visualisatie van kleine hoeveelheden amyloïde afzettingen. Echter, een nadeel over vlekken thioflavin S is het gebrek aan specificiteit. Veel andere weefsels componenten, waaronder met uitgebreide bèta-sheets, zoals fibrinoids, hyaline, keratine, etc, hebben een nogal affiniteit voor deze kleurstof.

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum en de uitrusting </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PVP40-100G </td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-3 </td></tr><tr><td> Ethyleen glycol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 324558-2L </td></tr><tr><td> Tissue-Tek oktober Compound </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> 88% mierenzuur </td><td> Fisher Scientific </td><td> A118P-500 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> ICN Biomedicals </td><td> 807426 </td></tr><tr><td> H2O2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H-1009 </td></tr><tr><td> Biotine Labeled 4G8 Antilichaam </td><td> Cedarlane </td><td> SIG-39240-500 </td></tr><tr><td> Elite ABC-kit </td><td> Vector </td><td> PK-6100 </td></tr><tr><td> Imm PACT DAB </td><td> Vector </td><td> SK-4105 </td></tr><tr><td> Xyleen </td><td> Fisher Scientific </td><td> X4-4 </td></tr><tr><td> Entellan </td><td> EM wetenschap </td><td> 65037-71 </td></tr><tr><td> Superfrost * Plus Microscope Slides </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Cryostaat </td><td> Leica </td><td> CM-3050-S </td></tr><tr><td> MX35 Premier microtoom mes </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3052835 </td></tr><tr><td> Thioflavin S </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1892-25G </td></tr></tbody></table>

detectie van neuritische plaques in de ziekte van alzheimer mouse model

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

De ziekte van Alzheimer (AD) is de meest voorkomende neurodegeneratieve aandoening die leidt tot dementie. Neuritische de vorming van tandplak is een van de pathologische kenmerken van de ziekte van Alzheimer. De centrale component van neuritische plaques is een kleine draadvormige eiwit amyloid β-eiwit (Aß) 1, die is afgeleid van een sequentiële proteolytische splitsing van het beta-amyloid precursor proteïne (APP) door β-secretase en γ-secretase. De hypothese houdt in dat amyloïde plaques als de onderliggende giftig mechanisme in AD pathologie 2 Aγ bevatten. De post-mortem analyse van de aanwezigheid van plaque neuritische bevestigt de diagnose van AD. Om verdere onze kennis van Aγ neurobiologie in AD pathogenese, werden verschillende muizenstammen uitdrukken AD-gerelateerde mutaties in het menselijk APP genen gegenereerd. Afhankelijk van de ernst van de ziekte, zullen deze muizen ontwikkelen neuritische plaques op verschillende leeftijden. Deze muizen fungeren als handige tools voor het bestuderen van de pathogenese en de ontwikkeling van geneesmiddelen die de APP verwerking route en neuritische plaquevorming zou kunnen beïnvloeden. In dit protocol, we hanteren een immunohistochemische methode voor specifieke detectie van neuritische plaques in AD model muizen. We zullen specifiek ingaan op de voorbereiding van de extractie van de half hersenen, paraformaldehyde fixatie, cryosectioning, en twee methoden om de neurotische plaques op te sporen in AD transgene muizen: immunohistochemische detectie met behulp van de ABC-en DAB-methode en fluorescerende detectie met behulp van thiofalvin S kleuringsmethode.

Een van de pathologische kenmerken van AD is de vorming van amyloïde eiwit β positief neuritische plaques. In dit protocol beschrijven we twee methoden om seniele plaques op te sporen in transgene muizen die model AD: immunohistochemische detectie met behulp van de ABC-en DAB-methode en fluorescerende detectie met behulp van thioflavin S kleuringsmethode.

Detectie van neuritische plaques in de ziekte van Alzheimer Mouse Model

De ziekte van Alzheimer (AD) is de meest voorkomende neurodegeneratieve aandoening die leidt tot dementie. De vorming van neuritische plaques is een van de pathologische kenmerken ...

Het algemene doel van deze procedure is het voorbereiden van hersenen van AD-modelmuizen voor de detectie van amyloïde plaquesen met behulp van 4G8-immunokleuring en flavine S-kleuring. Dit wordt bereikt door eerst de muizenhersenen uit de schedel te halen en passief te perfunderen met 4% PFA, gevolgd door onderdompeling in een 30% sucrose-oplossing en cryosectie van de hersenen in de lengterichting met een dikte van 30 micron. Vervolgens worden de amyloïde plaques gekleurd met het 4G8-antilichaam en gevisualiseerd via de DAB-methode.Stel daarnaast de amyloïde plaques vast met thioflavine S-kleuring en visualiseer deze met behulp van fluorescentiemicroscopie. Uiteindelijk kunnen de behaalde resultaten de depositie van amyloïde plaques in hersenweefsels aantonen via antilichaamgebaseerde detectie en kleuring met thioflavine S-kleurstof. Het belangrijkste voordeel van deze technieken ten opzichte van bestaande methoden is dat de 4G8-kleuring en thioflavine S zeer selectief zijn voor amyloïde plaques die bèta-proteïnen bevatten.Hoewel de hier getoonde methode is bedoeld voor het detecteren van bèta-plaques in transgene muizen met de ziekte van Alzheimer, kan deze methode ook worden ingezet om bèta-plaques bij de ziekte van Alzheimer in menselijke hersenen te detecteren. Offer de transgene muizen door middel van koolstofdioxidegas, gevolgd door onthoofding, extraheer de hersenen en dissecteer deze longitudinaal in het midden. Bevries de helft van de hersenen direct op droogijs voor biochemische analyse en dompel de andere helft gedurende ten minste 48 uur in 4% paraformaldehyde bij vier graden Celsius.Breng de hemi-hersenen over naar een 30% sucrose-oplossing bij vier graden Celsius. Aanvankelijk zullen de hemi-hersenen drijven in de sucrose-oplossing, maar na 24 tot 48 uur zinken ze naar de bodem. Breng vóór het cryoseccioneren een dunne laag OCT aan op de knop en laat dit bevriezen bij min 20 graden Celsius. Verwijder het cerebellum van de rest van de hemi-hersenen.Plaats het restant op de laag bevroren OCT, bedek het onmiddellijk met OCT en laat het langzaam bevriezen bij -20 °C. Stel de cryostaat in op een snijtdikte van 30 microns en verzamel elke coupes in een container met Domo-oplossing. Behandel elke vrijzwevende coupe gedurende 15 minuten met 88% mierenzuur.De secties zullen verschrompelen. Breng vervolgens elke sectie over naar een plaat en was deze drie keer gedurende vijf minuten met Triton XPBS onder zacht schudden. Zwak de endogene activiteit af met 0,5% waterstofperoxide in Triton XPBS gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur onder zacht schudden.Was de coupes vervolgens drie keer gedurende 10 minuten met Triton XPBS onder zachte schudding en blokkeer de coupes gedurende één uur bij kamertemperatuur met 5% vetvrije melk opgelost in Triton XPBS onder zachte schudding. Incubeer de coupes vervolgens overnight bij vier graden Celsius met een primaire antilichaam verdund in Triton XPBS met 5% melk onder zachte schudding. Was de monsters drie keer gedurende 10 minuten met Triton XPBS.Bereid nu een b, C-oplossing voor volgens het protocol van de fabrikant en incubeer de coupes gedurende 30 minuten in het A B, C-mengsel onder zacht schudden, gevolgd door drie wasbeurten met trite next PBS van 10 minuten. Incubeer de coupes gedurende vijf tot 10 minuten in vers bereid DAB-mengsel totdat er een bruinachtige kleur op elke coupe ontstaat; was vervolgens drie keer met trite next PBS gedurende 10 minuten onder zacht schudden. Monteer de vrij drijvende hersencoupes op met gelatine gecoate objectglazen en laat ze aan de lucht drogen; maak ze helder met een reeks xyleenbehandelingen en monteer ze in lin.Visualiseer de plaques onder een lichtmicroscoop bij een 40-voudige vergroting en kwantificeer het gemiddelde aantal plaques per plakje voor elk extract van hersenweefsel uit muizen, zoals eerder beschreven. Monteer vier tot vijf hemibrain-secties op een objectglas en laat deze volledig aan de lucht drogen. Dehydrateer de monsters volledig in 70% Ethanol gedurende één minuut, gevolgd door 80% ethanol gedurende één minuut. Incubeer de coupes vervolgens gedurende 15 minuten in een 0,1% gefilterde THEOF Flavin S-oplossing.Was de coupes, terwijl u erop let dat de Theof Flavin S-oplossing en de gekleurde coupes tegen licht worden beschermd, gedurende één minuut met 80% ethanol, één minuut met 70% ethanol en twee keer met gedestilleerd water. Monteer de coupes vervolgens in een waterig montage medium en laat ze in het donker minimaal twee uur aan de lucht drogen, waarna het dekglas wordt afgesloten met transparante nagellak. Bewaar de gekleurde coupes in het donker bij vier graden Celsius.Visualiseer tot slot de groen fluorescent gekleurde plaques binnen één week met fluorescentiemicroscopie. In onze recente studie naar de werkzaamheid van het anti-epileptische middel en stemmingsstabilisator valproïnezuur bij het remmen van de vorming van retic-plaques, hebben we de hierboven beschreven immunokleuring en de flavine-S-kleuringsprocedures gebruikt om retic-plaques te identificeren in ad-modelmuizen. Een typische negen maanden oude A PP 23 transgene muis is gekleurd met anti-A beta met behulp van BIOTINYLATED 4G eight en gedetecteerd via de A BC-methode.Neuritische plaques zijn duidelijk gelabeld met het antilichaam en worden aangegeven door de witte pijlen. Hier detecteert flavine S-kleuring de depositie van neuritische plaques in twee maanden oude APP 23 transgenicen muizen. Eenmaal beheerst kan deze techniek in drie dagen worden voltooid als deze correct wordt uitgevoerd. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om de hersenen volledig te fixeren in 4% PFA en ervoor te zorgen dat de hersenen volledig naar de bodem van de 30% sucrose-oplossing zakken.Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals immuno-kleuring voor tau, worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden over zaken als tau-hyperfosforylering en neuronale schade.

detection-of-neuritic-plaques-in-alzheimer-s-disease-mouse-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Transgene (Tg) muismodellen van AD bieden een uitstekende gelegenheid om te onderzoeken hoe en waarom Aß of tau niveaus in CSF veranderen naarmate de ziekte vordert in menselijke patiënten. Hier tonen we een verfijnd cisterna magna prikken techniek voor serie-CSF bemonstering van de muis.

Een techniek voor seriële verzamelen van hersenvocht uit de Cisterna Magna in de muis

Source: Bisht, K., et. al. Correlative Light and Electron Microscopy to Study Microglial Interactions with β-Amyloid Plaques. J. Vis. Exp. (2016) This video demonstrates the visualization and mapping of Methoxy-X04-labeled amyloid plaques in Alzheimer’s disease mouse brain sections using fluorescence and bright-field microscopy, enabling precise correlation of plaques with anatomical structures for studying Alzheimer’s pathology.

Visualization and Mapping of Methoxy-X04-Labeled Amyloid Plaques in an Alzheimer’s Disease Mouse Brain Section

Source: Arango-Lievano, M. et. al., Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates in vivo two-photon imaging to visualize fluorescently labeled amyloid plaques and cerebral vasculature. Blue fluorescence marks plaques, while green fluorescence highlights the cerebral blood vessels. A 3D map of the region of interest and high-resolution mosaic imaging reveal detailed interactions of amyloid plaques with cerebral...

In Vivo Imaging of Cerebral Vessels and Amyloid Plaques in an Alzheimer’s Disease Mouse Model

Hier presenteren we een protocol voor directe stereotactische herseninfusie van amyloid-beta. Deze methodologie biedt een alternatief in vivo muismodel om de kortetermijneffecten van amyloid-beta op hersenneuronen aan te pakken.

Stereotaxische Infusion van Oligomere amyloid-beta in de Mouse Hippocampus

De amyloid-β (Aß) -injected diermodel kan de toediening van een bepaalde hoeveelheid en de soort van Ap-fragmenten en vermindert de individuele verschillen binnen elke studiegroep. Dit protocol beschrijft de intracerebroventriculaire (ICV) injectie van Ap zonder stereotactische instrumenten, waardoor de productie van Alzheimer-achtige gedragsafwijkingen bij normale muizen.

Intracerebroventriculaire Injectie van amyloid-β peptiden in normale muizen om acuut induceren Alzheimer-achtige cognitieve tekorten

Hier beschrijven we de setup, softwarenavigatie en gegevensanalyse voor een ruimte en tijd nauwkeurige werkwijze voor het meten tonische en fasische extracellulair glutamaat veranderingen in vivo middels enzymgekoppelde micro-elektrode arrays (MEA).

Met behulp van Enzyme-gebaseerde biosensoren te meten Tonic en Fasische glutamaat in de ziekte van Alzheimer muismodellen

Hier beschreven is een gestage, gedrags screening aanpak die kan worden gebruikt om te screenen voor verbindingen die in vivo werkzaamheid vertonen op cognitief en functioneel motorisch gedrag bij transgene muismodellen van β-amyloïdose en tauopathie. Deze methoden zijn geoptimaliseerd om verbindingen te screenen voor activiteit in kort- en werkgeheugen taken.

Evaluatie van spontane alternatie, herkenning van nieuwe objecten en limb clasping in transgene muismodellen van Amyloid-B en Tau Neuropathology

Het huidige protocol beschrijft en vergelijkt de procedure om een volledige regio of subregio van belang analyse uit te voeren van sagittale muishersensecties om amyloïde-bètabelasting te kwantificeren in het APP / PS1 transgene muismodel van de ziekte van Alzheimer.

Volledige versus subregionale kwantificering van amyloïde-bètabelasting op hersensecties van muizen

Een kenmerk van de ziekte van Alzheimer is de hoogte van...

Voorbereiding van oligomere β-amyloïde 1-42 En Inductie van synaptische plasticiteit Waardevermindering op hippocampus Slices

Aptameren zijn korte ribo-/deoxyribo-oligonucleotides geselecteerd...

Selectie van Aptameren voor amyloid β-eiwit, de verwekker van de ziekte van Alzheimer

Leer neuritische plaques detecteren in een muismodel voor de ziekte van Alzheimer met immunohistochemische en fluorescente kleuringstechnieken. Deze methoden bieden hoge specificiteit voor amyloïde plaques.

Detectie van neuritische plaques in de ziekte van Alzheimer Mouse Model

Meer video's verkennen