Voorbereiding, Zuivering en karakterisering van lanthanide-complexen voor gebruik als contraststoffen voor Magnetic Resonance Imaging

Het algemene doel van deze procedure is om lanthanidenhoudende complexen te synthetiseren, zuiveren en karakteriseren die kunnen worden gebruikt voor het markeren van biologische macromoleculen. Dit wordt bereikt door eerst de metaalstartstof en ligand te mengen terwijl de pH van de oplossing wordt gecontroleerd. De tweede stap van de procedure is het zuiveren van het resulterende complex met behulp van dialyse.

Vervolgens moet de afwezigheid van vrij metaal worden geverifieerd. De laatste stap van de procedure is de karakterisering van de eigenschappen van het complex die relevant zijn voor beeldvorming. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die aantonen dat de gesynthetiseerde complexen zich zullen gedragen als contrastmiddelen door middel van relaxatie-activiteitsmetingen.

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van sleutelvragen op het gebied van beeldvorming, zoals of het coördinatienummer van water van een contrastmiddel verandert bij binding aan een eiwit. Over het algemeen zullen personen die deze methode nodig hebben, worstelen omdat zorgvuldige controle van de pH ertoe zal leiden dat de LI onbruikbaar wordt voor bio-educatie. Het demonstreren van dialyse en activiteitsmetingen zal Buda en Sashi zijn.

Afgestudeerde studenten uit mijn laboratorium Om met methation te beginnen met lanthanidezouten, lost u eerst één equivalent van ligand op in water om een oplossing van 30 tot 265 millimolair te produceren. Het ligand Paraiso Benzyl DTPA wordt hier gebruikt bij een concentratie van 73 Millimolair. Pas vervolgens de pH van de ligandoplossing aan tussen 5,5 en zeven door één molair ammoniumhydroxide toe te voegen.

In deze video wordt 0,2 milliliter van de één molaire ammoniumhydroxideoplossing gebruikt om nu één tot twee equivalenten lanthanidechloride op te lossen in water om een oplossing met een concentratie van vijf tot 1000 millimolair te produceren. Eurobiumchloride of gadoliniumchloride kan worden gebruikt in concentraties van 111 millimolair. Vaak wordt een overmaat aan metaal gebruikt om de ventilatie tot voltooiing te brengen en bijgevolg de zuivering te vereenvoudigen.

Voeg vervolgens elke oplossing van lathanzouten toe aan de voorbereide oplossing van ligand onder roeren. Pas nu de pH van de resulterende reactiemengsels aan tussen 5,5 en zeven door 0,2 molaire ammoniumhydroxide toe te voegen. Hier wordt een totaal van 0,5 milliliter van de 0,2 molaire ammoniumhydroxideoplossing gebruikt om de oplossing aan te passen.

Als het gebruikte ligand zuurgevoelige functionele groepen bevat, pas dan de pH meerdere keren aan tijdens deze stap. Zorg ervoor dat u voorzichtig bent bij het aanpassen van de pH, want als de oplossing te basaal wordt, worden alle basisgevoelige functionele groepen zoals Isothiocyanaat onbruikbaar gemaakt. Voor conjugatie, bewaak de reactie nauwgezet via pH-metingen.

De reactie is voltooid wanneer de pH constant blijft Voor liganden zonder enige basisgevoelige functionele groepen kan een opwerking die het verhogen van de pH omvat ook nuttig zijn. Om met dialyse opwerking te beginnen, bepaal een geschikte lengte van dialyseslang om het monstervolume plus extra lengte te houden om een extra 10% van het monstervolume te houden. Volg vervolgens de richtlijnen van de fabrikant om de slang op deze lengte te knippen.

In deze video werd een membraan met een molecuulgewichtsafsnijding van 100 tot 500 Dalton gebruikt, maar grotere molecuulgewichtsafsnijdingslangen kunnen worden gebruikt indien geschikt als conjugatie vóór methation wordt uitgevoerd, indien passend op basis van de richtlijnen van de fabrikant, weken de gesneden dialyseslang en water gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Vul vervolgens een dialysereservoir met water, dat als dialysaat zal dienen. Hier wordt een liter beker gebruikt.

Het dialysaatvolume moet ongeveer 100 keer dat van het monster zijn. Vouw nu een uiteinde van de slang twee keer en zet het gevouwen deel vast met de dialysesluitingsklem. Wikkel het uiteinde van de sluiting met een elastiek om ervoor te zorgen dat het gesloten blijft tijdens dialyse.

Filter de eerder bereide reactiemengsel door een 0,2 micronfilter. Laad vervolgens het filtraat in het open uiteinde van de slang. Wees voorzichtig om de slang niet te scheuren.

Zorg ervoor dat er voldoende ruimte is om de slang te sluiten. Vouw het resterende open uiteinde van de slang twee keer, zet het vast met een sluiting en wikkel de sluiting met een elastiek. Bevestig vervolgens een glazen flesje met lucht aan de klem aan het ene uiteinde van de dialyseslang met behulp van een ander elastiek.

Bevestig vervolgens een flesje met zand aan de andere klem. Deze flesjes zorgen ervoor dat de slang ondergedompeld blijft in het dialysaat. Plaats nu de volle slang in het dialysereservoir dat dialysaat bevat.

Roer het dialysaat met een magnetische roerplaat op een langzame snelheid bij kamertemperatuur. Zorg ervoor dat de roersnelheid langzaam blijft en dat de oplossing niet. Vortex. Verander het dialysaat drie keer in de loop van een dag.

In deze video wordt het dialysaat veranderd bij 2,5, 6,5 en 11,5 uur. Laat de dialyse doorgaan gedurende de nacht voor een totaal van 20 tot 28 uur. Zodra de dialyse voltooid is, verwijdert u de slang uit het dialysaat en opent u voorzichtig een sluiting om het monster te verwijderen.

Was de dialyseslang drie keer met water en combineer de wassingen met het monster. Verwijder ten slotte het water uit het monster onder verminderde druk hier. Dit wordt bereikt door middel van vacuümdrogen.

Het monster wordt bevroren en vervolgens op een apparaat voor vacuümdrogen geplaatst. Om de aanwezigheid van vrij metaal in het monster te beoordelen, bereidt u eerst acetaatbuffer voor door 1,4 milliliter azijnzuur op te lossen in 400 milliliter water, en past u de pH aan tot 5,8 met één molaire ammoniumhydroxide, en voegt u water toe om een totaal volume van 500 milliliter te produceren. Los vervolgens 0,3 milligram van elk complex op in 0,3 milliliter buffer.

Bereid nu xol oranje indicator op, die 16 micromolair zou moeten zijn in de pH